专利名称：趋化因子ccl18作为生物标记的制作方法
技术领域：
在稳态应答和病理应答中，白细胞运输的调节在很大程度上通过趋化因子来完成。趋化因子包括一大类同源蛋白质，其通过结合细胞表面的七螺旋G蛋白偶联的受体行使它们的生物功能。CCL18，又被称为DC-CK1、PARC、AMAC-1和MIP-4，是一种与CCL3结构相关的人趋化因子。目前，CCL18没有小鼠等同物，其受体未知。CCL18在生发中心和扁桃体由树突状细胞(DC)组成型表达，其显示主要吸引幼稚T细胞、CD38-帽状区(mantle zone)B淋巴细胞和DC。抗原呈递细胞(APC)对CCL18的产生能够被Th2细胞因子(如IL-4、IL-13)增加，而被IFN-γ抑制。
遗传过敏性皮炎(AD)是由T辅助细胞2(Th2)介导的慢性炎性皮肤疾病，其特征为湿疹性皮肤损伤，例如特征为伴随有表皮细胞间水肿的强烈瘙痒的红斑丘疹。AD的皮肤损伤在组织病理学上展现为由巨噬细胞、增多的承载IgE的朗氏细胞(LC)、炎性的树突状表皮细胞、嗜酸性粒细胞和CD4+Th细胞组成的单核细胞浸润(见例如Leung DY.，J.AllergyClin.Immunol.2000，105860-76)。急性损伤中的Th细胞主要产生如IL-4、IL-5和IL-13的Th2细胞因子，而在慢性AD中也存在分泌IFN-γ的Th细胞。被认为介导Th细胞进入AD皮肤的归巢行为的趋化因子包括CCR4的配体CCL17、CCL22和CCR10的配体CCL27。然而，可能需要另外的趋化信号来特别招募专门的T细胞亚群。
目前，尚无用于AD的可靠的实验室标记，但是AD患者经常有增高的IgE水平和对食物及其它普通过敏原(如花粉、霉菌和昆虫)的过敏性反应。无论过敏原类型怎样，都非常需要能够用于了解AD患者的病理学状态以及决定疾病治疗方案的诊断参数。对患者伤害较少并能方便的提供诊断所需信息的过敏疾病标记将非常有用。
发明内容
我们发现，与健康对照相比，患者(如AD患者)体液(如血液)中的CCL18以及CCL18分泌细胞水平显著提高，所述分泌细胞如APC(包括单核细胞)和DC。这个发现和其它发现突出了CCL18作为生物标记的有用性。
一方面，本发明提供趋化因子CCL18用作个体体液样品中的生物标记。
用在本发明中的“生物标记”指对个体体液样品中CCL18的测定(检测和/或量化)是这类病症的指示和/或紊乱状况的监控。
个体体液样品可以来自血液，如分离的单核细胞，或者来自血液级分，如血浆或血清，如血清。
另一方面，本发明提供了CCL18作为血液样品(如血清)中的生物标记的用途。
本文用到的CCL18包括全长CCL18蛋白、CCL18蛋白片段、CCL18蛋白突变体、CCL18衍生物和分泌(产生)CCL18的细胞，如包括单核细胞和树突状细胞(DC)的抗原呈递细胞(APC)。CCL18的片段、突变体和衍生物中保留了CCL18的生物标记特征。
根据本发明，CCL18作为生物标记的用途指在上述个体样品中的CCL18得到检测，如使用包括测定领域常规的测定法的检测手段，如免疫测定法，例如酶联免疫测定法(ELISA)、基于荧光的测定法，例如解离增强的镧荧光免疫测定法(DELFIA)或者放射性分析测定法。本发明的检测手段包括如特异性识别CCL18的分子，如可直接或间接检测的分子。本发明检测手段优选包括抗体，包括抗体衍生物或它的片段，如识别CCL18的抗体，或带有标签的CCL18识别抗体。
另一方面，使用CCL18特异性抗体来测定CCL18水平。
标签可以是常规的，如生物素或酶，例如碱性磷酸酶(AP)、辣根过氧化物酶(HRP)或过氧化物酶(POD)或荧光分子，如荧光染料，例如异硫氰酸荧光素。优选标签是生物素。可以按照常规方法检测带有标签的分子(如带有标签的抗体)，如通过荧光测量或酶检测的方法。
在优选的方面，使用识别CCL18的抗体作为检测手段，如使用标记(例如荧光标记)的抗体形式。
