抗病毒化合物的制作方法

专利名称：：抗病毒化合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及用作神经氨酸苷酶(NA)、红血球凝集素(HA)、结构蛋白M2和血凝素酯酶融合(HEF)糖蛋白的抑制剂的新型化合物；包含用于治疗、预防或改善病毒感染的所述化合物的药物组合物；以及使用所述4t合物和组合物的方法。已经发现流感病毒在电子显微镜下观察时显示出直径为80至120rnn的球体形状和/或细丝状(YoshinoriFujiyoshietal."FinestructureifinfluenzaAvirusobservedbyelectroncryo-microscopy"，TheEMBOJournal13(2)，p318-26，1994)。病毒膜的最典型特征是，在相应于红血球凝集素(HA)和神经氨酸苷酶(NA)的A型和B型病毒的情况下存在》欠射状凸出物(radialprojections)[(WilsonI.A.etal."Structureofthehaemoagglutininmembraneglycoproteinofinfluenzavirusat3Aresolution",Nature,289，p366-73，1981;VargheseJ.N.etal."Structureoftheinfluenzavirusglycoproteinantigenneuraminidaseat2.9Aresolution",Nature,303，p35-40，1983;ColmanP.M.etal."Structureofthecatalyticandantigenicsitesininfluenzavirusneuraminidase",Nature,303，p41-44，1983)],以及在相应于称为血凝素酯酶融合(HEF)糖蛋白的C型流感病毒的情况下产生三种生物学活性结合到受体(H)、受体失活(E)和融合(F)(HerrierGeorg，etal.，"AsyntheticsialicacidanalogueisrecognizedbyinfluenzaCvirusasareceptorbutisresistanttothereceptor—destroyingenzyme",J.Biol.Chem.，2567(8)，p12501-12505，1992)。第一代抗病毒产品(主要是金刚烷衍生物，类似的金刚烷胺、金刚乙胺等)据认为通过阻断A型流感病毒的M广蛋白离子通道而起作用。阻断H+离子通过M2-蛋白离子通道的流入会抑制脱壳和游离核糖核蛋白在细胞质中的释放。这仅在A型病毒中发现，但不在B型病毒中发生。此后，抗病毒策略涉及第二代抗病毒剂例如扎那米韦和奥塞米韦的开发，它们抑制红血球凝集素(HA)或神经氨酸苷酶(M)，其以蘑菇状凸出物存在于A型和B型流感病毒的表面。这些蛋白通过裂解唾液酸糖蛋白的唾液酸部分和糖脂类而结合到要感染的靶细胞的膜表面。此外，在病毒复制的终点，神经氨酸苷酶对于从受体上裂解唾液酸使病毒释放是必需的。相比之下，当前抑制丙型肝炎病毒(HVC)的策略包括在单磷酸鸟噪呤核苷的合成中使用利巴韦林(为单磷酸盐)通过降低细胞内水平来抑制。此外，利巴韦林(为三磷酸盐)通过降低病毒ARNm和ARN聚合酶的合成来抑制ARNm-胍基转移酶(guanily1transpherase)。国际申请愈来愈多地报道了耐药流感病毒林，持续的突变(特别是A型病毒)和耐药变异体或其组合是可传染的并且完全是致病的。在这方面，在最近几年，科学家们将A型禽流感(H5N1)病毒描述为世界流行病暴发的重大风险。类似地，丙型肝炎感染在全世界是非常普遍的，因此也代表了一种影响患者人数增加的严重的致病状况。由上可见，急需开发出改良的抗病毒化合物，其优选存在对病毒复制作用的多重组合机制。
背景技术：
：Itzstein，M.vonetal.;"Nature",363(6428)，p418-423(1993)中公开了基于唾液酸酶的流感病毒复制抑制剂的合理设计。Colman，P.M.etal.;W092/06691(PCT/AU90/00501，公开日1992年4月30日)，Itzstein,L.M.vonetal.;EP0539204A1(欧洲申请92309684.6，7>开日1993年4月28曰)，以及Itzstein，L.M.vonetal.;WO91/16320(PCT/AU91/00161,公开曰1991年10月31日)中公开了结合神经氨酸苷酶的化合物，并且据认为显示出体内抗病毒活性。BischofbergerN，W.etal.;US5,952,375(美国申请08/606,624，申请日1996年2月26日)公开了作为神经氨酸苷酶抑制剂的新化合物。BabuY.S.,ChadP.，BantiaS.etal."Discoveryofanovel,highlypotent,orallyactive,andselectiveinfluenzaneuraminidaseinhibitorthroughstructure—baseddrugdesign".JMedChem，43(19):3482(2000)，国际申请W099/33781(国际申请号PCT/US98/26871，公开日1999年7月8日)公开了用作神经氨酸苷酶抑制剂的新型取代化合物和衍生物。此外，为了治疗慢性HVC感染，例如描述于Martindale33.rdEd.(2002)p639-43中的、通常的医学实践是在人受试者中同时组合施用嘌呤核苷类似物例如利巴韦林或Viramidine(商品名)与细胞因子例如千扰素a-2b(或聚乙二醇化千扰素ot-2b)。实际上，据认为，单浓集，而三磷酸盐千扰RMm-胍基转移酶,发明目的本发明的一个目的是提供对病毒特別是对流感病毒和肝炎病毒显示有效抑制作用的新化合物。此类化合物对膜蛋白、红血球凝集素(HA)、结构蛋白例如病毒中的M2、和糖解酶例如神经氨酸苷酶(NA)产生其组合的和选择性的抑制作用，更特别地是通过与病毒神经氨酸苷酶千扰而起作用。这些新化合物还对丙型肝炎病毒(HVC)产生抑制活性。另一目的是提供改良的和更低廉的病毒复制抑制剂以及导致严重病毒感染的最常见病毒传递过程抑制剂，而与目前使用的抗病毒剂无任何交叉耐药性。再进一步的目的是提供施用本发明新化合物或它们与其它已知抗病毒剂的合理组合的方法。另一目的是提供用于以上目的的药物组合物。对于本领域技术人员而言根据本发明整体考虑，这些和其它的目的将会变得明显。
