膨胀床法分离纯化藻蓝蛋白的方法与流程

文档序号:12573266阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种膨胀床法分离纯化藻蓝蛋白的方法,其特征在于包括如下步骤:

(1)制备藻蓝蛋白粗提液:称取螺旋藻干粉,用反复冻融法进行细胞破壁,提取藻蓝蛋白;

(2)吸附剂Streamline DEAE静态吸附藻蓝蛋白;

(3)膨胀床吸附分离藻蓝蛋白。

2.根据权利要求1所述的膨胀床法分离纯化藻蓝蛋白的方法,其特征在于:在步骤(1)中,以螺旋藻干粉与磷酸钠盐缓冲液的固液比为1:150g/mL,在-20℃和37℃反复冻融5次,每次冻融时间为4h;将冻融5次后的破壁液于5000rpm下离心30min,收集上清液得到藻蓝蛋白的粗提液,置于4℃冰箱中储藏备用。

3.根据权利要求1所述的膨胀床法分离纯化藻蓝蛋白的方法,其特征在于:

在步骤(2)中,称取0.15g吸附剂Streamline DEAE于50mL的具塞三角瓶中,并加入藻蓝蛋白粗提液,在200rpm/min,25℃下进行恒温振荡吸附;吸附1.5小时后取上清液取样一次。

4.根据权利要求1所述的膨胀床法分离纯化藻蓝蛋白的方法,其特征在于:

在步骤(3)中,将吸附剂Streamline DEAE装入膨胀柱中,打开出水口,使吸附剂Streamline DEAE均匀沉降,达到沉降床层高度为H0=10.0cm时,停止加入吸附剂并关闭出水口,最后使柱中吸附剂表面上留有1cm高度的溶液;

用蠕动泵将平衡缓冲液从膨胀床底部入口泵入柱中,吸附剂Streamline DEAE在柱中不断向上移动,当上升至膨胀床层高度为H为20.0cm不再上升时, 将顶部调节器固定在床层上1-2cm处,继续平衡20-30min,使床层稳定;

待膨胀床稳定后,将进口流体从平衡缓冲液切换成藻蓝蛋白粗提液,开始进样,整个吸附过程中,控制进样流速,保持膨胀床层的膨胀率稳定;用自动部分收集器每2min收集一次流出液;停止进样后,进口流体从藻蓝蛋白粗提液切换成平衡缓冲液,进行向上冲洗,去除膨胀床中的杂质和弱结合蛋白,制得藻蓝蛋白。

5.根据权利要求4所述的膨胀床法分离纯化藻蓝蛋白的方法,其特征在于:在步骤(3)中,所述膨胀柱为400mm×16mm。

6.根据权利要求1至5任一项所述的膨胀床法分离纯化藻蓝蛋白的方法,其特征在于:在步骤(3)中,所述缓冲液为25mM中性磷酸钠盐缓冲液。

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