个体的体液样品(如血液)中的CCL18分泌细胞可以用例如下文描述的常规方法确定。可以如通过经密度梯度分离，从样品(如血液)中纯化细胞，并且染色获得的纯化细胞。任选地刺激细胞(如用白细胞介素-4刺激)之后，将抗CCL18抗体(如荧光标记的抗CCL18抗体)加入经染色的细胞制品并检测CCL18分泌细胞的水平。
任选地，将样品中包含的CCL18或检测手段中包括的识别CCL18的分子(如可检测的分子)固定于固相。合适的固相包括如常规的材料，如聚苯乙烯或聚乙烯板之类的塑料板，尤其是微量滴定板。微珠也可被用作固相，如包被的微珠。固相可以用包被材料包被，该材料的性质取决于检测手段中包括的标签。包被材料应该能与标签结合，如标签是生物素而包被材料包含链霉抗生物素蛋白，例如其共价结合到固相。
另一方面，本发明提供趋化因子CCL18在选自过敏性疾病和Th2介导的紊乱的紊乱或疾病的个体体液样品中用作生物标记。
另一方面，本发明提供趋化因子CCL18在与遗传过敏性皮炎相关的紊乱或疾病的个体体液样品中作为生物标记的用途。
本发明使用的“紊乱和疾病”包括选自过敏性疾病和Th2介导的紊乱的多种类型和严重度的紊乱和疾病。过敏性疾病和Th2介导的紊乱包括如过敏性肺炎、春季发生的角膜结膜炎、接触性过敏以及与遗传过敏性皮炎有关的包括多种炎性皮肤疾病(如遗传过敏性皮炎)的紊乱或疾病。
另一方面，本发明提供用于筛选和/或体外诊断个体中选自过敏性疾病和Th2介导的紊乱的紊乱或疾病的方法，该方法包括a)提供个体体液样品，b)测定步骤a)提供的上述样品中的CCL18水平，c)将步骤b)测定的CCL18水平与来自健康对照个体体液样品的参考水平相比较，和d)通过确定步骤b)测定的上述CCL18水平是否显著不同于上述参考水平，筛选和/或体外诊断选自变态性疾病和Th2介导的紊乱的紊乱或疾病。
CCL18的测定按如上所述进行，使用如特异识别生物标记的分子(如抗体、抗体衍生物、抗体片段，如抗CCL18抗体、如商业可获得的CCL18特异性抗体)，通过如免疫诊断分析的方法。
另一方面，本发明提供了用于监测物质对个体的治疗功效的方法，该物质预期能够减轻或治愈选自过敏性疾病和Th2介导的紊乱的紊乱或疾病，该方法包括测定CCL18在上述个体体液样品中的水平并且与施用上述物质之前的CCL18水平相比较。
另一方面，本发明提供了在个体体液样品中筛选和/或体外诊断选自过敏性疾病和Th2介导的紊乱的紊乱或疾病的试剂盒，其包括a)识别CCL18蛋白或其部分的分子，任选为标记的形式，b)使用说明书，c)任选的检测方法，d)任选的固相。
由本发明提供的这类试剂盒还可包含重要组分，包括测定样品的适宜环境和例如测定样品中CCL18的适当手段。
图1CCL18在AD中的表达。染色来自AD、银屑病或健康皮肤的损伤活检组织的冰冻切片以确定CCL18的表达。
图2CCL18在AD中的表达。用所示抗体对AD皮肤活检组织的冰冻切片进行双免疫荧光染色。原始放大200×(图1)和400×(图2)。
图3CCL18的血清水平。用IL-4刺激来自AD患者(n＝8)和对照(n＝13)的PBMC。产生CCL18的单核细胞和分泌CCL18的CD11c+血液DC在PBMC中的百分率用盒图表示。分析显示了AD的单核细胞和对照之间(各自的平均值为7.1％和1.3％，p＜0.003)以及AD的DC和对照之间(各自的平均值为5.6％和1.9％，p＜0.001)的显著性差异。
图4CCL18的血清水平。AD患者(n＝36)血清中的CCL18水平显著高于健康对照(n＝28)受试者(各自的平均值为34.9ng/ml和10.7ng/ml，p＜0.0003)。
图5CCL18的血清水平。疾病重度分数(severity disease scores)(IGA)不同的AD患者之间，CCL18的血清水平的图形分布。
图6CCL18的血清水平。AD患者的CCL18和CCL22血清水平间的联系。实心圆包括极轻度的到重度的疾病表现的患者(r＝0.6，p＜0.003)。空心圆表示被排除于相关性分析之外的最高重度分数的患者。
图7源自AD的记忆T细胞的CCL18结合情况。AD皮肤中结合CCL18(红)和表达CD3(深蓝)细胞的免疫组织化学分析。用HE复染(原始放大1000×)。