发明内容在本发明的第一方面，本文提供了通式(I)化合物其中X是-CH广、-0-、-CHF-、-CF2-;单键或双键连接环的C2-C3;t表示-0H、卣素或-B/部分，条件是存在双键连接环的C2-C3时W不存在；且R2表示-0H、-0-CH(C2H5)2、-NH2、-NHC(NH)NH2或-NH-OH;且113是-NH2、-NHC0-CH3或-NH-C0-CH2-OH;且R4表示-CH0H-CH0H-CH广0H、-CHOH-CH广B/部分、-CH广B/部分或-B/部分其中-B/部分表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>-Bl/部分-B2/部分其中.-R5表示连接官能团-NH-、-CH广NH-、-CH(CH3)-NH-、-NH-CH(CH3)-NH-、-C(CH3)2_CH2-NH-、-冊-CO-CH广O-CH广CH厂NH-或W是-H、-CH3或-C2Hs;且R7是-H、-CH^-C2H5;且R8表示连接官能团-NH-、-CO-NH-或-C(NH)-NH-;以及它们的Cl-4羧基单或多酯、加成盐、溶剂合物、拆分的对映体和纯化的非对映体。本发明还包括药物组合物，其在适用于给哺乳动物特别是人施用的药学可接受的载体中含有单独的本发明化合物或者与其它活性剂组合。在本发明另一实施方案中，神经氨酸苷酶和/或蛋白M2的活性可受包括以下步骤的方法抑制用本发明化合物或组合物处理怀疑含有神经氨酸苷酶和/或蛋白M2的样品。本发明另一方面提供了用于在宿主中治疗或预防例如由流感病毒或肝炎病毒引起的病毒感染的方法，该方法包括通过任何适宜的施用途径给宿主施用治疗有效剂量的本文公开的本发明化合物。在本发明其它实施方案中，还提供了合成本发明化合物的新方法。具体实施例方式本发明涉及以下构型的结构式(I)化合物:其中:x是-ch广、-0-、-chf-、-cf2-;单键或双键连接环的c2-c3;且W表示-0h、面素或-B/部分，条件是存在双键连接环的C2-C3时W不存在；且R2是-0h、-0-ch(c2h5)2、-nh2、-nhc(nh)NH2或-nh-0h;且r3是-nh"-"1^0-(:}13或-匪-0)-(:112-011;且r"表示-choh-choh-ch广oh、-choh-ch广b/部分、-01厂8/部分或-b/部分其中-b/部分表示-Bl/部分-b2/部分其中r5表示连接官能团-nh-、-ch广nh-、-ch(ch3)-nh-、-nh-ch(ch3)-nh-、-c(ch3)广ch「nh-、-nh-c0-ch2-0_ch2-ch2-nh-或N一;并且R6是-H、-CH3或-C2Hs;且R7是-h、-CH3或-C2Hs;且r8表示连接官能团-nh-、-co-nh-或-c(nh)-nh-'在优选的实施方案中，x是由-0-表示的，其为典型的唾液酸环，其中在d上的羧酸保持未取代，因为其被认为是病毒神经氨酸苷酶的吸着点。在另一更优选的实施方案中，单键或双键连接环的c2-c3，条件是，当存在双键时，W不存在。在另一典型的实施方案中，至少r1或^可以是被-b/部分单取代的。因此，IT优选表示-0h、卣素或典型的-b/部分，当r'表示-choh-choh-ch广0h或典型的-choh-ch广b/部分时，其中该-B/部分可以是-Bl/部分或-b2/部分。当使用典型的-Bl/部分时，A和B流感病毒林对神经氨酸苷酶的特异性抑制机制优选被诱发，而且Mf蛋白离子通道(仅存在于A林中)的阻断也被容许。-b2/部分也可用于单取代^f汙生物，以实现类似的抑制作用。在另一适宜的组合中，W和114可以是相同的或不同的二取代的。在优选的组合中，r'和R4可以均;陂-b2-部分取代，所得化合物据认为更选择性地抑制hvc复制。当R1被-Bl/部分或-b2/部分取代并且R4不同地表示为-b2/部分或-Bl/部分时，据认为所得抑制作用可影响A和B流感病毒抹，并且还可影响hvc。在进一步优选的组合中，当r或r4同时;f皮连接到主结构(I)的-b1/部分取代时，rs可以是-oh并且rs可以是-nhco-ch3。另一优选实施方案是连接官能团rs可以是-nh-或-ch(CH3)-nh-,而1(6和r'可优选是-h或-CH3。当W或R4是由连接到主结构(I)的-b2/部分表示时，连接官能团r8可优选为-co-nh-。本发明还包括本发明化合物的直链或支链d-4羧基单酯或多酯、加成盐、溶剂合物、拆分的对映体和纯化的非对映体。在本发明另一实施方案中，神经氨酸苷酶和/或M2离子通道的活或M2蛋白的病毒样品来抑制或阻断。本发明的另一方面涉及在哺乳动物宿主中治疗或预防病毒感染特别是流感a和b病毒林或者hvc的方法，其包括通过任何适宜施用途径给宿主施用治疗有效剂量的本发明化合物。在另一实施方案中，还提供了合成本发明化合物的新方法。本发明还包括药物组合物，其在适用于例如给哺乳动物施用的药学可接受的载体中含有单独的本发明化合物，或者与例如本发明另一化合物或一种或多种活性剂的组合。本发明进一步的方面包括治疗或预防所述病毒性疾病或病症的方法，该方法是通过组合使用本发明化合物或药物组合物或者其混合物的哺乳动物的治疗以及同时或交替使用另一治疗有效剂量的活性剂的治疗，所述活性剂也能够抑制此类病毒感染。本发明还包括产生本发明化合物的方法。所述化合物可通过有机合成中任何适用的技术制备，它们是本领域技术人员公知的。对于W直接连接到唾液酸环的c2a=-o-)的本发明优选化合物的一般性制备，可以优选还原酰胺化操作法，如由Tangetal.Biochem.Biophys.Res.Commun.，132:474-80(1985)早期描述的方法，以及由Stolletal.,Biochem.J.，256:661-4(1988)和由ScharzmannG.etal.，Biochem.,22:5041-9(1983)修改的方法。事实上，通过根据以上方法，可以产生唾液酸环的Cs与-B/部分的氨基基团之间的共价胺连接。类似地，对于本发明其它优选化合物(例如R4直接连接到唾液酸环的。(X=-0-)的那些化合物)的一般性制备法，可以遵循以下出版物中描述的许多已知技术CompendiumofOrganicSyntheticMethods(JohnWiley&Sons,NewYork),Vol.1，IanT;HarrisonandShuye，Harrison,1971'，Vol.2，IanT.HarrisonandShuyenHarrison,1974;Vol.3，LouisS.HegedusandLeroyWade,1977;Vol.4，LeroyG.Wade,jr.,1980;Vol.5，LeroyG.Wade,Jr.1984;且Vol.6，MichaelB.Smith;以及March,J.，2AdvancedOrganicChemistry,第3版，(JohnWiley&Sons,NewYork,1985)，ComprehensiveOrganicSynthesis.Selectivity,Strategy&EfficacyinmodernOrganicChemistry.In9Volumes,BarryM.Trost，Editor-in-Chief(PergamonPress,NewYork,1993年印刷)。