专利名称：Hedgehog信号传导途径的喹喔啉抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及在哺乳动物中用于治疗和/或预防的有机化合物，尤其涉及能抑制hedgehog信号传导途径并可用于治疗过度增殖性疾病和血管发生介导的疾病的喹喔啉化合物。
背景技术：
在黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)中Hedgehog(Hh)蛋白质最初被确认为参与胚胎图式发育(patterning)的体节极性基因(Nusslein-Volhard等人，Roux.Arch.Dev.Biol.193267-282(1984))。后来确认果蝇hedgehog的三种直向同源物(Sonic、Desert和Indian)存在于所有脊椎动物中，包括鱼类、鸟类和哺乳动物。在小鼠胚胎发育和成年啮齿动物和人中，Desert hedgehog(DHh)主要在睾丸中表达；在胚胎发生和成人骨形成过程中，Indian hedgehog(IHh)参与骨发育；在发育脊椎动物胚胎的脊索和底板中高水平表达Sonic hedgehog(SHh)。体外外植块测定以及SHh在转基因动物的异位表达显示SHh在神经管图式发育中具有关键作用(Echelard等人，supra.；Ericson等人，Cell 81747-56(1995)；Marti等人，Nature 375322-5(1995)；Krauss等人，Cell 75，1432-44(1993)；Riddle等人，Cell 751401-16(1993)；Roelink等人，Cell 81445-55(1995)；Hynes等人，Neuron 1915-26(1997))。在肢体(Krauss等人，Cell 751431-44(1993)；Laufer等人，Cell 79，993-1003(1994))、体节(Fan和Tessier-Lavigne，Cell 79，1175-86(1994)；Johnson等人，Cell 791165-73(1994))、肺(Bellusci等人，Develop.12453-63(1997)和皮肤(Oro等人，Science 276817-21(1997))的发育中Hh也具有作用。类似地，IHh和DHh参与骨、肠和生发细胞的发育(Apelqvist等人，Curr.Bio1.7801-4(1997)；Bellusci等人，Dev.Suppl.12453-63(1997)；Bitgood等人，Curr.Biol.6298-304(1996)；Roberts等人，Development 1213163-74(1995))。
人SHh被合成为45kDa的前体蛋白，该蛋白在自身催化裂解时得到负责正常hedgehog信号传导活性的20kDa N-末端片段；和其中N-末端片段与胆固醇部分结合的负责自体加工活性的25kDa C-末端片段(Lee，J.J.等人，(1994)Science 266，1528-1536；Bumcrot，D.A.等人，(1995)，MoI.Cell Biol.15，2294-2303；Porter，J.A.等人，(1995)Nature 374、363-366)。N-末端片段由全长前体序列的氨基酸残基24-197组成，它通过其C-末端的胆固醇保持膜相关(Porter，J.A.等人，(1996)Science 274，255-258；Porter，J.A.等人，(1995)Cell 86，21-34)。胆固醇结合负责hedgehog信号的组织定位。
在细胞表面，认为Hh信号通过12跨膜域蛋白质Patched(Ptc)(Hooper和Scott，Cell 59751-65(1989)；Nakano等人，Nature 341508-13(1989))和G-蛋白偶联类受体Smoothened(Smo)(Alcedo等人，Cell86221-232(1996)；van den Heuvel和Ingham，Nature 382547-551(1996))中继。遗传和生化证据两者都支持其中Ptch和Smo是多成分受体复合物的一部分的受体模型(Chen和Struhl，Cell 87553-63(1996)；Marigo等人，Nature 384176-9(1996)；Stone等人，Nature 384129-34(1996))。在Hh结合至Ptch时，Ptch对Smo的正常抑制效果得以缓解，从而允许Smo转导Hh信号通过质膜。但是，Ptch控制Smo活性的准确机理仍然有待阐明。
由Smo引发的信号级联放大导致移入细胞核的Gli转录因子的激活，它们在细胞核中控制目标基因的转录。已发现Gli能在负反馈回路中影响Hh途径抑制剂如Ptc和Hipl的转录，这说明正常的细胞分化和器官形成需要牢固控制Hh途径活性。不受控制的Hh信号传导途径的激活与癌症尤其是脑癌、皮肤癌和肌肉癌以及血管发生有关。一种对此的解释是已发现Hh途径能通过激活参与细胞周期进程的基因如参与Gl-S转变的细胞周期蛋白D而调节成人细胞增殖。而且，SHh阻断由细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21介导的细胞周期停滞。通过诱导参与增殖的EGFR途径中的成分(EGF、Her2)以及参与血管发生的PDGF(PDGFα)和VEGF中的成分，Hh信号进一步参与癌症。在具有基底细胞痣综合征(BCNS)的患者中确认了Ptch基因的功能丧失性突变，基底细胞痣综合征是一种特征为多发性基底细胞癌(BCC)的遗传疾病。功能不良性Ptch基因突变还与大百分比的散发性基底细胞癌肿瘤有关(Chidambaram等人，Cancer Research 564599-601(1996)；Gailani等人，Nature Genet.1478-81(1996)；Hahn等人，Cell 85841-51(1996)；Johnson等人，Science 2721668-71(1996)；Unden等人，Cancer Res.564562-5Wicking等人，Am.J.Hum.Genet.6021-6(1997))。认为Ptch功能丧失会在基底细胞癌中引起不受控制的Smo信号传导。类似地，在散发性BCC肿瘤中确认了激活性Smo突变(Xie等人，Nature 39190-2(1998))，从而强调了Smo作为信号传导亚基在SHh受体复合物中的作用。
已经研究了各种hedgehog信号传导抑制剂，如已发现能阻滞G0-G1的细胞周期并诱导SCLC中的凋亡的天然生物碱环杷明。据信，环杷明能通过结合至其七螺旋束而抑制Smo。已发现毛喉素能通过激活保持Gli转录因子失活的蛋白激酶A(PKA)而抑制Smo下游的Hh途径。尽管取得了这些进展以及其他化合物，但仍然需要有效的hedgehog信号传导途径抑制剂。
发明内容
在本发明的一个方面，提供具有通式(I)的新型hedgehog抑制剂及其盐和溶剂化物 其中A为碳环或杂环；X为亚烷基、NR4C(O)、NR4C(S)、NR4C(NH)、NR4SO、NR4SO2、NR4C(O)NH、Nr4C(S)NH、C(O)NR4、C(S)NR4、C(NH)NR4、NR4PO或NR4PO(OH)，其中R4为H或烷基；Y为N、CH或CR3；R1选自分别任选地被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基、卤代烷基或烷氧基取代的烷基、环烷基、芳基或杂环；所述环烷基、芳基和杂环进一步任选地被-(CH2)s-(Q)u-(CH2)t-Z取代，其中Q为C(O)、S(O)、SO2、C(O)O、OC(O)、NR4C(O)、NR4C(S)、NR4SO、NR4SO2、NR4C(O)NH、NR4C(S)NH、C(O)NR4、或C(S)NR4；Z为羟基、氨基、卤素、烷基磺酰基、烷氧基、烷氧基羰基、卤代烷基、碳环、杂环，或被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基或烷氧基烷氧基取代的碳环或杂环；s和t独立地为0至5，u为0或1；R2为分别任选地被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基或烷氧基取代的卤素、羟基、烷基、酰基或烷氧基；R3为分别任选地被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基或烷氧基取代的卤素、羟基、烷基、酰基或烷氧基；m为0-3；n为0-3。
在本发明的另一方面，提供了包括式I化合物和载体、稀释剂或赋形剂的组合物。
在本发明的另一方面，提供用于治疗癌症的方法，该方法包括向有需要的哺乳动物给予有效量的式I化合物。
在本发明的另一方面，提供用于抑制细胞内hedgehog信号传导的方法，该方法包括用式I化合物接触所述细胞。
在本发明的另一方面，提供用于治疗与哺乳动物体内hedgehog信号传导相关的疾病或病症的方法，该方法包括向所述哺乳动物给予有效量的式I化合物。
具体实施例方式
定义“酰基”指式-C(O)-R所示的包含取代基的羰基，其中R为烷基、碳环、杂环、碳环烷基或杂环烷基，其中烷基、碳环和杂环如本文所定义。酰基包括烷酰基(如乙酰基)、芳酰基(如苯甲酰基)、和杂芳酰基。