图8源自AD的记忆T细胞的CCL18结合情况。在源自AD的静息T细胞系和克隆中的CCL18或CCL22结合细胞，趋化因子用荧光(F)标记。CD4+且结合CCL18的T细胞的百分率在右上角给出。
图9源自AD的记忆T细胞的CCL18结合情况。结合CCL18的T细胞系NIT中对CCR3的FACS染色。
图10源自AD的记忆T细胞的CCL18结合情况。T细胞系NIT中CCL18-F和CCL22-F结合的FACS。FACS染色都代表了5-10个重复实验的结果，并且在不同的T细胞系和克隆中相一致。
图11源自AD的记忆T细胞在体外和体内应答CCL18的迁移。在趋化室测定(chemotaxis chamber assay)中，源自AD皮肤的T细胞对于CCL18(实心圆)和CCL22(空心正方)的浓度增加有显著应答(p＜0.05)。通过与特异性中和的单克隆抗体孵育封闭最高浓度的细胞。每个数据点评估四个重复实验，以平均值±SE表示。给出的是15次实验其中2次的结果。
图12源自AD的记忆T细胞在体外和体内应答CCL18的迁移。在SCID-hu皮肤小鼠中人记忆T细胞向人皮肤移植物的迁移。将CCL18(n＝8)、CCL22(n＝8)或PBS(n＝9)注射入人皮肤移植物并通过FACS分析评估记忆T细胞的皮肤归巢。CCL18诱导T细胞系NIT和T细胞克隆98016T.02显著迁移(p＜0.05)。给出的是4次独立实验中2次的结果。下列实施例中的温度用摄氏度表示且未加校正。
使用到下列缩写AD遗传过敏性皮炎APC 抗原呈递细胞BSA 牛血清白蛋白CFSE 羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯DC树突细胞EASI 湿疹面积严重度指数ELISA 酶联免疫吸附测定法FACS 荧光激活细胞分选术FACS缓冲液含有2％FCS和0.1％NaN3的PBSFCS 胎牛血清FITC 异硫氰酸荧光素IGA 研究员的全球评估(Investigator’s GlobalAssessment)IL白细胞介素LC朗格汉斯细胞mAb 单克隆抗体PBMC 外周血单核细胞PBS 磷酸盐缓冲盐水RPMI Roosevelt Park Memorial研究所开发的细胞培养基RT 室温SCID重度联合免疫缺陷SCID-hu Skin mice 移植人皮肤的SCID小鼠SD 标准偏差SE 标准误差Th T辅助细胞实施例方法患者血液样品得自36个AD患者和28个非特异反应性的健康对照。临床上严重性用EASI和IGA记录(见如，Hanifin，J.M.，等人，Exp.Dermatol.2001，1011-18)。患者群体的组成用IGA评分几乎清除n＝3，轻度疾病n＝0，中度疾病n＝15，重度疾病n＝10，超重度疾病n＝4。在采集血液样品和皮肤活检组织之前至少4周，患者未受到任何全身或局部免疫抑制药物的治疗。
细胞纯化和培养来自人血液的PBMC用Ficoll-PaqueTMPlus(Amersham Biosciences)以密度梯度分离制备。源自AD的T细胞系(NIT、SVT、DK2-JOT)和克隆(98016T.02、98016T.24)表达皮肤的淋巴细胞抗原(CLA)、CCR4并且在激活后呈现Th2/Th0细胞因子分泌方式，该细胞系和克隆产生自损伤的穿孔活检组织，如描述于-Carballido，J.M.等人，J.Immunol.1997，1594316-4321，-Biedermann，T.等人，Eur.J.Immunol.2002，323171-3180。
T细胞在补充了重组人IL-2(20ng/ml)的X-Vivo15培养基(BioWitthaker)中培养。