下面提供了许多制备本发明化合物的示例方法，但是它们将不会限制适用方法的范围。通常，反应条件例如温度、反应时间、溶剂、处理工序等对于进行的具体反应来说是本领域普通的那些。所引用的文献材料以及其中引用的材料中包含上述条件的详细说明。作为示例性的方法，以下一般性步骤可用于本发明的R4取代的化合物的一般性合成。然而，本领域技术人员将会理解，其它标准操作可用于产生相同的物质。步骤1—以下结构的中间体1的制备冲间体1在回流下，在甲醇中用Dowex50(H+)搅拌处理唾液酸达24-48小时的时间。滤出树脂，将滤液浓缩至干燥，得到需要的二曱基取代的(中间体l)。步骤2—以下结构的中间体2的制备OHOHICOOHOCH3中间体2从步骤1获得的固体用氢氧化钠水溶液复原，并在室温下搅拌，通常持续1-3小时。然后将该混合物用Dowex50(H+)树脂调节至pH7.0-7.5。过滤，接着使滤液冷冻干燥，得到相应的非曱基化的酯(中间体2)。步骤3—以下结构的中间体3和4的制备18<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>使从步骤2获得的中间体与高碘酸钠水溶液以不同的摩尔比在暗处反应1小时，产生中间体3(较低的比例)或中间体4(较高的比例)。然后将醋酸钡加至沉淀物中，再通过过滤除去过量的多典酸盐和高碘酸盐。然后将滤液冷冻干燥。获得微黄色固体(中间体3或4)。步骤4—以下结构的中间体5和6的制备:中间体5中间体6在搅拌下将来自步骤3所得的中间体3或4分别溶解于甲酸水溶液中，再在80。C下加热1小时。将所得溶液各自冷冻干燥。分别获得中间体6和5。步骤5—根据以下示例性反应方案制备最终^单取代的化合物方案ACH，COHN'COOH十iU产生-Bl/部分的反应产物CH2OHNH"""3OHCOOH化合物1本发明的R4单取代的(-Bl/部分)化合物方案BCH3COHNCOOHN+OHOH中间体6产生-B2/部分的反应产物NH—CH:CH,COHN'OH^7OHCOOH化合物2本发明另一个R4单取代的(-B2/部分)化合物将来自步骤4的各个得到的中间体5或6分别用蒸馏水与所选的产生所需-B/部分(-Bl/部分或-B2/部分)的反应产物来复原，使反应混合物在4X:下保持静置过夜。然后加入硼氩化钠，并使反应混合物在室温下保持静置达l小时。使各样品在Dowex50(H+)柱上去离子化，再将洗脱液冷冻千燥，分别得到不同的本发明最终化合物。本发明其它典型的R4单取代的(具有不同的-B/部分)化合物例如表示如下，并在进一步的实施例中描述化合物5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>化合物10另一优选的制备实施方案包括通过使用以下反应步骤合成R'单取代的化合物步骤1—t单取代的(-B/部分)化合物的制备将唾液酸溶解于不同比例(优选9:l)的曱醇和水的混合物中，再在轻微搅拌下加入产生-B/部分的反应产物。添加硼氢化钠之后，使该混合物在60。C和轻孩t搅拌下保持2小时。然后使该混合物通过Dowex50(H+)柱，以使硼氢化钠转化成硼酸。将洗脱液冷冻干燥，用小份的甲醇复原，再通过纸滤器。分离出残余物，使洗脱液干燥。根据需要重复后面的操作数次(通常多于5倍)。将所得固体最终溶解在小份水中，然后冷冻干燥，得到需要的本发明^单取代的(具有-B/部分)化合物。其它典型的反应方案可表示如下方案C<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>唾液酸(中间体)产生-Bl/部分的反应产物本发明W单取代的(-Bl/部分)化合物(化合物11)方案DNH,CH3COHNCOOH<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>QH唾液酸OHOHOH产生-B2/部分的反应产物CH3COHN^7OHOHOH本发明的另一R1单取代的(-B2/部分)化合物另一其它优选的制备实施方案包括通过采用以下一般性反应方案合成W和W二取代的化合物步骤1一W和r二取代的(-B/部分)化合物的制备通过结合以上描述的生方方案(A、B、C和D)，本领域技术人员可得到本发明的双取代的化合物。本发明典型的最终双取代的(具有相同或不同的-B/部分)化合物表示如下ohohohoh另一典型的R1和R4双取代的(具有相同的-B2/部分)化合物对于本领域技术人员显然的是，通过使用相同的产生-Bl/部分或-B2/部分的反应产物，其各自提供如通式(I)表示的R6、R'和R8的其它可能的组合，这可能得到类似的本发明的双取代化合物。ohoh本发明典型的R1和R4双取代的(具有不同组合的-B/部分)化合物25~典型的W和W双取代的(具有相同的-Bl/部分)化合物OHOH本发明另一典型的R和W双取代的(具有不同组合的-B/部分)化合物类似地，通过使用组合-Bl/部分和-B2/部分的不同反应产物，其各自提供如通式(I)表示的R6、R'和R8的其它可能的组合，这可能得到类似的本发明不同的双取代化合物。对于本领域技术人员而言明显的是，通过使用经典的间苯二酚-HC1法(SvennerholmL."Quantitativeestimationofsialicacids.II.Acolorimetricresorcinol-hydrochloricacidmethod.'1Biochem.Biophys.Acta,24(3)，604-611，1957;MiettinenJ.etal."Useofbutylacetateindeterminationofsialicacid."，ActaChem.Scand.，13，856-858，1959)以及TBA(2-石;U戈巴比妥酸)法(WarrenL."Thethiobarbituricacidassayofsialicacids."，J.Biol.Chem.,234,1971-5，1959;AminoffD."MethodsforthequantitativeestimationofN-acetylneuraminicacidandtheirapplicationtohydrolysatesofsialomucoids."，Biochem.J.，81(2)，384-392，1961)检测和定量测定唾液酸因以下原因而不同间苯二酚-HCl法在唾液酸及其衍生物游离存在以及与其它糖例如唾液酸糖化合物(sialoglycocompounds)共轭时均可检测和定量测定。相比之下，TBA法仅在连接到2位(C》的碳原子的羟基-部分(^=-0H)未被取代时才可检测和定量测定唾液酸及其衍生物。