“烷基”指除非另有说明否则具有最多12个碳原子的支链或非支链的、饱和或不饱和(即烯基、炔基)的脂族烃基。当用作另一个术语如“烷基氨基”的一部分时，烷基部分可以是饱和烃链，但也包括不饱和烃碳链如“烯基氨基”和“炔基氨基”。烷基的例子包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、2，2-二甲基丙基、正己基、2-甲基戊基、2，2-二甲基丁基、正庚基、3-庚基、2-甲基己基等。术语“低级烷基”、“C1-C4烷基”和“具有1至4个碳原子的烷基”意义相同，可以互换用于表示甲基、乙基、1-丙基、异丙基、环丙基、1-丁基、仲丁基或叔丁基。除非具体说明，否则取代的烷基可以包含一个、两个、三个或四个相同或不同的取代基。上述取代的烷基的例子包括但不限于氰基甲基、硝基甲基、羟甲基、三苯甲基氧基甲基、丙酰基氧基甲基、氨基甲基、羧甲基、羧基乙基、羧基丙基、烷氧基羰基甲基、烯丙氧基羰基氨基甲基、氨基甲酰基氧基甲基、甲氧基甲基、乙氧基甲基、叔丁氧基甲基、乙酰氧基甲基、氯代甲基、溴代甲基、碘代甲基、三氟甲基、6-羟基己基、2，4-二氯(正丁基)、2-氨基(异丙基)、2-氨基甲酰基氧基乙基等。烷基也可以被碳环基取代。例子包括环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、和环己基甲基、以及相应的-乙基、-丙基、-丁基、-戊基、-己基等。取代的烷基包括取代的甲基，例如被与“取代的Cn-Cm烷基”中相同的取代基取代的甲基。取代的甲基例子包括羟甲基、受保护的羟甲基(例如四氢吡喃氧基甲基)、乙酰氧基甲基、氨基甲酰氧基甲基、三氟甲基、氯代甲基、羧甲基、溴代甲基和碘代甲基。
“脒”指-C(NH)-NHR基团，其中R为H或烷基或芳烷基。具体的脒为-NH-C(NH)-NH2基团。
“氨基”指伯胺(即-NH2)、仲胺(即-NRH)和叔胺(即-NRR)。仲胺和叔胺包括烷基胺、二烷基胺、芳基胺、二芳基胺、芳烷基胺和二芳烷基胺。具体的仲胺和叔胺为甲胺、乙胺、丙胺、异丙胺、苯胺、苄胺、二甲胺、二乙胺、二丙胺和二异丙胺。
本文所用的“氨基保护基团”是指当反应在化合物的其它官能团上进行时通常用于封闭或保护氨基的基团的衍生物。这些保护基团的例子包括氨基甲酸酯、酰胺、烷基和芳基、亚胺、以及许多N-杂原子衍生物，它们能被除去以再生所需的胺基。在T.W.Greene和P.G.M.Wuts，“Protective Groups in Organic Synthesis”，2nded.，John Wiley & Sons，Inc.、New York、NY，1991，第7章；E.Haslam，“Protective Groups in OrganicChemistry”，J.G. W.McOmie，Ed.，Plenum Press，New York，NY，1973，第5章、和T.W.Greene，“Protective Groups in Organic Synthesis”，John Wileyand Sons，New York，NY，1981中可以发现这些基团的更多例子。术语“受保护的氨基”指被上述氨基保护基团之一取代的氨基。
当单独使用或用作另一个术语的一部分时，“芳基”指稠合或未稠合的、具有指定的碳原子数或者如果没有指定碳原子数则具有最多14个碳原子的碳环芳基。芳基包括苯基、萘基、联苯基、菲基、并四苯基等(参见例如Lang′s Handbook of Chemistry(Dean，J.A.，ed)13thed.表7-2 )。在具体实施方案中，芳基可为苯基。取代的苯基或取代的芳基是指被一个、两个、三个、四个或五个，例如1-2个、1-3个或1-4个取代基取代的苯基或芳基，除非另有说明，否则取代基选自卤素(F、Cl、Br、I)、羟基、受保护的羟基、氰基、硝基、烷基(例如C1-C6烷基)、烷氧基(例如C1-C6烷氧基)、苄氧基、羧基、受保护的羧基、羧甲基、受保护的羧甲基、羟甲基、受保护的羟甲基、氨基甲基、受保护的氨基甲基、三氟甲基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、杂环基磺酰基氨基、杂环基、芳基、或其它指定的基团。这些取代基中的一个或多个次甲基(CH)和/或亚甲基(CH2)又可以被与上述类似的基团取代。术语“取代的苯基”的例子包括但不限于单(卤代)或二(卤代)苯基如2-氯苯基、2-溴苯基、4-氯苯基、2，6-二氯苯基、2，5-二氯苯基、3，4-二氯苯基、3-氯苯基、3-溴苯基、4-溴苯基、3，4-二溴苯基、3-氯-4-氟苯基、2-氟苯基等；单(羟基)或二(羟基)苯基如4-羟基苯基、3-羟基苯基、2，4-二羟基苯基、其受保护的羟基衍生物等；硝基苯基如3-或4-硝基苯基；氰基苯基如4-氰基苯基；单(低级烷基)或二(低级烷基)苯基如4-甲基苯基、2，4-二甲基苯基、2-甲基苯基、4-(异丙基)苯基、4-乙基苯基、3-(正丙基)苯基等；单(烷氧基)或二(烷氧基)苯基如3，4-二甲氧基苯基、3-甲氧基-4-苄基氧基苯基、3-甲氧基-4-(1-氯甲基)苄基氧基-苯基、3-乙氧基苯基、4-(异丙氧基)苯基、4-(叔丁氧基)苯基、3-乙氧基-4-甲氧基苯基等；3-或4-三氟甲基苯基；单羧基或二羧基苯基或(受保护的羧基)苯基如4-羧基苯基；单(羟甲基)或二(羟甲基)苯基或(受保护的羟甲基)苯基如3-(受保护的羟甲基)苯基或3，4-二(羟甲基)苯基；单(氨基甲基)或二(氨基甲基)苯基或(受保护的氨基甲基)苯基如2-(氨基甲基)苯基或2，4-(受保护的氨基甲基)苯基；或单(N-(甲基磺酰基氨基))或二(N-(甲基磺酰基氨基))苯基如3-(N-甲基磺酰基氨基))苯基。此外，术语“取代的苯基”表示其中取代基不相同的二取代苯基如3-甲基-4-羟基苯基、3-氯-4-羟基苯基、2-甲氧基-4-溴苯基、4-乙基-2-羟基苯基、3-羟基-4-硝基苯基、2-羟基-4-氯苯基等，以及其中取代基不相同的三取代苯基如3-甲氧基-4-苄氧基-6-甲基磺酰基氨基、3-甲氧基-4-苄氧基-6-苯基磺酰基氨基，以及其中取代基不相同的四取代苯基如3-甲氧基-4-苄氧基-5-甲基-6-苯基磺酰基氨基。取代的苯基包括2-氯苯基、2-氨基苯基、2-溴苯基、3-甲氧基苯基、3-乙氧基-苯基、4-苄氧基苯基、4-甲氧基苯基、3-乙氧基-4-苄氧基苯基、3，4-二乙氧基苯基、3-甲氧基-4-苄氧基苯基、3-甲氧基-4-(1-氯甲基)苄氧基-苯基、3-甲氧基-4-(1-氯甲基)苄氧基-6-甲基磺酰基氨基苯基。稠芳环也可以按与取代的烷基相同的方式，被任何(例如1个、2个或3个)本文所述的取代基取代。
当单独使用或用作复合基团如碳环烷基的一部分时，“碳环基”、“碳环的”、“碳环”以及“碳环并”指可以是饱和或不饱和的、芳族或非芳族的、可以是桥连的具有3至14个碳原子如3至7个碳原子的单环、双环、或三环脂族环。饱和的碳环基包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。在具体实施方案中碳环基为环丙基和环己基。在另一个具体实施方案中碳环基为环己基。不饱和碳环包括芳环如前面定义的芳基，例如苯基。术语“取代的碳环基”、“碳环”和“碳环并”指被与“取代的烷基”中相同的取代基取代这些基团。
本文所用的“羧基保护基团”是羧酸的一种当反应在化合物的其它官能团上进行时通常用于封闭或保护羧酸基团的酯衍生物。这些羧酸保护基团的例子包括4-硝基苄基、4-甲氧基苄基、3，4-二甲氧基苄基、2，4-二甲氧基苄基、2，4，6-三甲氧基苄基、2，4，6-三甲基苄基、五甲基苄基、3，4-亚甲基二氧基苄基、二苯甲基、4，4′-二甲氧基二苯甲基、2，2′，4，4′-四甲氧基二苯甲基、烷基如叔丁基或叔戊基、三苯甲基、4-甲氧基三苯甲基、4，4′-二甲氧基三苯甲基、4，4′，4″-三甲氧基三苯甲基、2-苯基丙-2-基、三甲基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、苯甲酰甲基、2，2，2-三氯乙基、β-(三甲基甲硅烷基)乙基、β-(二(正丁基)甲基甲硅烷基)乙基、对甲苯磺酰基乙基、4-硝基苄基磺酰基乙基、烯丙基、肉桂基、1-(三甲基甲硅烷基甲基)丙-1-烯-3-基，以及类似的基团。所使用的羧基保护基团的种类并不重要，只要所衍生的羧酸对分子其它位置上的后续反应条件稳定，且不需要干扰分子剩余部分就能在适当的点除去这些基团。尤其是，重要的是不要让羧基受保护的分子面临强亲核性碱或使用高活性金属催化剂如阮内镍的还原条件。(如下所述，当除去氨基保护基团和羟基保护基团时，也要避免这种强烈的除去条件。)羧酸保护基团包括烯丙基和对硝基苄基。用于头孢菌素、青霉素和肽领域的类似羧基保护基团也可以用于保护羧基取代基。在T.W. Greene和P. G. M.Wuts，“Protective Groups inOrganic Synthesis”，2nded.，John Wiley & Sons，Inc.，New York，N.Y，1991，第5章；E.Haslam，“Protective Groups in Organic Chemistry”，J.G. W.McOmie，Ed.，Plenum Press，New York，N.Y，1973，第5章；和T.W.Greene，“Protective Groups in Organic Synthesis”，John Wiley and Sons，New York，NY.1981，第5章中可以发现这些基团的更多例子。术语“受保护的羧基”指被上述羧基保护基团之一取代的羧基。
“胍”指-NH-C(NH)-NHR，其中R为H或烷基或芳烷基。具体的胍基团为-NH-C(NH)-NH2。