流式细胞计数在冰上用FACS缓冲液染色细胞30分钟。使用到下列单克隆抗体及其相应的同种型CD3-Pe、CD3-Percp、CD4-Pe、CD4-Percp、CD8-Percp、CD14-FITC、CD19-FITC、CD20-FITC、CD62-Pe、CD56-FITC、HLADR-Cychrome、CCR4-Pe(BD Pharmingen)、CD3-APC、CD3-FITC、CD4-APC、CD11a-Pe、CD11c-APC、CD19-APC、(Caltag)、CCR3-Pe、CCR5-Pe、CCR7-Pe、CXCR3-Pe、CXCR4、CXCR6-Pe(R&D Systems)。CCL22-Alexa647由Dictagene提供。CCL18(Peprotech)按照厂商指示用FITC或生物素(Molecular Probes)标记。用BD CELLTMQUEST软件在FACSCaliburTM(BD)型流式细胞仪上进行分析。
用IL-4刺激单核细胞和树突细胞后细胞内CCL18的检测取自AD患者(n＝8)和对照(n＝13)的PBMC用或不用10ng/ml重组人IL-4刺激(5×105细胞/ml)48小时并在最后3小时用布雷菲德菌素A(10μg/ml，Sigma)处理。通过CD14染色识别单核细胞，骨髓的DC被确定为HLA-DR+、lin(CD3、14、19、20、56)-PBMC中的CD11c+级分。为了对细胞内的CCL18染色，用4％低聚甲醛(Sigma)固定表面染色的细胞，0.5％皂苷(Sigma)透化细胞，以山羊抗人CCL18单克隆抗体继之以猴抗山羊Pe(DPC Biermann)染色。山羊血清(Sigma)被用作同种型对照。
ELISA用Duoset ELISA测定法测定血清CCL18和CCL22水平。
趋化性测定将30μl趋化因子或对照培养基(含有0.5％BSA的RPMI 1640)加入96孔趋化室(Neuro Probe)的下层孔中。钙荧光素AM(1μM，MolecularProbes)标记的细胞以3×106细胞/ml接种于上层室和下层室中选作用来得到100％迁移值的孔。上下两室区用3μm孔径的聚碳酸酯滤膜(NeuroProbe)分开。在37℃孵育2.5小时后，移去滤膜，翻转板丢弃上清液。向每孔加入20μl 0.4％的Triton-X100(Sigma)。迁移度使用Victor II(Wallac)多孔板读取器通过读取荧光而量化。
SCID-hu皮肤小鼠中的体内迁移测定根据机构和政府的伦理学指南，使用如Carballido，J.M.等人，J.Immunol.Methods 2003，273125-135所述方法向SCID(C.B-17/GbmsTac-PrkdcscidLystbg)小鼠(Taconic M&B)移植人皮肤片，其获得自WHRTB，Petz Aladár County Hospital Gyr，匈牙利。趋化因子诱导的人T细胞的皮肤归巢实验使用经改良的Biedermann，T.等人在Eur.J.Immunol.2002，23171-3180中提到方法进行。源自AD皮肤的T细胞用CFSE标记(Molecular Probes，1M于PBS室温5分钟)，并且以5×107细胞/小鼠的细胞量静脉注射入移植了人皮肤的SCID小鼠(SCID-hu皮肤小鼠)。其后立即向人皮肤移植物皮内注射CCL18或CCL22(300ng于30μl PBS，R&D)或仅注射PBS。24小时后，皮肤移植物被移出并处理成单细胞悬液，FACS染色分析确定于活细胞级分(碘化丙啶阴性)中存在的CD3+、CFSE+细胞的百分率。
免疫组织学来自健康人(n＝3)正常皮肤和AD患者(n＝10)或银屑病患者(n＝3)的损伤皮肤的5μm的恒冷箱切片，经过丙酮固定后用山羊抗CCL18单克隆抗体(R&D)或山羊血清和生物素化的马抗山羊IgG(Vector)并随后加入缀合抗生物素蛋白的碱性磷酸酶(AP)和萘酚AS磷酸盐/FAST RedTR底物(Sigma)染色。AD样品中的CCL18结合细胞用CCL18-生物素随后用抗生物素蛋白-AP和Fast Red检测。样品用抗CD3单克隆抗体(BD继之以抗小鼠Ig-生物素(Vector)、抗生物素蛋白-AP和Fast Blue(Sigma)供染，并用苏木精-伊红(HE，Merck)复染。用于免疫荧光分析的恒冷箱切片用山羊抗CCL18和小鼠抗HLA-DR或抗CD3(BD)、抗CD1a(Caltag)、抗CD207(Baxter)继之分别加入兔抗山羊-TxRd和马抗小鼠-FITC(Vector)进行染色。载玻片用含有DAPI的封固剂(Vector)盖片。