本发明化合物还包括在任何或全部不对称原子处的富集的或拆分的光学异构体。外消旋混合物和非对映体混合物，以及分离或合成的、基本上无其它对映体对或非对映体对的单一光学异构体，均在本发明范围内。可通过公知技术将外消旋混合物分离成它们的单一的、基本上为光学纯的异构体，所述技术例如，使与光学活性辅助剂例如酸或碱形成的非对映体盐分离，接着转化回复到光学活性物质。在大多数情况下，需要的光学异构体是通过从所需起始物质的适宜立体异构体开始以立体特异性反应来合成的。本发明组合物任选包括本文化合物的盐，尤其是药学可接受的非毒性盐，其包含例如无机或者优选有机酸或碱。当需要化合物的水溶性盐时，成盐作用是优选的操作法。本发明另一方面涉及抑制神经氨酸苷酶活性的方法，该方法包括用本发明化合物处理怀疑含有神经氨酸苷酶例如病毒神经氨酸苷酶的样品的步骤。据认为本发明化合物可作为神经氨酸苷酶的抑制剂，作为此类抑制剂的中间体，或者具有下面所述的其它用途。事实上，所述抑制剂会结合到神经氨酸苷酶的表面或内腔中，这些表面或内腔对于神经氨酸苷酶而言具有几何独特性。然而，结合神经氨酸苷酶的化合物可以不同程度的可逆结合。这些基本上不可逆结合的化合物是用于本发明方法的理想候选者。含有神经氨酸苷酶的有机体包括细菌(霍乱弧菌、产气荚膜梭菌、肺炎链球菌和Arthrobactersialophilus)和病毒(尤其是正粘液病毒或副粘液病毒例如流感病毒A和B、副流感病毒、鼻病毒、冠状病毒、冠状病毒突变体和/或改良冠状病毒、腮腺炎病毒、新城疫病毒、鸡瘋病毒和仙台病毒)。从这些有机体的任一种中获得的或发现的神经氨酸苷酶活性的抑制作用在本发明的范围内。本发明化合物还可用于在动物或人中治疗或预防上述感染，所述动物例如鸭、啮齿类动物或猪。在进一步的实施方案中，本发明化合物是通过评价酶活性的常规技术来对其神经氨酸苷酶的抑制活性进行筛选的。在本发明上下文中，首先针对体外抑制神经氨酸苷酶来筛选典型的化合物。本发明进一步的方面涉及阻断H+离子通过M2-蛋白离子通道的流入、抑制脱壳和游离核糖核蛋白释放到细胞质的方法，该方法包括用本发明化合物处理怀疑含有M2-蛋白例如流感病毒A的样品的步骤。事实上，还认为本发明化合物是通过阻断病毒M卜蛋白功能而起效。本发明另一进一步的方面涉及抑制单磷酸鸟嘌呤核苷和RNAm-胍基转移酶的合成的方法，该方法包括通过用本发明化合物处理受怀疑样品以阻断HVC的RNAm和RNA聚合酶合成。在另一实施方案中，据认为本发明不同的双取代的化合物同时作为神经氨酸苷酶和M2-蛋白离子通道的抑制剂起效。本发明化合物可以用常规载体和赋形剂来配制，这些载体和赋形剂将根据常规实践来选择。片剂将含有赋形剂、助流剂、填充剂、粘合剂等。水溶液制剂被制成无菌制剂，当需要通过除口服以外的方式来给药时，它们通常是等渗的。所有制剂将任选含有赋形剂，例如在公知出版物"HandbookofPharmaceuticalExcipients"，第4版，RoweR.C.etal.，PharmaceuticalPress(2003)中描述的那些。赋形剂包括抗坏血酸和其它抗氧剂，螯合剂例如EDTA、碳水化合物例如糊精、羟烷基纤维素、羟烷基曱基纤维素、硬脂酸等。本发明的一种或多种化合物(下面亦称为活性成分)可以通过任何适合于待治疗病症的途径来施用。适宜的途径包括口、直肠、鼻、局部(包括口腔和舌下)、阴道和胃肠外(包括皮下、肌内、静脉、皮内、鞘内和硬膜外)等。可以理解，优选的途径可随例如受试者的病症而改变。本发明化合物的优点是，它们是口服生物有效的，并且可以以口服药物剂型给药；可以但并不必须通过肺内或鼻内途径来给予它们。虽然本发明活性成分单独施用是可能的，但它们优选以药物制剂存在。本发明制剂，其可以兽用或人用，包括至少一种上述定义的本发明的活性成分或化合物，以及一种或多种可接受的载体和任选的其它治疗成分。所述载体必需是"可接受的"，表示其与制剂的其它成分相容并且对其受试者生理上是无毒的。制剂包括适用于前述施用途径的那些。制剂可以便利地以单位剂量形式存在，并且可通过药学领域公知的任何方法来制备。制剂技术通常可见于"Remington'sPharmaceuticalSciences"MackPublishingCo.，Easton，Pa.，U.S.A.。此类方法包括使活性成分与载体结合的步骤，该载体由一种或多咱辅助成分构成。通常，该制剂可通过使活性成分均匀且致密地与液体载体或粉碎细化的固体载体或此二者结合，然后，如果需要，使产物成形为所期望的。适用于口服的本发明制剂可制备成为固体单元例如胶嚢剂、扁嚢剂或片剂，其各自含有预定量的活性成分；粉末或颗粒；在水性液体或非水性液体中的溶液或混悬液；水包油液体乳剂或油包水液体乳剂。活性成分还可以以大丸剂、糖何剂或糊剂存在。片剂是通过任选与一种或多种辅助成分压制或模制来制备的。压制片剂可通过在适宜的机器上将活性成分压制成自由流动的形式例如粉末或颗粒来制备，任选与粘合剂、润滑剂、隋性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合。模制片剂可通过在适宜的机器上将用隋性液体稀释剂湿化的粉末化活性成分的混合物压模来制备。片剂可任选被包衣或刻痕，并且任选配制成提供活性成分从其中緩慢释放或控制释放。对于眼或其它外部组织例如口和皮肤的感染，该制剂可优选用作局部用软骨或乳青，所述软骨或乳骨含有活性成分的量为例如0.075至20。/。w/w(包括范围为0.1%至20%的活性成分，增量为0.l%w/w，例如0.6°/。w/w、0.7。/。w/w等)，优选为0.2至15%w/w,最优选为0.5至10%w/w。当配制成软骨时，活性成分可以与石蜡基质或水分散性软骨基质使用。或者，该活性成分可以与水包油乳膏基质一起配制成乳骨。如果需要，乳骨基质的水相可包括，例如，至少30y。w/w的多元醇，即具有两个或多个羟基的醇例如丙二醇、1，3-丁二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG400)及其混合物。局部制剂还可期望地包括促进活性成分通过皮肤或其它受侵袭区域吸收或渗透的化合物。此类皮肤渗透促进剂的实例包括二甲亚砜和类似物。本发明乳剂的油相可由已知成分以已知方式构成。虽然该相可仅包括乳化剂(另称之为利泄剂)，其期望包括至少一种乳化剂与脂肪或油或者与脂肪和油二者的混合物。亲水性乳化剂优选与作为稳定剂的亲脂性乳化剂一起使用。还优选包括油和脂肪二者。同时，有或无稳定剂的乳化剂制备成所谓的乳化蜡，并且该蜡与油和脂肪一起制备成所谓的乳化软青基质，该乳化软骨基质形成乳骨制剂的油分散相。适用于本发明制剂的利泄剂和乳剂稳定剂包括Tween60、Span80、十八醇十六醇混合物、苯曱醇、十四醇、甘油单硬脂酸酯和月桂疏酸钠。用于该制剂的适宜的油或脂肪的选择根据要实现期望的化妆品特性来进行。