α-4-β-7异二聚体特异性拮抗剂抗体的制作方法

专利名称：α-4-β-7异二聚体特异性拮抗剂抗体的制作方法
技术领域：
本申请提供有关α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白的组合物和方法。背景整联蛋白是异二聚体的I型跨膜蛋白，由两个亚基(一个是α亚基，一个是β亚基)形成，并且介导许多不同的细胞-细胞间和细胞-胞外基质间的相互作用。从功能上看，已证实整联蛋白参与多种生物进程，包括白细胞迁移和再循环以及免疫应答。哺乳动物中，有18种已知的α亚基和8种已知的β亚基，其组合形成M种截然不同的整联蛋白。 配体特异性大多取决于所表达的α亚基和β亚基的特定组合，而配体的亲和力受整联蛋白构象变化调节，并且是二价阳离子依赖性的。整联蛋白的配体形成结构上不同的组别，包括胞外基质蛋白，例如胶原、纤连蛋白、玻连蛋白和层粘连蛋白；反受体，例如细胞黏着分子(例如血管细胞黏着分子或VCAM) 和血浆蛋白。许多致病微生物亦利用整联蛋白发起感染或作为毒素结合的部位。结构上不同的配体共有暴露的谷氨酸或天冬氨酸残基，通常存在于延伸的柔性环上，这对于被整联蛋白识别是重要的。α 4整联蛋白(α4与β 或β 7亚基搭配)在免疫系统中起重要作用。Α4 β 1在淋巴细胞和髓样细胞上表达；它似乎是血管细胞黏着分子(VCAM)的主要结合配偶体。VCAM 在血管内皮上遍在表达，在炎症期间增量调节，并且结合α4β7以及α4β 1 (但与α4β7 弱结合)。虽然在外周T细胞、B细胞、NK细胞和嗜伊红粒细胞上也检测到α4β7，但是 α 4β 7在⑶4+⑶45RA记忆T细胞亚群中的表达最高，该亚群已被证实优先归巢至肠中。 α 4 β 7异二聚体的主要配体是在肠内皮中表达的黏膜地址素细胞黏着分子1 (MAdCAM-I或 MAdCAM)。除了与α 4链配对外，β 7亚基还与α E搭配形成α E β 7，其主要在在肠、肺和生殖泌尿道的上皮内淋巴细胞(IEL)中表达。α Εβ 7还在肠的树突细胞上表达。αΕβ7异二聚体与在上皮细胞上表达的E-钙黏着蛋白结合。一般认为IEL细胞在上皮区室内提供免疫监视机制。结合α 4并抑制α 4β 1与VCAM-I和纤连蛋白结合的抗体定位在介于残基152 和 203 之间的 α4 的 52 个氨基酸区域(Schiffer 等，J. Biol. Chem. 270 :14270 ； 1995)。 Tidswell等人(J. Immuno 159 :1497 ； 1997)在小鼠/人嵌合β 7亚基方法中，利用一组结合β 7的抗体，鉴定出对与MAdCAM-I结合重要的β 7结构域。他们发现抑制与MAdCAM-I和 E-钙黏着蛋白结合的7种抗体中，有6种定位在包含氨基酸176-250的区域中，该区域似乎与其它整联蛋白亚基的金属离子依赖性黏着位点(metal-ion dependent adhesion site,MIDAS)具有同源性。Tidswell等人使用的抗体之一是称为ACT-I的α 4β 7异二聚体特异性抗体。Lazarovitz 等人(J. Immunol. 133 :1857 ； 1984)最初将 ACT-I 抗体描述为用得自 PBMC的人破伤风类毒素特异性T淋巴细胞系给小鼠免疫接种而产生的抗体。后来，研究表明 ACT-I 与 α 4β 7 异二聚体特异性结合(Schweighoffer 等，J. Immunol. 151 :717，1993)。 虽然ACT-I不结合鼠α 4β 7，但却结合来源于最少一些非人类灵长类动物物种的α4β7， 而且研究表明在关养的裸面#中减轻自发性结肠炎(Hesterberg等，Gastroenterology 1111373 ； 1996)。已将ACT-I人源化，并对在溃疡性结肠炎O^eagan等，N Engl J Med. 352 :2499 ； 2005)以及最近在克罗恩病(Crohn，s disease) (Feagan 等，Clinical Gastroenterology and Hepatology 6 :1370,2008)中作为人用治疗药进行了评价。人源化ACT-1，亦称为 vedolizumab，披露于 WO 98/06248 和美国专利 7，147，85 以及 WO 07/061679 和 US 2007-0122404.另一种人源化抗体即那他珠单抗(Tysabri )已被用于治疗克罗恩病。那他珠单抗是α 4特异性鼠抗体的人源化形式。已经证实在部分患者中Vedolizumab中和抗人源化抗体应答，而那他珠单抗与进行性多灶性白质脑病(PML)有关，PML是一种在无免疫应答的个体中与用JC病毒感染前的再活化有关的神经障碍。因此，需要改正这些缺点同时破坏α 4 β 7/MAdCAM-l途径的治疗药物。发明概述一方面，本发明提供与人α 4β 7特异性结合的分离的抗原结合蛋白(即α4β7 异二聚体特异性抗原结合蛋白)。在本发明的另一个方面，抗原结合蛋白与以下动物的 α 4β 7特异性结合非人类灵长类动物、食蟹猴(cynomologous monkey)、黑猩猩、非灵长类哺乳动物、啮齿动物、小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、猫或狗。在另一个实施方案中，分离的抗原结合蛋白包括以下抗体人抗体、嵌合抗体、单克隆抗体、重组抗体、抗原结合抗体片段、 单链抗体、双链抗体(diabody)、三链抗体(triabody)、四链抗体(tetrabody)、Fab片段、 F(ab，)2片段、结构域抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgM抗体、IgGl抗体、IgG2抗体、IgG3抗体、IgG4抗体或在铰链区具有降低形成H链内二硫键的趋势的至少一个突变的IgG4抗体。 另一方面，分离的抗原结合蛋白包含前述抗体之一的重链恒定区；另一方面，恒定区是包含 SEQ ID NO 72的多肽；与SEQ ID NO 72有至少90%同一性的多肽；具有其中剔除了 1、2、 3、4或5个N端和/或C端氨基酸的SEQ ID NO :72所示氨基酸序列的多肽；或者加入一种或多种翻译后修饰的前述多肽之一。在一个实施方案中，分离的抗原结合蛋白包含κ轻链恒定区，在另一个实施方案中，它包含λ轻链区。在一个实施方案中，轻链恒定区是包含 SEQ ID NO 70的多肽；与SEQ ID NO 70有至少90%同一性的多肽；具有其中剔除了 1、2、 3、4或5个N端和/或C端氨基酸的SEQ ID NO :70所示氨基酸序列的多肽；或加入一种或多种翻译后修饰的前述多肽之一。本发明的一个实施方案提供具有重链和轻链的α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，每条重链和轻链都包含一个或多个互补决定区，即⑶R。在本发明的另一个方面，重链可变区包含⑶R1、⑶R2和⑶R3，而轻链可变区包含⑶R1、⑶R2和⑶R3，其中各个相应⑶R 选自 SEQ ID NO 55 的轻链 CDRl、CDR2 和 CDR3，以及 SEQ ID NO 58 的重链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；SEQ ID NO 56 的轻链 CDRl、CDR2 和 CDR3，以及 SEQ ID NO 59 的重链 CDRl、CDR2 和CDR3;以及 SEQ ID NO :57 的轻链 CDR1、CDR2 和 CDR3，以及 SEQ ID NO :60 的重链 CDR1、CDR2 和 CDR3。在本发明的另一个方面，重链可变区还包含命名为FR1、FR2、FR3和FR4的4个框架区(FR)，轻链可变区还包含命名为FR1、FR2、FR3和FR4的4个框架区(FR)。一方面，FR 选自与⑶R相同的SEQID NO ；另一方面，FR选自不同的SEQ ID NO。在又一个实施方案中， 本发明提供α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其中轻链可变区包含SEQ ID Ν0:55，重链可变区包含SEQ ID NO 58 ；轻链可变区包含SEQ ID NO 56，重链可变区包含SEQ ID NO: 59 ；或者轻链可变区包含SEQ ID NO :57，重链可变区包含SEQ ID NO :60。在本发明的另一个方面，本发明提供具有重链和轻链的分离的α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，每条重链和轻链都包含一个或多个互补决定区，即CDR。在本发明的另一个方面，重链可变区包含⑶R1、⑶R2和⑶R3，轻链可变区包含⑶R1、⑶R2和⑶R3。在一个实施方案中，轻链⑶R选自分别与SEQ ID NO :3的⑶R1、⑶R2和⑶R3有至少90%同一性的CDRUCDR2和CDR3 ；分别与SEQ ID NO 5的CDRUCDR2和CDR3有至少90%同一性的 CDRUCDR2 和 CDR3 ；分别与 SEQ ID NO 7 的 CDRUCDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDRl、 CDR2 和 CDR3 ；分别与 SEQ ID NO 22 的 CDR1、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ；分别与 SEQ ID NO 24 的 CDRl、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；并且重链可变 CDR1、CDR2 和 CDR3 来自 SEQ ID NO :58。在本发明的另一个方面，重链可变区还包含命名为FR1、FR2、FR3和FR4的4个框架区(FR)，轻链可变区还包含命名为FR1、FR2、FR3和FR4的4个框架区(FR)。一方面，FR 选自与⑶R相同的SEQ ID NO ；另一方面，FR选自不同的SEQ ID NO。在又一个实施方案中， 本发明提供α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其中轻链可变区选自与SEQ ID Ν0:3有至少90%同一性的轻链可变区、与SEQ ID NO :5有至少90%同一性的轻链可变区、与SEQ ID NO :7有至少90%同一性的轻链可变区、与SEQ ID NO :22有至少90%同一性的轻链可变区以及与SEQ ID NO 有至少90%同一性的轻链可变区；并且重链可变区包含SEQ ID NO :58。本发明的另一个方面提供分离的α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其具有包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的重链可变区及包含CDR1、⑶R2和⑶R3的轻链可变区，其中轻链 CDRU CDR2和CDR3选自分别与SEQ ID NO 12的CDR1、CDR2和CDR3有至少90%同一性的 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；分别与 SEQ ID NO 25 的 CDRl、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDRUCDR2和CDR3 ；以及分别与SEQ ID NO 26的CDRUCDR2和CDR3有至少90%同一性的 CDRU CDR2 和 CDR3 ；而且重链 CDRU CDR2 和 CDR3 选自分别与 SEQ ID NO 41 的 CDR1、CDR2 和CDR3有至少90%同一性的CDRUCDR2和CDR3 ；以及分别与SEQ ID NO 54的CDRUCDR2 和⑶R3有至少90%同一性的⑶R1、⑶R2和⑶R3。在一个实施方案中，轻链可变区选自与 SEQ ID NO :12、25和沈中的任一个有至少90%同一性的可变区，重链可变区选自与SEQ ID NO 41和M中的任一个有至少90%同一性的可变区。在本发明的另一个方面，重链可变区还包含命名为FR1、FR2、FR3和FR4的4个框架区(FR)，轻链可变区还包含命名为FRl、FR2、 FR3和FR4的4个框架区(FR)。一方面，FR选自与⑶R相同的SEQ ID NO;另一方面，FR选自不同的SEQ ID NO。在一个实施方案中，本发明提供分离的α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其具有包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的重链可变区及包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的轻链可变区，其中各个相应的⑶R与选自以下的⑶R有至少90%同一性SEQ ID NO :10的轻链⑶Rl、⑶R2
和 CDR3，以及SEQIDNO38的J■链 CDRl、.CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO2的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO30的,I链 CDRl、CDR2和 CDR3 ； SEQIDNO 20的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO51的,I链 CDRl、CDR2和 CDR3 ； SEQIDNO 11的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO39的,I链 CDRl、CDR2和 CDR3 ； SEQIDNO 13的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO42的,I链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 17的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO46的J■链 CDRl、,CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO8的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO36的,I链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 19的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO49的,I链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 18的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO47的,I链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 21的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO52的J■链 CDRl、,CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO3的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO31的J■链 CDRl、,CDR2和 CDR3；SEQIDNO7的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO35的J■链 CDRl、,CDR2和 CDR3；SEQIDNO6的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO34的J■链 CDRl、,CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO1的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO29的,I链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 22的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO50的,I链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 24的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO40的J■链 CDRl、,CDR2和 CDR3 ； SEQIDNO9的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO37的J■链 CDRl、,CDR2和 CDR3；SEQIDNO4的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO32的,I链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 28的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO53的,I链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 16的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO45的,I链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 15的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO44的,I链 CDRl、CDR2和 CDR3 ； SEQIDNO 14的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO43的,I链 CDRl、CDR2和 CDR3；SEQIDNO 27的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO43的J■链 CDRl、.CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO5的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO33的,I链 CDRl、CDR2和 CDR3 ； SEQIDNO 12的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO41的,I链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 23的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO48的,I链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ； SEQIDNO 25的轻链CDRl、CDR2和 CDR3，以及SEQIDNO54的1I链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；以及 SEQ ID NO 26 的轻链 CDRU