统计学分析数据以平均值±SE或以盒图(标明平均值、中值、25％-75％百分位数和SD)表示。统计学的显著性用非配对t检验确定。临床数据的单相关性通过测定Pearson’s相关系数和未经校正的概率值来测试。P＜0.05被认为有显著性。
实施例1AD是一种与皮肤对过敏原高反应性和IL-4高产生相关的炎性皮肤疾病。因此，AD能够为上调CCL18提供适宜环境。为了证明这一点，用免疫组织化学的方法评估并比较来自AD患者(n＝10)、正常人(n＝3)和银屑病患者(n＝3)的皮肤样品中CCL18的表达。在全部AD皮肤样品中都可以检测到CCL18表达，但是在健康个体或银屑病个体的皮肤中CCL18表达缺失(见如图1)。在AD皮肤中，CCL18表达在与单核细胞浸润密切相关的上皮血管丛(upper dermal vascular plexus)强烈CCL18表达。免疫荧光染色证明CCL18表达限于HLA-DR+APC(见如图2)。特别地，表皮中所有的CCL18表达细胞都是CD1a+的。随后用CD207染色证明大部分CCL18表达细胞是LC，而剩余的群体由炎性的树突表皮细胞组成。由于正常或银屑病皮肤中的LC不产生CCL18趋化因子，LC产生CCL18似乎是与AD相关联的Th2细胞因子环境的结果。角质形成细胞、成纤维细胞和CD3阳性T细胞不表达CCL18(见如图2)。
实施例2进一步研究表明，AD患者血液中的CCL18和分泌CCL18的APC增加。IL-4刺激细胞后，用细胞内的免疫荧光染色评估AD患者和健康对照中APC表达的CCL18。我们发现AD患者血液中分泌CCL18的单核细胞(CD14+)的百分比显著高于(＞5倍，p＜0.003)健康个体中的观察值(见如图3)。同样地，AD患者的血液中产生CCL18的DC中的CD11c+、HLA-DR+百分比都有增加(3倍，p＜0.001)(见如图3)。两组实验都是仅在IL-4刺激后才检测到CCL18表达细胞。未经过或经过IL-4刺激的PBMC的CD3+T和CD19+B细胞级分检测不到CCL18产生。存在于AD患者循环中的更高数目的CCL18分泌细胞与升高的CCL18血清水平相关(见如图4)。AD患者的CCL18血清值(平均值34.9ng/ml±5.3SE)三倍(p＜0.0003)高于健康的、非变态性的且年龄和性别匹配的对照(平均值10.7ng/ml±0.9SE)。在中度和重度AD期(以临床IGA和EASI分数评估)的CCL18表达水平高于在有轻微疾病表现时(见如图5)。然而，在疾病重度分数很高的患者体内，CCL18的血清水平下降(见如图5)。非常严重/慢性的AD表现不仅包括产生IL-4，许多产生IFN-γ的Th细胞也在这类皮肤损伤中被发现(见如Grewe，M.等人，Immunol.Today 19359-361，1998)。可预期在严重/慢性AD情况下，当环境中的IL-4不丰富时，CCL18的产生会减少。这可能是在具有最高临床疾病分数患者的血清中观察到CCL18表达减少的原因。在我们的患者群中还发现EASI和血清CCL22水平间的关系(r＝0.4，p＜0.05，数据未出示)。此外，我们发现在轻微到重度疾病患者体内发现CCL18与CCL22的表达强烈相关(r＝0.6，p＜0.003，图6，实心圆)。然而，有最高CCL22血清水平也具有最高疾病分数的患者仅表现出中等的CCL18表达(见如图6，空心圆)。因此，CCL18表达在AD发展中的选择性增加及其随后在具有最高临床疾病分数的患者体内的下降表明一种独特的CCL18调节模式。