该乳骨应优选为非油腻的、非沾污的和可水洗的产品并具有适宜的稠度以避免从管或其它容器中泄漏。可以使用直链或支链、单或二烷基酯例如二-异已二酸酯、硬脂酸异十六烷基酯、椰子脂肪酸的丙二醇二酯、十四烷酸异丙酯、油酸癸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、棕榈酸2-乙基己基酯、或者称为CrodamolCAP的支链/酯的混合物，最后三种是优选的酯。它们可以单独使用或者根据所需性质组合使用。或者，使用高熔点脂类例如白凡士林。用于局部施用于眼的制剂还包括滴眼剂，其中活性成分被溶解或混悬在活性成分的适宜载体尤其是水性溶剂中。活性成分优选以0.5至20%的浓度存在于此类制剂中，有利地为0.5至10%，特别是约2.0%w/w。用于局部施用于口的制剂包括，锭剂，其含有处于调味基质(通常为蔗糖、阿拉伯胶或黄蓍胶)中的活性成分；软锭剂，其含有处于隋性基质(例如明胶和甘油，或者蔗糖和阿拉伯胶)中的活性成分；以及漱口剂，其含有处于适宜的液体载体中的活性成分。用于直肠施用的制剂可以以具有适宜基质的栓刑存在，该基质包括例如可可豆脂或水杨酸酯。用于肺内或鼻内施用的制剂具有0.1至500微米范围的粒度(包括范围为0.1至500微米的粒度，增量微米例如为0.5、1、30微米，35微米等)，其是通过经鼻道快速吸入或者通过经口吸入从而到达肺泡嚢来施用的。适宜的制剂包括活性成分的水性或油性溶液。适用于气雾剂或干粉剂施用的制剂可根据常规方法制备，并且可以与其它治疗剂一起给药，该其它治疗剂例如到目前为止用于如下所述治疗或预防流感A或B感染的化合物。用于阴道施用的制剂可以以阴道栓剂、棉塞剂、乳骨剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂存在，这些制剂除了活性成分外还含有本领域已知的适用的载体。适用于胃肠外施用的制剂可以包括水性和非水性无菌注射溶液，其可以含有抗氧剂、緩沖剂、抑菌剂和提供与预期受试者的血液等渗的制剂的溶质；以及可包括悬浮剂和增稠剂的水性和非水性无菌混悬液。制剂可存在于单剂量或多剂量容器中，例如密封安瓿瓶或管形瓶中，并且可以在冷冻干燥(冻干)条件下保存，仅需要在临用前立即添加无菌液体载体(溶剂)例如注射用水。临配注射溶液和混悬液是从前述种类的无菌粉末、颗粒或片剂制备的。优选的单位剂量制剂是含有活性成分的如本文上面所述的每日剂量或单位每日亚剂量，或者其适宜的份数的剂型。应当理解，除了上面特别提及的成分外，本发明的制剂可包括本领域常规的与所讨论的制剂类型有关的其它试剂，例如适用口服施用的那些试剂，包括调味剂。本发明进一步提供了兽医用组合物，其包含至少一种如上定义的活性成分以及兽医用载体。兽医用栽体是可用于施用该组合物目的的物质，可以是固体、液体或气体物质，其为隋性的或者兽医领域可接受的，并且与活性成分相容。这些兽医组合物可口服、胃肠外施用，或者通过任何其它期望的途纟圣施用。本发明化合物可用于提供控释药物制剂，其含有作为活性成分的一种或多种本发明化合物("控释制剂")，在该制剂中活性成分的释放受到控制和调节，以使给药频率更低或者改善了给定活性成分的药物动力学或毒性。活性成分的有效剂量至少取决于所治疗病症的性质、毒性，而不论该化合物是否用于预防(较低剂量)或抑制活跃的流感感染、也不论给药方法、以及药物制剂，并且活性成分的有效剂量将由临床医生使用常规剂量递增比例研究来确定。期望为每天约0.0001至约100mg/kg体重。典型地为每天约0.01至约10mg/kg体重。更典型地为每天约0.01至约5mg/kg体重。更典型地为每天约0.05至约0.5mg/kg体重。例如对于吸入剂，约70kg体重的成人每天推荐剂量将为1mg至1000mg，优选为5mg至>500mg,并且可以是单剂量或多剂量的形式。当受试者的病理情况需要时，也可施用更大的治疗有效日剂量。本发明的活性成分(或化合物)还可与其它活性成分组合使用。选择此类组合是基于所治疗的病症、各成分的交叉反应性以及组合的药物性质。例如，当治疗呼吸系统的病毒感染特别是流感感染时，本发明的组合物与抗病毒剂(例如金刚烷胺、金刚乙胺和利巴韦林)、粘液溶解药、祛痰剂、支气管扩张剂、抗生素、解热药或镇痛药组合。通常，抗生素、解热药和镇痛药与本发明化合物一起施用。本发明详细的描述足以使得本领域技术人员能够制备和使用以下实施例的主题物质。显然，以下实施例的方法和组合物的某些修饰可以在本发明范围和精神内进行。本发明将参考以下示例性的实施方案和所附的图l-4作进一步的描述。图1是化合物1的FT-IR(傅立叶变换红外光谱)光镨(A)，与之对照的是起始中间体金刚烷胺(B)，图2是化合物4的FT-IR光谱(A)，与之对照的是起始中间体金刚乙胺(B)，图3是化合物8的FT-IR光谱(A)，与之对照的是起始中间体美金刚(B)，图4是化合物10的FT-IR光谱(A)，与之对照的是起始中间体利巴韦林(B)。实施例实施例1中间体1的制备将溶解于40ml的无水甲醇中的225mg的唾液酸(0.73mmol)混合到0.5g的Dowex50(H+)树脂中。在持续搅拌下使该混合物回流48小时。由间苯二酚HC1和硫代巴比妥酸(TBA)分析测定可知，在24和48小时时，分别有85%和97%的唾液酸转化成中间体1。然后将树脂过滤到通用纸滤器上，并将洗脱液通过旋转蒸发器浓缩至干燥，得到油状微黄色液体。然后将该油状液体用少量体积的乙醚甲醇(3:1w/w)的混合物复原。在41C下使该溶液保持静置24-48小时，通过过滤收集结晶沉淀物，再用P205干燥。获得145mg的固体中间体1(M.W.337.4)(收率:60.0%)。所得中间体1对间苯二酚-HC1反应显阳性(与唾液酸强度相同)，并且对TBA反应显阴性。实施例2中间体2的制备使145mg的中间体l(0.43mmol)溶解于10.7ml的0.06M氢氧化钠水溶液中，再在室温下持续搅拌2-3小时。然后将该混合物用Dowex50(H+)树脂调节至pH7.0-7.5。滤出树脂，将洗脱液冷冻干燥，得到发白色的固体。获得132.6mg的固体中间体2(M.W.323.3)(收率:95.0%)。所得中间体2对间苯二酚-HC1反应显阳性(与唾液酸强度相同)，并且对TBA反应显阴性。实施例3中间体3的制备将132.6mg(0.41mmol)的冻干的固体(中间体2)溶解于4.3ml的蒸馏水中。然后加入每份10.7ml的0.038M高碘酸钠水溶液(NaI04)(0.41mmo1)(摩尔比=1:1)，再将该溶液在室温下在暗处保持持续搅拌1小时。将12.8ml的O.1M醋酸钡水溶液加至该混合物中，以使过量的碘酸盐和高碘酸盐沉淀。使用通用纸滤器将该混合物过滤。使该洗脱液鼓吹入二氧化碳饱和，以使过量的醋酸钡沉淀，然后用纸滤器过滤。洗脱液冷冻干燥，得到微黄色固体。