⑶R2和⑶R3，以及SEQ ID NO 54的重链⑶R1、⑶R2和⑶R3。另一方面，重链和轻链⑶R 与所述SEQ ID NO相应的⑶R相同。在本发明的一个实施方案中，重链可变区还包含命名为FR1、FR2、FR3和FR4的4个框架区(FR)，轻链可变区还包含命名为FR1、FR2、FR3和FR4 的4个框架区(FR)。一方面，FR选自与⑶R相同的SEQ ID NO ；另一方面，FR选自不同的 SEQ ID NO。 在另一个实施方案中，α4β7异二聚体特异性抗原结合蛋白包含轻链可变区和重链可变区，其中轻链可变区与SEQ ID NO :10有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO: 38有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO 2有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :30有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO :20有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :51有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO :11有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :39有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID N0:13有至少90% 同一性，重链可变区与SEQ ID NO :42有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ IDNO :17有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :46有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO :8有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :36有至少90%同一性；轻链可变区与 SEQ ID NO :19有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :49有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO 18有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID N0:47有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO :21有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :52有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO :3有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO: 31有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO :7有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :35有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO :6有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :；34有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO :1有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO : 有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID N0:22有至少90% 同一性，重链可变区与SEQ ID NO :50有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID N0J4有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :40有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO :9有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :37有至少90%同一性；轻链可变区与 SEQ ID NO :4有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :32有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO J8有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :53有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO 16有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO 45有至少 90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO :15有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO: 44有至少90%同一性；轻链可变区与SEQID NO 14有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :43有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO :27有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :43有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO :5有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :33有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID N0:12有至少90% 同一性，重链可变区与SEQ ID NO 41有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO 23有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO :48有至少90%同一性；轻链可变区与SEQ ID NO :25有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO力4有至少90%同一性；或者轻链可变区与SEQ ID NO J6有至少90%同一性，重链可变区与SEQ ID NO M有至少90%同一性。 另一方面，重链和轻链可变区与所述SEQ ID NO的相应可变区相同。本发明的一个方面提供分离的α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其在⑶4+ 记忆T细胞结合测定法中具有小于35ng/ml的EC50 ；另一个方面提供分离的α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其在CD4+记忆T细胞结合测定法中具有小于lOng/ml的EC50。在另一个实施方案中，本发明提供分离的α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其在MAdCAM 竞争测定法中具有小于30ng/m的IC50 ；在另一个实施方案中提供分离的α 4 β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其在MAdCAM竞争测定法中具有小于lOng/ml的IC50。本发明的一个方面提供分离的α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其结合0 40 7的325(^突变体。在本发明的一个方面，本发明提供编码上述多肽的核酸。在本发明的另一个方面， 所述核酸为载体。在本发明的另一个实施方案中，本发明提供用本发明的核酸转化或转染的宿主细胞。在本发明的另一个方面，提供制备多肽的方法，所述方法包括在促进多肽表达的条件下培育宿主细胞，并收获所述多肽。
另一方面，本发明提供分泌结合α4β7的抗原结合蛋白的分离细胞。在另一个实施方案中，所述细胞是杂交瘤。在另一个实施方案中，本发明提供制备特异性结合 α4β7(即人α4β7)的抗原结合蛋白的方法，所述方法包括在允许表达所述抗原结合蛋白的条件下培育所述分离细胞。一方面，本发明提供与α 4β 7异二聚体特异性结合的分离的抗原结合蛋白。在另一个实施方案中，分离的抗原结合蛋白当与人α 4β 7结合时，抑制α 4 β 7与MAdCAM-I结合。因此，本发明的一个实施方案提供抑制α 4β 7的至少一种活性的方法，所述方法包括使表达α 4β 7的细胞与α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白接触，使得活性被部分或全部抑制。一方面，这种方法在体内进行。在本发明的一个方面，分离的抗原结合蛋白抑制表达α 4β 7的细胞与表达MAdCAM-I的细胞粘附。在本发明的又一个方面，分离的抗原结合蛋白抑制表达α 4 β 7的细胞运输至表达MAdCAM-I的细胞所定居的区域或组织中；在这类实施方案的一个实例中，分离的抗原结合蛋白抑制淋巴细胞运输至肠中。另一方面，本发明提供包含抗原结合蛋白的药物组合物。在一个实施方案中，本发明提供治疗受试者的病况的方法，所述方法包括将药物组合物给予受试者，其中可通过降低受试者的α4β7活性(部分或全部)治疗所述病况。在另一个实施方案中，受试者是人类。在另一个实施方案中，所述病况是胃肠系统的炎性疾病。因此，提供治疗患有以下病况的个体的方法，所述病况的特征在于表达α 4β 7的细胞不恰当地运输到包含表达MAdCAM 的细胞的组织中，所述方法包括以足以抑制(部分或全部)表达α 4β 7的细胞运输到包含表达MAdCAM的细胞的组织中的量，将α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白给予所述个体。 在一个实施方案中，所述病况是炎性肠病，例如溃疡性结肠炎、克罗恩病、乳糜泻(非热带性口炎性腹泻)、肠病伴发血清反应阴性关节病、显微镜下结肠炎(microscopic colitis) 或胶原性结肠炎、嗜酸性胃肠炎或直肠与结肠切除术和回肠肛管吻合术后所致的回肠囊袋炎(pouchitis)。在另一个实施方案中，所述病况是胰腺炎、胰岛素依赖性糖尿病、乳腺炎、 胆囊炎、胆管炎、胆管周围炎、慢性支气管炎、慢性鼻窦炎、哮喘或移植物抗宿主病。在另一个实施方案中，所述方法还包括给予受试者第二种治疗。在另一个实施方案中，在将药物组合物给予受试者之前和/或与之同时和/或之后给予受试者第二种治疗。 在另一个实施方案中，第二种治疗包括抗炎药。在另一个实施方案中，第二药物组合物包含选自非留体抗炎药、类固醇和免疫调节剂的物质。在另一个实施方案中，所述方法包括给予受试者第三种治疗。另一方面，本发明提供延长受试者寿命的方法，所述方法包括将药物组合物给予受试者。另一方面，本发明提供在有需要的受试者中降低α 4β 7活性的方法，所述方法包括将药物组合物给予受试者。另一方面，本发明提供在有需要的受试者中降低α4β7介导的运输(例如0 40 7介导的肠归巢)的方法，所述方法包括将药物组合物给予受试者。发明详述本发明提供涉及结合整联蛋白α 4β 7(“ α 4β 7”)的分子的组合物、药盒和方法， 所述分子包括激动或拮抗α 4β 7的分子，例如抗α 4β 7抗体、抗体片段和抗体衍生物，例如拮抗性抗α 4β 7抗体、抗体片段或抗体衍生物。还提供核酸及其衍生物和片段，其包含编码与α4β7结合的多肽的全部或部分的核苷酸序列，例如编码抗α4β7抗体、抗体片段或抗体衍生物的全部或部分的核酸、包含这类核酸的质粒和载体以及包含这类核酸和/或载体和质粒的细胞或细胞系。所提供的方法包括例如制备、鉴定或分离与α 4β 7结合的分子(例如抗α4β7抗体)的方法、确定分子是否与α 4β 7结合的方法、确定分子是否刺激或拮抗α 4β 7的方法、制备包含与α 4β 7结合的分子的组合物(例如药物组合物)的方法以及将与α 4β 7结合的分子给予受试者的方法，例如用于治疗α 4β 7介导的病况的方法，以及用于体内或体外刺激或拮抗α 4β 7的生物活性的方法。多核苷酸和多肽序列使用标准一字母或三字母缩写词表示。除非另有说明，否则每个多肽序列在左边具有氨基端，在右边具有羧基端；各单链核酸序列和每个双链核酸序列的上链在左边具有5’端，在右边具有3’端。还可通过解释多肽或多核苷酸序列如何不同于参比序列来描述具体的多肽或多核苷酸序列。除非本文另外定义，否则与本发明联用的科技术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。此外，除非文中另有要求，否则单数术语应包括复数，而复数术语应包括单数。一般地讲，所使用的与本文所描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、 遗传学及蛋白质与核酸化学和杂交有关的命名以及关联技术是本领域众所周知和通用的。 通常按照本领域众所周知的常规方法以及如本说明书全文所引用和讨论的各种一般性的和更为具体的参考文献所述实施本发明的方法和技术，除非另有说明。参见例如Sambrook 等，Molecular Cloning :A Laboratory Manual，第 2 片反，Cold Spring Harbor Laboratory PressiCold Spring Harbor,N. Y. (1989)禾口Ausubel等，Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates(1992)，以及 Harlow 禾口 Lane Antibodies A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press， Cold Spring Harbor， N. Y. (1990)，所述文献通过引用结合到本文中。按照生产商的说明书、按照本领域常规实施方法或按照本文所述方法进行酶促反应和纯化技术。所使用的与本文描述的分析化学、合成有机化学和医学与药物化学有关的术语以及关联实验室规程和技术是本领域众所周知和通用的。标准技术可用于化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递药以及患者治疗。除非另有说明，否则下列术语应理解为具有以下含义术语“分离的分子”(其中所述分子为例如多肽、多核苷酸或抗体)是以下分子，根据其起源或衍生源，其(1)不与在其天然状态与之相伴的天然缔合的组分缔合，(2)基本不含来自同一物种的其它分子，C3)由不同物种的细胞表达，或(4)实质上无人干预时不会出现。因此，化学合成的分子，或在与其天然起源细胞不同的细胞系统中合成的分子，为与其天然缔合的组分“分离的”。还可采用本领域众所周知的纯化技术，通过分离使分子基本上不含天然缔合的组分。可通过本领域众所周知的多种方法测定分子纯度或均质性。例如， 可采用聚丙烯酰胺凝胶电泳并采用本领域众所周知的技术使凝胶染色以呈现多肽，来测定多肽样品的纯度。出于某些目的，可通过采用HPLC或本领域众所周知的其它纯化方法来提供更高的分辨率。术语“ α 4 β 7抑制剂”和“ α 4 β 7拮抗剂”可互换使用。各为可检测地抑制α 4 β 7 的至少一种功能的分子。相反地，“ α 4 β 7激动剂”是可检测地增强α 4 β 7的至少一种功能的分子。由α 4β 7抑制剂引起的抑制不必是完全的，只要通过例如采用测定法可检出即可。可采用α4β7功能的任何测定法，本文提供了有关实例。可被α4β7抑制剂抑制(或被α 4 β 7激动剂增强)的α 4 β 7的功能的实例包括配体结合(即与MAdCAM-I结合)、与表达配体的细胞粘附、运输至特定区室(例如肠)、细胞因子、趋化因子和其它介质的释放、炎症反应和组织损伤加重或恶化等。α 4 β 7抑制剂和α 4 β 7激动剂的类型的实例包括但不限于α4β7结合多肽，例如抗原结合蛋白(例如α 4β 7抗原结合蛋白)、抗体、抗体片段和抗体衍生物。术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”分别是指包含通过肽键彼此连接的两个或更多个氨基酸残基的分子。这些术语包括例如天然和人工蛋白质、蛋白质序列的蛋白质片段和多肽类似物(例如突变蛋白、变体和融合蛋白)以及翻译后修饰的蛋白质或者其它共价或非共价修饰的蛋白质。肽、多肽或蛋白质可以是单体的或是多聚体的。本文使用的术语“多肽片段”是指与相应的全长蛋白质相比，具有氨基端和/或羧基端缺失的多肽。