一种新型复合微生物活菌制剂及其制备方法和应用的制作方法

专利名称：一种新型复合微生物活菌制剂及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及处理有机污水的新型复合微生物活菌制剂及其制备方法和应用。
背景技术：
目前，国内对于城市生活污水、食品工业废水和畜粪污水等有机污水通常采用下述方法进行处理当COD大于1000mg/L时，采用先厌氧后好氧的生物处理工艺；当0 小于 1000mg/L时，采用缺氧-好氧生物处理工艺(活性污泥法、生物膜法)。经上述方法处理后， 一般COD能达标，但氨氮、总氮和总磷处理效果较差。并且，活性污泥剩余污泥量大、污泥处理时恶臭味强烈，好氧曝气量大、运行成本高等缺点。九十年代以来，国外开始从污染土壤中提取高效降解菌或用质粒转移的方法生成工程菌用于有机污水处理，该方法COD去除率高，除臭效果好，剩余污泥量少。但由于提取生物菌成本较高，而工程菌的环境风险甚高，其大规模应用受到限制。发明内容
本发明为了克服现有处理有机污水工艺技术中存在剩余污泥量大、臭味大和能耗闻、成本闻的缺点，提供了一种可避免上述缺陷并能有效分解有机物、抑制有害微生物生长、消除臭味、节能减排的生态环保型复合微生物活菌制剂及其制备方法和应用。
在一个方面，本发明提供了一种复合微生物活菌制剂，其含有片球菌、酵母菌和芽孢杆菌，其中所述复合微生物活菌制剂含有的总菌数为IO7Cfu/克以上，并且其中所述芽孢杆菌包含选自特基拉芽抱杆菌(Bacillus tequiIensis)、阿维芽抱杆菌(Bacillus arvi ) 和崛越氏芽孢杆菌(Bacillus horneckiae)中的一种或多种的芽孢杆菌。在一个实施方案中，所述复合微生物活菌制剂包含阿维芽孢杆菌。
除了特基拉芽孢杆菌、阿维芽孢杆菌和崛越氏芽孢杆菌之外，所述复合微生物活菌制剂还可包含属于芽孢杆菌属的其他任意菌种。在一个实施方案中，所述复合微生物活菌制剂还包含选自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、巨大芽抱杆菌(Bacillus megaterium)、球状芽抱杆菌(Bacillus sphaericus)、凝结芽抱杆菌(Bacillus coagulans)、解淀粉芽抱杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)中的一种或多种的芽孢杆菌。在一个实施方案中，所述复合微生物活囷制剂包含减结牙抱杆囷。
在一个实施方案中，本发明所述的复合微生物活菌制剂中芽孢杆菌的菌数应占复合微生物活菌制剂中总菌数的50%以上。在一个实施方案中，本发明复合微生物活菌制剂中所述芽孢杆菌的菌数占复合微生物活菌制剂中总菌数的50 60%，例如55%或60%。
本发明所述的片球菌为属于片球菌属(Pediococcus)的任何菌种。在一个实施方案中，所述复合微生物活菌制剂中包含的片球菌为选自啤酒片球菌(Pediococcus cerevisiac)、乳酸片球菌(Pediococcus acidiIactici )和戍糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)中的一种或多种片球菌。在一个实施方案中，所述复合微生物活菌制剂包含戊糖片球菌。例如，所述复合微生物活菌制剂包含戊糖片球菌，或者包含戊糖片球菌和乳酸片球菌或包含戊糖片球菌和啤酒片球菌，或者包含戊糖片球菌、乳酸片球菌和戊糖片球菌。