收集101.9mg的固体中间体3(M.W.291.3)(收率85.0%)。所得中间体3对间苯二酚-HC1反应显阳性(与唾液酸强度相同)，并且对TBA反应显阴性。实施例4中间体4的制备使132.6mg(0.41mmol)的冻干的固体(中间体2)溶解于4.3ml的蒸馏水中。将10.7ml的Q.2M高捵酸钠(NaI04)水溶液(2.14mmo1)(摩尔比l:5.24)加至该溶液中，使其在室温下在暗处持续搅拌1小时。将12.8ml的0.1M醋酸钡水溶液加至该混合物中，以使过量的碘酸盐和高碘酸盐沉淀。使用通用纸滤器将该混合物过滤。使洗脱液鼓吹入二氧化碳饱和，以沉淀出过量的醋酸钡，然后在纸滤器上过滤。洗脱液冷冻干燥，得到微黄色固体。收集91.4mg的固体中间体4(M.W.261.23)(收率85.0°/。)。所得中间体4对间苯二酚-HC1反应显阳性(与唾液酸强度相同)，并且对TBA反应显阴性。实施例5中间体5的制备使91.43mg(0.35mmol)的冻干的粉末中间体4溶解于pH约4.0的2.0ml的2.3mM甲酸水溶液中。使溶液加热至80。C达1小时。然后使溶液冷冻干燥。获得72.76mg的中间体5(M.W.247.20)(收率84.1%)。所得中间体5对间苯二酚-HC1和TBA反应均显阳性。实施例6中间体6的制备使101.96mg(0.35mmol)的冻干的固体中间体3溶解于pH约4.0的2.0ml的2.3mM甲酸水溶液中。使溶液加热至80°C达1小时。然后使溶液冷冻干燥。获得93.83mg的中间体6(M.W.277.23)(收率96.7%)。所得中间体6对间苯二酚-HCl和TBA反应均显阳性。实施例7化合物1的制备使84.0mg(0.34mmol)的冻干的固体(中间体5)溶解于5.0ml的蒸馏水中。然后在緩慢搅拌下加入51.442mg的金刚烷胺(0.34mmo1)。在緩慢搅拌和4n下使该混合物搅拌过夜。添加40.0mg硼氢化钠后，在室温搅拌下使反应混合物保持1小时。然后使该混合物通过Dowex50(H+)树脂柱，使过量的硼氢化钠转化成硼酸。使洗脱液冷冻干燥。然后用小份甲醇使冷冻干燥的固体复原，使洗脱液干燥。将此操作重复至少3次。使干燥的固体最终用小份水复原，然后冷冻干燥，得到最终化合物1。获得110.53mg的化合物1(M.W.382.45)(收率:85.0°/。)。收集的化合物l对间苯二酚-HCl反应和TBA反应均显阳性。化合物1的FT-IR(傅立叶变换红外光谱)光镨(A)绘于图l，与之对照的(B)是起始中间体金刚烷胺，显示以下参比值a)酰胺I镨带1640cm-1;b)酰胺II镨带:1550cm、c)伯氨基团:600-800cnT1，1590-650cnf1，3330-3380cnT、仲氨基团700-800cm_1;1615cm—1;3300cm—\实施例8化合物2的制备使94.26mg(0.34mmol)的冻干的固体(中间体6)溶解于5.0ml的蒸馏水中。然后在緩慢搅拌下加入82.7mg的利巴韦林(O.3卩mrao1)。使该混合物在4C下緩慢搅拌过夜。添加40.Gmg的硼氢化钠后，使反应混合物在搅拌和室温下保持1小时。然后使该混合物通过Dowex50(H+)树脂柱，以使过量的硼氢化钠转化成硼酸。使洗脱液冷冻干燥。然后用小份甲醇使冷冻干燥物复原，使洗脱液再次干燥。此操作重复至少3次。使干燥的固体最终溶解于小份水中，然后冷冻干燥，得到固体(化合物2)。收集94.02mg的固体化合物2(M.W.505.4)(收率89.0%)。收集的化合物2对间苯二酚-HCl和TBA反应均显阳性。实施例9化合物3的制备使94.26mg(0.34mmol)的冻干的固体(中间体6)溶解于5.0ml的蒸馏水中。然后在緩慢搅拌下加入51.442mg的金刚烷胺(0.34mmol)。使该混合物在4'C下緩慢搅拌过夜。添加40.0mg的硼氢化钠后，使反应混合物在室温下搅拌1小时。然后使该混合物通过Dowex50(H+)柱，以便使过量的硼氢化钠转化成硼酸。使洗脱液冷冻干燥。然后将冷冻干燥的固体溶解于小份曱醇中，使滤液干燥。此操作重复至少3次。然后将干燥的固体溶解于小份水中，然后冷冻干燥，得到最终化合物3。收集122.02mg的固体化合物3(M.W.412.5)(收率87.0%)。收集的化合物3对间苯二酚-HCl和TBA反应均显阳性。实施例10化合物4的制备使84.0mg(0.34mmol)的冻干的固体(中间体5)溶解于5.0ml的蒸馏水中。然后在緩慢搅拌下加入60.962mg的金刚乙胺(0.34mmol)。使该混合物在4t:下緩慢搅拌过夜。添加40.0mg的硼氩化钠后，使反应混合物在室温下搅拌1小时。然后使该混合物通过Dowex50(H+)柱，以使过量的硼氢化钠转化成硼酸。使洗脱液冷冻干燥。然后用小份曱醇使冷冻干燥的固体复原，使洗脱液干燥。此操作重复至少3次。然后将千燥的粉末用小份水溶解，然后冷冻干燥，得到最终化合物4。收集125.61mg的化合物4(M.W.410.5)(收率:90.0%)。收集的化合物4对间苯二酚-HCl反应和TBA反应均显阳性。化合物4的FT-IR光镨(A)绘于图2，与之对照的(B)是起始中间体金刚乙胺，显示以下参比值a)酰胺I谙带1640cnf1;b)酰胺II谙带1550cm-1;c)伯氨基团600-800cm_1，1590-650cm—、3330-3380cm画、仲氨基团700-800cnf、1615cm—1;3300cnf1。实施例11化合物5的制备使94.26mg(0.34mmol)的冻千的固体(中间体6)溶解于5.0ml的蒸馏水中。然后在緩慢搅拌下加入60.962mg的金刚乙胺(0.34mmol)。使该混合物在4C下緩慢搅拌过夜。添加40.0mg的硼氢化钠后，使反应混合物在室温下搅拌1小时。然后使该混合物通过Dowex50(H+)柱，以便使过量的硼氢化钠转化成硼酸。使洗脱液冷冻干燥。使冷冻干燥物溶解于小份甲醇中，使洗脱液干燥。此操作重复至少3次。然后使干燥的固体用小份水溶解，然后冷冻千燥，得到最终化合物5。收集137.79mg的最终固体化合物5(M.W.440.5)(收率92.0%)。收集的化合物5对间苯二酚-HCl和TBA反应均显阳性。实施例12化合物6的制备将84.0mg(0.34mmol)的冻干的固体(中间体5)溶解于5.0ml的蒸馏水中。然后在緩慢搅拌下加入70.5mg的索金刚胺(O.34rarao1)。使该混合物在4C下緩慢搅拌过夜。添加40.0mg的硼氢化钠后，使反应混合物在室温下搅拌1小时。然后使该混合物通过Dowex50(H+)柱，以使过量的硼氢化钠转化成硼酸。使洗脱液冷冻干燥。使冷冻干燥物溶解于小份甲醇中，使滤液干燥。此操作重复至少3次。然后将干燥的粉末用小份水溶解，然后冷冻干燥，得到最终化合物6。收集125.26mg的固体化合物6(M.W.438.6)(收率:84.0%)。