专利名称：：一种双孢蘑菇提取物及其获得方法与应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种双孢蘑菇提取物及其获得方法与应用。
背景技术：
：双孢蘑菇又称洋蘑菇、二孢蘑菇。真菌门、担子菌纲、伞菌科、蘑菇属。双孢蘑菇生林地、草地、田野、公园、道旁等处，分布极广泛，国内普遍栽培。双孢蘑菇味道鲜美，且营养十分丰富，含有io多种氨基酸、丰富的蛋白质、核苷酸和维生素。双孢蘑菇既可以食用，也可以药用及工业用。
发明内容本发明的目的是提供一种双孢蘑菇提取物及其获得方法与应用。本发明所提供的双孢蘑菇提取物的获得方法，是将双孢蘑菇子实体与水按照1:3-5的体积比混合匀浆后，于75—95。C，pH值为7-9的条件下提取1一6小时，去除残渣，得到含有双孢蘑菇多糖的双孢蘑菇提取液。所述方法中，所述提取时间优选为6小时。所述方法中，所述提取温度优选为85。C。所述方法中，所述提取pH值优选为9。所述方法中，所述双孢蘑菇子实体与水的体积比优选为1:3。所述方法中，还包括将所述双孢蘑菇提取液调节至pH值至4-4.5，然后加入是所述双孢蘑菇提取液体积的1%的活性碳在70-80。C进行脱色2-3小时，得到澄清的双孢蘑菇提取液。所述方法中，所述澄清的双孢蘑菇提取液经冷冻干燥得到双孢蘑菇提取物粉末。本发明所提供的双孢蘑菇提取物为上述方法获得的双孢蘑菇提取物。本发明利用热水浸提法提取富含多糖双孢蘑菇提取物，通过四因素三水平的正交实验筛选得到双孢蘑菇提取物的最佳获得条件，本发明的方法得到的双孢蘑菇提取物中多糖提取得率高达1.3587%，充分保留了双孢蘑菇多糖成分，检测到双孢蘑菇提取物的抗氧化和保湿等效果。结晶紫分光光度法测得本发明的双孢蘑菇提取物对羟自由基有一定的清除作用，可作为抗衰老成分应用到化妆品中。通过人体法(MMV法和TEWL法)对本发明的双孢蘑菇提取物保湿功能的评价表明，在40%~60%的湿度下，在一定时间内双孢蘑菇多糖的保湿性能较好，含1%的双孢蘑菇多糖提取物溶液的保湿效果优于含5%的甘油溶液。本发明的双孢蘑菇提取物可作为有效成分，用于化妆品的制备，增加化妆品的保湿能力和抗氧化性能。图1为本发明双孢蘑菇提取物的保湿性能人体测定法MMV值随时间变化曲线图2为本发明双孢蘑菇提取物的保湿性能人体测定法TEWL增长率随时间变化曲线具体实施例方式下述实施例的方法，如无特别说明，均为常规方法。下述实施例中所述的百分含量，如无特别说明，均为质量百分含量。下述实施例中所用的材料双孢蘑菇购自北京市美廉美超市；所用试剂均为分析纯。皮肤油水酸碱测试仪(CM825)和Tewameter测试仪(TM300)为德国CK电子公司产品；真空冷冻干燥机(AdVantage-ES)，美国VIRTIS公司。实施例1、双孢蘑燕多糖提取物的提取方法优化1、双孢蘑菇多糖提取物的提取条件优化经过大量实验筛选，综合提取成本和得率两个因素，最终确定采用热水浸提从双孢蘑菇新鲜子实体中提取双孢蘑菇多糖提取物，具体流程如下主要包括下述步骤1)取双孢蘑菇新鲜子实体切碎加水匀浆；2)调节pH值；3)恒温搅拌浸提，提取液离心取上清液，抽滤得提取物。对其中关键的因素(料水比(双孢蘑菇新鲜子实体与水的质量比)、浸取温度(9)、浸提时间(t)、浸提pH值)设计正交实验，按照4因素3水平进行L9(34)实验，具体设计如表l所示表1.提取双孢蘑恭多糖正交实验的因素一水平表<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>根据表l的因素水平设计，共进行9组实验，各组条件如表2所示，具体方法如下所述分别取双孢蘑菇新鲜子实体，切碎，分别按照表2和表1所示组合条件，加去离子水匀浆，然后调节pH值，利用水浴恒温加热，浸提，浸提结束后，将浸提液分别离心(4000r/min，20min)，取上清液，分别将上清液进行抽滤得到液体样品，即得到富含双孢蘑菇多糖的双孢蘑菇多糖提取液。将上述正交实验各组得到的双孢蘑菇提取液，分别采用苯酚一硫酸法(大连轻工业学院等合编.食品分析[M].大连轻工业出版社.i995)测定双孢蘑菇多糖的含量。进而计算多糖得率多糖得率(％)z提取液中多糖含量/原料总重量xiooy。