当单独使用或用作复合基团如杂环烷基的一部分时，“杂环的基团”、“杂环的”、“杂环”、“杂环基”、或“杂环并”可以交换使用，指其中环原子为碳和至少一个杂原子(氮、硫或氧)如具有1至4个杂原子的具有指定的原子数如5至14个环原子的任何单环、双环或三环饱和或不饱和芳族(杂芳基)或非芳族环。典型地，5元环具有0至2个双键，6元或7元环具有O至3个双键，氮或硫杂原子可以任选地被氧化(例如SO、SO2)，任何氮杂原子都可以任选地被季铵化。非芳族杂环包括吗啉基(吗啉代)、吡咯烷基、环氧乙烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、2，3-二氢呋喃基、2H-吡喃基、四氢吡喃基、硫杂丙环基、硫杂环丁烷基、四氢硫杂环丁烷基(tetrahydrothietanyl)、吖丙啶基、氮杂环丁烷基、1-甲基-2-吡咯基、哌嗪基和哌啶基。“杂环烷基”指上面定义的杂环基共价结合至上面定义的烷基。包含硫或氧原子和一至三个氮原子的5元杂环包括噻唑基如噻唑-2-基和噻唑-2-基N-氧化物，噻二唑基如1，3，4-噻二唑-5-基和1，2，4-噻二唑-5-基，噁唑基如噁唑-2-基，以及噁二唑基如1，3，4-噁二唑-5-基、和1，2，4-噁二唑-5-基。包含2至4个氮原子的5元杂环包括咪唑基如咪唑-2-基；三唑基如1，3，4-三唑-5-基；1，2，3-三唑-5-基、1，2，4-三唑-5-基，以及四唑基如1H-四唑-5-基。苯并稠合5元杂环包括苯并噁唑-2-基、苯并噻唑-2-基和苯并咪唑-2-基。包含一至三个氮原子和任选的硫或氧原子的6元杂环包括吡啶基如吡啶-2-基、吡啶-3-基、和吡啶-4-基；嘧啶基如嘧啶-2-基和嘧啶-4-基；三嗪基如1，3，4-三嗪-2-基和1，3，5-三嗪-4-基；哒嗪基如哒嗪-3-基、和吡嗪基。在具体实施方案中，6元杂环包括吡啶N-氧化物和哒嗪N-氧化物和吡啶基、嘧啶-2-基、嘧啶-4-基、哒嗪基和1，3，4-三嗪-2-基。在W. Druckheimer等人的美国专利4,278,793中可以发现用于上述任选地取代的杂环的取代基、和5元和6元环体系的更多例子。
当单独使用或用作复合基团如杂芳基烷基的一部分时，“杂芳基”指其中至少一个环为包含选自氮、氧、和硫的一至四个杂原子的5元、6元或7元环的具有给定的原子数的任何单环、双环、或三环芳环体系。在具体实施方案中，杂芳基包含至少一个杂原子(Lang′s Handbook ofChemistry，supra)。定义中包括其中任何上述杂芳环与苯环稠合的双环基团。在具体实施方案中，杂芳基包括至少一个氮杂原子和/或氧杂原子。下列环体系中术语“杂芳基”所指的杂芳基(可以是取代的或未取代的)的例子噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、三唑基、噻二唑基、噁二唑基、四唑基、噻三唑基、噁三唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、噻嗪基、噁嗪基、三嗪基、噻二嗪基、噁二嗪基、二噻嗪基、二噁嗪基、氧杂噻嗪基、四嗪基、噻三嗪基、噁三嗪基、二噻二嗪基、咪唑啉基、二氢嘧啶基、四氢嘧啶基、四唑并[1，5-b]哒嗪基和嘌呤基、以及苯并稠合衍生物，例如苯并噁唑基、苯并喃喃基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、苯并咪唑基和吲哚基。在具体实施方案中，“杂芳基”包括1，3-噻唑-2-基、4-(羧甲基)-5-甲基-1，3-噻唑-2-基、4-(羧甲基)-5-甲基-1，3-噻唑-2-基钠盐、1，2，4-噻二唑-5-基、3-甲基-1，2，4-噻二唑-5-基、1，3，4-三唑-5-基、2-甲基-1，3，4-三唑-5-基、2-羟基-1，3，4-三唑-5-基、2-羧基-4-甲基-1，3，4-三唑-5-基钠盐、2-羧基-4-甲基-1，3，4-三唑-5-基、1，3-噁唑-2-基、1，3，4-噁二唑-5-基、2-甲基-1，3，4-噁二唑-5-基、2-(羟甲基)-1，3，4-噁二唑-5-基、1，2，4-噁二唑-5-基、1，3，4-噻二唑-5-基、2-硫羟-1，3，4-噻二唑-5-基、2-(甲硫基)-1，3，4-噻二唑-5-基、2-氨基-1，3，4-噻二唑-5-基、1H-四唑-5-基、1-甲基-1H-四唑-5-基、1-(1-(二甲基氨基)乙-2-基)-1H-四唑-5-基、1-(羧甲基)-1H-四唑-5-基、1-(羧甲基)-1H-四唑-5-基钠盐、1-(甲磺酸)-1H-四唑-5-基、1-(甲磺酸)-1H-四唑-5-基钠盐、2-甲基-1H-四唑-5-基、1，2，3-三唑-5-基、1-甲基-1，2，3-三唑-5-基、2-甲基-1，2，3-三唑-5-基、4-甲基-1，2，3-三唑-5-基、吡啶-2-基N-氧化物、6-甲氧基-2-(n-氧化物)-哒嗪-3-基、6-羟基哒嗪-3-基、1-甲基吡啶-2-基、1-甲基吡啶-4-基、2-羟基嘧啶-4-基、1，4，5，6-四氢-5，6-二氧代-4-甲基-as-三嗪-3-基、1，4，5，6-四氢-4-(甲酰基甲基)-5，6-二氧代-as-三嗪-3-基、2，5-二氢-5-氧代-6-羟基-as-三嗪-3-基、2，5-二氢-5-氧代-6-羟基-as-三嗪-3-基钠盐、2，5-二氢-5-氧代-6-羟基-2-甲基-as-三嗪-3-基钠盐、2，5-二氢-5-氧代-6-羟基-2-甲基-as-三嗪-3-基、2，5-二氢-5-氧代-6-甲氧基-2-甲基-as-三嗪-3-基、2，5-二氢-5-氧代-as-三嗪-3-基、2，5-二氢-5-氧代-2-甲基-as-三嗪-3-基、2，5-二氢-5-氧代-2，6-二甲基-as-三嗪-3-基、四唑并[1，5-b]哒嗪-6-基和8-氨基四唑并[1，5-b]-哒嗪-6-基。或者，“杂芳基”包括4-(羧甲基)-5-甲基-1，3-噻唑-2-基、4-(羧甲基)-5-甲基-1，3-噻唑-2-基钠盐、1，3，4-三唑-5-基、2-甲基-1，3，4-三唑-5-基、1H-四唑-5-基、1-甲基-1H-四唑-5-基、1-(1-(二甲基氨基)乙-2-基)-1H-四唑-5-基、1-(羧甲基)-1H-四唑-5-基、1-(羧甲基)-1H-四唑-5-基钠盐、1-(甲磺酸)-1H-四唑-5-基、1-(甲磺酸)-1H-四唑-5-基钠盐、1，2，3-三唑-5-基、1，4，5，6-四氢-5，6-二氧代-4-甲基-as-三嗪-3-基、1，4，5，6-四氢-4-(2-甲酰基甲基)-5，6-二氧代-as-三嗪-3-基、2，5-二氢-5-氧代-6-羟基-2-甲基-as-三嗪-3-基钠盐、2，5-二氢-5-氧代-6-羟基-2-甲基-as-三嗪-3-基、四唑并[1，5-b]哒嗪-6-基、和8-氨基四唑并[1，5-b]哒嗪-6-基。
本文所用的“羟基保护基团”指当反应在化合物的其它官能团上发生时通常用于封闭或保护羟基的羟基衍生物。这种保护基团的例子包括四氢吡喃基氧基、乙酰氧基、氨基甲酰基氧基、三氟、氯、羧基、溴和碘。在T.W.Greene和P. G. M.Wuts，“Protective Groups in OrganicSynthesis”，2nded.，John Wiley & Sons，Inc.，New York、NY，1991，第2-3章；E.Haslam，“Protective Groups in Organic Chemistry”，J.G. W. McOmie，Ed.，Plenum Press，New York，NY，1973，第5章；和T.W. Greene，“ProtectiveGroups in Organic Synthesis”，John Wiley and Sons，New York，NY，1981中可以找到这些基团的更多例子。术语“受保护的羟基”指被羟基保护基团例如上述基团取代的羟基。
“药物学可接受的盐”包括酸和碱加成的盐。“药物学可接受的酸加成盐”指保持游离碱生理学效力和性质的盐，不会生理学不合意或以其它方式不合意，该盐是与无机酸和有机酸形成的盐，无机酸为例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸等，有机酸可以选自脂族、脂环族、芳族、芳脂族、杂环、羧酸、和磺酸类有机酸，例如甲酸、乙酸、丙酸、羟基乙酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、maloneic acid、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、天冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、恩波酸(embonic acid)、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。
“药物学可接受的碱加成盐”包括源自无机碱的盐如钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝盐等。具体的盐为铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。源自药物学可接受的有机无毒碱的盐包括伯胺、仲胺、和叔胺、取代的胺包括天然取代的胺、环胺和碱性离子交换树脂的盐，如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙氨基乙醇、trimethamine、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、1，2-乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶、聚胺树脂等。在具体实施方案中，有机无毒碱为异丙胺、二乙胺、乙醇胺、trimethamine、二环己胺、胆碱、和咖啡因。
本文所用的术语“和其盐及溶剂化物”指本发明的化合物可以以一种或多种盐或溶剂化物的形式存在。例如本发明的化合物可以是基本纯化的一种具体盐或溶剂化物的形式，或者可以是两种或多种盐或溶剂化物形式的混合物。
本发明提供了具有通式I的新型化合物 其中A、X、Y、R1、R2、和R3如本文所定义。
A为被0至3个(即、n为0-3)R2基取代的碳环或杂环，R2选自分别任选地被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基或烷氧基取代的卤素、羟基、烷基、酰基或烷氧基。在具体实施方案中，A是任选地取代的芳基或杂芳基。在具体实施方案中，A是任选地取代的苯、噻吩、噻唑、咪唑、吡咯、N-烷基吡咯、吡唑或N-烷基吡唑。在具体实施方案中，A是选自A1和A2的环