在一个实施方案中，本发明复合微生物活菌制剂中所述片球菌的菌数占复合微生物活菌制剂中总菌数的25 35%，例如25%、30%或35%。
本发明所述的酵母菌为属于酵母菌属的任意菌种。在一个实施方案中，所述复合微生物活菌制剂中包含的酵母菌为选自白假丝酵母(Candida albicans)、 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、毕赤酵母(Pichia farinose)、德克酵母 (Dckkeraanomala)、德巴利酵母(Debaryomyces poIumorphus)及异常毕赤酵母(Pichia anomala)中的一种或多种的酵母菌。
在一个实施方案中，本发明复合微生物活菌制剂中所述酵母菌的菌数占复合微生物活菌制剂中总菌数的15 25%，例如15%、20%或25%。
在本发明所述的复合微生物活菌制剂中，任一种菌株的菌数不低于103CfU/克，例如不低于104,105, 106Cfu/克。
在另一个方面，本发明还提供了制备本发明复合微生物活菌制剂的方法，包括将所需菌种进行放大液体培养，然后按所需比例混合，固体发酵，低温干燥，粉碎成粉，然后过筛。
在另一个方面，本发明提供了一种处理有机污水的方法，包括使用本发明的复合微生物活菌制剂的步骤。本发明所述复合微生物活菌制剂可以直接加入所述污水中或者配制为溶液后再通过投加或者喷洒加入所述污水中。所述有机污水包括但不限于城市生活污水、食品工业废水和畜粪污水。
在另一个方面，本发明还提供了一种组合物，其包含本发明所述复合微生物活菌制剂，其可作为有机污水助净剂、水产养殖水体净化剂、除臭驱蝇剂、去油污剂、管道消堵剂、饲料添加剂或微生物疾病防治制剂。
在另一个方面，本发明提供了本发明的复合微生物活菌制剂在制备有机污水助净剂、水产养殖水体净化剂、除臭驱蝇剂、去油污剂、管道消堵剂、饲料添加剂或微生物疾病防治剂中的应用。
本发明所述的细菌均可以从任何可以商业获得的渠道获得，例如购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)或美国菌种保藏中心(ATCC)或其它菌种库。
例如，所述啤酒片球菌为购自CGMCC的保藏号为CGMCC1. 123的啤酒片球菌，乳酸片球菌为购自ATCC的保藏号为ATCC 12697的乳酸片球菌以及戊糖片球菌为购自ATCC的保藏号为ATCC 25744的戊糖片球菌。
例如，所述白假丝酵母为购自CGMCC的保藏号为CGMCC 2. 538的白假丝酵母，所述酿酒酵母为购自CGMCC的保藏号为CGMCC 2. 769的酿酒酵母，所述毕赤酵母为购自CGMCC 的保藏号为CGMCC 2. 1463的毕赤酵母，所述德克酵母为购自ATCC的保藏号为ATCC 10559 的德克酵母，所述德巴利酵母为购自CGMCC的保藏号为CGMCC 2. 1462的德巴利酵母，以及所述异常毕赤酵母为购自CGMCC的保藏号为CGMCC 11061的异常毕赤酵母。
例如，所述枯草芽孢杆菌为购自CGMCC的保藏号为CGMCC1. 1414的枯草芽孢杆菌；所述地衣芽孢杆菌为购自CGMCC的保藏号为CGMCC1. 521的地衣芽孢杆菌；所述巨大芽孢杆菌为购自CGMCC的保藏号为CGMCC1. 1870的巨大芽孢杆菌；所述球状芽孢杆菌为购自CGMCC的保藏号为CGMCC1. 270的球状芽孢杆菌；所述凝结芽孢杆菌为购自CGMCC的保藏号为CGMCC1.2009的凝结芽孢杆菌；所述解淀粉芽孢杆菌为购自CGMCC的保藏号为CGMCC1.1099的解淀粉芽孢杆菌；所述特基拉芽孢杆菌为购自ATCC的保藏号为ATCC BAA-819的特基拉芽孢杆菌；所述阿维芽孢杆菌为购自DSM的保藏号为DSM 16317的阿维芽孢杆菌，以及所述崛越氏芽孢杆菌为购自CICIM的保藏号为CICIM B1319的崛越氏芽孢杆菌。