上述正交实验各组得到的提取液的双孢蘑菇多糖提取得率结果如表2所示，结果表明，9组中，得率最高的达1.3587%，得率最低的为0.6977%。<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>对表2所得的正交实验结果进行分析，数据分析可以知道各因素对双孢蘑菇提取物中多糖得率的影响力由大到小分别是浸取温度〉pH值〉料水比〉浸取时间，较佳组合为A2BsdD3，即浸取温度85。C、浸取时间6h、料水比1:3、pH9。。经实验验证，以这种方案提取双孢蘑菇多糖提取物，双孢蘑菇多糖提取率可达1.3587%。2、本发明的双孢蘑菇提取物的获得1)脱色将步骤1中正交实验各组得到的提取液，分别调PH值至4-4.5，加入是提取液体积的"/o的活性炭，在水浴加热至70-8(TC，保温2h，4000r/min离心20min去活性炭，抽滤得澄清液；温冰箱冻实，然后用真空冷冻干燥机干燥，得到富含双孢蘑燕多糖的双孢蘑恭提取物，因其主要成分为双孢蘑菇多糖，也将其称为双孢蘑菇多糖提取物。实施例2、本发明的双孢蘑菇提取物的功能验证一、本发明的双孢蘑菇提取物的抗氧化性能评价将实施例1中正交实验最好搭配组的双孢蘑菇提取物，采用结晶紫法(刘骏.结晶紫分光光度法测定Fenton反应产生的羟自由基[J].武汉工业学院学报，2005，24(2):53-55)测双孢蘑菇多糖对羟基自由基的抗氧化性，具体步骤如下所述在一系列4mL离心管中分别加入0.5mL结晶紫(0.4mmol/L)、1.4mLPBS(pH=7.4、0.2mol/L)、0.5mLFeS04(l腿ol/L)、0.lmL抗氧化待测样(用去离子水溶解实施例1中正交实验最好搭配组得到的双孢蘑菇提取物得到的质量百分浓度为1%双孢蘑菇提取物溶液)，最后加0.5mLH2O2溶液(6%)，静置lh后测584nm处的吸光度Ab，同时测定不加抗氧化样品时584nm处的吸光度Ai，不加H202、抗氧化样品时584nm处的吸光度Ao。羟自由基清除率S可以按下式计算S(o/o):[l-(Ao-Ab)/(Ao陽A丄)]X100%结果表明，实施例1最佳条件提取得到的双孢蘑菇提取物质量百分浓度为1%溶液的羟自由基清除率为5.10%。结果表明，本发明的双孢蘑恭提取物有一定的清除羟基自由基的能力，是一种抗氧化剂。二、本发明的双孢蘑菇提取物的保湿性能评价采用人体法测试实施例1获得的双孢蘑菇提取物的保湿性能，并与甘油的保湿性能进行对比，从而对双孢蘑菇提取物的保湿功能进行评价。首先选择健康无皮肤病的志愿者受试者10名。实验条件为测试期间要求环境的温度和湿度恒定，温度为22°C±2°。，相对湿度为40%60%。受试者为健康无皮肤病的志愿者。实验条件为测试期间要求环境的温度和湿度恒定，温度为25°C±2°C，相对湿度为40%60%。1、MMV(moisturemeasurementvalue)法采用CM825型皮肤油水酸碱测试仪测试皮肤的水合作用。它的测定原理是由于角质层含有大量的电解质，存在水中的电解质具有导电性，这种现象也产生在皮肤表面，通过测试探头与皮肤接触后，电导率的变化来反映皮肤的水合状态(杜小豪,徐卫，杜雪洁.护肤产品的保湿功能评价[J].日用化业,2000，30(3):47-52)。测试方法为①确定左右前臂4块测试区域，区域面积为5cmX5cm，分别测试该区域的空白值。5%(体积百分含量)甘油保湿霜涂敷于一区域作为参照样品，用去离子水溶解实施例1中正交实验最好搭配组得到的双孢蘑燕提取物得到的质量百分浓度为1%双孢蘑菇提取物溶液涂敷于其它区域作为测试样品，用量为2mg/cm2。③使用后15min、30min、60min、90min、120min进行测试，每±央区域测试5个点，取平均值。保湿效果评价的评价公式水合率%=P样"—P空白x100%P标t:X-P空白式中Pm=x~~使用一定时间后产品的电导率；P空白——未涂样品的电导率；P标t^x——使用一定时间后参照物的电导率结果如图l所示，由图l可以看出在2h的时间范围内，本发明的双孢蘑菇提取物、甘油的水合率值都随时间的延长呈现下降趋势，双孢蘑菇提取物的平均水合率大于甘油，表明了双孢蘑菇多糖在皮肤角质层中结合水的能力优于甘油。2、TEWL(transepidermalwaterloss)法测试原理除了出汗外，人体表皮的水分经皮肤散失(transepidermalwaterloss，TEWL)—直在不间断进行的。