片段的长度可为例如至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、50、70、80、 90、100、150或200个氨基酸。片段的长度也可为例如至多1，000、750、500、250、200、175、 150、125、100、90、80、70、60、50、40、30、20、15、14、13、12、11 或 10 个氨基酸。片段还可由蛋白酶水解(或其它)加工产生，所述加工例如导致在1-5个氨基酸的氨基端和/或羧基端方面偏离所预测的。片段还可在其末端的任一端或两端包含一个或多个其它氨基酸，例如得自不同的天然存在的蛋白质(例如Fc或亮氨酸拉链结构域)或人工氨基酸序列(例如人工接头序列或标签蛋白)的氨基酸序列。本发明的多肽包括以任何方式和出于以下任何理由被修饰的多肽，例如以(1) 降低对蛋白酶解的敏感性，O)降低对氧化的敏感性，( 改变对形成蛋白质复合体的结合亲和力，(4)改变结合亲和力，和(4)提供或改变其它物理化学性质或功能性质。类似物包括多肽的突变蛋白。例如，可以在天然存在的序列上进行单个或多个氨基酸取代(例如保守氨基酸取代)(例如在一个或多个形成分子间接触的结构域外的多肽部分上)。可以使用共有序列选择用于取代的氨基酸残基；本领域技术人员认可的是，还可取代其它氨基酸残基。“保守氨基酸取代”是基本上不改变亲本序列的结构特征的取代(例如置换氨基酸应不会破坏亲本序列中出现的螺旋，或者破坏作为亲本序列特征或者对其功能性必需的其它二级结构类型)。公认的多肽二级结构和三级结构的实例可参见I^roteins， Structures and Molecular Principles (Creighton 编著，W. H. Freeman and Company,New York (1984)) ； Introduction to Protein Structure (C. Branden 禾口 J. Tooze 编著，Garland Publishing,New York,N. Y. (1991))；以及 Thornton 等，Nature ；354 :105 (1991)，所述文献各自通过引用结合到本文中。本发明还提供α 4β 7结合多肽的非肽类似物。作为具有与模板肽类似的特性的药物，非肽类似物常用于制药工业。非肽化合物的这些类型称为“肽模拟物”或“模拟肽(peptidomimetics)，，，参见例如 Fauchere，J. Adv. Drug Res. 15 :29(1986) ；Veber 禾口 Freidinger TINS 第 392 页(1985)；以及 Evans 等，J. Med. Chem. 30 1229 (1987)，所述文献通过引用结合到本文中。可使用在结构上类似于治疗上有益的肽的肽模拟物以产生等同的治疗或预防效果。总的来讲，模拟肽在结构上类似于范例多肽(即具有所需要的生化性质或药理活性的多肽)，例如人抗体，但却具有一个或多个通过本领域众所周知的方法用选自以下的键任选置换的肽键一CH2NH—、-CH2S-, -CH2-CH2-, -CH = CH-(顺式和反式)、一C0CH2--、-CH(OH)CH2-和一CH2SO--。用相同类型的D-氨基酸对共有序列的一个或多个氨基酸的系统取代(例如D-赖氨酸替换L-赖氨酸)也可用来产生更稳定的肽。另外，可通过本领域已知的方法产生包含共有序列或基本相同的共有序列变化的约束肽(Rizo和Gierasch Ann. Rev. Biochem. 61 :387 (1992)，通过引用结合到本文中)，例如通过加入能够形成使肽环化的分子内二硫键的内部半胱氨酸残基。多肽(例如抗体)的“变体^^含这样的氨基酸序列，其中与另一个多肽序列相比， 一个或多个氨基酸残基插入、从中缺失和/或取代入所述氨基酸序列。本发明的变体包括融合蛋白。多肽的“衍生物”是例如通过与另一个化学部分(例如聚乙二醇或白蛋白，例如人血清白蛋白)缀合、磷酸化和/或糖基化而被化学修饰的多肽(例如抗体)。除非另有说明，否则术语“抗体”除包含2条全长重链和2条全长轻链的抗体外，还包括其衍生物、变体、 片段和突变蛋白，下面描述了有关实例。“抗原结合蛋白”是包含与抗原结合的部分和任选支架或框架部分的蛋白质，所述支架或框架部分允许抗原结合部分呈促进抗原结合蛋白与抗原结合的构象。抗原结合蛋白的实例包括抗体、抗体片段(例如抗体的抗原结合部分)、抗体衍生物和抗体类似物。抗原结合蛋白可包含例如具有移植CDR或CDR衍生物的备选蛋白质支架或人工支架。这类支架包括但不限于抗体衍生的支架，其包含引入以例如稳定抗原结合蛋白的三维结构的突变以及包含例如生物相容性聚合物的完全合成支架。参见例如Korndorfer等，2003 Jroteins Structure, Function, and Bioinformatics,第 53 卷，第 1 期121-129 ；Roque 等，2004, Biotechnol. Prog. 20 :639-654.另外，可以使用肽抗体模拟物(“PAM”)，以及以利用纤连蛋白组分作为支架的抗体模拟物为基础的支架。抗原结合蛋白可具有例如天然存在的免疫球蛋白的结构。“免疫球蛋白”是四聚体分子。在天然存在的免疫球蛋白中，各种四聚体由两个相同的多肽链对组成，每对具有一条 “轻”链(约25kDa)和一条“重”链(约50-70kDa)。每条链的氨基端部分包括约100-110 个或更多个氨基酸的可变区，主要负责抗原识别。每条链的羧基端部分界定了主要负责效应子功能的恒定区。人轻链分为κ或λ轻链。重链分为μ、δ、Υ、α或ε，并将抗体同种型分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过约12 个或更多个氨基酸的“J”区连接，其中重链还包括约10个以上氨基酸的“D”区。一般参见 Fundamental Immunology 第 7 章(Paul, W.主编,第 2 版.Raven Press, N. Y. (1989))(通过引用以其整体结合用于所有目的)。每个轻链/重链对的可变区形成抗体结合部位，使得完整的免疫球蛋白具有两个结合部位。天然存在的免疫球蛋白链的可变区具有相同的通用结构，其相对保守的框架区 (FR)被3个超变区(亦称互补决定区或CDR)连接。轻链和重链两者从N端到C端包含结构域？1 1、0)1 141 2、0)1 241 3、0)1 3和FR4。各结构域的氨基酸的分配与Kabat等人的定义(Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版,美国卫生与公众月艮务部(US Dept. of Health and Human Services), PHS, NIH, NIH 出版号91_3242，1991) 一致。免疫球蛋白链中氨基酸的其它编号系统包括IMGT’ (国际ImMunoGeneTics信息系统； Lefranc Dev. Comp. Immunol. 29 185—203 ；2005)禾口 AHo (Honegger 禾口 Pluckthun，J. Mol. Biol. 309(3) :657-670 ；2001)。可从含有具有不同抗原特异性的免疫球蛋白的来源(例如血清或血浆)获得抗体。如果对这类抗体进行亲和纯化，则它们可富集特定的抗原特异性。通常由小于约10%
19对具体抗原具有特定结合活性的抗体制备抗体的这类富集制备物。对这些制备物进行若干轮亲和纯化可提高对抗原具有特异性结合活性的抗体的比例。按这种方式制备的抗体通常称为“单特异性的”。单特异性抗体制备物可由约10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、 75%、80%、85%、90%、95%、97%、99%或99. 9%的对具体抗原具有特异性结合活性的抗体组成。“抗体”是指完整免疫球蛋白或其与完整抗体竞争特异性结合的抗原结合部分，除非另有说明。可通过重组DNA技术或者通过酶促切割或化学裂解完整抗体来产生抗原结合部分。抗原结合部分尤其包括Fab、Fab'、F(ab' )2、Fv、结构域抗体(dAb)和互补决定区 (CDR)片段、可变区片段、单链抗体(scFv)、嵌合抗体、双链抗体、三链抗体、四链抗体和含有足以赋予多肽特异性抗原结合的免疫球蛋白的至少一部分的多肽。Fab片段是具有八、VH、(^结构域的一价片段；F(ab' )2片段是具有在铰链区通过二硫键连接的2个Fab片段的二价片段；Fd片段具有Vh和ChI结构域；Fv片段具有抗体单臂的\和Vh结构域；而dAb片段具有Vh结构域、Vl结构域或者Vh或\结构域的抗原结合片段(美国专利号6，846，634,6, 696，245 ；美国申请公布号05/0202512,04/0202995, 04/0038291,04/0009507,03/0039958 ；Ward 等，Nature 341 :544-546,1989)。单链抗体(SCFv)是其中Vl和Vh区通过接头(例如氨基酸残基的合成序列)连接形成连续的蛋白质链的抗体，其中接头足够长，以允许蛋白质链在自身上折叠起来并形成一价抗原结合部位(参见例如Bird等，1988，Science 242 :423-26以及Huston等，1988， Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 =5879-83)。双链抗体是包含2条多肽链的二价抗体，其中每条多肽链包含通过接头连接的Vh和\结构域，所述接头太短以至于不允许在同一链上的两个结构域间配对，因而只允许每个结构域与另一多肽链上的互补结构域配对(参见例如 Holliger 等，1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 :6444-48 以及 Poljak 等，1994, Structure 2 :1121-23)。如果双链抗体的两条多肽链相同，则由其配对产生的双链抗体会具有两个相同的抗原结合部位。可使用具有不同序列的多肽链来制备具有两个不同抗原结合部位的双链抗体。同样，三链抗体和四链抗体是分别包含3条和4条多肽链的抗体，分别形成3个和 4个可以是相同或不同的抗原结合部位。可采用Kabat等人(同上)、Lefranc等人(同上)和/或Honegger和 Pluckthim (同上)描述的系统鉴定给定抗体的互补决定区(CDR)和框架区(FR)。可将一个或多个CDR共价或非共价地加入分子中使之成为抗原结合蛋白。抗原结合蛋白可加入一个或多个CDR作为较长的多肽链的部分，可使一个或多个CDR与另一条多肽链共价连接，或者可非共价地加入一个或多个CDR。CDR允许抗原结合蛋白与特定的目标抗原特异性结合。抗原结合蛋白可具有一个或多个结合部位。如果有超过一个结合部位，则结合部位彼此可相同或不同。例如，天然存在的人免疫球蛋白通常具有2个相同的结合部位，而 “双特异性”或“双功能”抗体则具有2个不同的结合部位。术语“人抗体”包括具有一个或多个来源于人免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的所有抗体。在一个实施方案中，所有的可变结构域和恒定结构域都来源于人免疫球蛋白序列(完全人抗体)。可以多种方法制备这些抗体，下面描述这些方法的实例，包括用目标抗原给小鼠免疫接种，该小鼠经遗传修饰成表达来源于人重链和/或轻链编码基因的抗体。
人源化抗体具有因一个或多个氨基酸取代、缺失和/或添加而不同于来源于非人类物种的抗体序列的序列，使得将其给予人受试者时，与非人类物种抗体相比，人源化抗体较小可能诱导免疫应答，和/或诱导较不严重的免疫应答。在一个实施方案中，使非人类物种抗体重链和/或轻链框架和恒定结构域的某些氨基酸突变以产生人源化抗体。在另一个实施方案中，使得自人抗体的恒定结构域与非人类物种的可变结构域融合。在另一个实施方案中，改变非人类抗体的一个或多个CDR序列中的一个或多个氨基酸残基，以在将其给予人受试者时降低非人类抗体可能的免疫原性，其中改变的氨基酸残基对于抗体与其抗原的免疫特异性结合不是关键的，或者所进行的氨基酸序列的改变是保守改变，使得人源化抗体与抗原的结合不比非人类抗体与抗原的结合明显更差。如果制备人源化抗体的实例可参见美国专利号 6，054, 297,5, 886，152 和 5，877，293。术语“嵌合抗体”是指含有来自一种抗体的一个或多个区和来自一种或多种其它抗体的一个或多个区的抗体。在一个实施方案中，一个或多个CDR来源于人抗α 4β 7抗体。 在另一个实施方案中，所有CDR都来源于人抗α4β7抗体。在另一个实施方案中，将得自不止一种人抗α 4β 7抗体的⑶R混合并匹配于嵌合抗体中。例如，嵌合抗体可包含第一人抗α 4 β 7抗体轻链的⑶Rl、第二人抗α 4 β 7抗体轻链的⑶R2和⑶R3和第三抗α 4 β 7抗体重链的CDR。其它组合是可行的，也包括本发明的实施方案中。此外，框架区可来源于一种相同的抗α 4β 7抗体、来源于一种或多种不同的抗体 (例如人抗体)，或来源于人源化抗体。在嵌合抗体的一个实例中，重链和/或轻链的一部分与特定物种的抗体或属于特定抗体类别或亚类的抗体相同、同源或者来源于所述抗体， 而链的剩余部分与另一种物种的抗体或属于另一种抗体类别或亚类的抗体相同、同源或者来源于所述抗体。还包括具有所需生物活性(即特异性结合α 4β 7的能力)的这类抗体的片段。参见例如美国专利号 4，816，567 和 Morrison, 1985，Science 229 1202-07。“中和抗体”或“抑制抗体”是抑制α 4β 7与MAdCAM-I相互作用的抗体，当采用某种测定法(例如本文实施例中描述的测定法)测定时，过量的抗α 4β 7抗体降低相互作用的量达至少约20%。在不同的实施方案中，抗原结合蛋白降低α 4β 7与MAdCAM-I α 4β 7 的相互作用达至少 30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、99% 和 99. 9%。按照本说明书的教导以及采用本领域众所周知的技术，本领域的普通技术人员可容易地制备抗体的片段或类似物。片段或类似物的氨基端和羧基端出现在功能结构域的边界附近。可通过将核苷酸和/或氨基酸序列数据与公共或专有序列数据库进行比较来鉴定结构和功能结构域。可应用计算机化比较方法鉴定存在于已知结构和/或功能的其它蛋白质中的序列基序或预测的蛋白质构象结构域。鉴定折叠成已知三维结构的蛋白质序列的方法是已知的。参见例如Bowie等，1991，kience 253:164。"CDR移植抗体”是包含一个或多个来源于特定物种或同种型的抗体的CDR和相同或不同物种或同种型的另一抗体框架的抗体。“多特异性抗体”是识别一种或多种抗原上多于一个的表位的抗体。该抗体类型的亚类是“双特异性抗体”，该抗体识别相同或不同抗原上的2个截然不同的表位。如果抗原结合蛋白与抗原结合的解离常数为1纳摩尔或更少，则抗原结合蛋白与抗原(例如人α4β7) “特异性结合”。如本文中所用，如果抗原结合蛋白结合第一异二聚体整联蛋白但不结合与第一整联蛋白具有共同的一条链的其它整联蛋白，则所述抗原结合蛋白是“异二聚体特异性的”。例如，α 4β 7异二聚体特异性的抗体可结合α 4β 7但不结合 α4β 1 或 αΕβ70已知整联蛋白呈不同构象，这取决于表达整联蛋白的细胞的活化状态和某些金属离子存在与否。呈“活性”构象的整联蛋白以比呈“无活性”构象的同一整联蛋白高的亲和力结合其同源配体。抗原结合蛋白可与呈仅其活性构象、呈仅其无活性构象或者呈两种构象或任一种构象的整联蛋白结合。例如，α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白可在存在或缺乏二价阳离子锰2+(Mn2+)时结合α 4β 7，这就表明了抗原结合蛋白既结合活性的α4β7 又结合无活性的α4β7。“抗原结合结构域”、“抗原结合区”或“抗原结合部位”是含有与抗原相互作用并有利于抗原结合蛋白对抗原的特异性和亲和力的氨基酸残基(或其它部分)的抗原结合蛋白的一部分。对于与其抗原特异性结合的抗体，这可包括至少一个其⑶R结构域的至少部分。“表位”是被抗原结合蛋白(例如被抗体)结合的分子的部分。表位可包含分子的非邻接部分(例如多肽中，在多肽的一级序列中不邻接，但在多肽的三级和四级结构的情况下彼此足够靠近以被抗原结合蛋白结合的氨基酸残基)。应用GAP计算机程序(GCG Wisconsin软件包，10. 3版的一部分(Accelrys，San Diego, CA))，采用其默认参数，通过比较序列来确定2个多核苷酸序列或2个多肽序列的 “百分比同一性”。术语“多核苷酸”、“寡核苷酸”和“核酸”始终可互换使用，其包括DNA分子(例如 cDNA或基因组DNA) ,RNA分子(例如mRNA)、使用核苷酸类似物(例如肽核酸和非天然存在的核苷酸类似物)产生的DNA或RNA的类似物，及其杂合体。核酸分子可以是单链或双链的。在一个实施方案中，本发明的核酸分子包含编码本发明的抗体或其片段、衍生物、突变蛋白或变体的连续可读框。如果2个单链多核苷酸的序列可以反平行方向排列使得一个多核苷酸中的每个核苷酸与另一个多核苷酸的互补核苷酸相对，而又不引入空位，而且在任一序列的5’端或 3’端又无未配对核苷酸，则2个单链多核苷酸的序列彼此是“互补序列”。如果两个多核苷酸在中等严格条件下可彼此杂交，则一个多核苷酸与另一多核苷酸“互补”。因此，多核苷酸可与另一多核苷酸互补而又不是其互补序列。“载体”是可用来将与之连接的另一种核酸导入细胞的核酸。载体的一种类型是 “质粒”，它是指其中可连接其它核酸区段的线性或环状双链DNA分子。载体的另一种类型是病毒载体(例如复制缺陷型反转录病毒、腺病毒和腺伴随病毒)，其中可将其它的DNA区段引入病毒基因组。某些载体能够在其导入的宿主细胞中自主复制(例如包含细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)。其它载体(例如非附加型哺乳动物载体)在导入宿主细胞时整合到宿主细胞的基因组，从而与宿主基因组一起复制。“表达载体”是可指导选定多核苷酸表达的载体类型。如果调节序列影响核苷酸序列的表达(例如表达的水平、时机或位置)，则该核苷酸序列与调节序列“有效连接”。“调节序列”是影响与之有效连接的核酸表达(例如表达的水平、时机或位置)的核酸。例如，调节序列可直接对所调节的核酸发挥其作用，或者通过一个或多个其它分子(例如与调节序列和/或核酸结合的多肽)的作用发挥其作用。调节序列的实例包括启动子、增强子和其它表达调控元件(例如多腺苷酸化信号)。 调节序列的更多实例可参见例如 Goeddel，1990，Gene Expression Technology =Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA 禾口 Baron 等，1995, Nucleic Acids Res.23 :3605-06o“宿主细胞”是可用于表达核酸(例如本发明的核酸)的细胞。