本发明所述的“活菌”是指通过使用本领域已知的任何测定活菌的方法测定为活菌的细菌。所述测定方法例如可以先用染料染色细菌细胞、然后计数，或者可以将包含待测细菌的溶液按一定比例稀释，然后铺板培养，通过计数培养后形成的菌落数来确定原溶液中的活菌数(参见例如微生物学实验教程(第2版)，周德庆，高等教育出版社)。本领域已知计数活菌数的试剂盒或设备。在本发明的一个实施方案中，本发明所述的“活菌”是通过使用本领域常规活菌计数方法，即将包含待测细菌的溶液按一定比例稀释，然后铺板培养，通过计数培养后形成的菌落数来确定原溶液中的活菌数。
在本文中，除非特别定义，提及菌数时均是指活菌数。
如本文所述，术语“cfu (菌落形成单位)”是指在培养介质例如琼脂平板上形成的菌落数。例如，cfu可以如下测定将含有细菌的溶液稀释一定倍数，然后将稀释液例如通过浇注或涂布方式让微生物单细胞一一分散在介质例如琼脂平板上，培养一段时间后，计数形成的菌落数，再根据稀释倍数计算原溶液的Cfu数。稀释倍数可以根据本领域技术人员的经验确定。所述介质可以是适于待测微生物生长和/或便于计数观察的任何介质或培养基，例如琼脂等。计数菌落数主要是对肉眼可见的细菌菌落数进行计数。
如本文所述，包含选自特基拉芽孢杆菌、阿维芽孢杆菌和崛越氏芽孢杆菌中的一种或多种是指本发明所述复合微生物活菌制剂可以包含任意一种、任意两种或所有3种所述芽孢杆菌，例如包含特基拉芽孢杆菌、阿维芽孢杆菌或崛越氏芽孢杆菌中的任一种，或者包含阿维芽孢杆菌和崛越氏芽孢杆菌，或者包含特基拉芽孢杆菌、阿维芽孢杆菌和崛越氏芽孢杆菌。
当所述复合微生物活菌制剂包含两种或更多种芽孢杆菌时，各种芽孢杆菌之间的菌数可以是任意比例，例如1:1，12 (两种时)或者1:1 1,1 2 1,1 1 2 (二种时)；当所述复合微生物活菌制剂包含多种(例如2、3或4种)酵母菌时，各种酵母菌之间的菌数比例可以是例如1:1或者其它任意比例；当所述复合微生物活菌制剂包含多种(例如2、或3种) 片球菌时，各种片球菌之间的菌数比例可以是例如1:1或者其它任意比例。
本发明所述放大液体培养可以采用本领域已知的任何方法进行。例如，本发明提供了一种制备本发明复合微生物活菌制剂的方法，包括
-将片球菌、酵母菌以及芽孢杆菌经斜面活化后，接种于液体培养基中；
-活菌计数，测定片球菌、酵母菌和芽孢杆菌的菌数，按照所需比例将菌液进行混合；
-固体发酵；
-烘干，粉碎并过筛。
所述斜面活化是指将少量细菌挑在于试管中的斜面培养基中进行培养。所述斜面培养基可以是适于培养所述细菌的任何培养基。在一个实施方案中，培养片球菌的培养基为MRS培养基；培养酵母菌的培养基为YPD培养基；培养芽孢杆菌的培养基为LB培养基。本领域技术人员根据本领域技术知识可以确定不同细菌所需的斜面活化时间，例如12-48 小时，如12、24、36、48小时。斜面活化的温度可以是适于培养片球菌、酵母菌以及芽孢杆菌的任何温度，例如 26-35°C，如 27°C、28°C、29°C、30°C、31°C、32°C、33°C、34°C。
斜面培养基的配方以及适于活化片球菌、酵母菌和芽孢杆菌的培养条件例如温度、时间等均为本领域所熟知，例如参见微生物学实验教程(第2版)，周德庆，高等教育出版社。
所述液体培养基可以是适于培养片球菌、酵母菌以及芽孢杆菌的任何培养基，例如LB培养基、琼脂培养基等。用于片球菌、酵母菌以及芽孢杆菌的培养基可以相同或不同， 该培养基与斜面培养基也可以相同或不同。