角质层以外的表皮组分在组织内充满水分，呈饱和状态，但其保持水分的力较弱。而角质层起屏障作用将生物体与外界隔开，保持住水分不流失却又有通透作用。TEWL值不能直接表示角质层的水分含量，而是表明角质层水分散失的情况，说明角质层屏障的功能，是评价角质层状态的重要参数。测试原理为使用特殊设计的两端开放的圆柱形腔体探头在皮肤表面形成相对稳定的测试小环境，通过两组温度、湿度传感器测定近表皮(约lcm以内)由角质层散失形成的不同两点的水蒸气压梯度，直接测出经表皮蒸发的水分量。测得TEWL值高则表明经皮肤散失的水分多，角质层的屏障效果不好，使用样品后，随着时间的延长，TEWL增长值越小，说明样品保湿效果越好，使用样品后使角质层的屏障作用明显增强。可以进行不同化妆品保湿性能的比较，还可进行长时间皮肤水分散失情况的监测。测试方法①确定左右前臂4块测试区域，区域面积为5cmX5cm，分别测试该区域的空白值。5%甘油保湿霜涂敷于一区域作为参照样品，用去离子水溶解实施例1中正交实验最好搭配组得到的双孢蘑菇提取物得到的质量百分浓度为1。％双孢蘑菇提取物溶液涂敷于其它区域作为测试样品，用量为2mg/cm2。③使用30min、60min、90min、120min、150min后进行测试选择好测试时间，将筒状探头垂直至于被测皮肤上20s，测定值稳定后才可读取数据，仪器自动采集TEWL数据并按时间顺序显示出来，成为一条TEWL时间曲线。仪器可自动显示皮肤水分流失的TEWL数值、曲线、平均值和标准偏差，可取数次不同的测定时间测试数值的平均值为最终结果。结果如图2，由图2可以看出在2.5h的时间范围内，双孢蘑菇多糖提取物溶液，甘油溶液的TEWL增长率都随时间呈现下降趋势，双孢蘑菇多糖提取物的TEWL增长率小于甘油，表明了双孢蘑菇多糖提取物在皮肤角质层中防止水分散失的能力优于甘油。综合水分散失率和上述平均水合率这两项指标，说明体内法测得的双孢蘑菇多糖保湿效果优于甘油。权利要求1、一种双孢蘑菇提取物的获得方法，是将双孢蘑菇子实体与水按照1∶3-5的体积比混合匀浆后，于75-95℃，pH值为7-9的条件下提取1-6小时，去除残渣，得到含有双孢蘑菇多糖的双孢蘑菇提取液。2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述提取时间为6小时。3、根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述提取温度为85X:。4、根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述提取pH值为9。5、根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述双孢蘑菇子实体与水的体积比为1:3。6、根据权利要求1-5中任意一项所述的方法，其特征在于所述方法中，还包括将所述双孢蘑菇提取液调节至pH值至4-4.5，然后加入是所述双孢蘑菇提取液体积的1%的活性碳在70-8(TC进行脱色2-3小时，得到澄清的双孢蘑燕提取液。7、根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述澄清的双孢蘑燕提取液经冷冻干燥得到双孢蘑菇提取物粉末。8、权利要求l一7中任意一项所述的方法获得的双孢蘑菇提取物。9、权利要求8所述的双孢蘑燕提取物在制备化妆品中的应用。10、根据权利要求9所述的应用，其特征在于所述化妆品为具有保湿功能和/或抗氧化能力的化妆品。全文摘要本发明公开了一种双孢蘑菇提取物及其获得方法与应用。该方法，是将双孢蘑菇子实体与水按照1∶3-5的体积比混合匀浆后，于75-95℃，pH值为7-9的条件下提取1-6小时，去除残渣，得到含有双孢蘑菇多糖的双孢蘑菇提取液。该方法获得的双孢蘑菇提取物可作为有效成分，用于化妆品的制备，增加化妆品的保湿能力和抗氧化性能。文档编号A61Q19/00GK101352406SQ200810222270公开日2009年1月28日申请日期2008年9月12日优先权日2008年9月12日发明者清任,刘永国,张晓平,李守勉,王友升申请人:北京工商大学