宿主细胞可以是原核生物，例如大肠杆菌(E. coli)，或者可以是真核生物，例如单细胞真核生物(例如酵母或其它真菌)、植物细胞(例如烟草或番茄植物细胞)、动物细胞(例如人细胞、猴细胞、仓鼠细胞、大鼠细胞、小鼠细胞或昆虫细胞)或杂交瘤。宿主细胞的实例包括猴肾细胞C0S-7系 (ATCC CRL 1651)(参见 Gluzman 等，1981，Cell 23 175)、L 细胞、C127 细胞、3T3 细胞(ATCC CCL 163)、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或其衍生物，例如在无血清培养基中生长的Veggie CHO 和相关细胞系(参见 Rasmussen 等，1998，Cytotechnology 28 31)或在 DHFR 中为缺陷型的 CHO 品系 DX-B11(参见 Urlaub 等，1980，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 :4216-20)、 HeLa细胞、BHK (ATCC CRL 10)细胞系、来源于非洲绿猴肾细胞系CVl (ATCC CCL 70)的CVl/ EBNA细胞系(参见McMahan等，1991，EMBO J. 10 :2821)、人胚肾细胞例如^3J93EBNA或 MSR四3、人表皮A431细胞、人Colo205细胞、其它转化的灵长类动物细胞系、正常二倍体细胞、来源于初生组织体外培养物的细胞品系、原代外植体、HL-60、U937、HaK或Jurkat细胞。 宿主细胞通常是可用多肽编码核酸转化或转染的培养细胞，所述多肽编码核酸然后可在宿主细胞中表达。表述“重组宿主细胞”可用来表示已用待表达的核酸转化或转染的宿主细胞。宿主细胞还可以是这样的细胞，其包含核酸但除非将调节序列导入宿主细胞使得调节序列与核酸有效连接，否则不按所需水平表达所述核酸。要理解的是，术语宿主细胞不仅仅是指特定的受试者细胞，而且还是指这类细胞的子代或潜在子代。因为由于例如突变或环境影响，某些修饰可发生在后代中，这类子代实际上可能与亲本细胞不同，但是仍包括在本文使用的该术语的范围内。抗原结合蛋白一方面，本发明提供与α4β7(例如人α 4 β 7)结合的抗原结合蛋白(例如抗体、 抗体片段、抗体衍生物、抗体突变蛋白和抗体变体)。本发明的抗原结合蛋白包括抑制α 4β 7的生物活性的抗原结合蛋白。这类生物活性的实例包括α 4 β 7与MAdCAM-I结合、表达α 4 β 7的细胞和表达MAdCAM-I的细胞之间的粘附。其它生物活性包括由α 4β 7体内介导的活性，例如运输或归巢；具体地讲，α 4β 7 参与淋巴细胞运输至肠内，在炎性肠中MAdCAM-I表达的提高促进将表达α 4β 7的淋巴细胞募集至肠中，在肠中异常的淋巴细胞活化增加炎症反应和组织损伤。不同的抗原结合蛋白可与α 4β 7的不同结构域或表位结合或通过不同的作用机制发挥作用。实例包括但不限于干扰α 4β 7结合MAdCAM-I的能力的抗原结合蛋白或抑制细胞相互作用(例如表达α 4β 7的细胞和表达MAdCAM-I的细胞之间的粘附)的抗原结合蛋白。作用部位可以是例如细胞内(例如通过干扰胞内信号转导级联)或细胞外。抗原结合蛋白不必完全抑制α 4β 7诱导的活性以可用于本发明中；相反，还考虑使用降低α4β7 的特定活性的抗原结合蛋白。(本文有关结合α 4β 7的抗原结合蛋白在治疗具体疾病中的特定作用机制的论述仅是说明性的，本文提供的方法不局限于此)。本发明范围内的抗α 4β 7抗体的其它衍生物包括抗α 4β 7抗体或其片段与其它蛋白质或多肽的共价或聚集缀合物，例如通过表达包含与抗α 4 β 7抗体多肽的N端或C 端融合的异源多肽的重组融合蛋白。例如，缀合肽可以是异源信号(或前导序列)多肽，例如酵母α-因子前导序列，或肽例如表位标签。含有抗原结合蛋白的融合蛋白可包含加入以促进纯化或鉴定抗原结合蛋白的肽(例如聚-His)。抗原结合蛋白还可与Hopp等(Bio/ Technology 6 :1204,1988)和美国专利 5，011，912 中描述的 FLAG 肽 Asp-Tyr-Lys-Asp -Asp-Asp-Asp-Lys (DYKDDDDK) (SEQ ID NO :62)连接。FLAG 肽是高抗原性的，并且提供被特异性单克隆抗体(mAb)可逆结合的表位，使得能够对所表达的重组蛋白进行快速的测定和简易的纯化。可用于制备其中FLAG 肽与给定多肽融合的融合蛋白的试剂是市售的 (Sigma-Aldrich, St. Louis MO)。含有一个或多个抗原结合蛋白的寡聚体可用作α 4β 7拮抗剂。寡聚体可呈共价连接的或非共价连接的二聚体、三聚体或更高寡聚体的形式。还考虑使用包含两个或更多个抗原结合蛋白的寡聚体，其中一个实例为同二聚体。其它寡聚体包括异二聚体、同三聚体、异三聚体、同四聚体、异四聚体等。—个实施方案涉及包含多个抗原结合蛋白的寡聚体，所述抗原结合蛋白通过与抗原结合蛋白融合的肽部分之间的共价或非共价相互作用连接。这类肽可以是肽接头(间隔基)或具有促进寡聚化性质的肽。亮氨酸拉链和来源于抗体的某些多肽也在可促进与之连接的抗原结合蛋白寡聚化的肽之中，下面将更详细予以描述。在具体的实施方案中，寡聚体包含2-4个抗原结合蛋白。寡聚体的抗原结合蛋白可呈任何形式，例如上述任何形式，例如变体或片段。优选寡聚体包含具有α4β7结合活性的抗原结合蛋白。在一个实施方案中，寡聚体使用来源于免疫球蛋白的多肽制备。包含与抗体衍生多肽的不同部分(包括Fc结构域)融合的某些异源多肽的融合蛋白的制备披露于例如 Ashkenazi 等，1991，PNAS USA 88 :10535 ；Byrn 等，1990，Nature 344 :677 ；以及 Hollenbaugh 等，1992 〃 Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins “，载于 Current Protocols in Immunology,±曾干Ij 4,第 10. 19. 1-10. 19. 11 页。本发明的一个实施方案涉及包含通过使抗α 4β 7抗体的α4β7结合片段与抗体的Fc区融合而产生的2个融合蛋白的二聚体。例如，可如下制备二聚体通过将编码融合蛋白的基因融合物插入合适的表达载体，在用重组表达载体转化的宿主细胞中表达基因融合物，并且允许表达的融合蛋白非常像抗体分子地装配，于是在Fc部分之间形成链间二硫键以得到二聚体。本文使用的术语“Fe多肽”包括来源于抗体的Fc区的多肽的天然和突变蛋白形式。还包括含有促进二聚化的铰链区的这类多肽的截短形式。包含Fc部分的融合蛋白(和由其形成的寡聚体)提供在A蛋白或G蛋白柱上通过亲和色谱法而易于纯化的优势。一种合适的Fc多肽，参见PCT申请WO 93/10151(通过引用结合到本文中)，是从 N端铰链区延伸到人IgGl抗体Fc区的天然C端的单链多肽。另一种有益的Fc多肽是Fc 突变蛋白，参见美国专利5，457，035和Baum等，1994，EMBO J. 13 :3992-4001。这种突变蛋白的氨基酸序列除以下不同之外与WO 93/10151提供的天然Fc序列相同氨基酸19由Leu 变为Ala，氨基酸20由Leu变为Glu，氨基酸22由Gly变为Ala。突变蛋白对Fc受体的亲和力降低。
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在其它实施方案中，抗α 4β 7抗体的重链和/或轻链的可变部分可取代某一抗体重链和/或轻链的可变部分。或者，寡聚体是含或不含肽接头(间隔基肽)的包含多个抗原结合蛋白的融合蛋白。合适的肽接头可参见美国专利4，751，180和4，935，233中的肽接头。用于制备寡聚体抗原结合蛋白的另一种方法包括使用亮氨酸拉链。亮氨酸拉链结构域是促进亮氨酸拉链结构域存在于其中的蛋白质寡聚化的肽。最初在若干种DNA结合蛋白中鉴定出亮氨酸拉链(Landschulz等，1988，Science 240 1759)，此后在多种不同蛋白质中也发现了亮氨酸拉链。在已知的亮氨酸拉链中的是天然存在的二聚化或三聚化的肽及其衍生物。适于产生可溶性寡聚蛋白的亮氨酸拉链结构域的实例参见PCT申请WO 94/10308，来源于肺表面活性蛋白D(SPD)的亮氨酸拉链参见Hoppe等，1994，FEBS Letters 344:191，所述文献通过引用结合到本文中。允许与之融合的异源蛋白质稳定三聚化的修饰亮氨酸拉链的使用参见Fanslow等，1994，Semin. Immunol. 6 :267-78。在一种方法中，包含与亮氨酸拉链肽融合的抗α 4β 7抗体片段或衍生物的重组融合蛋白在合适的宿主细胞中表达，并从培养物上清液中回收形成的可溶性寡聚抗α 4β 7抗体片段或衍生物。一方面，本发明提供干扰α 4β 7与MAdCAM-I结合的抗原结合蛋白。这类抗原结合蛋白可针对α 4β 7或其片段、变体或衍生物产生，并在干扰α 4β 7与MAdCAM-I结合的能力的常规测定法中筛选。合适测定法的实例是测定抗原结合蛋白抑制MAdCAM-l(即可溶性MAdCAM-I)与表达α 4β 7的细胞结合的能力的测定法，或者测定抗原结合蛋白减少由 MAdCAM-I禾Π α 4 β 7的相互作用(即表达α 4 β 7的细胞与MAdCAM-I或表达MAdCAM-I的细胞粘附)引起的生物反应或细胞反应的能力的测定法。测定抗原结合蛋白的其它测定法包括对抗原结合蛋白与α 4β 7多肽的结合和已知抗原结合蛋白与α 4β 7多肽的结合进行定性或定量比较的测定法，本文公开了测定法的若干实例。另一方面，本发明提供具有物种选择性的抗原结合蛋白。在一个实施方案中，抗原结合蛋白与一种或多种哺乳动物α 4β 7结合，例如与人α 4β 7和一种或多种小鼠、大鼠、 豚鼠、仓鼠、沙鼠(gerbil)、猫、兔、狗、山羊、绵羊、牛、马、骆驼和非人类灵长类动物α4β7 结合。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白与一种或多种灵长类动物α 4β 7结合，例如与人α 4β 7和一种或多种食蟹猴、狨猴、恒河猴、绢毛猴和黑猩猩α 4β 7结合。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白与人、食蟹猴、狨猴、恒河猴、绢毛猴或黑猩猩α 4β 7特异性结合。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白不与一种或多种小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、沙鼠、猫、兔、狗、 山羊、绵羊、牛、马、骆驼和非人类灵长类动物α4β7结合。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白不与新世界猴物种例如狨猴结合。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白对α 4β 7以外的任何天然存在的蛋白质没有特异性结合。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白对哺乳动物α4β7以外的任何天然存在的蛋白质没有特异性结合。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白对灵长类动物α4β7 以外的任何天然存在的蛋白质没有特异性结合。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白对人 α 4β 7以外的任何天然存在的蛋白质没有特异性结合。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白与至少一种非人类灵长类动物(例如食蟹猴)的α4β7和人α 4β 7特异性结合。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白以相似的结合亲和力与非人类灵长类动物、食蟹猴和人 α 4β 7特异性结合。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白阻断非人类灵长类动物、食蟹猴和人α4β7的活性。在另一个实施方案中，在本文所述测定法中，抗原结合蛋白对于非人类灵长类动物、食蟹猴和人α 4 β 7具有相似的IC5tl或EC5tlt5可采用本领域众所周知的方法并按照本说明书的教导来测定抗原结合蛋白对 α 4β 7的选择性。例如，可以采用蛋白质印迹、FACS、ELISA或RIA测定选择性。另一方面，本发明提供具有一个或多个下列特征的结合α 4β 7的抗原结合蛋白 (例如抗α4β7抗体)与人和非人类灵长类动物α 4β 7两者结合、抑制MAdCAM-I与 α 4 β 7的结合、抑制表达α 4 β 7的细胞与MAdCAM-I粘附、抑制表达α 4 β 7的细胞与表达 MAdCAM-I的细胞粘附、抑制表达α 4β 7的细胞运输至包含表达MAdCAM-I的细胞的组织中， 结合活性和无活性形式的α 4β 7两者、引起细胞表面表达的α 4β 7相对小地减量调节。本发明的抗原结合蛋白的抗原结合片段可通过常规技术产生。这类片段的实例包括但不限于Fab和F(ab' )2片段。还考虑通过遗传工程技术产生的抗体片段和衍生物。其它实施方案包括嵌合抗体，例如人源化形式的非人类(例如鼠)单克隆抗体。这类人源化抗体可通过已知技术制备，并且提供在将抗体给予人时免疫原性降低的优势。在一个实施方案中，人源化单克隆抗体包含鼠抗体的可变结构域(或其所有或部分抗原结合部位)和来源于人抗体的恒定结构域。或者，人源化抗体片段可包含鼠单克隆抗体的抗原结合部位和来源于人抗体的可变结构域片段(缺乏抗原结合部位)。制备嵌合单克隆抗体和其它改造的单克隆抗体的方法包括以下文献描述的方法Riechmarm 等，1988，Nature 332 :323 ；Liu 等，1987，Proc. Nat. Acad. Sci. USA 84 :3439 ；Larrick 等， 1989, Bio/Technology 7 :934 ；以及 Winter 等，1993，TIPS 14:139。在一个实施方案中， 嵌合抗体是CDR移植抗体。以下列文献中论述了将抗体人源化的技术例如美国专利申请号 10/194，975(2003 年 2 月 27 公布)；美国专利号 5，869，619,5, 225，539,5, 821，337、 5，859，205 ；Padlan 等，1995，FASEB J. 9 :133-39 ；以及 Tamura 等，2000，J. Immunol. 164 1432-41。已经开发出在非人类动物中产生人或部分人抗体的方法。例如，已制备了其中通过各种方法使一种或多种内源免疫球蛋白基因失活的小鼠。已将人免疫球蛋白基因导入小鼠中以置换失活的小鼠基因。将在动物中产生的抗体掺入由导入该动物的人遗传物质编码的人免疫球蛋白多肽链中。在一个实施方案中，非人类动物(例如转基因小鼠)用α4β7 多肽免疫接种，使得在该动物中产生针对α 4β 7多肽的抗体。合适免疫原的一个实例是可溶性人α 4β 7，例如包含部分α 4β 7的多肽，或其它免疫原性片段α 4β 7。合适免疫原的另一个实例是表达高水平α 4β 7的细胞或其细胞膜制备物。用于产生和使用转基因动物以制备人或部分人抗体的技术的实例参见美国专利 5, 814, 318,5, 569, 825 和 5, 545, 806 ；Davis 等，2003，Production of human antibodies from transgenic mice 载于 Lo 主编白勺 Antibody Engineering :Methods and Protocols, Humana Press, NJ : 191-200 ；Kellermann 等，2002, Curr Opin Biotechnol. 13 593-97 ；Russel 等，2000，Infect Immun. 68 :1820-26 ；Gallo 等，2000，Eur J Immun. 30 534-40 ；Davis 1999, Cancer Metastasis Rev. 18 :421-25 ；Green,1999, J Immunol Methods. 231 :11-23 Jakobovits, 1998, Adv Drug Deliv Rev 31 :33-42 ；Green 等，1998， J Exp Med. 188 :483-95 Jakobovits A, 1998, Exp. Opin. Invest. 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Ag 41、 Sp210-Agl4、F0、NS0/U、MPC-ll、MPCll-X45-GTG 1. 7 和 S194/5XX0 Bul ；可用于大鼠融合的细胞系的实例包括R210. RCY3、Y3-Ag 1. 2. 3、IR983F和4B210。用于细胞融合的其它细胞系为 U-266、GM1500-GRG2、LICR-L0N-HMy2 和 UC729-6。在一个实施方案中，如下产生杂交瘤细胞系通过用α 4β 7免疫原免疫接种动物 (例如具有人免疫球蛋白序列的转基因动物)；从免疫动物中收获脾细胞；使收获的脾细胞与骨髓瘤细胞系融合，从而产生杂交瘤细胞；由杂交瘤细胞建立杂交瘤细胞系，并鉴定产生结合α 4β 7多肽的抗体的杂交瘤细胞系。本发明包括这类杂交瘤细胞系及通过其产生的抗α 4β 7单克隆抗体。通过杂交瘤细胞系分泌的单克隆抗体可采用本领域已知的任何技术纯化。可对杂交瘤或mAb进行进一步筛选以鉴定具有特定性质的mAb，例如阻断α 4β 7诱导的活性的能力。下面的实施例中提供了这类筛选法的实例。还可以采用称为基因免疫的方法产生单克隆抗体。例如，可将编码目标抗原的核酸掺入病毒载体(例如腺病毒载体)中。然后使用所得载体在合适的宿主动物(例如非肥胖性糖尿病即NOD小鼠)中产生针对目标抗原的免疫应答。Ritter等人(Biodrugs 16(1) 3-10(2002))相当详尽充实地描述了该技术，所述文献的公开内容通过引用结合到本文中。在抗体结合部位中心的互补决定区(CDR)的分子进化也被用于来分离亲和力增强的抗体，例如对c-erbB-2的亲和力增强的抗体，如Schier等，1996，J. Mol. Biol. 263 :551 所述。因此，这类技术可用于制备抗α 4β 7的抗体。针对α 4β 7的抗原结合蛋白可用于例如体外或体内检测α 4β 7多肽或表达 α 4β 7的细胞的存在情况的测定法中。