其中Z1为O、S或NR5，其中R5为H或烷基；Z2为CH、CR2′-或N；R2为分别任选地被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基或烷氧基取代的卤素、羟基、烷基、酰基或烷氧基；R2′为分别任选地被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基或烷氧基取代的H、卤素、羟基、烷基、酰基或烷氧基；n为0-3。在具体实施方案中，A为式A1的环。在具体实施方案中，A为环A1，其中Z1为S，Z2为CH或N。在另一个实施方案中，Z1为S，Z2为CH，即噻吩。在另一个实施方案中，Z1为S，Z2为N，即噻唑。在具体实施方案中，R2′为H。在具体实施方案中，R2′为甲基。在另一个具体实施方案中，A为式A2的环。在具体实施方案中，R2′为甲基。在具体实施方案中，A为环A2。在该实施方案中，R2可以不存在，即n为0。在另一个实施方案中，n为l，R2为Cl。在具体实施方案中，A为环A1a、A1b或A2a 在具体实施方案中，A为式A1a的环。在另一个实施方案中，A为式A1b的环。在另一个实施方案中，A为式A2a的环。
X为亚烷基、NR4C(O)、NR4C(S)、NR4C(NH)、NR4SO、NR4SO2、NR4C(O)NH、NR4C(S)NH、C(O)NR4、C(S)NR4、C(NH)NR4、NR4PO或NR4PO(OH)，其中R4为H或烷基。或者，X为亚烷基、NR4C(O)、NR4C(S)、NR4SO、NR4SO2、NR4C(O)NH、NR4C(S)NH、C(O)NR4、C(S)NR4、NR4PO或NR4PO(OH)，其中R4为H或烷基。在具体实施方案中，X为NR4C(O)，它在环A和R1之间形成酰胺连接。在具体实施方案中，X为NR4C(NH)，它在环A和R1之间形成脒连接。在另一个实施方案中，X为NR4C(S)，它在环A和R1之间形成硫代酰胺连接。在另一个实施方案中，X为NR4C(O)NH，它在环A和R1之间形成脲连接。在另一个实施方案中，X为NR4C(S)NH，它与NR2一起在环A和R1之间形成硫脲连接。
Y为N、CH或CR3。在具体实施方案中，Y为CH或CR3。在另一个实施方案中，Y为CH。在另一个实施方案中，Y为N。
R1选自分别任选地被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基、卤代烷基或烷氧基取代的烷基、环烷基、芳基或杂环；所述环烷基、芳基和杂环进一步任选地被-(CH2)s-(Q)u-(CH2)t-Z取代，其中Q为C(O)、S(O)、SO2、C(O)O、OC(O)、NR4C(O)、NR4C(S)、NR4SO、NR4SO2、NR4C(O)NH、NR4C(S)NH、C(O)NR4、或C(S)NR4；Z为羟基、氨基、卤素、烷基磺酰基、烷氧基、烷氧基羰基、卤代烷基、碳环、杂环或被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基或烷氧基烷氧基取代的碳环或杂环；s和t独立地为0至5，u为0或1。或者，R1选自分别任选地被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基或烷氧基取代的环烷基、芳基或杂环。
在具体实施方案中，R1为任选地被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基、卤代烷基或烷氧基取代的环烷基、芳基或杂环；所述环烷基、芳基和杂环进一步被-(CH2)s-(Q)u-(CH2)t-Z取代，其中Q为C(O)、S(O)、SO2、C(O)O、OC(O)、NR4C(O)、NR4C(S)、NR4SO、NR4SO2、NR4C(O)NH、NR4C(S)NH、C(O)NR4、或C(S)NR4；Z为羟基、氨基、卤素、烷基磺酰基、烷氧基、烷氧基羰基、卤代烷基、碳环、杂环或被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基或烷氧基烷氧基取代的碳环或杂环；s和t独立地为0至5，u为0或1。
在具体实施方案中，Q为C(O)。在另一个实施方案中，Q为C(O)NH。在另一个实施方案中，Q为C(O)O。在另一个实施方案中，Q为SO2。在另一个实施方案中，Q为SO2NH。在另一个实施方案中，Q为NH。在一个实施方案中，s为0。在另一个实施方案中，s为0至3。在一个实施方案中，t为0。在另一个实施方案中，t为0至3。在一个实施方案中，u为0。在另一个实施方案中，u为1。
在具体实施方案中，Z为选自以下组中的碳环或杂环哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉代、吡唑、三唑、吡咯烷酮、咪唑和硫代吗啉。在具体实施方案中，Z为选自以下组中的碳环或杂环哌啶-1-基、4-羟基-哌啶-1-基、N-甲基-哌啶-4-基、哌嗪-1-基、N-甲基-哌嗪-1-基、N-乙基-哌嗪-1-基、N-乙酰基-哌嗪-1-基、吡咯烷-1-基、3，5-二甲基-哌嗪-1-基、吗啉-1-基、硫代吗啉-1-基、3，5-二甲基-吗啉-1-基、N-羟基乙基-哌嗪-1-基、吡唑-1-基、1，2，4-三唑-1-基、吡咯烷-2-酮-1-基和咪唑-5-基。在另一个具体实施方案中，Z为羟基、二甲基氨基、CF3、甲氧基羰基或甲氧基。
或者，R1选自分别任选地被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基或烷氧基取代的环烷基、芳基或杂环。在具体实施方案中，R1为任选地取代的芳基或杂芳基。在具体实施方案中，R1为任选地取代的苯基。在另一个具体实施方案中，R1为任选地取代的吡啶基。在具体实施方案中，R1为式IIa、IIb、IIc、IId、IIe、IIf、IIg、IIh、IIi、IIj、IIk、IIl或IIm
其中W为O、S或NR7，其中R7为H或烷基；R6为卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基或烷氧基；o为0-3。在具体实施方案中，W为S。在具体实施方案中，R1为式IIa的基团。在该实施方案中，R6可以是烷氧基，o为1、2或3。具体的IIa基团为IIa1-IIa28
在另一个具体实施方案中，R1为式IIb的基团。在该实施方案中，R6可以是烷基或卤代烷基(例如CF3)。具体的IIb基团为IIb1-IIb3 在具体实施方案中，R1为式IIc的基团。在该实施方案中，W可以是S，o为0。在另一个具体实施方案中，R1为式IId的基团。在该实施方案中，o可以为0。在另一个具体实施方案中，R1为式IIe的基团。在该实施方案中，o可以为0。在另一个具体实施方案中，R1为式IIf的基团。在该实施方案中，o可以为0。
R2为分别任选地被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基或烷氧基取代的卤素、羟基、烷基、酰基或烷氧基。n为0-3，例如0或1。在具体实施方案中，R2为羟基。在具体实施方案中，R2为烷基或被卤素、甲基或三氟甲基取代的烷基。在具体实施方案中，R2为酰基如烷酰基，例如乙酰基。在具体实施方案中，R2为卤素如Cl或F。在另一个具体实施方案中，R2为烷氧基如甲氧基或乙氧基。
R3为卤素、羟基、烷基、卤代烷基、酰基或烷氧基；m为0-3。在具体实施方案中，m为0，即R3不存在。在另一个具体实施方案中，m为1-3，R3为卤素(例如F)或烷基(例如甲基)。
本发明的具体化合物包括但不限于下列化合物
本发明的化合物可以包含一个或多个不对称碳原子。因此，化合物可以作为非对映体、对映体或其混合物存在。可以使用外消旋体、非对映体或对映体作为原材料或作为中间体合成化合物。通过色谱法或结晶方法可以分离非对映体化合物。类似地，用相同的技术或本领域已知的其它方法可以分离对映体混合物。每个不对称碳原子可以是R或S构型，这两种构型都在本发明的范围内。
本发明还包括上述化合物的前药。合适的前药包括已知的氨基保护基团和羧基保护基团，在生理条件下它们可以被释放，例如被水解以获得母体化合物。具体的前药类别为如下化合物，其中氨基、脒基、氨基亚烷基氨基、亚氨基亚烷基氨基或胍基中的氮原子被羟基(OH)、烷基羰基(-CO-R)、烷氧基羰基(-CO-OR)、酰氧基烷基-烷氧基羰基(-CO-O-R-O-CO-R)取代，其中R为如上面所定义的一价或二价基团，或者被具有式-C(O)-O-CP1P2-卤代烷基的基团取代，其中P1和P2可以相同或不同，为H、低级烷基、低级烷氧基、氰基、卤代低级烷基或芳基。通过使上述本发明化合物与活性酰基化合物反应，将本发明化合物中的氮原子结合到活性酰基化合物的羰基，可以制备前药化合物。合适的活性羰基化合物包含结合至羰基碳的良好离去基团，包括酰卤、酰基胺、酰基吡啶盐、酰基烷氧化物，尤其是酰基苯氧化物如对硝基苯氧基酰基、二硝基苯氧基酰基、氟代苯氧基酰基、和二氟苯氧基酰基。反应通常是放热的，且在惰性溶剂中，在低温如-78℃至约50℃进行反应。通常也可以在无机碱如碳酸钾或碳酸氢钠、或有机碱如胺，包括吡啶、三乙胺等存在的情况下进行反应。制备前药的一种方法记载于1997年4月15日提交的USSN 08/843,369(对应于PCT公开WO9846576)，其全部内容并入此处作为参考。
合成用标准有机合成方法由市售原材料和试剂制备本发明的化合物。应理解用于制备本发明化合物的合成工艺将取决于化合物中存在的具体取代基，可能需要各种保护和去保护程序，这在有机合成中是标准的。根据通用路线1制备其中X为NR4C(O)的本发明化合物。
