期调亡细胞;而PI染色为红色巧光，表示晚 期调亡细胞。
[0103] 结果：图5A和图5B显示，未处理细胞中的调亡细胞比例非常低（3.2%);苦参碱和 透膜短肤-苦参碱均可诱导肝癌细胞的调亡。然而，与苦参碱（13.4%)相比较，透膜短肤-苦 参碱(22.5%)具有更强的诱导细胞调亡的作用。图5C显示，与苦参碱相比较，透膜短肤-苦 参碱处理的肝癌细胞中有更多的调亡细胞。结论:与苦参碱相比较，透膜短肤-苦参碱具有 更强的诱导肝癌细胞调亡的作用。
[0104] 上述虽然结合实施例对本发明的【具体实施方式】进行了描述，但并非对本发明保护 范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员 不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围W内。
【主权项】
1. 一种透膜短肽-苦参碱，其结构式如下：其中，m为1~9中的正整数;η为1~6中的正整数。2. 根据权利要求1所述的透膜短肽-苦参碱，其特征在于:所述L = -0C0(CH2)3-。3. 权利要求1或2所述的透膜短肽-苦参碱的制备方法，其特征在于:将透膜七氨基酸短 肽溶于溶剂中，室温下加入碱和苦参碱衍生物活性酯，加完后搅拌反应90~150分钟;减压 浓缩除去溶剂，得到粗品，经液相分离纯化得到白色固体，即为透膜短肽-苦参碱； 所述溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙腈中的任一种； 所述碱选自碳酸钾、碳酸钠、N，N-二异丙基乙胺、三乙胺中的任一种； 所述苦参碱衍生物活性酯与短肽的摩尔比为1.8~2.4:1。4. 根据权利要求3所述的透膜短肽-苦参碱的制备方法，其特征在于:所述苦参碱衍生 物活性酯是通过以下方法制备得到的： (1) 与水加成： (41S，7aS，13bR)-10-氧代十二氢-1H，5H，8H-二吡啶并[2，l-f:3,，2'，l'-ij][l，6]萘 啶-11-烯在碱性条件下与水发生加成反应得到TM1，即：SM1在水中加入过量的氢氧化钾，反 应温度l〇〇°C，反应时间6~10小时，纯化得到(41S，7aS，13bR)-10-氧代十二氢-1H，5H，8H-二吡啶并[2，1矸:3'，2'，1'-1_][1，6]萘啶-12-醇； (2) 接戊二酸： TM1在碱性条件下与戊二酸酐发生酯化反应得到TM2,即：TM1在四氢呋喃中加入戊二酸 酐1~5当量和过量的三乙胺，反应温度20°C，反应时间20~28小时，纯化得到5-氧代-5-(((413,7&3，13匕1〇-10-氧代十二氢-1!1，5!1，8!1-二吡啶并[2，1矸 :3'，2'，1'-1_][1，6]萘啶-12-基)氧基)戊酸； (3)合成活性酯： TM2在碱性条件下与丁二酰亚胺碳酸酯酯化反应得到TM3,即：TM2在四氢呋喃中加入丁 二酰亚胺碳酸酯1~5当量和碳酸钾1~5当量，反应温度20 °C，反应时间16~20小时，纯化得 到5_氧代-5-(((41S，7aS，13bR)-10-氧代十二氢-1H，5H，8H-二吡啶并[2，l-f :3'，2'，Γ-ij][l，6]萘啶-12-基)氧基)戊酸-Ν-羟基丁二酰亚胺酯，即为苦参碱衍生物活性酯。5. 根据权利要求3或4所述的透膜短肽-苦参碱的制备方法，其特征在于：所述透膜短 肽-苦参碱的制备方法为：SM2在N，N-二甲基甲酰胺中中加入TM31.8~2.4当量和N，N-二异 丙基乙胺2~3.5当量，溶剂原料比为20毫升/克，反应温度20°C，反应时间90~150分钟，纯 化得到TP。6. 根据权利要求5所述的透膜短肽-苦参碱的制备方法，其特征在于:SM2在N，N-二甲基 甲酰胺中中加入TM32.2当量和N，N-二异丙基乙胺3当量，溶剂原料比为20毫升/克，反应温 度20 °C，反应时间120分钟，纯化得到TP。7. 