抗原结合蛋白还可用于通过免疫亲和色谱法来纯化α4β7蛋白。另外可阻断MAdCAM-I和α 4 β 7的相互作用的抗原结合蛋白可用于抑制因这类相互作用而产生的生物活性。阻断抗原结合蛋白可用于本发明的方法。起α4β7拮抗剂作用的这类抗原结合蛋白可用于治疗任何α 4β 7诱导的病况，包括但不限于炎性病况。 在一个实施方案中，通过包括给转基因小鼠免疫接种的方法而产生的人抗α4β7单克隆抗体可用于治疗这类病况。可将抗原结合蛋白用于体外方法，或体内给予以抑制α 4β 7诱导的生物活性。因此，可以治疗由α 4β 7及其与MAdCAM-I的相互作用而引起或加重(直接或间接)的病症， 本文提供了所述病症的实例。在一个实施方案中，本发明提供治疗方法，所述方法包括以对降低α 4β 7诱导的生物活性有效的量，将α 4β 7阻断性抗原结合蛋白体内给予有需要的哺乳动物。本发明的抗原结合蛋白包括抑制α 4β 7的生物活性的部分人和完全人单克隆抗体。一个实施方案涉及至少部分阻断人α 4β 7与MAdCAM-I的相互作用的人单克隆抗体。 在一个实施方案中，抗体通过用α 4β 7免疫原给转基因小鼠免疫接种来产生。在另一个实施方案中，免疫原是人α 4β 7多肽(例如经转化或转染以表达α 4β 7的细胞，或者天然表达α4β7的细胞)。本文还提供来源于这类免疫小鼠的杂交瘤细胞系，其中杂交瘤分泌结合α 4β 7的单克隆抗体。虽然人抗体、部分人抗体或人源化抗体可适于许多应用，特别是包括将抗体给予人受试者的那些应用，但是其它类型的抗原结合蛋白也可适于某些应用。例如，本发明的非人类抗体可以来源于任何产抗体动物，例如小鼠、大鼠、兔、山羊、驴或非人类灵长类动物 (例如猴(例如食蟹猴或恒河猴)或类人猿(例如黑猩猩))。本发明的非人类抗体可用于例如体外和基于细胞培养的应用，或者其中对本发明抗体的免疫应答不会发生、不明显、可被阻止、无需担心或是所需要的任何其余应用。在一个实施方案中，将本发明的非人类抗体给予非人类受试者。在另一个实施方案中，非人类抗体不会在非人类受试者中诱导免疫应答。在另一个实施方案中，非人类抗体来自与非人类受试者相同的物种，例如将本发明的小鼠抗体给予小鼠。可如下制备来自特定物种的抗体通过例如用所需免疫原(例如表达 α 4 β 7的细胞，或可溶性α 4 β 7多肽)给该物种的动物免疫接种，或者采用产生该物种的抗体的人工系统(例如用于产生特定物种的抗体的基于细菌或噬菌体展示的系统)，或者通过例如用其它物种的恒定区置换抗体的恒定区，将一种物种的抗体转化成另一种物种的抗体，或者通过置换抗体的一个或多个氨基酸残基使得抗体更像其它物种的抗体序列。在一个实施方案中，抗体为包含来源于两种或更多种不同物种的抗体的氨基酸序列的嵌合抗体。可通过多种常规技术的任一种制备抗原结合蛋白。例如，可采用本领域已知的任何技术，从天然表达抗原结合蛋白的细胞中纯化出抗原结合蛋白(例如可从产生抗体的杂交瘤中纯化出抗体)，或者在重组表达系统中产生抗原结合蛋白。参见例如Monoclonal Antibodies, Hybridomas :A New Dimension in Biological Analyses, Kennet 等(编辑)，Plenum Press, New York (1980)；以及 Antibodies :A Laboratory Manual, Harlow 禾口 Land (编辑)，Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, (1988)。本领域已知的任何表达系统可用来制备本发明的重组多肽。一般而言，宿主细胞用包含编码所需多肽的DNA的重组表达载体转化。在可采用的宿主细胞中的是原核生物、酵母或高等真核细胞。原核生物包括革兰氏阴性或革兰氏阳性生物，例如大肠杆菌或杆菌。 高等真核细胞包括昆虫细胞和哺乳动物源的确立细胞系。合适哺乳动物宿主细胞系的实例包括猴肾细胞的 C0S-7 系(ATCC CRL 1651) (Gluzman 等，1981，Cell 23 :175)、L 细胞、293 细胞、C127细胞、3T3细胞(ATCC CCL 163)、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细胞、BHK (ATCC CRL 10)细胞系和来源于非洲绿猴肾细胞系CVI的CVI/EBNA细胞系(ATCC CCL 70)(参见 McMahan等，1991，EMBO J. 10 :2821)。用于细菌、真菌、酵母和哺乳动物细胞宿主的合适克隆禾口表达载体参见 Pouwels 等(Cloning Vectors :A Laboratory Manual, Elsevier, New York,1985)。可将转化细胞在促进多肽表达的条件下培养，并通过常规蛋白质纯化方法回收多肽。这类纯化方法之一包括例如在具有与之结合的全部或部分(例如胞外结构域)α 4β 7 的基质上应用亲和色谱法。本文考虑使用的多肽包括基本均质的重组哺乳动物抗α4β7 抗体多肽，其基本上不含污染的内源物质。多肽的氨基酸序列可用本领域已知的任何方法证实，并且可与本文序列表中公开的序列相同，或者可因加工所致以一个或多个氨基酸残基不同于那些序列。例如，在全部或部分的基本均质多肽中，可通过蛋白酶解加工或在培养期间发生的其它加工(例如C端Lys 残基的加工)，从轻链或重链(或相关单链分子)中剔除C端氨基酸。或者，剔除不止一个 C端氨基酸残基，例如2个C端氨基酸，或者3、4或5个C端氨基酸。例如，如所公开的一样，可将C端截短至抗体重链的酰胺化脯氨酸。同样，可缺失N端氨基酸，例如可缺失1、2、 3、4或5个N端氨基酸。备选或另外地，氨基酸残基可进行翻译后修饰，例如但不限于可使谷氨酰胺(特别是N端的谷氨酰胺)环化或转化成焦谷氨酸；另外或备选地，氨基酸可以进行脱酰胺化、 异构化、糖化和/或氧化。本发明的多肽可在本领域众所周知的位点进行其它的翻译后修饰，包括糖基化，例如N连接或0连接的糖基化。如前所述，可在多肽氨基酸序列中进行改变以阻止这类变动或使这类变动最小化，或者在这类处理是有益的情况下促进这类变动。基本均质的多肽的制备物可包含约1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、 70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%已进行一种或多种特定形式的加工的多肽。基本均质的多肽的制备物可包含一些(小于或等于50% )、大部分(大于50%但小于90% )或基本上全部(大于90% )的特定形式的加工多肽。此外，这类制备物可包含具有不同水平的不止一种加工相关修饰类型的多肽，例如，多肽的一些、大部分或基本上全部的C端赖氨酸可被剔除(例如SEQ ID Ν0:72的C端赖氨酸)，以及一些、大部分或基本上全部的N端氨基酸转化成焦谷氨酸(例如表1和/或表2或共有序列中所显示的任何多肽)。可通过多种已知技术的任一种针对所需要的性质制备并筛选抗原结合蛋白。某些技术包括分离编码目标抗原结合蛋白(例如抗α4β7抗体)的多肽链(或其部分)的核酸，和通过重组DNA技术操作核酸。例如，核酸可与另一种目标核酸融合，或者可被改变(例如通过诱变或其它常规技术)以添加、缺失或取代一个或多个氨基酸残基。一方面，本发明提供本发明的抗α 4β 7抗体的抗原结合片段。这类片段可完全由抗体衍生的序列组成或者可包含其它序列。抗原结合片段的实例包括Fab、F(ab' )2、 单链抗体、双链抗体、三链抗体、四链抗体和结构域抗体。其它实例参见Limde等，2002， Biochem. Soc. Trans. 30 :500_06o
可通过经由氨基酸桥(短肽接头)连接重链和轻链可变结构域(Fv区)片段得到单条多肽链，来形成单链抗体。通过使编码肽接头的DNA在编码2个可变结构域多肽队和Vh)的DNA之间融合来制备这类单链Fv(SCFV)。所得多肽可在自身上折叠起来形成抗原结合单体，或者可以形成多聚体(例如二聚体、三聚体或四聚体)，这取决于2个可变结构域间的柔性接头的长度(Kortt 等，1997，Prot. Eng. 10 :423 ；Kortt 等，2001，Biomol. Eng. 18 :95-108)。可通过使不同的包含八和Vh的多肽组合，形成结合不同表位的多聚体 scFv (Kriangkum等，2001，Biomol. Eng. 18 :31-40)。开发用于产生单链抗体的技术包括以下文献中所述的这些技术美国专利号4，946，778 ；Bird, 1988，Science 242 :423 ；Huston 等，1988，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 :5879 ；Ward 等，1989，Nature 334 :544, de Graaf 等，2002，Methods Mol Biol. 178 :379_87。本发明的抗原结合蛋白(例如抗体、抗体片段和抗体衍生物)可包含本领域已知的任何恒定区。轻链恒定区可以是例如K型或λ型轻链恒定区，例如人K型或λ型轻链恒定区。重链恒定区可以是例如α型、δ型、ε型、Υ型或μ型重链恒定区，例如人α 型、δ型、ε型、Υ型或μ型重链恒定区。在一个实施方案中，轻链或重链恒定区是天然存在的恒定区的片段、衍生物、变体或突变蛋白。已知从目标抗体得到不同亚类或同种型的抗体的技术，即亚类转换(subclass switching)。因此，例如可由IgM抗体得到IgG抗体，反之亦然。这类技术允许制备具有既定抗体(亲本抗体)的抗原结合性质，但亦显示与亲本抗体性质不同的抗体同种型或亚类有关的生物性质的新抗体。可以应用重组DNA技术。编码特定抗体多肽的克隆DNA可应用于这类方法，例如编码所需同种型抗体恒定结构域的DNA。另参见Lantto等，2002， Methods Mol. Biol. 178 :303_16。此外，如果需要IgG4，则同样可能需要在铰链区中引入点突变(CPSCP- > CPPCP)(参见 Bloom 等，1997，Protein Science 6 :407，通过引用结合到本文中)，以降低形成可在IgG4抗体中导致异质性的H链内二硫键的趋势。此外，用来得到具有不同性质(即对其结合的抗原具有变化的亲和力)的抗原结合蛋白的技术也是已知的。这类技术之一称为链改组，包括在丝状噬菌体表面展示免疫球蛋白可变结构域基因库，通常称为噬菌体展示。链改组已被用来制备抗半抗原2-苯基Pf 唑-5-酮的高亲和力抗体，参见Marks等，1992，BioTechnology, 10 :779。在另一个实施方案中，本发明提供具有自α 4β 7解离的低解离常数的抗原结合蛋白。在一个实施方案中，抗原结合蛋白的Kd为IOOpM或更低。在另一个实施方案中，&为 IOpM或更低；在另一个实施方案中，Kd为5ρΜ或更低，或者为IpM或更低。在另一个实施方案中，Kd与本文实施例所述抗体的基本相同。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白以与本文实施例所述抗体基本相同的Kd与α 4 β 7结合。另一方面，本发明提供抑制α 4β 7活性的抗原结合蛋白，所述活性为例如与 MAdCAM-I结合(或粘附)、与表达MAdCAM-I的细胞结合或者表达α 4β 7的细胞和表达 MAdCAM-I的细胞之间的粘附。在一个实施方案中，抗原结合蛋白的IC5tl为IOOOpM或更低。 在另一个实施方案中，IC5tl为500ρΜ或更低；在另一个实施方案中，IC5tl为IOOpM或更低。在另一个实施方案中，IC5tl与本文实施例所述抗体的IC5tl基本相同。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白以与本文实施例所述抗体基本相同的IC5tl抑制α 4β 7的活性。在一个实施方案中，本发明的抗原结合蛋白对α4β7(或表达^40 7的细胞)的表观亲和力为IOOOpM或更低。在其它实施方案中，抗原结合蛋白的表观亲和力为500pM或更低、200pM或更低、IOOpM或更低、80pM或更低、40pM或更低或者15pM或更低。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白的表观亲和力与本文实施例所述抗体的基本相同。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白的表观亲和力与本文实施例所述抗体的基本相同。另一方面，本发明提供结合活性和无活性形式的α 4β 7两者的抗原结合蛋白。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白只结合α 4β 7的一种形式，或优先结合一种形式。例如， 抗原结合蛋白可在Mn2+存在或不存在时结合α4β7(即结合活性和无活性形式两者)。或者，抗原结合蛋白只可在Mn2+存在或只在缺乏Mn2+时结合α 4 β 7，或其可在这一种条件下以比在另一种条件下更高的亲和力结合，这就表明了优先与特定的α 4β 7形式结合。在另一个实施方案中，本发明提供与本文公开的抗体竞争结合α 4β 7的抗原结合蛋白。这种竞争能力可通过本领域众所周知的方法测定，例如通过采用荧光激活细胞分选(FACS)技术或其它类似测定法观察到的竞争结合表达α 4β 7的细胞、通过在测定法例如粘附测定法(即表达α 4β 7的细胞和表达MAdCAM-I的细胞之间粘附)中的竞争，或者通过在本文所述另一种测定法中的竞争。一方面，与本文公开的抗体竞争结合α 4β 7的抗原结合蛋白结合与所述抗体相同的表位或重叠(或邻接)表位。另一方面，与本文公开的抗体竞争结合α 4β 7的抗原结合蛋白抑制α 4β 7的活性。另一方面，本发明提供以下抗原结合蛋白，其与在细胞表面上表达的人α4β7结合，并且当如此结合时，抑制α 4β 7与MAdCAM-I的相互作用而不引起细胞表面上α4β7 的量的显著减少。可以采用测定或估算细胞表面上和/或细胞内α 4β 7的量的任何方法。在一个实施方案中，本发明提供以下抗原结合蛋白，其与在细胞表面上表达的α4β7 结合，并且当如此结合时，抑制α 4 β 7与MAdCAM-I的相互作用而又不显著提高细胞表面上 α4β7的内化率。在其它实施方案中，抗原结合蛋白与表达α 4β 7的细胞的结合引起小于约 75%、50%、40%、30%、20%、15%、10%、5%、1% 或 0. 的细胞表面 α4β7 被内化。另一方面，本发明提供具有至少1天体外或体内(例如给予人受试者时)半寿期的抗原结合蛋白。在一个实施方案中，抗原结合蛋白的半寿期至少为3天。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白的半寿期为4天或更长。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白的半寿期为8天或更长。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白是衍生化或修饰的，使得与未衍生化或未修饰的抗原结合蛋白相比，其具有较长的半寿期。在另一个实施方案中，抗原结合蛋白含有延长血清半寿期的一个或多个点突变，例如参见2000年2月M日公布的WO 00/09560， 通过引用予以结合。本发明还提供多特异性抗原结合蛋白，例如双特异性抗原结合蛋白，例如通过两个不同的抗原结合部位或区域与α 4β 7的两个不同表位结合或者与α 4β 7的一个表位和另一种分子的一个表位结合的抗原结合蛋白。此外，本文公开的双特异性抗原结合蛋白可包含一种本文所述抗体的α 4β 7结合部位和另一种本文所述抗体(包括本文通过参照其它出版物描述的抗体)的第二 α 4β 7结合区。或者，双特异性抗原结合蛋白可包含本文所述抗体之一的抗原结合部位和本领域已知的另一种α 4β 7抗体或者通过已知方法或本文所述方法制备的抗体的第二抗原结合部位。制备双特异性抗体的多种方法是本领域已知的，可参见2001年4月20日提交的美国专利申请09/839，632 (通过引用结合到本文中)。这类方法包括使用杂种杂交瘤(参见Milstein等，1983，Nature 305 :537)和其它杂交瘤(美国专利4，474，893、美国专利 6，106，833)以及抗体片段的化学偶联(Brennan 等，1985，Science 229 :81 ；Glennie 等，1987，J. Immunol. 139 :2367 ；美国专利6，010，902)。此外，双特异性抗体可通过重组方法产生，例如通过使用亮氨酸拉链部分(即得自Fos和Jim蛋白，其优先形成异二聚体； Kostelny等，1992，J. Immnol. 148 1547)或其它锁钥相互作用结构域结构(参见美国专利 5，582，996)。其它有益的技术包括以下文献中描述的技术=Kortt等，1997，同上；美国专利 5，959，083 ；以及美国专利 5，807，706。另一方面，本发明的抗原结合蛋白包含抗体的衍生物。衍生化抗体可包含赋予抗体所需性质(例如在具体应用中延长的半寿期)的任何分子或物质。衍生化抗体可包含例如可检测(或标记)部分(例如放射性分子、比色分子、抗原分子或酶分子、可检测珠粒(例如磁珠或电子致密珠粒(例如金珠))或与其它分子(例如生物素或链霉抗生物素)结合的分子)、治疗或诊断部分(例如放射性部分、细胞毒部分或药用活性部分)或者提高用于特定用途(例如给予受试者例如人受试者，或者其它体内或体外用途)的抗体适宜性的分子。可用于衍化抗体的分子的实例包括白蛋白(例如人血清白蛋白)和聚乙二醇(PEG)。 可采用本领域众所周知的技术制备抗体的白蛋白连接的衍生物和聚乙二醇化衍生物。在一个实施方案中，抗体与运甲状腺素蛋白(TTR)或TTR变体缀合或以其它方式连接。TTR或 TTR变体可用例如选自以下的化学物质进行化学修饰葡聚糖、聚(η-乙烯基吡咯烷酮)、聚乙二醇、聚丙二醇(propropylene glycol)均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇和聚乙烯醇。美国专利申请号20030195154。另一方面，本发明提供使用本发明的抗原结合蛋白筛选与α 4β 7结合的分子的方法。可采用任何合适的筛选技术。在一个实施方案中，将α4β7分子或其片段(本发明的抗原结合蛋白与之结合)与本发明的抗原结合蛋白和另一种分子接触，其中如果所述另一种分子降低抗原结合蛋白与α 4β 7的结合，则该分子与α4β7结合。可采用任何合适的方法(例如ELISA)检测抗原结合蛋白的结合。可如上所述通过对抗原结合蛋白进行可检测标记来简化抗原结合蛋白与α 4β 7结合的检测。