路线1 用合适的酰基氯Cl-C(O)-R1将胺原材料酰化，然后在乙酸和氢溴酸的混合物中，用Br2将所得化合物α-溴化。然后通过在碱如乙酸钠的存在下与合适的1，2-苯二胺或2，3-吡啶二胺反应，将α-溴酮中间体转化为最终的喹喔啉或5-氮杂喹喔啉产物。通过在酰化步骤中使用合适的硫代酰基氯Cl-C(S)-R1，可以用相同的路线制备本发明的硫代酰胺化合物，即X为NR4C(S)。在本合成路线和随后的合成路线中，原材料和试剂可以是市售的，或者可以用市售原材料通过已知有机化学方法制备。
根据通用路线2可以制备其中X为NR4C(O)NH的本发明化合物。
路线2 用合适的异氰酸酯R1-NCO处理胺原材料以形成所需的脲。然后在乙酸和氢溴酸的混合物中用Br2将所得化合物α-溴化。在碱如乙酸钠的存在下，通过与合适的1，2-苯二胺或2，3-吡啶二胺反应，将该α-溴酮转化为最终的喹喔啉或5-氮杂喹喔啉产物。通过用合适的异硫氰酸酯R1-NCS代替异氰酸酯，可以用相同的路线制备本发明的硫脲化合物，即X为NR4C(S)NH。
根据通用路线3可以制备其中X为NR4SO2的本发明化合物。
路线3 在非亲核性碱如三乙胺或二异丙基乙胺的存在下，用合适的磺酰氯R1-S(O2)Cl处理胺原材料，以形成所需的磺酰胺。然后在乙酸和氢溴酸的混合物中，用Br2将所得化合物α-溴化。在碱如乙酸钠的存在下，通过与合适的1，2-苯二胺或2，3-吡啶二胺反应，将该α-溴酮转化为最终的喹喔啉或5-氮杂喹喔啉产物。
本发明的化合物能抑制hedgehog信号传导，并用于治疗与hedgehog信号传导异常相关的癌症，例如当Patched不能压制、或不能充分压制Smoothened(Ptc功能丧失型表型)时，和/或当尽管Patched压制，但Smoothened具有活性(Smo功能获得型表型)时。这些癌症类型的例子包括基底细胞癌、神经外胚层瘤如成髓细胞瘤、脑膜瘤、血管瘤、成胶质细胞瘤、胰腺腺瘤、鳞状肺癌、软骨肉瘤、乳腺癌、横纹肌肉瘤、食管癌、胃癌、胆道癌、肾癌、甲状腺癌。可以在给予其它抗癌治疗如放射治疗或化疗之前、同时、或之后给予本发明的化合物。合适的细胞抑制化疗化合物包括但不限于(i)抗代谢药如阿糖胞苷、氟拉达滨、5-氟-2′-脱氧尿苷、吉西他滨、羟基脲或甲氨喋呤；(ii)DNA断裂剂如博来霉素；(iii)DNA交联剂如苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺或氮芥；(iv)嵌入剂如阿霉素(多柔比星)或米托葸醌；(v)蛋白质合成抑制剂如L-天冬酰胺酶、放线菌酮、嘌罗霉素或白喉毒素；(vi)拓朴异构酶I毒物如喜树碱或托泊替康；(vii)拓朴异构酶II毒物如依托泊苷(VP-16)或替尼泊苷；(viii)微管定向剂如秋水仙酰胺、秋水仙碱、紫杉醇、长春碱或长春新碱；(ix)激酶抑制剂如flavopiridol、星孢素、STI571(CPG57148B)或UCN-01(7-羟基星孢素)；(x)多种试验剂如thioplatin、PS-341、丁酸苯酯、ET-18-OCH3、或法尼基转移酶抑制剂(L-739749、L-744832)；多元酚如槲皮素、白藜芦素、piceatannol、表没食子儿茶精没食子酸盐、茶黄素、黄烷醇、原花青色素、白桦脂酸及其衍生物；(xi)激素如糖皮质类固醇或芬维A胺；(xii)激素拮抗剂如他莫昔芬、非那雄胺或LHRH拮抗剂。在具体实施方案中，本发明的化合物与选自顺铂、多柔比星、泰素、泰素帝和丝裂霉素C的细胞抑制化合物一起给予。
可用于本发明的另一类活性化合物是通过结合至死亡受体能够敏化或诱导凋亡的化合物(“死亡受体激动剂”)。这些死亡受体激动剂包括死亡受体配体如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、肿瘤坏死因子β(TNF-β)、淋巴毒素-α、LT-β(淋巴毒素-β)、TRAIL(Apo2L，DR4配体)、CD95(Fas，APO-1)配体、TRAMP(DR3，Apo-3)配体、DR6配体以及任何所述配体的片段和衍生物。在具体实施方案中，死亡受体配体为TNF-α。在另一个具体实施方案中，死亡受体配体为Apo2L/TRAIL。此外，死亡受体激动剂包括死亡受体的兴奋抗体如抗CD95抗体、抗TRAIL-R1(DR4)抗体、抗TRAIL-R2(DR5)抗体、抗TRAIL-R3抗体、抗TRAIL-R4抗体、抗DR6抗体、抗TNF-R1抗体和抗TRAMP(DR3)抗体以及任何所述抗体的片段和衍生物。
为了敏化细胞易于凋亡，本发明的化合物也可以与放射治疗组合使用。术语“放射治疗”指在治疗肿瘤时使用电磁或粒子放射(particulateradiation)。放射治疗基于如下原理向靶区域传递高剂量放射会导致肿瘤和正常组织中生殖细胞的死亡。放射剂量方案通常根据放射吸收剂量(rad)、时间和分级分离(fractionation)限定，且必须由肿瘤学家谨慎地限定。患者接受的放射量将取决于各种考虑，包括肿瘤位置与其它身体器官的关系、和肿瘤扩散的程度。放射治疗剂的例子见于但不限于放射治疗中，且在该领域中是已知的(Hellman，Principles of RadiationTherapy，Cancer，in Principles I and Practice of Oncology，24875(Devita等人，4th ed.，vol 1，1993)。放射治疗的近期进展包括三维共形外部波束放射(three-dimensional confommal external beam radiation)、强度调控放射治疗(IMRT)、立体定向放射手术和近距治疗(组织间隙放射治疗)，后者将放射源直接置于肿瘤中作为植入的“种子”。这些更新的治疗形式向肿瘤传递了更大的放射剂量，从而使它们比标准外部波束放射治疗更有效。
因为电离粒子(电子)的中等线性能量传递(LET)及其中间范围(通常在组织中为几毫米)，用发射β-射线的放射核进行电离辐射被认为是最有用的放射治疗方法。γ射线在大得多的距离处传递较低的剂量水平。α粒子代表另一个极端，它们传递非常高的LET剂量，但具有非常有限的范围，因此必须与待治疗的组织细胞密切接触。此外，α射线发射体通常是重金属，这限制了可能的化学(chemistry)，且带来从待治疗区域泄漏放射核的不适当危险。根据待治疗的肿瘤，可了解所有类型的发射体均在本发明范围内。此外，本发明包括非电离放射类型，如紫外线(UV)辐射、高能可见光、微波辐射(高热治疗)、红外线(IR)辐射和激光。在本发明的具体实施方案中使用UV辐射。
本发明的化合物能抑制血管发生，因此可用于治疗由血管发生介导的疾病或病症如肿瘤，尤其是实体瘤如结肠癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌和神经胶质瘤。此外，本发明的化合物可以用于治疗黄斑变性，如与年龄相关的黄斑变性。本发明的化合物还可用于治疗炎性/免疫疾病如克罗恩病、炎性肠病、舍格伦综合征、哮喘、器官移植排斥、系统性红斑狼疮、风湿性关节炎、银屑病关节炎、银屑病和多发性硬化。本发明的化合物还可用作脱毛药。
本发明还包括药物组合物或药物，其包含本发明的化合物和治疗惰性载体、稀释剂或赋形剂，本发明还包括用本发明的化合物制备这些组合物和药物的方法。典型地，通过在环境温度和适当的pH下，以所需的纯度与生理学可接受的载体，即在草药(galenical)给予形式所用的剂量和浓度下对受体无毒的载体混合，来配制用于本发明方法的本发明化合物。制剂的pH主要取决于具体用途和化合物的浓度，但可以为约3至约8。具体制剂为pH 5的乙酸盐缓冲液。本文所用的抑制化合物可以存在于无菌剂型中。可以将化合物作为固体组合物贮存，冻干制剂或水溶液也是可以接受的。
按照符合良好医药规范(good medical practice)的方式配制、服用、和给予本发明的化合物。其中考虑的因素包括被治疗的具体疾病、被治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床病症、疾病的原因、传递药物的位置、给予方法、给予方案、和医师已知的其它因素。这些考虑将控制所给予化合物的“有效量”，且该“有效量”是减少hedgehog途径信号传导所必需的最小量，或者是引起对hedgehog信号传导有响应的肿瘤尺寸、体积或质量减少，或者是减少该肿瘤尺寸、体积或质量增加所必需的最小量。或者，化合物的“有效量”指减少恶性细胞数量或减少恶性细胞数量增加速率所必需的量。或者，“有效量”是增加患有抗hedgehog途径敏感肿瘤的患者存活率所需要的本发明化合物的量。该量可以低于对正常细胞、或对哺乳动物整体有毒性的量。关于非恶性适应症，“有效量”指减少具体适应症或其症状的严重性所需要的本发明化合物的量。
通常，胃肠外给予本发明化合物的起始药物学有效量为每剂量在约0.01至约100mg/kg、例如约0.1至约20mg/kg患者体重/天，例如约0.3至约15mg/kg/天的范围内。口服单位剂量形式如片剂和胶囊可以包含约25至约1000mg本发明化合物。
可以通过任何合适的方式给予本发明的化合物，这些方式包括口服、局部给予、透皮、胃肠外、皮下、腹膜内、肺内、和鼻内，如果需要局部治疗，可以病灶内给予。胃肠外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内、或皮下给予。合适的口服剂量形式的例子为片剂，其包含约25mg、50mg、100rng、250mg、或500mg本发明化合物、约90-30mg无水乳糖、约5-40mg交联羧甲基纤维素钠、约5-30mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30、和约1-10mg硬脂酸镁。首先将粉末化成分混合到一起，然后与PVP溶液混合。可以将所得组合物干燥、造粒、与硬脂酸镁混合，并用常规设备压制成片剂形式。通过将例如5-400mg本发明化合物溶于合适的缓冲溶液如磷酸盐缓冲液中可以制备气雾剂剂型，如果需要，可以添加张力剂例如盐，如氯化钠。典型地将溶液过滤，例如使用0.2微米过滤器，以除去杂质和污染物。局部剂型包括油膏、乳膏、洗剂、散剂、溶液、阴道栓剂、喷雾剂、气雾剂和胶囊。可以使用水性或油性基质并添加合适的增稠剂和/或胶凝剂和/或溶剂配制油膏和乳膏。这些基质可以包括水和/或油如液体石蜡或植物油如花生油或蓖麻油或溶剂如聚乙二醇。可以使用的增稠剂包括软石蜡、硬脂酸铝、十六醇十八醇混合物、聚乙二醇、微晶蜡和蜂蜡。可以用水性或油性基质配制洗剂，且洗剂可以包含一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、助悬剂或增稠剂。可以借助于任何合适的粉末基质如滑石、乳糖或淀粉形成外用散剂。可以用还包括一种或多种分散剂、增溶剂或助悬剂的水性或非水基质配制滴剂。
