专利名称：一种高纯度樱黄素的制备方法
技术领域：
本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种高纯度樱黄素的制备方法。
背景技术：
樱黄素(Prunetin)为5，4' - 二羟基_7_甲氧基异黄酮，CAS号552-59-0，熔点 236-2380C (甲醇)，分子式C16H12O5,分子量284. 26，分子结构式樱黄素为李属异黄酮物质，具有抗炎、降血脂作用，同时还具有植物雌激素样作用。如专利“一种含樱黄素的药物组合物及其在医药上的应用”和专利“一种含红车轴草素、 樱黄素的药物组合物及其在医药上的应用”都实验证实其药理作用。从植物中提取樱黄素工艺，很少有披露，多属研究型工艺或低含量提取物。如房士明以昌都锦鸡儿为原料，采用 95%乙醇浸泡提取，得到浸膏经硅胶柱反复分离得到包括樱黄素在内的15个化合物。还有马强等以红车轴草为原料50%乙醇回流提取，提取液浓缩后乙酸乙酯萃取，再经硅胶柱和凝胶柱反复分离，得到包括樱黄素在内的8个化合物。现有制备樱黄素工艺，生产过程有大量的硅胶废弃物产生，操作繁琐，重现性差。因此提供一种制备高纯度的樱黄素是必要的， 可以更好地研究樱黄素的药理作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种樱黄素的制备方法，采用高速逆流色谱法，可以快速高效得到高纯度樱黄素。为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案1)以昌都锦鸡儿为原料，粉碎，5-8倍量低碳醇超声提取，提取液减压浓缩，浓缩液加入适量水分散，加入聚酰胺树脂吸附，水、乙醇梯度洗脱，收集目标成分，减压浓缩后用乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩，得浓缩液；2)将氯仿、甲醇、酸性水溶液在分液漏斗中充分混合，静置分层后，取上相做固定相，充满逆流色谱仪柱，开转主机，泵入下相做流动相，平衡后，由进样阀注进浓缩液，根据检测器图谱，收集组分，回收试剂，干燥即得高纯度樱黄素。步骤1)中所述的低碳醇为70-90%的甲醇或乙醇溶液。步骤1)中所述的超声提取次数为2-3次，每次30-40min。步骤1)中所述的水、乙醇梯度洗脱为水洗无糖色一5-7BV30-50%乙醇溶液洗脱 —4-5BV70-80%乙醇溶液洗脱。
步骤幻所述的酸性水溶液为pH2-3的磷酸水溶液。步骤2)所述的氯仿、甲醇、酸性水溶液混合比例为7-8 5-6 3。步骤2)述的主机转速700-1000rpm，流动相流速l_3ml/min。本发明的优点是工艺采用聚酰胺树脂和高速逆流色谱联合制备樱黄素，生产周期短、操作简单、制备量大，收率高，而且生产过程减少了废物的产生。
具体实施例方式下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。实施例1:取昌都锦鸡儿粉碎，取10kg，投入超声提取罐，加入8倍量90%乙醇超声提取 40min,滤出液体，再加入6倍量80%乙醇溶液超声提取30min，合并2次提取液减压浓缩无醇，加适量水分散后，加入聚酰胺树脂柱饱和吸附，水洗树脂柱无糖色后，取7BV30%乙醇溶液洗脱弃去洗脱液，再用4BV80%乙醇溶液洗脱目的成分，洗脱液减压浓缩后用等体积乙酸乙酯萃取3次，萃取液减压浓缩，得浓缩液50ml。取氯仿、甲醇、磷酸水(pH2)溶液，按7 5 3比例在分液漏斗中充分混合，静置分层后，取上相做固定相，充满逆流色谱仪柱，开转主机，转速调整为700rpm，以9ml/min泵入下相做流动相，平衡后，流速调整为3ml/min，由进样阀注进浓缩液，根据检测器图谱，收集组分，回收试剂，干燥得樱黄素1. 3g，经HPLC检测，含量98. 2%。实施例2 取昌都锦鸡儿粉碎，取10kg，投入超声提取罐，加入6倍量80%甲醇超声提取 30min，提取3次，提取液减压浓缩无醇，加适量水分散后，加入聚酰胺树脂柱饱和吸附，水洗树脂柱无糖色后，取5BV50%乙醇溶液洗脱弃去洗脱液，再用5BV70%乙醇溶液洗脱目的成分，洗脱液减压浓缩后用等体积乙酸乙酯萃取4次，萃取液减压浓缩，得浓缩液60ml。