收集的化合物6对间苯二酚-HCl和TBA反应均显阳性。实施例13化合物7的制备使94.26mg(0.34mmo1)的冻干的固体(中间体6)溶解于5.0ml的蒸馏水中。然后在緩慢搅拌下加入61.0mg的索金刚胺(0.34mmo1)。使该混合物在4X:下緩慢搅拌过夜。添加40.0mg的硼氢化钠后，使反应混合物在室温下搅拌1小时。然后使该混合物通过Dowex50(H+)柱，以使过量的硼氢化钠转化成硼酸。然后将洗脱液冷冻干燥。然后使冷冻干燥物溶解于小份甲醇中，使滤液干燥。此操作重复至少3次。然后将干燥的粉末用小份水溶解，然后冷冻干燥，得到最终化合物7。收集135.43mg的固体化合物7(M.W.468.6)(收率85.0%)。收集的化合物对间苯二酚-HCl和TBA反应均显阳性。实施例14化合物8的制备使84.0mg(0.34mmoU的冻干的固体(中间体5)溶解于5.0ml的蒸馏水中。然后在緩慢搅拌下加入61.0mg的美金刚(0.34mmo1)。使该混合物在4t:下緩慢搅拌过夜。添加40.0mg的硼氢化钠后，使反应混合物在室温下搅拌1小时。然后使该混合物通过Dowex50(H+)柱，以使过量的硼氢化钠转化成硼酸。使洗脱液冷冻干燥。使冷冻干38燥物溶解于小份曱醇中，使滤液干燥。此操作重复至少3次。然后将干燥的粉末用小份水溶解，然后冷冻干燥，得到最终化合物8。收集129.80mg的固体化合物8(M.W.410.5)(收率:93.0%)。收集的化合物对间苯二酚-HCl和TBA反应均显阳性。化合物8的FT-IR光语(A)绘于图3，与之对照的(B)是起始中间体美金刚，显示以下参比值a)酰胺I语带:1640cm、，b)酰胺II镨带:1550cnT!;c)伯氨基团600-綱cm一1，1590-650cm一1，3330-3380cm—、仲氨基团700-800cm_1;1615cm-1;3300cnf1。实施例15化合物9的制备使94.26mg(0.34mmol)的冻干的固体(中间体6)溶解于5.0ml的蒸馏水中。然后在緩慢搅拌下加入61.0mg的美金刚(0.34mmol)。使该混合物在4'C下緩慢搅拌过夜。添加40.0mg的硼氢化钠后，使反应混合物在室温下搅拌1小时。然后使该混合物通过Dowex50(H+)柱，以使过量的硼氢化钠转化成硼酸。然后将洗脱液冷冻干燥。然后使冷冻干燥物溶解于小份甲醇中，使滤液干燥。此操作重复至少3次。然后将干燥的粉末用小份水溶解，然后冷冻干燥，得到最终化合物9。收集134.79mg的化合物9(M.W.440.5)(收率90.0%)。收集的化合物9对间苯二酚-HCl和TBA反应均显阳性。实施例16化合物10的制备使84.0mg(0.34mmol)的冻千的固体(中间体5)溶解于5.0ml的蒸馏水中。然后在緩慢搅拌下加入82.7mg的利巴韦林(O.3紐mo1)。使该混合物在4。C下緩慢搅拌过夜。添加40.0mg的硼氢化钠后，使反应混合物在室温下搅拌1小时。然后使该混合物通过Dowex50OT)柱，以使过量的硼氢化钠转化成硼酸。使洗脱液冷冻干燥。将冷冻干燥物溶解于小份曱醇中，使滤液干燥。此操作重复至少3次。然后将干燥的粉末用小份水溶解，然后冷冻干燥，得到最终化合物io。收集140.62mg的化合物10(M.W.475.4)(收率87.0%)。收集的化合物对间苯二酚-HCl和TBA反应显阳性。化合物10的FT-IR光谱(A)绘于图4，与之对照的(B)是起始中间体利巴韦林，显示以下参比值a)酰胺I谙带1640CDT1;b)酰胺II谱带1550cm—1;c)伯氨基团600-800cm—1，1590-650cm-1，3330-3380cnf、仲氨基团700-800cm一、1615cnf、3300cnf1。实施例17化合物11的制备使102.5mg(0.34mmol)的冻干的中间体唾液酸溶解于50.0ml的甲醇蒸馏水(9:1，v/v)的混合物中。然后在緩慢搅拌下加入51.442mg的金刚烷胺(O.34mmo1)。添加100.0mg的硼氢化钠后，使反应混合物在60。C下搅拌1小时。然后使该混合物通过Dowex50(H+)柱，以便使过量的硼氢化钠转化成硼酸。使洗脱液冷冻干燥。将冷冻干燥物溶解于小份甲醇中，使滤液千燥。此操作重复至少5次。然后将干燥的固体用小份水溶解，然后冷冻干燥，得到最终化合物ll。收集总计133.90mg固体化合物11(M.W.442.5)(收率89.0%)。收集的化合物对间苯二酚-HC1反应显阳性，并且对TBA反应显阴性。实施例18本发明化合物抑制流感病毒A和B型林的抗病毒活性评价。目的和研究计划特别地，与金刚烷胺和美金刚相比，评价了两种有高价值的抗病毒活性的化合物即化合物l和化合物8抑制流感病毒A和B型的体外抗病毒活性。在本研究中，使用了两种分开的流感病毒A型和分开的病毒B型。材料和方法1-流感病毒的传播和滴定使流感病毒A/H3N2(A/巴拿马/2007/99)、A/H1N1(A/NewCaledonia/20/99)和B(B/山东/7/97)菌抹传播到胚胎鸡蛋中。简而言之，使流感病毒林通过尿嚢途径接种到受精11天的鸡蛋中。然后使鸡蛋在37'C下孵化3天，收集尿嚢液，接着测定滴定度。通过空斑形成试验(菌斑测定，PA)进行分析测定。详细地说，使每一分离的病毒的系列稀释液(10—1一10—")接种到在12孔板中的融合单层的MDCK(马-达二氏犬肾)细胞中。在37。C下孵育1小时后，除去病毒接种物，再加入传染介质(含有10pg/ml胰蛋白酶、2°/。琼脂的MEM(最低基础培养基))。在37°C、5%C02处孵育3天后，将细胞单层用5°/。戊二醛溶液固定，除去琼脂后，用5%石炭酸品红的溶液染色。对空斑目测计数，该分离分析是用每ml空斑形成单位(PFU)(PFU/ml)的数目表示的。2-与金刚烷胺和美金刚有关的化合物1和化合物8的抗病毒活性的评价。2.l.要分析的化合物的制备经干燥72小时后，使化合物1和8，以及对照的化合物金刚烷胺和美金刚以IOOOjiM的浓度适当复溶于无菌蒸馏水中。然后对各测试化合物以IO为基础进行系列稀释，范围为0.OljnM至100-。2.2.空斑减少分析(PRA)使生长于12孔板的融合单层MDCK细胞(lx1()S细胞/ml)以约50PFU/ml的各分离病毒(A/巴拿马/2007/99-H3N2、A/新喀里多尼亚岛/20/99-H1N1和B/山东/7/97)感染。在37C、5%0)2下孵育1小时以使病毒吸附后，除去病毒接种物，将该细胞单层用MEM培养基洗涤2次。向各孔中加入覆盖培养基(在MEM中的10|ag/ml胰蛋白酶、2%琼脂)，该覆盖培养基含有系列稀释的分析化合物(从0.OlfiM至100nM)。测试进行双份，同时加入不含有抗病毒化合物的反应对照物。由此使细胞培养物在37t:、5%0)2下孵育3天。