实施例通过参考下列实施例将更完全地理解本发明。但是它们不应被理解为限制本发明的范围。本文所用的简写如下DIPEA二异丙基乙胺；DMAP4-二甲基氨基吡啶；DME1，2-二甲氧基乙烷；DMF二甲基甲酰胺；EDC1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺；HATUO-(7-偶氮苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐；
HOAc乙酸；HOBt羟基苯并三唑；NBSN-溴代丁二酰胺；ROESY旋转坐标系奥氏效应谱(Rotating frame Overhauser EffectSpectroscopY)；TASF三(二甲基氨基)锍二氟三甲基硅酸盐；THF四氢呋喃；除非另有说明，所有试剂都是通过商购获得。在氮气气氛中用经烘箱干燥的玻璃仪器进行反应。通过注射器或不锈钢套管转移空气和湿气敏感性液体和溶液。在减压(约15mmHg)下通过旋转蒸发浓缩有机溶液。除非另有说明，使用的所有溶剂都是通过商购获得。通过使用IscoCombiFlash Companion和介质实现产物的色谱纯化。所给出的反应时间仅仅为了说明。在反应过程后进行薄层色谱法(TLC)和液相色谱法-质谱法(LC-MS)。在EM Science硅胶60 F254板(250μm)上进行薄层色谱法(TLC)。通过荧光熄灭观察色谱展开。用Shimadzu 10AD LC在Phenomenex柱(50×4.6mm，5μm)上以3mL/min获得LC-MS。用Shimadzu SPD-10A检测器在214和254nm处监测。在Applied Biosystem质谱仪上进行单个四极质谱。在Varian Inova光谱仪上以400MHz获得1H核磁共振(NMR)谱，内标为四甲基硅烷(TMS)，以百万分之份数(ppm)表示。如下记录1H NMR数据化学位移(δ，ppm)，多重性(s，单峰；bs，宽单峰；d，双峰；t，三重峰；q，四重峰；quint，五重峰；sext，六重峰；hept，七重峰；m，多重峰；bm，宽多重峰)，和积分。通过下列技术中的至少一种评估所有最终产物的结构和纯度LC-MS、NMR、TLC。
实施例1通用程序按下列通用程序制备实施例2-11的化合物。
A还原程序向合适的硝基芳族化合物(1eq)在10ml HOAc中的磁力搅拌下的溶液中一次性添加325目铁粉(10eq)。将所得悬浮液加热至120°C保持30分钟，然后倒入冰中。用EtOAc(3×20ml)萃取所得溶液。用饱和NaHCO3(3×10ml)洗涤合并的有机物，用固体无水MgSO4干燥，然后浓缩。通过快速柱色谱法纯化粗产物，以得到所需的苯胺。
B酰化程序向合适的苯胺(1eq)在20ml二氯甲烷中的磁力搅拌下的溶液中一次性添加二异丙基乙胺(2.1eq)，然后添加合适的酰基氯(1.4eq)。将反应物在室温下搅拌过夜。将所得溶液另外搅拌3h，然后通过添加30ml 1NHCl淬灭。分离各层，用EtOAc(3×30ml)萃取水层。用饱和NaHCO3(1×20ml)洗涤合并的有机物，用固体无水MgSO4干燥，然后浓缩。通过快速柱色谱法纯化粗产物，以得到所需的酰胺。
C溴化程序在0℃向合适的苯乙酮(1eq)在1ml甲苯中的磁力搅拌下的溶液中缓慢添加1ml 30％HBr的HOAc溶液，保持温度。然后滴加Br2(1.1eq)，将所得溶液在0℃搅拌1h。将反应物倒在冰上，用固体NaHCO3中和溶液，然后用EtOAc(3×10ml)萃取。用固体无水MgSO4干燥合并的有机物，然后浓缩。将所得α-溴代苯乙酮不经纯化用于下一反应。
D喹喔啉形成程序向合适的α-溴代苯乙酮(1eq)在5ml乙醇中的磁力搅拌下的溶液中添加合适的1，2-苯二胺(2.7eq)，然后添加DIPEA(3.4eq)。在空气气氛中将所得溶液在室温下搅拌过夜。将反应物浓缩，然后通过反相色谱法在C-18柱上用0至90％梯度的CH3CN水溶液纯化，CH3CN和水两者都包含0.05％TFA。将包含馏分的产物冻干以得到粉末。
实施例2N-(4-氯-3-(喹喔啉-3-基)苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺 用2′-氯-5′-硝基-苯乙酮(0.22g，1.1mmol)和铁粉(0.64g，11mmol)进行程序A。通过快速柱色谱法，在硅胶上用EtOAc:己烷(0∶1至1∶0)洗脱以纯化粗产物，得到所需的2′-氯-5′-氨基-苯乙酮。
向2′-氯-5′-氨基-苯乙酮(0.72g，4.2mmol)的20ml二氯甲烷磁力搅拌下的溶液中一次性添加二异丙基乙胺(2.2ml，12.6mmol)、3，5-二甲氧基苯甲酰氯(1.39g，6.9mmol)。将反应物在室温下搅拌2h，添加第二部分3，5-二甲氧基苯甲酰氯(1.26g，6.3mmol)，然后添加二异丙基乙胺(1.0ml，5.7mmol)。将所得溶液另外搅拌3h，然后通过添加30ml 1N HCl淬灭。分离各层，用EtOAc(3×30ml)萃取水层。用饱和NaHCO3(1×20ml)洗涤合并的有机物，用固体无水MgSO4干燥，然后浓缩。通过快速柱色谱法在硅胶上纯化粗产物，用EtOAc:己烷(0∶1至2∶5)洗脱以得到所需的N-(3-乙酰基-4-氯苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺。
用N-(3-乙酰基-4-氯苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺(0.1g，0.3mmol)和Br2(0.017ml，0.33mmol)进行程序C以得到N-(3-(2-溴乙酰基)-4-氯苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺。
用N-(3-(2-溴乙酰基)-4-氯苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺(0.029g，0.07mmol)、1，2-苯二胺(0.021g，0.19mmol)和DIPEA(0.042ml，0.24mmol)进行程序D，以得到N-(4-氯-3-(喹喔啉-3-基)苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺，为浅褐色粉末。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ 9.26(s，1H)，8.15-8.18(m，2H)，7.91-7.92(m，2H)，7.80-7.82(m，2H)，7.54(d，1H)，6.96(d，2H)，6.61(t，1H)，3.83(s，6H)ppm)；MS(Q1)XXX(M)+。
实施例3N-(4-氯-3-(6-甲基喹喔啉-2-基)苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺 用N-(3-(2-溴乙酰基)-4-氯苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺(0.045g，0.11mmol)、4-甲基-1，2-苯二胺(0.022g，0.18mmol)和DIPEA(0.06ml，0.34mmol)进行程序D。所得N-(4-氯-3-(6-甲基喹喔啉-2-基)苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺为浅色粉末，由6-和7-甲基化产物的混合物组成。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.21(s，1H)，8.08(d，1H)，7.90-7.96(m，3H)，7.68(d，1H)，7.56(d，1H)，6.98(d，2H)，6.64(t，1H)，3.83(s，6H)ppm)；MS(Q1)434.3(M)+。
实施例4 N-(4-氯-3-(5，7-二甲基喹喔啉-3-基)苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺
用N-(3-(2-溴乙酰基)-4-氯苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺(0.044g，0.11mmol)、3，5-二甲基-1，2-苯二胺(0.020g，0.18mmol)和DIPEA(0.06ml，0.34mmol)进行程序D。所得N-(4-氯-3-(5，7-二甲基喹喔啉-3-基)苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺为浅色粉末，与实施例10类似地确定其区域化学(regiochemistry)。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.22(s，1H)，7.95(d，1H)，7.86-7.90(m，2H)，7.78(br s，1H)，7.56(d，1H)，7.51(br s，1H)，6.79-7.00(m，2H)，6.62-6.66(m，1H)，3.86(s，6H)，2.82(s，3H)，2.59(s，3H)ppm；MS(Q1)448.0(M)+。