取氯仿、甲醇、磷酸水(pro)溶液，按8 6 3比例在分液漏斗中充分混合，静置分层后，取上相做固定相，充满逆流色谱仪柱，开转主机，转速调整为800rpm，以6ml/min泵入下相做流动相，平衡后，流速调整为2ml/min，由进样阀注进浓缩液，根据检测器图谱，收集组分，回收试剂，干燥得樱黄素1. Ig,经HPLC检测，含量98. 5%。实施例3 取昌都锦鸡儿粉碎，取10kg，投入超声提取罐，加入5倍量70 %甲醇超声提取 30min，提取3次，提取液减压浓缩无醇，加适量水分散后，加入聚酰胺树脂柱饱和吸附，水洗树脂柱无糖色后，取5BV50%乙醇溶液洗脱弃去洗脱液，再用5BV75%乙醇溶液洗脱目的成分，洗脱液减压浓缩后用等体积乙酸乙酯萃取3次，萃取液减压浓缩，得浓缩液65ml。取氯仿、甲醇、磷酸水(pro)溶液，按8 5 3比例在分液漏斗中充分混合，静置分层后，取上相做固定相，充满逆流色谱仪柱，开转主机，转速调整为lOOOrpm，以6ml/min 泵入下相做流动相，平衡后，流速调整为lml/min，由进样阀注进浓缩液，根据检测器图谱， 收集组分，回收试剂，干燥得樱黄素1. 4g，经HPLC检测，含量97. 7%。
权利要求
1.一种高纯度樱黄素的制备方法，其特征在于包括以下步骤1)以昌都锦鸡儿为原料，粉碎，5-8倍量低碳醇超声提取，提取液减压浓缩，浓缩液加入适量水分散，加入聚酰胺树脂吸附，水、乙醇梯度洗脱，收集目标成分，减压浓缩后，用乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩，得浓缩液；2)将氯仿、甲醇、酸性水溶液在分液漏斗中充分混合，静置分层后，取上相做固定相，充满逆流色谱仪柱，开转主机，泵入下相做流动相，平衡后，由进样阀注进浓缩液，根据检测器图谱，收集组分，回收试剂，干燥即得高纯度樱黄素。
2.根据权利要求1所述的高纯度樱黄素的制备方法，其特征在于步骤1)中所述的低碳醇为70-90%的甲醇或乙醇溶液。
3.根据权利要求1所述的高纯度樱黄素的制备方法，其特征在于步骤1)中所述的超声提取次数为2-3次，每次30-40min。
4.根据权利要求1所述的高纯度樱黄素的制备方法，其特征在于步骤1)中所述的水、 乙醇梯度洗脱为水洗至无糖色一5-7BV30-50%乙醇溶液洗脱一4-5BV70-80%乙醇溶液洗脱。
5.根据权利要求1所述的高纯度樱黄素的制备方法，其特征在于步骤2)所述的酸性水溶液为PH2-3的磷酸水溶液。
6.根据权利要求1所述的高纯度樱黄素的制备方法，其特征在于步骤幻所述的氯仿、 甲醇、酸性水溶液混合比例为7-8 5-6 3。
7.根据权利要求1所述的高纯度樱黄素的制备方法，其特征在于步骤幻所述的主机转速 700-1000rpm，流动相流速 l_3ml/min。
全文摘要
本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种高纯度樱黄素的制备方法。方法步骤是1)以昌都锦鸡儿为原料，粉碎，5-8倍量低碳醇超声提取，提取液减压浓缩，浓缩液加入适量水分散，加入聚酰胺树脂吸附，水、乙醇梯度洗脱，收集目标成分，减压浓缩后，用乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩，得浓缩液；2)将氯仿、甲醇、酸性水溶液在分液漏斗中充分混合，静置分层后，取上相做固定相，充满逆流色谱仪柱，开转主机，泵入下相做流动相，平衡后，由进样阀注进浓缩液，根据检测器图谱，收集组分，回收试剂，干燥即得高纯度樱黄素。本发明工艺易操作、生产周期短、收率高，适合工业化制备。
文档编号C07D311/40GK102250049SQ20111015167
公开日2011年11月23日 申请日期2011年6月7日 优先权日2011年6月7日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司