实施例3我们还发现AD中CCL18结合记忆T细胞。CCL18受体未知这一事实妨碍了对CCL18靶向的细胞群体的检测。为了克服这个问题，我们制备了用FITC和生物素标记且生物特性不变的CCL18。在AD患者活检组织中，CCL18与CD3+皮肤浸润T细胞的一部分结合(见如图7)。此外，CCL18结合到淋巴管，表明这种趋化因子可能参与经由这些管道的淋巴细胞运输(见如图7)。CCL18还结合高达5％的记忆T细胞系和源自AD皮肤的克隆(见如图8)。在这些T细胞系中，在CD4+区优先观察到CCL18表达(见如图8)。该结合是特异性的，因为CCL18还结合包括人CD45RA+、CCR7high、CD62Lhigh、CD25-、CD4+或CD8+T细胞的不同PBMC群体，其与已报道的CCL18对幼稚T细胞的影响相一致，见如Adema，G.J.等人，Nature 387713-717(1997)。此外，CCL18结合能够被未经标记的CCL18竞争，但是不被包括CCL11的其它趋化因子竞争，CCL11的受体CCR3曾被报道介导CCL18的拮抗反应(见如Nibbs，R.J.等人，J.Immunol.2000，1641488-1497)。使用特异性的单克隆抗体还可以排除CCL18结合的T细胞群体上的CCR3的表达(见如图9)。在不同的T细胞系和克隆中，CCL22结合细胞的百分比高于CCL18结合细胞的百分比(见如图3B)。另一方面，所有结合CCL18的细胞也结合CCL22(见如图10)，表明它们可能代表CCR4+Th细胞的亚群。
实施例4在体外和体内迁移测定中功能性评估CCL18结合记忆Th细胞的功能相关性。在体外，所有测试的AD来源的T细胞系和克隆显著迁移，并以剂量依赖的方式应答CCL18。CCL18诱导的迁移程度与CCL22诱导的迁移程度相当(见如图11)。CCL18和CCL22诱导的迁移都能够用特异性的中和单克隆抗体阻断，证明该应答的特异性(见如图11)。CCL18的体内功能用前面提到的SCID-hu皮肤小鼠模型(Biederman T.等人，Eur.J.Immunol.2002，32，3171-3180)的修饰体研究。源自AD的记忆T细胞系和克隆应答CCL18向移植在SCID小鼠的人皮肤移植物显著迁移(见如图12)。CCL18诱导的皮肤归巢在迁移程度上与CCL22诱导的迁移相当(见如图12)。
总之，所有这些结果为CCL18蛋白质表达与AD相关提供了证据并且描述了CCL18在体内招募记忆Th细胞群进入人皮肤的新能力。在取自患者的样品(如血液样品)中可以测定CCL18水平的调控(如增长)，因此可用作AD的指示。
权利要求
1.CCL18趋化因子用作个体体液样品中的生物标记的用途。
2.权利要求1的趋化因子用作个体体液样品中紊乱或疾病的生物标记的用途，所述紊乱或疾病选自变态性疾病和Th2介导紊乱。
3.权利要求1或2中任意一项的趋化因子，其中紊乱或疾病与遗传过敏性皮炎有关。
4.用于筛选和/或体外诊断个体中紊乱或疾病的方法，所述紊乱或疾病选自变态性疾病和Th2介导的紊乱，该方法包括a)提供个体的体液样品，b)测定步骤a)提供的上述样品中CCL18的水平，c)将步骤b)测定的CCL18水平与来自健康对照个体体液样品的参考水平相比较，和d)通过确定步骤b)测定的上述CCL18水平是否显著不同于上述参考水平，筛选和/或体外诊断选自变态性疾病和Th2介导的紊乱的紊乱或疾病。
5.权利要求4的方法，其中用CCL18特异性抗体测定CCL18的水平。
6.用于监测物质对个体的治疗功效的方法，所述物质预期能够有效减轻或治愈选自变态性疾病和Th2介导的紊乱的紊乱或疾病，该方法包括测定所述个体体液样品中的CCL18水平并且将它与施用所述物质前的CCL18水平相比较。
7.用于在个体体液样品中筛选和/或体外诊断紊乱或疾病的试剂盒，所述紊乱或疾病选自变态性疾病和Th2介导的紊乱，该试剂盒包括a)识别CCL18蛋白或其部分的分子，任选地，其是被标记的形式，b)使用说明书，c)任选的检测手段，d)任选的固相。
全文摘要
本发明涉及诊断工具，例如作为个体体液样品中的生物标记的趋化因子CCL18，以及它在多种方法中的用途。
文档编号C07K14/435GK1930476SQ200580008172
公开日2007年3月14日 申请日期2005年3月21日 优先权日2004年3月22日
发明者埃雷拉 J·M·卡瓦利多, C·京特 申请人:诺瓦提斯公司