液体培养温度可以是适于培养片球菌、酵母菌以及芽孢杆菌的任何温度，例如 26-350C，如 270C、28°C、29°C、30°C、31°C、32°C、33°C、34°C。培养时间可以是适于片球菌、酵母菌以及芽孢杆菌增殖的任意所需时间，例如24-52小时，如24、44或48小时。
所述所需比例是芽孢杆菌菌数占总菌数的50%以上、片球菌菌数占总菌数的 25 35%以及酵母菌菌数占总菌数的15 25%。在一个实施方案中，所述芽孢杆菌的菌数占总菌数的50 60%。
所述固体发酵也可以使用任何合适的发酵培养基。在一个实施方案中，所述固体发酵培养基组成为米糠73%、麸皮10%、大豆粉7%、奶粉8%和微量元素1% ;在另一个实施方案中，所述固体发酵培养基组成为糠粉63%，麸皮10%，豆柏9%，米粉18%和α -淀粉酶 O. 09%。发酵温度以及发酵时间均可以是适于培养所述细菌的任何温度和时间，例如温度为 26-40 V、26-350C或 35-40°C，如 27、28、29 或 30°C，时间为 44-52 小时，如 24 或 48 小时。
所述烘干和粉碎可以使用本领域已知的任何合适温度和其他条件，例如烘干温度为40°C或以下。所述过筛可以使用本领域已知的任何适于筛选所需细菌的筛目，例如40 60目，如40、50或60目。
本文中，液体培养和固体发酵的操作均按本领域常规操作，其中液体培养基和固体发酵基质采用本领域常用配方，例如参见微生物学实验教程(第2版)周德庆高等教育出版社。
本发明所述新型复合微生物活菌制剂中的片球菌所分泌的乳酸和片球菌素可对细菌的细胞质膜产生功能性的扰动，能杀死对人畜有害的病原体，同时对革兰氏阴性和革兰氏阳性菌有抗菌功效。并且片球菌为兼性厌氧微生物，可在兼性条件下分解腐败的有机物质、纤维素、木质素等及去除还原态硫化物，如硫化氢。
本发明所述新型复合微生物活菌制剂中的酵母菌能有效分解各种碳水化合物、 糖、淀粉及各种蛋白质氨基酸，为其他有效微生物提供增殖所需的营养物质。酵母菌可分泌多种酶类，如纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、淀粉酶、果胶酶和木质酶等，可更有效地降解水中的有机物质，强化活性污泥中微生物生态系统，改善活性污泥絮体结构，有利于溶氧向絮体内部传递，提闻摄氧能 力，减少曝气量。
本发明所述新型复合微生物活菌制剂中的芽孢杆菌可分泌菌素、菌肽等活性物质或乳酸，能有效抑制有害微生物和致病菌的繁殖，同时可分泌和合成多种酶类，如蛋白酶、 肽酶、脂肪酶、淀粉酶和蔗糖酶、纤维素酶等等，可有效分解水中有机物，辅助分解油脂和蛋白质废物，消除异味。芽孢杆菌生命力强，具有头领效应和鲶鱼效应，从而重组、完善和优化活性污泥中微生物的生态系统，增强系统的生物活性，提高活性污泥中的有效生物量和功能性。头领效应也有利于复合菌各菌株间形成互生、共生关系。
本发明的新型复合微生物活菌制剂可用作垃圾场、禽畜养殖场、公共场所、农产品市场和厨房卫生间等场所的除臭剂、驱蝇灭蝇剂、去油污剂以及消除管道堵塞剂；还可用作家禽畜牧业及宠物养殖中的饲料添加剂，其可治疗由食物引起的肠道疾病，减少死亡；其还可用作农业和观赏植物和鱼类中微生物疾病防治制剂，以预防和治疗由假单胞菌、腐霉菌和丝核菌等微生物引起的农作物和经济作物及观赏植物和鱼类的病害。