在另一个实施方案中，对α4β7结合分子进行进一步分析，以确定它是否抑制α 4β 7活化和/或信号转导。一方面，本发明提供分离的核酸分子。所述核酸包含例如编码全部或部分抗原结合蛋白(例如本发明抗体的一条或两条链)或其片段、衍生物、突变蛋白或变体的多核苷酸、足以用作杂交探针的多核苷酸、用于鉴定、分析、突变或扩增编码多肽的多核苷酸的PCR 引物或测序引物、抑制多核苷酸的表达的反义核酸，以及前述多核苷酸的互补序列。核酸可为任何长度。其长度可为例如 5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、175、200、 250、300、350、400、450、500、750、1，000,1, 500,3, 000,5, 000 个或更多个核苷酸，和 / 或可包含一个或多个其它序列例如调节序列，和/或为较大核酸(例如载体)的部分。核酸可为单链或双链，并且可包含RNA和/或DNA核苷酸及其人工变体(例如肽核酸)。可从用α 4β 7免疫接种的小鼠的B细胞中分离出编码抗体多肽(例如重链或轻链、仅可变结构域或全长多肽)的核酸。核酸可通过常规方法分离，例如聚合酶链式反应 (PCR)。本发明还提供在特定杂交条件下与其它核酸杂交的核酸。用于核酸杂交的方法是本领域众所周知的。参见例如 Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N. Y. (1989),6.3. 1-6.3.6。本文定义的中等严格杂交条件使用含有5X氧化钠/柠檬酸钠(SSC),0. 5% SDSU.OmM EDTA (pH 8.0)的预洗溶液、约50%甲酰胺、6X SSC、杂交缓冲液并且杂交温度为55°C (或其它类似的杂交溶液，例如一种杂交溶液含有约50%甲酰胺，杂交温度为42°C )，以及60°C、在0. 5XSSC、0. 1% SDS中的洗涤条件。严格杂交条件在6X SSC中于45°C杂交，接着在0. IX SSC、0. 2% SDS中于68°C—次或多次洗涤。此外， 本领域技术人员可操控杂交和/或洗涤条件以提高或降低杂交的严格性，使得包含彼此有至少65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或99%同一性的核苷酸序列的核酸通常保持彼此杂交。影响杂交条件的选择的基础参数和设计合适条件的指导可参见例如 Sambrook、Fritsch 禾口 Maniatis (1989，Molecular Cloning :A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor,N. Y.，第 9禾口 11 章；以及Current Protocols in Molecular Biology，1995 ;Ausubel 等主编，John Wiley & Sons，Inc.，第 2. 10和6. 3-6. 4节)，本领域的普通技术人员可根据例如DNA的长度和/或碱基组成容易地确定。通过核酸突变可引入改变，从而导致其编码的多肽(例如抗原结合蛋白)的氨基酸序列发生改变。可采用本领域已知的任何技术引入突变。在一个实施方案中，采用例如位点定向诱变方案，改变一个或多个特定的氨基酸残基。在另一个实施方案中，采用例如随机诱变方案改变一个或多个随机选择的残基。无论如何进行，突变体多肽均可表达并针对所需要的性质(例如与α 4 β 7结合或阻断α 4 β 7与地址素(例如MAdCAM)的结合)筛选。可将突变引入核酸而又不显著改变其编码的多肽的生物活性。例如，可以进行核苷酸取代，导致在非必需氨基酸残基上的氨基酸取代。在一个实施方案中，使核苷酸序列或其所需片段、变体或衍生物突变，使得其编码包含一个或多个氨基酸残基缺失或取代的氨基酸序列。在另一个实施方案中，诱变将氨基酸插入一个或多个氨基酸残基附近。或者，可将一个或多个突变引入核酸，这选择性地改变其编码的多肽的生物活性(例如α4β7的结合、抑制α 4 β 7与地址素(例如MAdCAM)的结合等)。例如，突变可定量或定性地改变生物活性。定量改变的实例包括提高、降低或消除活性。定性改变的实例包括改变抗原结合蛋白的抗原特异性。另一方面，本发明提供适宜用作引物或杂交探针以检测本发明的核酸序列的核酸分子。本发明的核酸分子可只包含编码本发明全长多肽的核酸序列的一部分，例如可用作探针或引物的片段或者编码本发明多肽的活性部分(例如α 4β 7结合部分)的片段。基于本发明的核酸序列的探针可用来检测所述核酸或类似核酸，例如编码本发明多肽的转录物。探针可包含标记基团，例如放射性同位素、荧光化合物、酶或酶辅因子。这类探针可用来鉴定表达所述多肽的细胞。另一方面，本发明提供包含编码本发明多肽或其部分的核酸的载体。载体的实例包括但不限于质粒、病毒载体、非附加型哺乳动物载体和表达载体，例如重组表达载体。本发明的重组表达载体可包含本发明的核酸，其形式适于在宿主细胞中表达核酸。重组表达载体包括在用于表达的宿主细胞基础上选出的一个或多个调节序列，其与待表达的核酸序列有效连接。调节序列包括在许多类型的宿主细胞中指导核苷酸序列的组成型表达的调节序列(例如SV40早期基因增强子、劳斯肉瘤病毒启动子和巨细胞病毒启动子)、只在某些宿主细胞中指导核苷酸序列表达的调节序列(例如组织特异性调节序列，参见 Voss 等，1986，Trends Biochem. Sci. 11 :287 ；Maniatis 等，1987，kience 236 :1237, 过引用以其整体结合到本文中)、以及响应于特定处理或条件而指导核苷酸序列诱导型表达的调节序列(例如哺乳动物细胞的金属硫蛋白(metallothionin)启动子以及在原核和真核系统两者中的tet-反应性(tet-responsive)和/或链霉素反应性启动子，见上文)。 本领域技术人员应了解的是，表达载体的设计可取决于待转化宿主细胞的选择、所需蛋白质的表达水平等这类因素。可将本发明的表达载体导入宿主细胞从而产生蛋白质或肽，包括由本文所述核酸编码的融合蛋白或肽。另一方面，本发明提供向其中导入本发明的重组表达载体的宿主细胞。宿主细胞可以是任何原核细胞(例如大肠杆菌)或真核细胞(例如酵母、昆虫或哺乳动物细胞(例如CHO细胞))。可通过常规转化或转染技术将载体DNA导入原核或真核细胞。对于哺乳动物细胞的稳定转染，已知的是取决于所采用的表达载体和转染技术，仅一小部分的细胞可将外源DNA整合到其基因组中。为了鉴定和选择这些整合子(integrant)，一般将编码选择标记(例如抗生素抗性)的基因与目标基因一起导入宿主细胞中。优选的选择标记包括赋予抗药性(例如G418、潮霉素和甲氨蝶呤抗性)的选择标记。除其它方法之外，可通过药物选择(例如已掺入选择标记基因的细胞可存活而其它细胞死亡)鉴定用导入的核酸稳定转染的细胞。适应症一方面，本发明提供治疗受试者的方法。该方法对受试者可具有例如整体有益作用，例如可延长受试者的预期寿命。或者，该方法可例如治疗、预防、治愈、减轻或改善(“治疗”)疾病、病症、病况或病(“病况”)。在待按照本发明治疗的病况中的是，特征是α4β7 不当表达或活性的病况。这类病况包括与细胞不当运输，例如白细胞(例如淋巴细胞或单核细胞)运输至胃肠道或包含表达MAdCAM-I的细胞的其它组织中(由于白细胞与表达 MAdCAM-I的细胞结合所致)有关的病况。可以治疗的疾病因此包括炎性肠病，例如溃疡性结肠炎、克罗恩病、乳糜泻(非热带性口炎性腹泻)、肠病伴发血清反应阴性关节病、显微镜下结肠炎或胶原性结肠炎、嗜酸性胃肠炎或直肠与结肠切除术和回肠肛管吻合术后所致的回肠囊袋炎。可按照本发明治疗的其它病况包括胰腺炎、胰岛素依赖性糖尿病、乳腺炎、胆囊炎、胆管炎、胆管周围炎、慢性支气管炎、慢性鼻窦炎、哮喘和移植物抗宿主病。治疗方法和抗原结合蛋白的给予本文提供的某些方法包括将α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白给予受试者， 从而降低在特定病况中起作用的α4β7诱导的生物应答。在具体的实施方案中，本发明的方法包括例如通过给予受试者或在离体方法中，使内源α4β7与α 4β 7抗原结合蛋白接触。术语“治疗”包括减轻或预防病况的至少一种症状或其它方面，或者减轻疾病的严重程度等。抗原结合蛋白不必实现完全治愈或者根除疾病的每种症状或表现就可构成可行的治疗剂。正如相关领域所公认的一样，用作治疗剂的药物可减轻既定疾病状态的严重程度，但是不必消除疾病的每种表现就可被视为有益的治疗剂。同样，预防性给予的治疗在预防病况发作时不必完全有效就可构成可行的预防剂。仅仅是减轻疾病的影响(例如通过减轻其症状数目或严重程度，或者通过提高另一种治疗的疗效，或者通过产生另一种有益的效果)，或者降低受试者中疾病将发生或恶化的可能性便足够。本发明的一个实施方案涉及一种方法，所述方法包括以以下量给予患者α 4β 7拮抗剂达以下时间，所述量和时间足以在反映特定病症的严重程度的指示物的基线方面诱导持续改善。如相关领域所了解的一样，以与适应症相适应的方式将包含本发明的分子的药物组合物给予受试者。药物组合物可通过任何合适的技术给予，包括但不限于胃肠外、局部或通过吸入。如要注射，则可通过例如关节内、静脉内、肌内、病灶内、腹膜内或皮下途径、通过推注或连续输注给予药物组合物。考虑局部给药，例如在疾病或损害部位，透皮递送和从植入物持续释放亦是如此。通过吸入递送包括例如经鼻或经口吸入、使用喷雾器、吸入气雾剂形式的拮抗剂等。其它备选包括眼药水；口服制剂包括丸剂、糖浆剂、锭剂或口香糖；以及局部制剂，例如洗剂、凝胶剂、喷雾剂和软膏剂。还考虑在离体方法中使用抗原结合蛋白。例如，可使患者血液或其它体液与离体结合α 4β 7的抗原结合蛋白接触。抗原结合蛋白可与合适的不溶性基质或固体支持材料
纟口口。有利的是，以组合物的形式给予抗原结合蛋白，所述组合物包含一种或多种其它组分，例如生理上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。任选组合物另包含一种或多种生理活性剂，例如第二炎症抑制物质或免疫抑制物质、抗血管生成物质、镇痛物质等，本文提供了其非排他性实例。在各种具体的实施方案中，除α 4β 7结合性抗原结合蛋白以外，组合物还包含1、2、3、4、5或6种生理活性剂。在一个实施方案中，药物组合物包含本发明的抗原结合蛋白以及一种或多种选自以下的物质缓冲剂、抗氧化剂(例如抗坏血酸)、低分子量多肽(例如小于10个氨基酸的多肽)、蛋白质、氨基酸、糖(例如葡萄糖、蔗糖或糊精)、螯合剂(例如EDTA)、谷胱甘肽、稳定剂和赋形剂。中性缓冲盐水或与同种血清白蛋白混合的盐水是合适稀释剂的实例。根据适当的工业标准，还可加入防腐剂，例如苯甲醇。可使用合适的赋形剂溶液(例如蔗糖)作为稀释剂将组合物配制成冻干物。所采用的剂量和浓度下合适组分对接受者是无毒的。可用于药物制剂的组分的更多实例可参见Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版 (1980)和第 20 版(2000)，Mack Publishing Company, Easton, PA。医疗从业人员使用的药盒包括本发明的α 4β 7抑制物质和用于治疗本文所述任何病况的标签或其它用法说明。在一个实施方案中，药盒包括一种或多种α 4β 7结合性抗原结合蛋白的无菌制剂，其可呈上述组合物的形式，并且可装入一个或多个小瓶。剂量和给药频率可随例如给药途径、所采用的具体抗原结合蛋白、待治疗疾病的性质和严重程度、病况是急性还是慢性以及受试者的身材和一般情况等因素而改变。合适的剂量可通过相关领域已知方法确定，例如在可包括剂量递增研究的临床试验中。例如，可在一段时间内以固定间隔给予本发明的α 4β 7抑制物质例如一次或不止一次。在具体的实施方案中，抗原结合蛋白在至少一个月或更多个月的时间内给予，例如 1、2或3个月，甚至无限期。对于治疗慢性病况，长期治疗一般最有效。然而，对于治疗急性病况，给予较短时间(例如1-6周)便可足够。一般而言，给予抗原结合蛋白直到患者在所选择的一种或多种指示物的基线上表现出医学上相关的改善程度。本发明的具体实施方案包括以约Ing抗原结合蛋白/kg受试者体重/天(“lng/ kg/天”)-约10mg/kg/天、更优选约500ng/kg/天-约5mg/kg/天、最优选约5 μ g/kg/天-约ang/kg/天的剂量，将抗原结合蛋白给予受试者。在其它实施方案中，每周一次、每周二次或者每周三次或更多次将抗原结合蛋白给予成人，以治疗α 4β 7介导的疾病、病况或病症，例如本文公开的医学病症。如要注射，每位成人剂量的有效量的抗原结合蛋白的范围可为l-20mg/m2，优选为约5-12mg/m2。或者，可以给予平顶剂量(flat dose)；该量的范围可为5-100mg/剂。平顶剂量的一种范围为约20-30mg/剂。在本发明的一个实施方案中，通过注射重复给予25mg/剂的平顶剂量。如果采用注射以外的给药途径，则按照标准医疗实践适当调整剂量。治疗方案的一个实例包括在至少三周的时间内每周1-3次注射约20-30mg 抗原结合蛋白的剂量，但可能需要较长期的治疗以引起所需要的改善程度。对于儿科受试者(4-17岁)，一个示例性的合适方案包括每周2-3次给予皮下注射0. 4mg/kg直到25mg抗原结合蛋白的最大剂量。本文所提供的方法的具体实施方案包括每周一次或两次皮下注射0. 5mg-10mg、优选3-5mg的抗原结合蛋白。另一个实施方案涉及一周一次经肺给予(例如通过喷雾器)3mg 以上的抗原结合蛋白。本文提供的治疗方案的实例包括一周一次以1. 5-3mg的剂量皮下注射抗原结合蛋白，以治疗其中α 4β 7起作用的病况。本文提供了这类病况的实例，包括例如前述风湿性病况和其中过量或不当运输表达α 4β 7的细胞起作用的其它病况(本文所述的例如炎性肠病、胰腺炎等)。持续每周给予抗原结合蛋白直到达到所需效果，例如受试者的症状减轻。可按需要恢复治疗，或者可以给予维持剂量。本文所提供的治疗方案的其它实例包括皮下或静脉内给予1、3、5、6、7、8、9、10、 11、12、15或20毫克本发明的α 4β 7抑制剂/千克受试者体重(mg/kg)的剂量。可将剂量一次给予受试者，或以某一间隔不止一次给予，例如一天一次、一周三次、一周两次、一周一次、一月三次、一月两次、一月一次、每两月一次、每三月一次、每六月一次或一年一次。在疗程内，可更改或变动治疗持续时间及治疗剂量和/或治疗频率的任何变化以满足受试者的特殊需要。在另一个实施方案中，以足以引起至少一种反映待治疗病症的严重程度的指示物得到改善(优选持续改善)的量和时间，将抗原结合蛋白给予受试者。可以评价反映受试者病症、疾病或病况的程度的各种指示物，以确定治疗的量和时间是否足够。这类指示物包括例如临床公认的所述病症的疾病严重程度、症状或表现的指示物。在一个实施方案中，如果受试者在相隔2-4周的至少两个时间内都得到改善，则这种改善被视为是持续的。改善程度一般通过由医生确定，医生可根据体征、症状、活组织检查或其它试验结果加以确定， 而且医生还可应用给予受试者的问卷，例如已开发的用于既疾病的生命质量问卷。0 437表达和/或α 4β 7活化和/或其结合配偶体MAdCAM-I的改变与许多病症有关，包括例如胃肠系统炎症性病况。可对患有既定病症的受试者进行筛选，以鉴定 α 4 β 7或MAdCAM-I表达和/或活化发生改变的那些个体，从而鉴定出可从α 4 β 7结合性抗原结合蛋白治疗中获益最大的受试者。因此，本文提供的治疗方法任选包括测定受试者的α 4 β 7或MAdCAM-I活化或表达水平的第一个步骤。可将抗原结合蛋白给予其中α 4 β 7 和/或MAdCAM-I表达和/或活化超出正常的受试者。可在用抗原结合蛋白治疗之前、期间和/或之后监测受试者的α 4β 7或MAdCAM-I 活性水平，以检测α 4 β 7或MAdCAM-I活性的改变(如有任何改变的话)。对于某些病症，0 43 7和/或嫩沉々11-1活性升高的发生率可随病期或疾病的特殊形式等这类因素而改变。 例如，可应用已知技术测定受试者血液或组织样品中的这类活性。可应用任何合适的技术测定A4 β 7或MAdCAMl活性。本发明的方法和组合物的具体实施方案包括使用抗原结合蛋白和一种或多种其它的α 4 β 7拮抗剂，例如，两种或更多种本发明的抗原结合蛋白，或者本发明的抗原结合蛋白和一种或多种其它的α 4β 7拮抗剂。在进一步的实施方案中，抗原结合蛋白单独给予或与用于治疗患者所患病况的其它物质组合给予。这类物质的实例同时包括蛋白质性和非蛋白质性药物两者。当共同给予多种治疗药时，可因此按照相关领域公认的方法调整剂量。 “共同给予”和组合疗法不限于同时给药，而且还包括这样的治疗方案，其中在包括给予患者至少一种其它治疗剂的疗程期间至少一次给予抗原结合蛋白。可与抗原结合蛋白共同给予的其它物质的实例为根据待治疗的具体病况所选择的其它抗原结合蛋白或治疗性多肽。或者，可用于治疗一种上述特定病况的非蛋白质性药物可与α 4β 7拮抗剂共同给予。组合疗法另一方面，本发明提供用抑制α 4β 7的抗原结合蛋白和一种或多种其它治疗治疗受试者的方法。在一个实施方案中，这类组合疗法通过例如攻击肿瘤的多个部位或分子靶标而实现协同或相加效应。可与本发明联用的组合疗法类型包括抑制或激活(适当时) 单一疾病相关途径的多个节点、靶细胞和靶组织内多种细胞类型中的多个途径。在另一个实施方案中，组合疗法包括给予受试者2、3、4、5、6种或更多种本文所述的α4β7激动剂或拮抗剂。在另一个实施方案中，所述方法包括给予受试者两种或更多种共同抑制或激活(直接或间接)α 4β 7介导的信号转导的治疗。这类方法的实例包括使用两种或更多种抑制α 4β 7的抗原结合蛋白的组合、抑制α 4β 7的抗原结合蛋白和一种或多种具有抗炎性质的其它治疗部分(例如非留体抗炎药、类固醇、和/或免疫调节剂)的组合、或者抑制α 4β 7的抗原结合蛋白和一种或多种其它治疗(例如手术、超声或有效减轻炎症的治疗)的组合。可与α 4β 7抑制剂组合的有益物质包括用于治疗例如克罗恩病或溃疡性结肠炎的物质，例如氨基水杨酸盐(例如5-氨基水杨酸)、皮质留类(包括泼尼松 (predisone))、抗生素例如甲硝唑或环丙沙星(或用于治疗例如瘘患者的其它抗生素)以及免疫抑制药，例如硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、甲氨蝶呤、他克莫司和环孢菌素。这类物质的组合亦考虑用于与本发明的α4β7抑制剂一起使用。这类物质可以口服给予或通过另一种途径给予，例如通过栓剂或灌肠剂。此外，一种或多种抗α 4β 7抗体或抗体衍生物可与一种或多种分子或其它治疗组合使用，其中所述其它分子和/或治疗不直接结合或影响α 4β 7，但其组合对治疗或预防待治疗的病况是有效的。例如，α 4β 7抑制剂可与益生菌疗法(probiotic therapy)或用于恢复或维持正常肠菌群的其它疗法组合使用。