5-氟尿嘧啶衍生物、5-氟尿嘧啶免疫原及其抗体与5-氟尿嘧啶检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种5-氟尿嘧啶衍生物、5-氟尿嘧啶免疫原及其抗体与5-氟尿嘧啶检测试剂盒。本发明的5-氟尿嘧啶衍生物具有式(Ⅰ)所示的结构：其中，R为-(CH2)n-COO-，n为1至20之间的整数。具有上述结构式的5-氟尿嘧啶衍生物与特定的载体相结合，使得所制备的5-氟尿嘧啶免疫原具有高免疫原性，其免疫动物所产生的抗体具有更强的灵敏度和特异性，与5-氟尿嘧啶的特异结合能力强。通过使用均相酶免疫检测技术能够实现在全自动生化分析仪上对5-氟尿嘧啶的高通量、快速化检测，且具有操作简便、灵敏度高、特异性强、结果准确等优点，还能有效降低5-氟尿嘧啶检测成本，有利于临床推广使用。
【专利说明】5-氟尿嘧啶衍生物、5-氟尿嘧啶免疫原及其抗体与5-氟尿 嘧啶检测试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明涉及免疫检测领域，具体涉及一种5-氟尿嘧啶衍生物、5-氟尿嘧啶免疫原 及其抗体与5-氟尿嘧啶检测试剂盒。
【背景技术】
[0002] 5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5-FU)，其结构式如式（III)所示：
[0003]
【权利要求】
1. 一种5-氟尿嘧啶衍生物，其特征在于，具有式（I)所示的结构式：
其中，R为-(CH2)n-C00-，n为1至20之间的整数。
2. -种5-氟尿嘧啶免疫原，其特征在于，具有式（II)所示的结构式：
其中，R为连接基团_(CH2)n-C00-，n是1至20之间的整数，载体为具有免疫原性的蛋 白质或多肽；优选所述载体为血清蛋白、血蓝蛋白或甲状腺球蛋白中的任意一种。
3. -种5-氟尿嘧啶免疫原的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括： 制备权利要求1所述的5-氟尿嘧啶衍生物：以及 将所述5-氟尿嘧啶衍生物与载体进行连接，得到所述5-氟尿嘧啶免疫原； 其中，所述载体为具有免疫原性的蛋白质或多肽。
4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述5-氟尿嘧啶衍生物由5-氟尿嘧 啶和Br-(CH2)n-COOH在碱性条件下经取代反应制备而成；优选地，当n= 1时，所述5-氟 尿嘧啶衍生物的制备步骤如下：
5. 根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，所述5-氟尿嘧啶衍生物与所述 载体连接的步骤包括： 步骤S1，制备载体溶液和5-氟尿嘧啶衍生物溶液；优选所述载体为血清蛋白、血蓝蛋 白或甲状腺球蛋白中的任意一种； 步骤S2,将所述5-氟尿嘧啶衍生物溶液滴加至所述载体溶液中，得到5-氟尿嘧啶免疫 原粗品； 步骤S3,对所述免疫原粗品进行纯化，得到所述5-氟尿嘧啶免疫原；优选所述纯化采 用透析的方式进行。
6. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1包括： 步骤S11，将所述载体溶解于0. 15?0. 25M，pH8. 2?8. 7的磷酸钠缓冲液中，得到所 述载体溶液；其中，所述载体与所述磷酸缓冲液的质量体积比为3:1?5:1，优选为4:1 ; 步骤S12,将所述5-氟尿嘧啶衍生物与8?12mM，pH4. 8?5. 3的磷酸钾缓冲液和有 机溶剂混合，得到混合物；其中，所述有机溶剂包括二甲基甲酰胺、乙醇、1-乙基-3-(_3-二 甲氨丙基）碳二亚胺和N-羟基硫代琥珀酰亚胺； 优选所述5-氟尿嘧啶衍生物与所述1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基）碳二亚胺和N-羟 基硫代琥珀酰亚胺的质量比为1 :〇. 8?1. 1 :0. 20?0. 30 ;所述二甲基甲酰胺与所述乙醇 和所述磷酸钾缓冲液的体积比为1 :〇. 8?1. 1 :1. 8?2. 2 ;更优选所述5-氟尿嘧啶衍生物 与所述二甲基甲酰胺、所述乙醇和所述磷酸钾缓冲液的总体积的质量体积比为95?105 : 6?8; 步骤S13,对所述混合物在室温下进行搅拌20?40min，得到所述5-氟尿嘧啶衍生物 溶液。
7. 根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中包括： 步骤S21，将所述5-氟尿嘧啶衍生物溶液滴加至所述载体溶液中，得到混合溶液； 步骤S22,对所述混合溶液进行低温搅拌，得到所述免疫原粗品； 其中，所述5-氟尿嘧啶衍生物与所述载体的质量比为0. 8?1. 1 :0. 8?1. 1 ;所述低 温搅拌的温度为2?8°C，所述低温搅拌的时间大于等于24h。
8. -种抗5-氟尿喃啶抗体，所述抗5-氟尿喃啶抗体由免疫原免疫动物后得到，其特征 在于，所述免疫原为权利要求2所述的5-氟尿嘧啶免疫原。
9. 根据权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体为多克隆抗体或单克隆抗体。
10. 根据权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述抗体为完整的蛋白或者能够与所述 免疫原特异性结合的多肽片段。
11. 根据权利要求8所述的抗体，其特征在于，所述免疫原免疫的所述动物包括兔、山 羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马中任意一种。
12. -种5-氟尿嘧啶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的 5-氟尿嘧啶衍生物和/或权利要求8至11中任一项所述的抗5-氟尿嘧啶抗体。
【文档编号】C07D239/553GK104478813SQ201410799522
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月20日 优先权日:2014年12月20日
【发明者】虞留明, 邓拥军, 陈丽峰, 陆丽华, 余琳 申请人:苏州博源医疗科技有限公司