本发明的新型复合微生物活菌制剂利用混合的三种高活性益生菌(片球菌、酵母菌以及芽孢杆菌)与传统活性污泥的竞争与协同作用，完善和优化活性污泥中微生物的生态系统，增强系统的生物活性，可有效分解大量腐败有机物质，抑制有害微生物生长，消除臭味。酵母菌和芽孢杆菌利用有机废物生长，同时分泌多种酶类，可有效地分解各种大分子废物如纤维素，淀粉，蛋白质，油脂等，而片球菌则利用有机物质经分解产生的各种营养物质在厌氧条件下繁殖，分泌片球菌素，可广泛抑制革兰氏阳性菌和阴性菌的生长。
本发明的复合微生物活菌制剂能快速分解粪堆中有机质、抑制氨、硫化氢等臭味产生，并消除畜粪中的氨和胺，使得蝇类对粪便的趋向性减弱，减少和抑制家蝇及其幼虫的孵化、生长能力，达到灭蝇驱蝇的生物治理效果，蝇幼密度以及成蝇密度均大幅下降。复合菌作为一种有益菌组成的生态制剂与化学杀虫剂相比，具有用量少，无毒，不污染环境，不破坏生态，又有利于粪便的二次利用等·优点，剩余污泥量和好氧曝气量大幅减少，减泥与节电效果明显，环保性与经济性十分显著。
具体实施方式
本发明通过下述实施例进一步阐明，但任何实施例或其组合不应当理解为对本发明的范围或实施方式的限制。在不偏离本发明的精神和范围的前提下，本领域技术人员可以对本发明的技术方案进行任何修改或改变，这种修改和改变也包含在本发明的范围内。
下述实施例中所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中所用的菌种均从中国普通微生物菌种保藏管理中心购得。
除非特别指出，各微生物培养条件如下培养温度为30摄氏度，培养时间为48小时。培养片球菌培养基为MRS培养基；培养酵母菌培养基为YPD培养基；培养其余细菌培养基为LB培养基。各培养基配方参见《微生物学实验教程(第2版)》周德庆高等教育出版社。
实施例1
(I)分别进行放大培养
①将芽孢杆菌[堀越氏芽孢杆菌(CICM B1319)、特基拉芽孢杆菌(ATCC BAA-819)、凝结芽孢杆菌(CGMCC1. 2009)、解淀粉芽孢杆菌(CGMCC1. 1099)和阿维芽孢杆菌(DSM 16317)]分别经斜面(斜面培养基为LB培养基，30°C，48小时)活化后，依次接种到液体培养基中(液体培养基配方酵母膏5g、蛋白胨10g、NaCl 10g、蒸馏水lOOOmL，pH7.0)，30°C培养24小时。
②将酵母菌[毕赤酵母菌(CGMCC 2. 1463)、德克酵母菌(ATCC10559)]分别经斜面(斜面培养基为YPD培养基，300C，48小时)活化后，依次接种到培养基中(液体培养基配方 溶解10g酵母膏、20g蛋白胨于900ml水中，高压121°C、20min灭菌；再补加入100ml含20g 葡萄糖的灭菌溶液(115摄氏度20分钟)，30°C培养48小时。
③将片球菌[戊糖片球菌(ATCC 25744)、乳酸片球菌(ATCC 12697)]经斜面(斜面培养基为MRS培养基，300C，48小时)分别活化后，依次接种到液体培养基中(液体培养基配方酵母膏5g、蛋白胨10g、NaCl 10g、蒸馏水1000mL，pH 7.0)，30°C培养24小时。
活菌计数将包含待测细菌的溶液稀释，然后铺板培养，通过计数培养后形成的菌落数来确定原溶液中的活菌数(参见例如微生物学实验教程(第2版)，周德庆，高等教育出版社)。测定芽孢杆菌、片球菌、酵母菌的菌数，按照下述各种菌的菌数占总菌数的百分比进打混合牙抱杆囷占50 %左右，片球囷占25 %左右，酵母囷占25 %左右。
(2)固体发酵罐中加入糠粉63%，麸皮10%，豆柏9%，米粉18%，α -淀粉酶O. 09%, 121 °C灭菌30分钟，待罐温降至40°C以下，喷入混合菌液，35-40 V固体发酵48小时，在低于 40°C烘干，经60目过筛，备用。活菌计数，总菌数达到IO7Cfu/克以上，包装装袋。