在一个实施方案中，一种或多种分子和 /或治疗治疗或预防在治疗过程中由一种或多种其它分子或治疗引起的病况，例如恶心、疲倦、脱发、恶病质、失眠等。在其中采用分子和/或其它治疗的组合的各种情况下，各种分子和/或治疗可以有效的任何顺序在任何持续时间内给予，例如同时、序贯或交替给予。在一个实施方案中，治疗方法包括用一种分子或其它治疗完成第一疗程后再开始第二疗程。第一疗程结束与第二疗程开始之间的时间长度可以是使总疗程有效的任何时间长度，例如数秒钟、分钟、小时、天、周、月，甚至数年。在另一个实施方案中，所述方法包括给予一种或多种本文所述的α 4β 7拮抗剂和一种或多种其它治疗(例如治疗性治疗或姑息疗法)。如果方法包括给予受试者不止一种治疗，则要理解的是，给药的顺序、时机、次数、浓度和体积仅限于医学要求和治疗限制， 即可以例如同时、序贯、交替或者按照任何其它方案给予受试者两种治疗。提供下面既是实际的也是预测的实施例用于说明本发明的具体实施方案或特征， 但是不限制其范围。实施例1 抗体的制备通过用表达人α 4 β 7的细胞(瞬时转染的人胚肾(HEK) 293细胞093_a4b7)或稳定转染的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(CH0-a4b7))给XenoMouse XG2 κ λ (kl)和XG4kl小鼠(分别表达人IgG2或IgG4以及人κ和λ轻链的转基因小鼠；Abgenix Inc.，Fremont CA)免疫接种，来产生抗人α 4β 7的单克隆抗体。通过荧光激活细胞分选仪(FACS)分析比较α 4β 7转染的细胞与相应的亲代对照细胞，来监测血清效价。将得自任一种免疫活动 (immunization campaign)的超免疫动物处死，对脾和淋巴结组织进行杂交瘤融合。采用一系列测定法鉴定A4 β 7异二聚体特异性抗体。首先通过微体积荧光测定技术(Fluorometric Microvolume Assay Technology,FMAT Applera Corporation,Foster City CA;高通量筛选细胞检测系统)筛选与模拟转染细胞相比结合α 4β 7转染细胞的杂交瘤上清液。按照文献所述类似方法(Erie，J. Immunol, (1994) 153 :517)，对鉴定为结合α 4 β 7阳性的上清液(得自CH0_a4b7细胞免疫活动的1001种阳性结合上清液和得自 293-a4b7细胞免疫活动的1143种阳性结合上清液)抑制HUT78细胞与MAdCAM-I-Fc粘附的能力进行了评价。在该测定法中，得自CH0-a4b7活动的60种上清液和得自^3_a4b7活动的174种上清液的抑制大于90% (n = 2)，并进行进一步的特异性和功效分析。制备了 α 4β 7转染的293细胞、α 4β1转染的293细胞和α Εβ 7转染的293细胞，并与在抑制测定法中鉴定的杂交瘤上清液用于FACS分析。显示只与α 4β 7转染的细胞结合的上清液被归类为异二聚体特异性的，因为抗该整联蛋白的α 4亚基的抗体也可与 α 4 β 1转染细胞结合，并且结合β 7链的抗体可结合α E β 7转染细胞。通过FACS分析， 还对杂交瘤上清液与食蟹猴α 4β 7转染的293细胞的结合活性进行了分析。选出得自 CH0-a4b7活动的7个品系和得自^3_a4b7活动的25个品系用于亚克隆和进一步的分析。实施例2 抗体的分析将得到的抗体分泌细胞克隆，分离出编码抗体的核酸并进行了测序。采用位点定向诱变制备在一个或多个氨基酸残基上不同于分离序列的变体。抗体和变体的轻链和重链的氨基酸序列见下表1和表2。要了解的是，⑶R和FR区的边界像之前讨论的一样可与下列所显示的不同。表1 轻链的序列分析
权利要求
1.一种具有包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的重链可变区及包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的轻链可变区的分离的α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其中各个相应的CDR选自a)SEQ ID NO :55 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 58 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；b)SEQ ID NO 56 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 59 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；和c)SEQ ID NO 57 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 60 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3。
2.权利要求1的α4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其选自a)以下抗原结合蛋白，其中所述轻链可变区包含SEQID NO :55，所述重链可变区包含 SEQ ID NO 58 ；b)以下抗原结合蛋白，其中所述轻链可变区包含SEQID NO :55，其中一些、大部分或全部N端Glu被环化，所述重链可变区包含SEQ ID NO 58 ；c)以下抗原结合蛋白，其中所述轻链可变区包含SEQID NO :56，所述重链可变区包含 SEQ ID NO :59 ；禾口d)以下抗原结合蛋白，其中所述轻链可变区包含SEQID NO :57，所述重链可变区包含 SEQ ID NO :60。
3.一种具有包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的重链可变区及包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的轻链可变区的分离的α4β7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其中所述轻链⑶R1、⑶R2和⑶R3 选自a)分别与SEQ ID NO :3 的 CDR1、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ；b)分别与SEQ ID NO :5 的 CDR1、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ；c)分别与SEQ ID NO :7 的 CDR1、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDR1、CDR2 和 CDR3 ；d)分别与SEQ ID NO 22 的 CDRl、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；和e)分别与SEQID NO 24的CDRU CDR2和CDR3有至少90%同一性的CDRU CDR2和 CDR3 ；所述重链可变CDR1、CDR2和CDR3来自SEQ ID NO :58。
4.权利要求3的α4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其中所述轻链可变区选自a)与SEQID NO 3有至少90%同一性的轻链可变区；b)与SEQID NO 5有至少90%同一性的轻链可变区；c)与SEQID NO 7有至少90%同一性的轻链可变区；d)与SEQID NO 22有至少90%同一性的轻链可变区；禾口e)与SEQID NO 24有至少90%同一性的轻链可变区；所述重链可变区包含SEQ ID NO :58ο
5.一种具有包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的重链可变区及包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的轻链可变区的分离的α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其中所述轻链⑶R1、⑶R2和⑶R3 选自a)分别与 SEQ ID NO 12 的 CDR1、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDR1、CDR2 和CDR3 ；b)分别与SEQ ID NO 25 的 CDRl、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；和c)分别与SEQ ID NO 26 的 CDRl、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；所述重链CDRl、CDR2和CDR3选自a，)分别与 SEQ ID NO :41 的 CDRl、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；和b，)分别与 SEQ ID NO 54 的 CDRl、CDR2 和 CDR3 有至少 90% 同一性的 CDRl、CDR2 和 CDR3。
6.权利要求5的α4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其中所述轻链可变区选自与 SEQ ID NO :12、25和沈中的任一个有至少90%同一性的可变区，所述重链可变区选自与 SEQ ID NO 41和M中的任一个有至少90%同一性的可变区。
7.一种具有包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的重链可变区及包含⑶R1、⑶R2和⑶R3的轻链可变区的分离的α 4 β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其中各个相应的CDR与选自以下的 ⑶R有至少90%同一性a)SEQ ID NO :10 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 38 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；b)SEQ ID NO 2 的轻链 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 30 的重链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；c)SEQ ID NO 20 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 51 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；d)SEQ ID NO 11 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 39 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；e)SEQID NO :13 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 42 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；f)SEQ ID NO 17 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 46 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；g)SEQ ID NO 8 的轻链 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 36 的重链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；h)SEQ ID NO 19 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 49 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；i)SEQID NO 18 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 47 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；j) SEQ ID NO :21 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 52 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；k) SEQ ID NO 3 的轻链 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 31 的重链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；1) SEQ ID NO 7 的轻链 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 35 的重链 CDRl、CDR2 和CDR3 ；m) SEQ ID NO 6 的轻链 CDRl、CDR2 和 CDR3，以及 SEQ ID NO 34 的重链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；n) SEQ ID NO 1 的轻链 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 29 的重链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；ο) SEQ ID NO 22 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 50 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；P) SEQ ID NO 24 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 40 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；q) SEQ ID NO 9 的轻链 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 37 的重链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；r) SEQ ID NO 4 的轻链 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 32 的重链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；s) SEQ ID NO 28 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 53 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；t) SEQ ID NO 16 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 45 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；U) SEQ ID NO 15 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 44 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；v) SEQ ID NO 14 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 43 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；w) SEQ ID NO 27 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 43 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；χ) SEQ ID NO 5 的轻链 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 33 的重链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；y) SEQ ID NO 12 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 41 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；z) SEQ ID NO 23 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 48 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；a，)SEQ ID NO :25 的轻链 CDRU CDR2 和 CDR3，以及 SEQ ID NO :54 的重链 CDRU CDR2 和CDR3 ；禾口b，)SEQ ID NO 26 的轻链 CDRU CDR2 和 CDR3，以及 SEQ ID NO :54 的重链 CDRU CDR2 和 CDR3。