实施例5 N-(4-氯-3-(5-甲基喹喔啉-3-基)苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺 用N-(3-(2-溴乙酰基)-4-氯苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺(0.023g，0.06mmol)、2，3-二氨基甲苯(0.027g，0.22mmol)和DIPEA(0.05ml，0.30mmol)进行程序D。N-(4-氯-3-(5-甲基喹喔啉-3-基)苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺为浅色粉末，与实施例10类似地确定其区域化学。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.26(s，1H)，8.00-8.03(m，1H)，7.96(d，1H)，7.89-7.91(m，1H)，7.85(dd，1H)，7.65-7.74(m，2H)，7.514(d，1H)，6.96-7.98(m，2H)，6.61-6.62(m，1H)，3.83(s，6H)，2.85(s，3H)ppm；MS(Q1)434.0(M)+。
实施例6 N-(4-氯-3-(5，6-二甲基喹喔啉-3-基)苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺 用N-(3-(2-溴乙酰基)-4-氯苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺(0.034g，0.08mmol)、3，4-二甲基苯-1，2-二胺(0.017g，0.12mmol)和DIPEA(0.042ml，0.24mmol)进行程序D。N-(4-氯-3-(5，6-二甲基喹喔啉-3-基)苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺为浅色粉末，与实施例10类似地确定其区域化学。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.26(s，1H)，8.00-8.03(m，1H)，7.96(d，1H)，7.89-7.91(m，1H)，7.85(dd，1H)，7.65-7.74(m，2H)，7.514(d，1H)，6.96-7.98(m，2H)，6.61-6.62(m，1H)，3.83(s，6H)，2.85(s，3H)ppm；MS(Q1)XXX(M)+。
实施例7 N-(4-氯-3-(喹喔啉-3-基)苯基)-6-(三氟甲基)-2-甲基吡啶-3-甲酰胺 用1-(5-氨基-2-氯苯基)乙酮(0.4g，2.4mmol)、三乙胺(0.7ml，5.0mmol)和2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-3-碳酰氯(0.76g，3.4mmol)进行程序B。
用N-(3-乙酰基-4-氯苯基)-6-(三氟甲基)-2-甲基吡啶-3-甲酰胺(0.1g，0.3mmol)和Br2(0.017ml，0.33mmol)进行程序C，得到N-(3-(2-溴乙酰基)-4-氯苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺。
用N-(3-(2-溴乙酰基)-4-氯苯基)-6-(三氟甲基)-2-甲基吡啶-3-甲酰胺(0.029g，0.07mmol)、1，2-苯二胺(0.021g，0.19mmol)和DIPEA(0.042ml，0.24mmol)进行程序D，得到N-(4-氯-3-(喹喔啉-3-基)苯基)-3，5-二甲氧基苯甲酰胺，为浅褐色粉末。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.30(s，1H)，8.17-8.24(m，2H)，7.95-8.00(m，2H)，7.84-7.90(m，3H)，7.59-7.64(m，3H)，2.8 1(s，3H)ppm；MS(Q1)443.1(M)+。
实施例8 N-(4-氯-3-(6-甲基喹喔啉-2-基)苯基)-6-(三氟甲基)-2-甲基吡啶-3-甲酰胺 用N-(3-(2-溴乙酰基)-4-氯苯基)-6-(三氟甲基)-2-甲基吡啶-3-甲酰胺(0.042g，0.10mmol)、4-甲基-1，2-苯二胺(0.025g，0.20mmol)和DIPEA(0.052ml，0.30mmol)进行程序D。所得N-(4-氯-3-(6-甲基喹喔啉-2-基)苯基)-6-(三氟甲基)-2-甲基吡啶-3-甲酰胺为浅色粉末，由6-和7-甲基化产物的混合物组成。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.22(s，1H)，8.09(d，1H)，7.86-7.98(m，4H)，7.77(br s，1H)，7.71(d，1H)，7.56-7.62(m，2H)，2.80(s，3H)，2.64(s，3H)ppm；MS(Q1)457.1(M)+。
实施例9 N-(4-氯-3-(5，7-二甲基喹喔啉-3-基)苯基)-6-(三氟甲基)-2-甲基吡啶-3-甲酰胺
用N-(3-(2-溴乙酰基)-4-氯苯基)-6-(三氟甲基)-2-甲基吡啶-3-甲酰胺(0.038g，0.09mmol)、3，5-二甲基-1，2-苯二胺(0.029g，0.26mmol)和DIPEA(0.052ml，0.30mmol)进行程序D。所得N-(4-氯-3-(5，7-二甲基喹喔啉-3-基)苯基)-6-(三氟甲基)-2-甲基吡啶-3-甲酰胺为浅色粉末，与实施例10类似地确定其区域化学。
1H NMR(DMSO，400MHz)δ11.05(s，1H)，8.41(s，1H)，8.22(d，1H)，7.92(d，1H)，7.8 1-7.86(m，1H)，7.77(d，1H)，7.68(d，1H)，7.57(br s，1H)，6.81(d，1H)，2.66(s，3H)，2.51(s，3H)；MS(Q1)XXX(M)+。
实施例10 N-(4-氯-3-(5-甲基喹喔啉-3-基)苯基)-6-(三氟甲基)-2-甲基吡啶-3-甲酰胺 用N-(3-(2-溴乙酰基)-4-氯苯基)-6-(三氟甲基)-2-甲基吡啶-3-甲酰胺(0.026g，0.06mmol)、2，3-二氨基甲苯(0.018g，0.15mmol)和DIPEA(0.05ml，0.30mmol)进行程序D。N-(4-氯-3-(5-甲基喹喔啉-3-基)苯基)-6-(三氟甲基)-2-甲基吡啶-3-甲酰胺为粉末，通过在ROESY试验过程中观察从喹喔啉甲基到中心苯环2位质子的磁转移和没有转移至喹喔啉2位质子确定其区域化学。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.26(s，1H)、8.00-8.03(m，1H)，7.96(d，1H)，7.89-7.91(m，1H)，7.85(dd，1H)，7.65-7.74(m，2H)，7.514(d，1H)，6.96-7.98(m，2H)，6.61-6.62(m，1H)，3.83(s，6H)，2.85(s，3H)ppm；MS(Q1)457.1(M)+。
实施例11 N-(4-氯-3-(5，6-二甲基喹喔啉-3-基)苯基)-6-(三氟甲基)-2-甲基吡啶-3-甲酰胺 用N-(3-(2-溴乙酰基)-4-氯苯基)-6-(三氟甲基)-2-甲基吡啶-3-甲酰胺(0.018g，0.04mmol)、3，4-二甲基苯-1，2-二胺(0.01g，0.07mmol)和DIPEA(0.052ml，0.3mmol)进行程序D。N-(4-氯-3-(5，6-二甲基喹喔啉-3-基)苯基)-6-(三氟甲基)-2-甲基吡啶-3-甲酰胺为浅色粉末，与实施例10类似地确定其区域化学。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.18(s，1H)，7.89-7.98(m，3H)，7.83-7.87(m，1H)，7.68(br s，1H)，7.64(d，1H)，7.64-7.61(m，2H)，2.78(s，3H)，2.75(s，3H)，2.54(s，3H)ppm；MS(Q1)471.3(M)+。
实施例12通用程序根据下列通用程序制备实施例13的化合物。
A溴化程序在0℃向合适的苯乙酮(1eq)在40ml苯中的磁力搅拌下的溶液中缓慢添加40ml 30％HBr的HOAc溶液，保持温度。然后滴加Br2(1.05eq)，将所得溶液在0℃搅拌15min。将反应物倒在冰上，然后用EtOAc(3×30ml)萃取。用固体无水MgSO4干燥合并的有机物，然后浓缩。通过快速柱色谱法纯化所得粗α-溴代苯乙酮。
B喹喔啉形成程序向合适的α-溴代苯乙酮(1eq)在200ml乙醇中的磁力搅拌下的溶液中添加合适的1，2-苯二胺(2.4eq)，然后添加固体乙酸钠(3eq)。在空气气氛中将所得溶液暖热回流并搅拌过夜。使所形成的产物沉淀并将反应物真空过滤，用50ml冷却乙醇洗涤固体，然后用50ml 0.1 N HCl洗涤。产物不经进一步纯化即进行下一步反应。
C还原程序向合适的硝基芳族化合物(1eq)在100ml HOAc中的磁力搅拌下的溶液中一次性添加325目铁粉(3eq)。将所得悬浮液在室温下搅拌1h，期间有机物完全溶解，形成暗红色溶液。然后将反应物倒入冰中，用EtOAc(3×200ml)萃取所得溶液。用饱和NaHCO3(3×200ml)洗涤合并的有机物，用固体无水MgSO4干燥，然后浓缩。用快速柱色谱法纯化粗产物，以得到所需的苯胺。