实施例2
(1)分别进行放大培养(各菌所用斜面培养基以及活菌计数方法均与实施例1相同)
将片球菌[戊糖片球菌(ATCC 25744)、乳酸片球菌(ATCC 12697)和啤酒片球菌 (CGMCC1. 123)]分别经斜面活化后，依次接种于液体培养基中，35°C培养48小时，液体培养基配方葡萄糖3%，胰胨1. 5%，牛肉膏3%，蛋白胨2%，吐温-800.1%，乙酸钠0. 5%，柠檬酸铵 0.2%，硫酸镁 0.058%，硫酸锰 0.25%，pH 6.5。
将酵母菌[毕赤酵母菌(CGMCC 2. 1463)和酿酒酵母(CGMCC 2. 769)]分别经斜面活化后，依次接种于液体培养基中，28°C培养48小时，液体培养基配方葡萄糖1%，麦芽粉 0.2%，酵母膏 0.2%,乙酸钠 0.5%, pH 7。
将芽孢杆菌[解淀粉芽孢杆菌(CGMCC1. 1099)、凝结芽孢杆菌(CGMCC 1.2009)、 阿维芽孢杆菌(DSM 16317)和堀越氏芽孢杆菌(CICMB1319)]分别经斜面活化后，依次接种于液体培养基中，28°C培养48小时，液体培养基配方大豆粉1. 5%，淀粉1%，酵母膏0.2%，葡萄糖 1%，pH 6.5。
活菌计数测定芽孢杆菌、片球菌、酵母菌的菌数，按照下述各种菌的菌数占总菌数的百分比进彳丁混合牙抱杆囷占55 %左右，片球囷占30 %左右,酵母囷占15 %左右。
(2)固体发酵罐中加入米糠73%，麸皮10%，大豆粉7%，奶粉8%，微量元素1%，121°C 灭菌30分钟，待罐温降至40°C以下，在发酵罐旋转的情况下喷入混合菌液，28°C固体发酵 48小时，40°C烘干，粉碎，经40目过筛，备用。活菌计数，总菌数达到107Cfu/克以上，包装装袋。
实施例3
(1)分别进行放大培养(各菌所用斜面培养基以及活菌计数方法均与实施例1相同)
将片球菌[戊糖片球菌(ATCC 25744)、啤酒片球菌(CGMCC1. 123)]分别经斜面活化后，依次接种于液体培养基中，33°C培养48小时，液体培养基配方葡萄糖3%，胰胨1.5%， 牛肉膏3%，蛋白胨2%，吐温-800. 1%，乙酸钠0.5%，柠檬酸铵0.2%，硫酸镁0.058%,硫酸锰O. 25%, pH 6. 5。
将酵母菌[异常毕赤酵母(CGMCC 11061)、德克酵母(ATCC 10559)和德巴利酵母 (CGMCC 2. 1462)]分别经斜面活化后，依次接种于液体培养基中，27°C培养48小时，液体培养基配方葡萄糖1%，麦芽粉O. 2%，酵母膏O. 2%，乙酸钠O. 5%，pH 7. O。
将芽孢杆菌[枯草芽孢杆菌(CGMCC1. 1414)、凝结芽孢杆菌(CGMCC1. 2009)、阿维芽孢杆菌(DSM 16317)和球状芽孢杆菌(CGMCC 1.270)]分别经斜面活化后，依次接种于液体培养基中，27°C培养48小时，液体培养基配方大豆粉1. 5%，淀粉1%，酵母膏O. 2%，葡萄糖 1%，pH 6. 5。
活菌计数测定芽孢杆菌，片球菌、酵母菌的菌数，按照下述各种菌的菌数占总菌数的百分比进彳丁混合牙抱杆囷占60 %左右，片球囷占25 %左右,酵母囷占15 %左右。
(2)固体发酵罐中加入米糠73%，麸皮10%，大豆粉7%，奶粉8%，微量元素1%，121°C 灭菌30分钟，待罐温降至40°C以下，在发酵罐旋转的情况下喷入混合菌液，35°C固体发酵 48小时，40°C烘干，粉碎，经50目过筛，备用。活菌计数，总菌数达到IO7Cfu/克以上，包装装袋。
实施例4
(I)分别进行放大培养(各菌所用斜面培养基以及活菌计数方法均与实施例1相同)