8.权利要求7的α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其中各个相应的CDR选自a)SEQ ID NO :10 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 38 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；b)SEQ ID NO 2 的轻链 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 30 的重链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；c)SEQ ID NO 20 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 51 的重链 CDRUCDR2 和CDR3 ；d)SEQID NO CDR3 ；e)SEQID NO CDR3 ；f)SEQID NO CDR3 ；g)SEQ ID NO CDR3 ；h)SEQID NO CDR3 ；i)SEQID NO CDR3 ；j)SEQ ID NO CDR3 ；k) SEQ ID NO CDR3 ；1)SEQ ID NO CDR3 ；m) SEQ ID NO CDR3 ；n)SEQ ID NO CDR3 ；ο)SEQ ID NO CDR3 ；P)SEQ TD NO CDR3 ；q)SEQ ID NO CDR3 ；r)SEQ ID NO CDR3 ；s)SEQ ID NO CDR3 ；t)SEQ ID NO CDR3 ；U)SEQ ID NO CDR3 ；v)SEQ ID NO CDR3 ；11的轻链CDRl、CDR2和 13的轻链CDRl、CDR2和 17的轻链CDRl、CDR2和 8的轻链CDRl、CDR2和 19的轻链CDRl、CDR2和 18的轻链CDRl、CDR2和 21的轻链CDRl、CDR2和 3的轻链CDRl、CDR2和 7的轻链CDRl、CDR2和 6的轻链CDRl、CDR2和 1的轻链CDRl、CDR2和 22的轻链CDRl、CDR2和 24的轻链CDRl、CDR2和 9的轻链CDRl、CDR2和 4的轻链CDRl、CDR2和 28的轻链CDRl、CDR2和 16的轻链CDRl、CDR2和 15的轻链CDRl、CDR2和 14的轻链CDRl、CDR2和CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO CDR3,以及 SEQ ID NO39的重链CDRl、CDR2和 42的重链CDRl、CDR2和 46的重链CDRl、CDR2和 36的重链CDRl、CDR2和 49的重链CDRl、CDR2和 ■Al的重链CDRl、CDR2和 52的重链CDRl、CDR2和 31的重链CDRl、CDR2和 35的重链CDRl、CDR2和 34的重链CDRl、CDR2和 29的重链CDRl、CDR2和 50的重链CDRl、CDR2和 40的重链CDRl、CDR2和 37的重链CDRl、CDR2和 32的重链CDRl、CDR2和 53的重链CDRl、CDR2和 45的重链CDRl、CDR2和 44的重链CDRl、CDR2和 43的重链CDRl、CDR2和5w) SEQ ID NO 27 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 43 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；χ) SEQ ID NO 5 的轻链 CDRl、CDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 33 的重链 CDRl、CDR2 和 CDR3 ；y) SEQ ID NO 12 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 41 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；z) SEQ ID NO 23 的轻链 CDRUCDR2 和 CDR3,以及 SEQ ID NO 48 的重链 CDRUCDR2 和 CDR3 ；a，)SEQ ID NO :25 的轻链 CDRU CDR2 和 CDR3，以及 SEQ ID NO :54 的重链 CDRU CDR2 和CDR3 ；禾口b，)SEQ ID NO 26 的轻链 CDRU CDR2 和 CDR3，以及 SEQ ID NO :54 的重链 CDRU CDR2 和 CDR3。
9.权利要求7的α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其中a)所述轻链可变区与SEQID NO: 10有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID NO 38有至少90%同一性；b)所述轻链可变区与SEQID NO :2有至少90%同一性，和所述重链可变区与SEQ ID NO 30有至少90%同一性；c)所述轻链可变区与SEQ NO 51有至少90%同一性；d)所述轻链可变区与SEQ NO 39有至少90%同一性；e)所述轻链可变区与SEQ NO 42有至少90%同一性；f)所述轻链可变区与SEQ NO :46有至少90%同一性；g)所述轻链可变区与SEQID NO :8有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID NO: 36有至少90%同一性；h)所述轻链可变区与SEQ NO 49有至少90%同一性；i)所述轻链可变区与SEQ NO 47有至少90%同一性；j)所述轻链可变区与SEQ NO 52有至少90%同一性；k)所述轻链可变区与SEQ ID NO :3有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID NO 31有至少90%同一性；1)所述轻链可变区与SEQ ID NO :7有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID N0 ；35有至少90%同一性；m)所述轻链可变区与SEQ ID NO :6有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID N0: ；34有至少90%同一性；ID NO :20有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID ID NO :11有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID ID NO 13有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ IDIDNO 17有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQIDID NO 19有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID ID NO 18有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID ID NO :21有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ IDη)所述轻链可变区与SEQ ID NO :1有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID NO: 四有至少90%同一性；ο)所述轻链可变区与SEQ ID NO :22有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID NO 50有至少90%同一性；P)所述轻链可变区与SEQ ID NO 24有至少90 %同一性，所述重链可变区与SEQ ID NO 40有至少90%同一性；q)所述轻链可变区与SEQ ID NO :9有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID NO: 37有至少90%同一性；r)所述轻链可变区与SEQ ID NO :4有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID NO 32有至少90%同一性；s)所述轻链可变区与SEQ NO 53有至少90%同一性；t)所述轻链可变区与SEQ NO 45有至少90%同一性；u)所述轻链可变区与SEQ NO :44有至少90%同一性；ν)所述轻链可变区与SEQ NO 43有至少90%同一性；w)所述轻链可变区与SEQ NO 43有至少90%同一性；χ)所述轻链可变区与SEQ ID NO :5有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID NO: 33有至少90%同一性；y)所述轻链可变区与SEQ ID NO :12有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID NO 41有至少90%同一性；ζ)所述轻链可变区与SEQ ID NO 23有至少90 %同一性，所述重链可变区与SEQ ID NO 48有至少90%同一性；a，)所述轻链可变区与SEQ ID NO 25有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID NO 54有至少90%同一性；和b，)所述轻链可变区与SEQ ID NO 26有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQ ID NO力4有至少90%同一性。
10.权利要求9的分离的α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其中a)所述轻链可变区包含SEQID NO 10，所述重链可变区包含SEQ ID NO 38 ；b)所述轻链可变区包含SEQID NO :2，所述重链可变区包含SEQ ID NO 30 ；c)所述轻链可变区包含SEQID NO :20，所述重链可变区包含SEQ ID NO 51 ；d)所述轻链可变区包含SEQID NO 11，所述重链可变区包含SEQ ID NO 39 ；e)所述轻链可变区包含SEQID NO 13，所述重链可变区包含SEQ ID NO 42 ；f)所述轻链可变区包含SEQID NO 17，所述重链可变区包含SEQ ID NO 46 ；g)所述轻链可变区包含SEQID NO :8，所述重链可变区包含SEQ ID NO 36 ；h)所述轻链可变区包含SEQID NO 19，所述重链可变区包含SEQ ID NO 49 ；IDNO J8有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQIDID NO 16有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQIDIDNO 15有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQIDIDNO 14有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQIDIDNO :27有至少90%同一性，所述重链可变区与SEQIDi)所述轻链可变区包含SEQIDNO 18，所述:重链可变区包含SEQ ID NO47 ；j)所述轻链可变区包含SEQIDNO :21，所述:重链可变区包含SEQ ID NO52 ；k)所述轻链可变区包含SEQIDNO :3，所述重链可变区包含SEQ ID NO 31 ；1)所述轻链可变区包含SEQIDNO :7，所述重链可变区包含SEQ ID NO 35 ；m)所述轻链可变区包含SEQIDNO :6，所述重链可变区包含SEQ ID NO 34 ；η)所述轻链可变区包含SEQIDNO :1，所述重链可变区包含SEQ ID NO 29 ；ο)所述轻链可变区包含SEQIDNO 22，所述:重链可变区包含SEQ ID NO50 ；P)所述轻链可变区包含SEQIDNO丨4，所述:重链可变区包含SEQ ID NO40 ；q)所述轻链可变区包含SEQIDNO :9，所述重链可变区包含SEQ ID NO 37 ；r)所述轻链可变区包含SEQIDNO :4，所述重链可变区包含SEQ ID NO 32 ；s)所述轻链可变区包含SEQIDNO丨8，所述:重链可变区包含SEQ ID NO53 ；t)所述轻链可变区包含SEQIDNO 16，所述:重链可变区包含SEQ ID NO45 ；U)所述轻链可变区包含SEQIDNO 15，所述:重链可变区包含SEQ ID NO44 ；ν)所述轻链可变区包含SEQIDNO 14，所述:重链可变区包含SEQ ID NO43 ；W)所述轻链可变区包含SEQIDNO 27，所述:重链可变区包含SEQ ID NO43 ；χ)所述轻链可变区包含SEQIDNO :5，所述重链可变区包含SEQ ID NO 33 ；y)所述轻链可变区包含SEQIDNO 12，所述:重链可变区包含SEQ ID NO41 ；ζ)所述轻链可变区包含SEQIDNO 23，所述:重链可变区包含SEQ ID NO48 ；a，)所述轻链可变区包含SEQ ID NO :25，所述重链可变区包含SEQ ID NO 54 ； b，)所述轻链可变区包含SEQ ID NO 26，所述重链可变区包含SEQ ID NO :54。
11.权利要求1-10中任一项的分离的α4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其还包含轻链恒定区和重链恒定区。
12.权利要求11的分离的α4β7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其中所述轻链恒定区选自a)κ型轻链恒定区；和b)λ型轻链恒定区； 所述重链恒定区选自 a，)IgD抗体的恒定区； b，)IgE抗体的恒定区； c，) IgM抗体的恒定区； d’ ) IgGl抗体的恒定区； e，)IgG2抗体的恒定区； f' )IgG3抗体的恒定区； g，) IgG4抗体的恒定区；和h’ )在铰链区中具有降低形成H链内二硫键的趋势的至少一个突变的IgG4抗体的恒定区。
13.权利要求12的分离的α4β7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其中所述轻链恒定区选自a)包含SEQ ID NO 70的多肽；b)与SEQID NO 70有至少90%同一性的多肽；c)具有其中剔除了1、2、3、4或5个N端和/或C端氨基酸的如SEQ ID NO 70所示氨基酸序列的多肽；和d)加入一种或多种翻译后修饰的a)、b)或c)的多肽；所述重链恒定区选自a，)包含SEQ ID NO 72的多肽；b，)与SEQ ID NO 72有至少90%同一性的多肽；c，)具有其中剔除了 1、2、3、4或5个N端和/或C端氨基酸的如SEQ ID NO 70所示氨基酸序列的多肽；和d’ )加入一种或多种翻译后修饰的a’)、b’)或c’)的多肽。
14.一种分离的α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其在CD4+记忆T细胞结合测定法中的EC50小于;35ng/ml。
15.权利要求14的分离的α4β7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其在⑶4+记忆T细胞结合测定法中的EC50小于10ng/ml。
16.一种分离的α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其在MAdCAM竞争测定法中的 IC50 小于 30ng/m。
17.权利要求16的分离的α4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白，其在MAdCAM竞争测定法中的IC50小于10ng/ml。
18.—种结合α4β7的S250N突变体的分离的α 4 β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白。
19.一种编码权利要求1-18中任一项的抗原结合蛋白的分离核酸。
20.一种包含权利要求19的核酸的载体。
21.一种用权利要求20的载体转染或转化的分离宿主细胞。
22.—种产生抗原结合蛋白方法，所述方法包括在促进表达的条件下培养权利要求21 的宿主细胞，并从培养基中回收蛋白质。
23.一种组合物，所述组合物包含权利要求1-18中任一项的多肽和生理学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体。
24.—种抑制α 4β 7的至少一种活性的方法，所述方法包括使表达α 4β 7的细胞与权利要求1-18中任一项的α4β7异二聚体特异性抗原结合蛋白接触，使得所述细胞与 MAdCAM-I的粘附被部分或完全抑制。
25.—种抑制表达α 4β 7的细胞运输至包含表达MAdCAM-I的细胞的组织中的方法，所述方法包括使表达α 4β 7的细胞与权利要求1-18中任一项的α 4β 7异二聚体特异性抗原结合蛋白接触，使得所述细胞与MAdCAM-I的粘附被部分或完全抑制。
26.一种治疗患有以下病况的个体的方法，所述病况的特征是表达α 4β 7的细胞不恰当地运输至包含表达MAdCAM-I的细胞的组织中，所述方法包括以足以抑制表达α4β7的细胞运输至包含表达MAdCAM-I的细胞的组织中的量，将权利要求23的组合物给予所述个体。
27.权利要求沈的方法，其中所述病况是炎性肠病。
28.权利要求27的方法，其中所述病况选自溃疡性结肠炎、克罗恩病、乳糜泻(非热带性口炎性腹泻)、肠病伴发血清反应阴性关节病、显微镜下结肠炎或胶原性结肠炎、嗜酸性胃肠炎以及直肠与结肠切除术和回肠肛管吻合术后所致的回肠囊袋炎。
29.权利要求沈的方法，其中所述病况选自胰腺炎、胰岛素依赖性糖尿病、乳腺炎、胆囊炎、胆管炎、胆管周围炎、慢性支气管炎、慢性鼻窦炎、哮喘和移植物抗宿主病。
30.一种足以用作杂交探针、PCR引物或测序引物的分离多核苷酸，其是权利要求19的核酸分子的片段或其互补序列。
全文摘要
本文公开了α4β7异二聚体特异性抗原结合蛋白、编码所述α4β7异二聚体特异性抗原结合蛋白的核酸以及制备和使用所述α4β7异二聚体特异性抗原结合蛋白的方法。
文档编号C07K16/28GK102388068SQ201080013557
公开日2012年3月21日 申请日期2010年3月16日 优先权日2009年3月20日
发明者F·W·雅各布森, I·富尔茨, T·阿罗拉, 许海琳 申请人:安姆根有限公司