D酰化程序向合适的酸(1.05eq)在20ml DMF中的磁力搅拌下的溶液中添加EDC(2.0eq)和DIPEA(2.0eq)，然后添加6-氯-羟基苯并三唑(2eq)。将所得溶液在室温下搅拌30分钟，然后添加合适的苯胺，在室温下继续搅拌过夜。用100ml水稀释反应物，用EtOAc(3×50ml)萃取。用水(3×100ml)洗涤合并的有机物，用固体无水MgSO4干燥，然后浓缩。用快速柱色谱法纯化粗产物，以得到所需的酰胺。
实施例13 N-(4-氯-3-喹喔啉-2-基-苯基)-4-甲磺酰基-苯甲酰胺 用2′-氯-5′-硝基-苯乙酮(4.0g，20mmol)和溴(1.13ml，22mmol)进行程序A。通过快速柱色谱法纯化粗产物，在硅胶上用EtOAc:己烷(0∶1至1∶4)洗脱，以得到所需的2-溴-2′氯代-5′-硝基苯乙酮(5.4g，19.2mmol)。
用2-溴-2′氯代-5′-硝基苯乙酮(14.16g，50mmol)、1，2-苯二胺(13.1g，120mmol)和NaOAc(12.4、150mmol)进行程序B，以得到所需的2-(2-氯-5-硝基-苯基)-喹喔啉(8.6g，30mmol)。
用喹喔啉(8.6g，30mmol)和Fe(5.2g，90mmol)进行程序C以得到苯胺(5.3g，20.7mmol)。
用4-(甲基磺酰基)苯甲酸(102mg，0.49mmol)、EDC(186mg，0.93mmol)、DIPEA(0.16ml，0.93mmol)、6-氯-羟基苯并三唑(162mg，0.93mmol)和苯胺(119mg，0.46mmol)进行程序D。通过快速柱色谱法纯化粗产物，在硅胶上用EtOAc:己烷(0∶1至3∶2)洗脱以得到所需的4-氯-3-喹喔啉-2-基-苯基胺(104mg，0.24mmol)。
1H NMR(D6-DMSO，300MHz)δ10.81(s，1H)，9.25(s，1H)，8.23-8.15(m，4H)，8.11-8.00(m，3H)，7.97-7.90(m，2H)，7.69(s，1H)，3.30(s，3H)ppm；MS(Q1)438.0(M)+。
实施例14 Hedgehog信号传导抑制测定小鼠报告细胞系-10T1/2-GliLuc[s12]细胞(源自细胞系C3H10T1/2ATCC#CCL-226)；小鼠胚胎成纤维细胞；生长培养基用10％胎牛血清(FBS)、10单位/mL青霉素、100μg/mL链霉素、2mM谷氨酰胺、和10mMHEPES补充的Dulbecco′s改进的Eagles′培养基(DMEM)。
人报告细胞系-HEPM-GliLuc[MZ24]细胞(源自HEPM，人胚胎腭间叶细胞ATCC#CRL-1486)；生长培养基用10-20％胎牛血清(FBS)、10单位/mL青霉素、100μg/mL链霉素、2mM谷氨酰胺、和10mM HEPESpH 7.2补充的极限必需培养基(MEM；包含Earle′s盐)。
Sonic hedgehog-重组人SHh N-端基辛基化结合物。
微量滴定板(MTP)-将细胞铺在96孔MTP(白色，平底，视野清晰)中用于荧光素酶测定。
荧光素酶测定培养基-用0.5％FBS、10单位/mL青霉素、100μg/mL链霉素、2mM谷氨酰胺、和10mM HEPES pH 7.2补充的DMEM。
PBS/Ca/Mg混合物-用0.5mM CaCl2和1mM MgCl2补充的磷酸盐缓冲盐水(PBS)。
测定程序在37℃和5％CO2中，将经基因修饰以包含由hedgehog-响应性Gli促进剂驱动的荧光素酶报告基因的S12和MZ24细胞保持在组织培养皿的生长培养基中。每3-4天使细胞培养物于分会合(sub-confluency)传代。(s12为1∶20至1∶40；MZ24为1∶3至1∶10)。收获细胞，用生长培养基稀释，从而可以以10,000-20,000个细胞(s12)、或20,000-30,000个细胞(MZ24)/100μl/孔将它们铺在微量滴定板中。在37℃和5％CO2中将细胞进一步温育约24-48小时。
在24-48小时的温育后，用其中包含和不包含浓度为0.1-0.3μg/ml(S12)或0.5-1.0μg/ml(MZ24)的Sonic hedgehog-辛基结合物和受试化合物的荧光测定培养基(100μl/孔)代替微量滴定板中的生长培养基。然后将细胞进一步温育另外24小时。
然后采用改进的其中除去培养基并用1∶1 PBS/Ca/Mg溶胞缓冲液代替直接的溶胞缓冲液再造底物的制造商提供的程序，对微量滴定板使用荧光素酶报告基因测定试剂盒(LucLiteTM)测定。简言之，按1∶1将PBS/Ca/Mg与溶胞缓冲液混合，向(1000-测定试剂盒的)每个底物瓶中添加10mL。然后弃去来自微量滴定板的测定培养基，向每个孔中添加100μl该底物混合物。将板在室温下温育20-30分钟，然后用Topcount读出器(Packard)或Analyst读出器(Molecular Devices)确定相对光单位(RLUS)，它表示荧光素酶报告基因的相对表达水平。
下表1表示根据上述程序使用小鼠[s12]或人[MZ24]Gli报告细胞系测得的具体化合物的抑制hedgehog途径信号传导的平均IC50值。
权利要求
1.式I的化合物及其盐和溶剂化物 其中A为碳环或杂环；X为亚烷基、NR4C(O)、NR4C(S)、NR4C(NH)、NR4SO、NR4SO2、NR4C(O)NH、NR4C(S)NH、C(O)NR4、C(S)NR4、C(NH)NR4、NR4PO或NR4PO(OH)，其中R4为H或烷基；Y为N、CH或CR3；R1选自分别任选地被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基、卤代烷基或烷氧基取代的烷基、环烷基、芳基或杂环；所述环烷基、芳基和杂环进一步任选地被-(CH2)s-(Q)u-(CH2)t-Z取代，其中Q为C(O)、S(O)、SO2、C(O)O、OC(O)、NR4C(O)、NR4C(S)、NR4SO、NR4SO2、NR4C(O)NH、NR4C(S)NH、C(O)NR4、或C(S)NR4；Z为羟基、氨基、卤素、烷基磺酰基、烷氧基、烷氧基羰基、卤代烷基、碳环、杂环，或被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基或烷氧基烷氧基取代的碳环或杂环；s和t独立地为0至5，u为0或1；R2为分别任选地被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基或烷氧基取代的卤素、羟基、烷基、酰基或烷氧基；R3为分别任选地被羟基、卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基或烷氧基取代的卤素、羟基、烷基、酰基或烷氧基；m为0-3；n为0-3。
2.如权利要求1所述的化合物，其中A为选自A1和A2的环 其中Z1为O、S或NR5，其中R5为H或烷基；Z2为CH、CR2-或N；R2为卤素、羟基、烷基或烷氧基；R2′为H、卤素、羟基、烷基或烷氧基；n为0-3。
3.如权利要求2所述的化合物，其中A为其中Z1为S且Z2为CH或N的环A1。
4.如权利要求2所述的化合物，其中A为环A2。
5.如权利要求2所述的化合物，其中R2或R2′为Cl或Me。
6.如权利要求2所述的化合物，其中A为A2a
7.如权利要求1所述的化合物，其中X为NR4C(O)。
8.如权利要求1所述的化合物，其中X为NR4SO2。
9.如权利要求7所述的化合物，其中R4为H或Me。
10.如权利要求9所述的化合物，其中R4为H。
11.如权利要求1所述的化合物，其中R3为Me或F。
12.如权利要求1所述的化合物，其中R3为Me，m为1或2。
13.如权利要求1所述的化合物，其中R3为F，m为1或2。
14.如权利要求1所述的化合物，其中m为0。
15.如权利要求1所述的化合物，其中R1选自式IIa-IIm 其中W为O、S或NR7，其中R7为H或烷基；R6为卤素、氨基、硝基、烷基、酰基、烷基磺酰基或烷氧基；且o为0-3。
16.如权利要求15所述的化合物，其中R1为式IIa的基团。
17.如权利要求1 6所述的化合物，其中R6为烷氧基，且o为1或2。
18.如权利要求16所述的化合物，其中R1选自式IIa1-IIa28
19.如权利要求16所述的化合物，其中A为环A1或A2。
20.如权利要求16所述的化合物，其中A为环A2’。
21.如权利要求16所述的化合物，其中R3为Me或F。
22.如权利要求3所述的化合物，其中m为0。
23.如权利要求3所述的化合物，其中X为NR4C(O)。
24.如权利要求15所述的化合物，其中R1为式IIb的基团。
25.如权利要求24所述的化合物，其中R6为烷基或卤代烷基。
26.如权利要求24所述的化合物，其中R1为式IIb1的基团
27.如权利要求24所述的化合物，其中A为环A1或A2。
28.如权利要求24所述的化合物，其中A为环A2’。
29.如权利要求24所述的化合物，其中R3为H、Me或F。
30.如权利要求24所述的化合物，其中R3为H。
31.如权利要求24所述的化合物，其中X为NR4C(O)。
32.一种组合物，其包含权利要求1的化合物和药物学可接受的载体。
33.治疗哺乳动物癌症的方法，其包括向所述哺乳动物给予有效量的权利要求1的化合物。
34.如权利要求33所述的方法，其中所述癌症为基底细胞癌、成髓细胞瘤、胰腺腺癌、小细胞肺癌、乳腺癌、横纹肌肉瘤、食管癌、胃癌、胆道癌。
35.抑制哺乳动物中血管发生的方法，其包括向所述哺乳动物给予有效量的权利要求1的化合物。
全文摘要
本发明提供了可用作治疗药治疗癌的hedgehog信传导号的新型抑制剂及其盐和溶剂化物，其中化合物具有式I通式，其中A为碳环或杂环；X为亚烷基、NR
文档编号C07D403/04GK101018783SQ200580022281
公开日2007年8月15日 申请日期2005年4月29日 优先权日2004年4月30日
发明者迈克尔·F.·T.·凯勒, 理查德·戈德史密斯, 丹尼尔·P.·萨瑟林 申请人:遗传技术研究公司