本发明涉及改进的一种奥利万星的制备方法。具体地说，本发明涉及A82846B的区域选择性胺基烷基化。
背景技术：
糖肽抗生素是由微生物产生，或由微生物产生并进行部分修饰的一大类物质。万古霉素和替考拉宁为市售的抗菌产品。在上世纪九十年代发现的糖肽中，包括称作A82846A（也称作ereomomycin）、A82846B（也称作氯东方霉素chloroorienticinA）、A82846C（也称作东方霉素orienticinC）及东方霉素A。已经对天然存在的糖肽进行了多种修饰，其中一种是对糖肽中的反应性胺的还原烷基化的修饰。A82846B结构如下：
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奥利万星是由Eli Lilly开发的一种新型的半合成糖肽类抗生素。于2014.08.06在美国上市，批准的剂型为注射用冻干粉针，批准的剂量为1200mg，批准的适应症为革兰氏阳性菌特定敏感株引起的急性细菌性皮肤和皮肤结构感染（ABSSSI）。其结构如下：。
由于半衰期的延长，相较万古霉素等的多剂量治疗方案，奥利万星可单剂量给药，是FDA批准用于ABSSSI治疗的首个和唯一一种单剂量治疗方案的抗生素，患者仅接受一次Orbactiv输液，整个治疗方案便已结束。
CN1119649为奥利万星的化合物专利，并公开了奥利万星的制备方法：将A82846B在甲醇的存在下与4’-氯联苯甲醛反应生成席夫碱，再加入氰基硼氢钠进行还原，后纯化得到[4-（4-氯苯基）苄基-A82846B]，即奥利万星，但这种方法选择性不高。制备奥利万星需要将A82846B二糖的胺基（N4）烷基化，但同时A82846B的亮氨酸的胺基（N1）和/或单糖（N6）也同样能够烷基化，这样产物便纯度下降，产率只有约50%。
CN100463917公开了改进的奥利万星的制备方法：在还原剂的存在下使所述糖肽抗生素的可溶性铜配合物在甲醇中与4’-氯联苯甲醛反应，再进行还原，得到奥利万星和铜1:1配比的配体，并不直接得到奥利万星。该配合物的还原烷基化虽然有利于区域选择性烷基化和提高产率，但反应操作和后处理繁琐，且直接得到的是奥利万星的铜配合物，还需要将奥利万星从铜配合物中释放出来。
技术实现要素：
本发明公开了一种新的奥利万星的制备方法。本发明研究人员意外地发现，使用Brettphos催化剂和Brettphos配体能提高A82846B区域烷基化的选择性，即提高A82846B二糖的胺基（N4）烷基化，而降低亮氨酸的胺基（N1）和单糖胺基（N6）的烷基化，从而提高目标化合物奥利万星的产率。
Brettphos催化剂即为[2-(二环己基磷)-3,6-甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯][2-(2-氨基乙基)苯]氯化钯，Brettphos配体即为2-(二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2'-4'-6'-三异丙基-1,1'-联苯。
本发明制备方法以A82846B乙酸盐为原料，在Brettphos催化剂、Brettphos配体、碱和溶剂的存在下，与胺基烷基化试剂化合物a进行反应，一步生成奥利万星。
化合物a
X为卤素，优先X为Br，即4-(溴甲基)-4’-联苯氯。
溶剂优选非质子性溶剂，如1,4-二氧六环、甲苯、DMF、四氯化碳等，优选1,4-二氧六环和甲苯。碱包括叔丁醇钾、叔丁醇钠、六甲基二硅基胺基锂等，其中优选叔丁醇钾。
本发明需要在N2保护下进行反应，反应温度为100℃，反应时间为8-12小时不等，催化剂与配体摩尔比为1:1，原料A82846B乙酸盐、化合物a与催化剂的摩尔比为1.2:1:0.025。
使用Brettphos催化剂和Brettphos配体进行交叉偶联反应时，对伯胺选择性较高，基本不与仲胺反应。但制备奥利万星的原料A82846B二糖的胺基（N4）和单糖胺基（N6）均为伯胺，制备奥利万星需要将二糖的胺基（N4）烷基化，而保持单糖胺基（N6）为游离状态。本发明研究人员使用多种胺基烷基化方法来制备奥利万星，意外地发现，当使用Brettphos催化剂和Brettphos配体进行催化烷基化时，能提高选择性，即A82846B二糖的胺基（N4）烷基化的比例大大增加，单糖胺基（N6）的烷基化大大降低。
本发明与现有技术相比，为“一锅煮”反应，反应易于操作，后处理简单，且产率由50%左右提高至约65%-71%，在简化反应步骤的同时还提高了胺基烷基化的选择性，使得奥利万星的产率得以提高，提供了一条可能的适合大工业生产的路线。
具体实施例