接着，使细胞单层用5%戊二醛溶液固定，再在室温下孵育至少3小时，以促进渗透进入琼脂中。除去琼脂后，用5%石炭酸品红溶液使细胞单层染色。目测计数空斑，相对于不含测试化合物的对照物来计算空斑抑制的程度。由此测定相对于不含本发明化合物的对照物的空斑数目减少50%所必需的化合物浓度。结果化合物1和化合物8的抗病毒活性以及对照化合物金刚烷胺和美金刚的抗病毒活性是通过空斑减少分析(PRA)使用MDCK细胞来评价的。结果示于表l。化合物1显示出与金刚烷胺相似的抑制A型H3N2病毒的活性，但是抑制A型H1N1病毒的活性低10倍。化合物1抑制流感病毒B型的抗病毒活性比金刚烷胺(〉100^iM)的该活性更高(>10倍)(表1)。化合物8对抑制所分析的A型流感病毒(A/H3N2和A/H1N1)显示出比美金刚大10倍量级的抗病毒活性。在测试浓度范围内，化合物8显示出抑制B型流感病毒的抗病毒活性(表1)。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>结论提供的数据显示化合物l相比于金刚烷胺，提高了抑制B型流感病毒的抗病毒活性。需要记住，金刚烷胺是通过阻断仅存在于A型流感病毒而未存在于B型流感病毒中的离子通道的M2蛋白起效的，因此这可能是一种新的作用机理，这可能是未来研究的目标。化合物8显示出比美金刚高10倍的抑制A型流感病毒的抗病毒活性。权利要求1.结构式(I)的化合物，以及其直链或支链的C1-4羧基单-或多-酯、加成盐、溶剂合物、拆分的对映体和纯化的非对映体；其中X表示-CH2-、-O-、-CHF-、-CF2-；单键或双键连接环的C2-C3；R1表示-OH、卤素或-B/部分，条件是存在双键连接环的C2-C3时R1不存在；且R2是-OH、-O-CH(C2H5)2、-NH2、-NHC(NH)NH2或-NH-OH；且R3是-NH2、-NHCO-CH3或-NH-CO-CH2-OH；且R4表示-CHOH-CHOH-CH2-OH、-CHOH-CH2-B/部分、-CH2-B/部分或-B/部分；并且其中-B/部分表示-B1/部分-B2/部分其中R5表示连接官能团-NH-、-CH2-NH-、-CH(CH3)-NH-、-NH-CH(CH3)-NH-、-C(CH3)2-CH2-NH-、-NH-CO-CH2-O-CH2-CH2-NH-或id="icf0003"file="A2008800064070003C1.tif"wi="93"he="22"top="30"left="32"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>且R6是-H、-CH3或-C2H5；且R7是-H、-CH3或-C2H5；且R8表示连接官能团-NH-、-CO-NH-或-C(NH)-NH-。2.权利要求l的化合物，其为选自以下的C或Cs单-B/部分-取代的化合物OHOH化合物2NHCOOHICH3COHN'CH3—CH0H化合物4NHCH3—CHOH.CH3COHN,OHCOOHCOOH化合物6NHCOOH&CH3COHNCH;r~C—CH3化合物7<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>化合物8化合物93.权利要求1的化合物，其为选自以下的C2单-B/部分-取代的化合物CH3COHNOHCH3COHNOHOH4.权利要求1的化合物，其为C2和"双-Bl/部分-取代的化合物:CH:NHOH^sJ^ChUCOHN^75.权利要求1的化合物，其为G和Cs双-B2/部分-取代的化合物:6.权利要求1的化合物，其为选自以下的G和Cs具有不同的-B1/部分或-B2/部分-双取4戈的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>7.—种药物组合物，其包含在药学可接受的载体中的权利要求1至6任一项所述化合物或其混合物。8.治疗由红血球凝集素(HA)和/或神经氨酸苷酶(NA)和/或舍有M2蛋白的病毒引起的病毒感染的方法，该方法包括通过任何适宜的施用途径给需要此治疗的宿主施用治疗有效量的权利要求1至6任一项的化合物。9.权利要求8的方法，其中所述感染是由流感病毒A和B型的病毒或其突变体引起的。10.治疗由ARNm和ARN聚合酶介导的疾病或病症的方法，该方法包括通过任何适宜的施用途径给需要此治疗的宿主施用治疗有效量的权利要求1至6任一项的抑制ARNm-胍基转移酶的化合物。11.权利要求10的方法，其中所述ARNm、ARN聚合酶和ARNm-胍基转移酶介导的感染是丙型肝炎病毒(HVC)感染。12.权利要求9的方法，其进一步提供使所述化合物与治疗有效量的另一种有效抑制流感病毒A和B型或其突变体的化合物组合施用。13.权利要求12的方法，其中所述有效抑制流感病毒A和B型或其突变体的化合物是扎那米韦和/或奥塞米韦。14.权利要求11的方法，其进一步提供使所述化合物与治疗有效量的另一种有效抑制丙型肝炎病毒(HVC)或其突变体的化合物组合施用。15.权利要求14的方法，其中所述有效抑制HVC的化合物是干扰素a或聚乙二醇干扰素ot，单独或与利巴韦林组合。16.用于治疗的权利要求1至6任一项的化合物。17.权利要求16的化合物，其中所述治疗是在哺乳动物中HA或M或M2蛋白介导的病毒感染的治疗。18.权利要求16的化合物，其中所述治疗是在哺乳动物中ARNm、ARN聚合酶和ARNm-胍基转移酶介导的HVC的治疗。19.权利要求17或18的化合物，其中所述病毒感染是由A型流感病毒或B型流感病毒的任一种引起的，或者由它们的亚型和不同的抹以及突变体引起的。20.权利要求1至6任一项的化合物在制备用于在哺乳动物中治疗HA或IU或M2蛋白介导的病毒感染的药物中的用途。21.权利要求1至6任一项的化合物在制备用于在哺乳动物中治疗ARNm、ARN聚合酶和ARNm-胍基转移酶介导的病毒感染的药物中的用途。22.权利要求20或21的用途，其中所述病毒感染是由A型流感病毒或B型流感病毒或者它们的亚型和不同的株以及突变体所引起的。23.权利要求22的用途，其中所述病毒感染是由A或B型流感病毒或者丙型肝炎病毒或者它们的亚型和不同的林以及突变体的任一种所引起的。全文摘要本发明提供了对神经氨酸苷酶(NA)、红血球凝集素(HA)、具有结构蛋白M₂的病毒显示出抑制作用的新型化合物。这些化合物还可用作丙型肝炎病毒(HVC)复制因子的抑制剂。本发明还描述了与适宜的药学可接受的载体混合的单独或组合的本发明的化合物。文档编号C07H7/00GK101622265SQ200880006407公开日2010年1月6日申请日期2008年1月22日优先权日2007年1月23日发明者E·佩舍彻拉,P·A·维罗尼斯,P·E·A·罗德里盖斯,S·L·维罗尼斯申请人:瑟拉匹康有限责任公司