将片球菌[戊糖片球菌(ATCC 25744)和乳酸片球菌(ATCC 12697)]分别经斜面活化后，依次接种于液体培养基中，34°C培养44小时，液体培养基配方葡萄糖3%，胰胨1. 5%， 牛肉膏3%，蛋白胨2%，吐温-800. 1%，乙酸钠O. 5%，柠檬酸铵O. 2%，硫酸镁O. 058%,硫酸锰0.25%, pH 6. 5。
将酵母菌[毕赤酵母菌(CGMCC 2. 1463)、白假丝酵母(CGMCC 2. 538)和德克酵母菌(ATCC 10559)]分别经斜面活化后，依次接种于液体培养基中，26°C培养52小时，液体培养基配方葡萄糖1%，麦芽粉O. 2%，酵母膏O. 2%，乙酸钠O. 5%，ρΗ7· O。
将芽孢杆菌[地衣芽孢杆菌(CGMCC1. 521)、阿维芽孢杆菌(DSM16317)、枯草芽孢杆菌(CGMCC1. 1414)和凝结芽孢杆菌(CGMCC 1.2009)]分别经斜面活化后，依次接种于液体培养基中，26°C培养52小时，液体培养基配方大豆粉1. 5%，淀粉1%，酵母膏O. 2%，葡萄糖 1%，pH 6. 5。
活菌计数测定芽孢杆菌、片球菌、酵母菌的菌数，按照下述各种菌的菌数占总菌数的百分比进行混合片球菌30%，酵母菌15%，芽孢杆菌55%。
(2 )固体发酵罐中加入米糠73%，麸皮10%，大豆粉7%，奶粉8%，微量元素1%，121°C 灭菌30分钟，待罐温降至40°C以下，在发酵罐旋转的情况下喷入混合菌液，30°C固体发酵 52小时，40°C烘干，粉碎，经60目过筛，备用。活菌计数，总菌数达到IO7Cfu/克以上，包装装袋。
效果实施例1
某城市生活污水处理厂A/0工艺，设计处理水量20000m3/d，现实际平均处理水量 24000m3/d，水温25 28°C，进水进水化学需氧量(COD)约为300 400mg/L，总磷(TP)约为5mg/L左右,氨氮(NH3-N)约为40 50mg/L,总氮(TN)约在60mg/L左右,溶解氧(DO)为1.5 2. 5mg/L，混合液悬浮固体颗粒即活性污泥浓度(MLSS)为1. O 2. 5g/L，连续投加实施例I的粉状复合菌菌剂O. 5ppm，就地用污水配制成菌剂活化液，连续投加到O (好氧)池。
投菌前后的平均效果
权利要求
1.一种复合微生物活菌制剂，其含有片球菌、酵母菌和芽孢杆菌，其中所述复合微生物活菌制剂含有的总菌数为IO7Cfu/克以上，并且其中所述复合微生物活菌制剂包含选自特基拉芽孢杆菌、阿维芽孢杆菌和崛越氏芽孢杆菌中的一种或多种芽孢杆菌。
2.权利要求1的复合微生物活菌制剂，其中所述复合微生物活菌制剂包含阿维芽孢杆菌。
3.权利要求1的复合微生物活菌制剂，其中所述片球菌是选自啤酒片球菌、乳酸片球菌和戊糖片球菌中的一种或多种片球菌。
4.权利要求3的复合微生物活菌制剂，其中所述复合微生物活菌制剂包含戊糖片球菌。
5.权利要求1的复合微生物活菌制剂，其中所述酵母菌是选自白假丝酵母、酿酒酵母、毕赤酵母、德克酵母、德巴利酵母和异常毕赤酵母中的一种或多种酵母菌。
6.权利要求1的复合微生物活菌制剂，其中所述复合微生物活菌制剂还包含选自枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、球状芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌中的一种或多种芽孢杆菌。
7.权利要求6的复合微生物活菌制剂，其中所述复合微生物活菌制剂包含凝结芽孢杆菌。
8.权利要求1-7任一项的复合微生物活菌制剂，其中所述芽孢杆菌的菌数应占所述复合微生物活菌制剂中总菌数的50%以上。