根据权利要求3或4所述的透膜短肽-苦参碱的制备方法，其特征在于：所述透膜短 肽-苦参碱的制备方法的步骤如下： (1) (41S，7aS，13bR)-10-氧代十二氢-1H，5H，8H-二吡啶并[2，l-f:3,，2'，l'-ij][l，6] 萘啶-12-醇的合成： 在100毫升的圆底烧瓶中加入30毫升水和3.36克氢氧化钾，溶液加热到100°C，加入1.2 克SM1，反应8个小时后，将体系降至室温，用二氯甲烷萃取四次，每次30毫升;合并有机相， 用无水硫酸钠干燥后，除去溶剂得粗品油状物，此油状物用正己烷重结晶，得白色固体TM1; (2) 5-氧代-5-(((41S，7aS，13bR)-10-氧代十二氢-1H，5H，8H-二吡啶并[2，l-f :3'，2'， l'_ij][l，6]萘啶-12-基)氧基)戊酸的制备： 20°C下在50毫升圆底烧瓶中加入120毫克TM1和1.2毫升四氢呋喃，此温度搅拌下再依 次加入138毫克三乙胺和77毫克戊二酸酐，此温度下搅拌反应24小时;将反应液浓缩后进行 柱层析分离，流动相为二氯甲烷/甲醇= 20/1，得到淡黄色油状物TM2; (3) 5-氧代-5-(((41S，7aS，13bR)-10-氧代十二氢-1H，5H，8H-二吡啶并[2，l-f :3'，2'， 1'-^[1，6]萘啶-12-基)氧基)戊酸-~-羟基丁二酰亚胺酯的合成： 在50毫升的圆底烧瓶中加入1.25毫升四氢呋喃，20 °C搅拌下依次加入125毫克TM2、169 毫克丁二酰亚胺碳酸酯和137毫克碳酸钾，此温度下搅拌18小时；反应液浓缩至干，加入正 己烷洗涤3次，每次1毫升，干燥得淡黄色油状物TM3; (4) S-(5-氧代-5-(((41S，7aS，13bR)-10-氧代十二氢-1H，5H，8H-二吡啶并[2，l-f :3'， 2'，1'-。][1，6]萘啶-12-基)氧基)戊酰基)4-((5-氧代-5-(((415,7&5，13&1〇-10-氧代十 二氢 _1H,5H,8H-二吡啶[2，l_f:3'，2'，l'_ij][l，6]萘啶-12-yl)氧基）戊酰基）_D_壳氨 酰)-D-半胱胺酰-D-亮氨酰-D-精氨酰-D-脯氨酰1-D-缬氨酰甘氨酸的合成： 在2毫升的反应器中加入0.7毫升N，N-二甲基甲酰胺，20°C搅拌下依次加入35毫克SM2、 18毫克N，N-二异丙基乙胺和48毫克TM3,此温度下搅拌反应120分钟；在20 °C下减压浓缩除 去溶剂，得粗品油状物，液相分离纯化，流动相为水/乙腈/三氟乙酸= 90/10/0.1~10/90/ 0.1，检测波长为214纳米，收集目标物馏分，20°C下除去有机溶剂后得水溶液，进行冻干处 理，得到白色固体TP。8. 权利要求1或2所述的透膜短肽-苦参碱作为有效成分在制备抗肿瘤药物中的应用。9. 根据权利要求8所述的应用，其特征在于:所述肿瘤为上皮来源的恶性肿瘤。10. 根据权利要求9所述的应用，其特征在于:所述恶性肿瘤选自胃癌、结直肠癌、肝癌、 胰腺癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌。
【专利摘要】本发明公开了一种靶向作用于上皮来源恶性肿瘤的抗肿瘤药物——透膜短肽-苦参碱抗肿瘤药物，是利用苦参碱衍生物活性酯，在碱性条件下，与透膜七氨基酸短肽进行反应所制得的。本发明的透膜短肽-苦参碱，保留了苦参碱的抗癌效果和短肽的透膜和靶向性，可以靶向性作用于上皮来源的恶性肿瘤，尤其是肝癌。本发明的透膜短肽-苦参碱，与目前临床应用的苦参碱相比较，具有明显肝癌细胞靶向性，可以快速穿透肝癌细胞膜，抑制肝癌细胞的增殖，诱导肝癌细胞的凋亡。
【IPC分类】A61K31/4375, A61K47/48, A61P35/00
【公开号】CN105664173
【申请号】CN201610064925
【发明人】姚庆强, 孙学英, 牟艳玲, 齐放, 路国梁
【申请人】山东省医学科学院药物研究所, 济南精合医药科技有限公司
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年1月29日