本发明所用Brettphos催化剂、Brettphos配体均购自百灵威科技，A82846B乙酸盐由本公司发酵得到A82846B后成盐所得。
实施例1
N2保护下，反应瓶中加入Brettpho催化剂（10.1mg，1.26×10-2mmol）、Brettphos配体（6.77mg，1.26×10-2mmol），4-(溴甲基)-4’-联苯氯（0.142g，0.504mmol）、A82846B乙酸盐（1.0g，0.605mmol）、叔丁醇钾（0.27g，2.42mmol）和1,4-二氧六环10ml。反应混合物加热至100℃，保温反应8小时。反应完毕，反应液过滤，除去不溶物，所得滤液经Preparative HPLC纯化，制备液脱盐并用真空浓缩除去有机溶剂，冻干，得最终产品奥利万星0.769g，收率为70.88%。
实施例2
N2保护下，反应瓶中加入Brettphos催化剂（10.1mg，1.26×10-2mmol）、Brettphos配体（6.77mg，1.26×10-2mmol），4-(氯甲基)-4’-联苯氯（0.120g，0.504mmol）、A82846B乙酸盐（1.0g，0.605mmol）、叔丁醇钾（0.27g，2.42mmol）和甲苯10ml。反应混合物加热至100℃，保温反应10小时。反应完毕，反应液过滤，除去不溶物，所得滤液经Preparative HPLC纯化，制备液脱盐并用真空浓缩除去有机溶剂，冻干，得最终产品奥利万星0.725g，收率为66.82%。
实施例3
N2保护下，反应瓶中加入Brettphos催化剂（10.1mg，1.26×10-2mmol）、Brettphos配体（6.77mg，1.26×10-2mmol），4-(溴甲基)-4’-联苯氯（0.142g，0.504mmol）、A82846B乙酸盐（1.0g，0.605mmol）、叔丁醇钠（0.23g，2.42mmol）和1,4-二氧六环10ml。反应混合物加热至100℃，保温反应8.5小时。反应完毕，反应液过滤，除去不溶物，所得滤液经Preparative HPLC纯化，制备液脱盐并用真空浓缩除去有机溶剂，冻干，得最终产品奥利万星0.756g，收率为69.68%。
实施例4
N2保护下，反应瓶中加入Brettphos催化剂（10.1mg，1.26×10-2mmol）、Brettphos配体（6.77mg，1.26×10-2mmol），4-(碘甲基)-4’-联苯氯（0.165g，0.504mmol）、A82846B乙酸盐（1.0g，0.605mmol）、叔丁醇钾（0.27g，2.42mmol）和甲苯10ml。反应混合物加热至100℃，保温反应12小时。反应完毕，反应液过滤，除去不溶物，所得滤液经Preparative HPLC纯化，制备液脱盐并用真空浓缩除去有机溶剂，冻干，得最终产品奥利万星0.712g，收率为65.62%。
实施例5
N2保护下，反应瓶中加入Brettphos催化剂（10.1mg，1.26×10-2mmol）、Brettphos配体（6.77mg，1.26×10-2mmol），4-(溴甲基)-4’-联苯氯（0.142g，0.504mmol）、A82846B乙酸盐（1.0g，0.605mmol）、六甲基二硅基胺基锂（0.40g，2.42mmol）和1,4-二氧六环10ml。反应混合物加热至100℃，保温反应8小时。反应完毕，反应液过滤，除去不溶物，所得滤液经Preparative HPLC纯化，制备液脱盐并用真空浓缩除去有机溶剂，冻干，得最终产品奥利万星0.764g，收率为70.41%。
实施例6
N2保护下，反应瓶中加入Brettphos催化剂（10.1mg，1.26×10-2mmol）、Brettphos配体（6.77mg，1.26×10-2mmol），4-(溴甲基)-4’-联苯氯（0.142g，0.504mmol）、A82846B乙酸盐（1.0g，0.605mmol）、叔丁醇钾（0.27g，2.42mmol）和甲苯10ml。反应混合物加热至100℃，保温反应8小时。反应完毕，反应液过滤，除去不溶物，所得滤液经Preparative HPLC纯化，制备液脱盐并用真空浓缩除去有机溶剂，冻干，得最终产品奥利万星0.765g，收率为70.51%。
实施例7
实施例1-6 Preparative HPLC纯化条件（克级）：
色谱柱尺寸：50×250mm
填料：反相C8填料，孔径：100A，粒径：8~10μm
检测波长：280 nm
流动相A：5‰（三乙胺）/水溶液，用磷酸调节pH=3.0
流动相B：乙腈
流速：50mL/min
梯度：40分钟内，乙腈浓度由5%提高至95%。