9.权利要求8的复合微生物活菌制剂，其中所述片球菌的菌数占所述复合微生物活菌制剂中总菌数的25 35%。
10.权利要求8或9的复合微生物活菌制剂，其中所述酵母菌的菌数占所述复合微生物活菌制剂中总菌数的15 25%。
11.权利要求8-10任一项的复合微生物活菌制剂，其中所述芽孢杆菌的菌数占所述复合微生物活菌制剂中总菌数的50 60%。
12.权利要求1-11任一项的复合微生物活菌制剂，其包含戊糖片球菌、乳酸片球菌、毕赤酵母菌、德克酵母菌、堀越氏芽孢杆菌、特基拉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和阿维芽孢杆菌。
13.权利要求1-11任一项的复合微生物活菌制剂，其包含戊糖片球菌、乳酸片球菌、啤酒片球菌、毕赤酵母菌、酿酒酵母、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、阿维芽孢杆菌和堀越氏芽孢杆菌。
14.权利要求1-11任一项的复合微生物活菌制剂，其包含戊糖片球菌、啤酒片球菌、异常毕赤酵母、德克酵母、德巴利酵母、枯草芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、阿维芽孢杆菌和球状芽孢杆菌。
15.权利要求1-11任一项的复合微生物活菌制剂，其包含戊糖片球菌、乳酸片球菌、毕赤酵母菌、白假丝酵母、德克酵母菌、地衣芽孢杆菌、阿维芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌。
16.一种制备权利要求1-15任一项所述的复合微生物活菌制剂的方法，包括Ca)将片球菌经斜面活化后，接种于液体培养基中，26-35°C培养；将酵母菌经斜面活化后，接种于液体培养基中，26-35 °C培养；将芽孢杆菌经斜面活化后，接种于液体培养基中，26-35°C培养；(b)检测片球菌、酵母菌和芽孢杆菌的菌数，按照芽孢杆菌菌数占总菌数的50%以上、片球菌菌数占总菌数的25 35%以及酵母菌菌数占总菌数的15 25%的比例将菌液混合；(c)26-35°C固体发酵44-52小时；及(d)在40°C或以下烘干，粉碎，经40 60目过筛。
17.权利要求16的方法，其中所述细菌在(a)中培养24-52小时。
18.—种处理有机污水的方法，包括使用权利要求1-15任一项的复合微生物活菌制剂的步骤。
19.权利要求1-15任一项所述的复合微生物活菌制剂在制备有机污水助净剂、水产养殖水体净化剂、除臭驱蝇剂、去油污剂、管道消堵剂、饲料添加剂或微生物疾病防治剂中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种复合微生物活菌制剂，由片球菌、酵母菌和芽孢杆菌等益生菌组成，总菌数为107cfu/克以上。本发明还公开了该新型复合微生物活菌制剂的制备方法及其在制备有机污水助净剂、水产养殖水体净化剂、除臭驱蝇剂、去油污剂、消除管道堵塞剂、饲料添加剂、微生物疾病防治剂中的应用。本发明的新型复合微生物活菌制剂具有氨氮、总氮及总磷去除率较高，剩余污泥产量少，节能环保等综合功效以及使用方便、作用安全快速、无二次污染、有利生态保护、处理成本低、综合收益好等特点。
文档编号C11D3/00GK103031253SQ20121034244
公开日2013年4月10日 申请日期2012年9月14日 优先权日2012年9月14日
发明者曾伟明, 贺启环, 王世民, 王韵, 周懋安 申请人:上海环伟生物科技有限公司