本发明涉及药物化学领域，尤其涉及一种肉桂酰胺类化合物、其盐、其中间体、其制备方法及其应用。
背景技术：
：肿瘤是仅次于心脑血管疾病的严重威胁人类生命健康的第二大杀手。肿瘤本质上是由失控的基因表达引起，失控的基因表达分为：遗传学和表观遗传学，而基于表观遗传调节机理的抗肿瘤药研究成为新一代抗肿瘤治疗的重要方向之一。在众多与表观遗传修饰相关的酶中，组蛋白去乙酰化酶(HDACs)作为抗肿瘤新靶点是当前的研究热点之一。组蛋白去乙酰化酶抑制剂是一类新型的抗肿瘤药物，具有高效、低毒的特点，其作用于肿瘤细胞后能够抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞周期阻滞、促进细胞分化或凋亡。组蛋白去乙酰化酶抑制剂已成为抗肿瘤新药的一个重要研究方向。1977年，Nature报道丁酸钠能引起培养细胞中组蛋白的可逆性高度乙酰化。随之众多的天然及人工合成的组蛋白去乙酰化酶抑制剂相继被发现，除SAHA、FK228(皮肤T细胞淋巴瘤)及帕比司他(Panobinostat)(多发性骨髓瘤) 已被FDA批准上市外，目前已有十余个组蛋白去乙酰化酶抑制剂进入临床阶段。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是提供了一种与现有技术不同的肉桂酰胺类化合物、其药学可接受的盐、其中间体、其制备方法及其应用。本发明提供的肉桂酰胺类化合物及其盐具有有效的且较佳的抗肿瘤活性。本发明提供了一种如式A所示的肉桂酰胺类化合物或其药学可接受的盐：其中R1为苄基或C1～C4的烷基；R2为H或卤素；R3为卤素、C1～C4的烷氧基或C2～C7的饱和或不饱和杂环，杂环中杂原子数为1～3个，杂原子为氮和/或氧。本发明中，所述的R1优选C1～C4的烷基，进一步优选C1或C4的烷基，更进一步优选异丁基。本发明中，所述的R2优选卤素，所述的卤素优选F、Cl、Br或I，进一步优选F。本发明中，所述的R3为卤素时，所述的卤素优选F、Cl、Br或I，进一步优选F或Cl。本发明中，所述的R3为C1～C4的烷氧基时，所述的C1～C4的烷氧基作为一种基团或基团的部分，意指含有至多4个碳原子的直链或支链烷氧基，其中的“C1～C4”优选C1～C3，进一步优选C1～C2，再进一步优选C1。本发明中，所述的R3为C1～C4的烷氧基时，所述的C1～C4的烷氧基为甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧 基中的一种，优选甲氧基。本发明中，所述的R3为C2～C7的饱和或不饱和杂环时，其中的“C2～C7”优选C2～C4。本发明中，所述的R3为C2～C7的饱和或不饱和杂环时，所述的C2～C7的饱和或不饱和杂环中杂原子数较佳的为1、2或3个。本发明中，所述的R3为C2～C7的饱和或不饱和杂环时，所述的C2～C7的饱和或不饱和杂环中杂原子较佳的为1个氮原子，或者，1个氮原子和1个氧原子；或者，3个氮原子。本发明中，当化合物A中的R3为C2～C7的饱和或不饱和杂环时，所述的C2～C7的饱和或不饱和杂环中较佳的为氮原子与母体，即与R3相连的苯环直接相连；本发明中，当所述的R3为C2～C7的饱和或不饱和杂环，且所述的C2～C7的饱和或不饱和杂环中杂原子为1个氮原子和1个氧原子时，所述的杂环较佳的为：其中，n1和n2独立地均大于等于2，进一步优选n1和n2均等于2。本发明中，当所述的R3为C2～C7的饱和或不饱和杂环，且所述的C2～C7的饱和或不饱和杂环中杂原子为3个氮原子时，较佳的为有且仅有2个氮原子彼此直接相连；本发明中，所述的R3为C2～C7的饱和或不饱和杂环时，所述的C2～C7的饱和或不饱和杂环更佳的为吡咯烷基(如吡咯烷-1-基)、吗啉基(如吗啉-4-基)、三氮唑基(如1,2,4-三氮唑-1-基)。本发明中，所述的肉桂酰胺类化合物A更佳的为如下任一化合物：N-羟基-3-[4-[[[(1S)-1-苄基-N-(4-氯-苯基)-2-氧代-胺乙基]氨基]甲基]苯基]-(2E)-2-丙烯酰胺(A1)；N-羟基-3-[4-[[[(1S)-1-甲基-N-(4-氯-苯基)-2-氧代-胺乙基]氨基]甲基]苯基]-(2E)-2-丙烯酰胺(A2)；N-羟基-3-[4-[[[(1S)-1-异丁基-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-2-氧代-胺乙基]氨基]甲基]苯基]-(2E)-2-丙烯酰胺(A3)；N-羟基-3-[4-[[[(1S)-1-异丁基-N-(3-氟-4-吗啉-4-基-苯基)-2-氧代-胺乙基]氨基]甲基]苯基]-(2E)-2-丙烯酰胺(A4)；N-羟基-3-[4-[[[(1S)-1-异丁基-N-(4-氯-苯基)-2-氧代-胺乙基]氨基]甲基]苯基]-(2E)-2-丙烯酰胺(A5)；N-羟基-3-[4-[[[(1S)-1-异丁基-N-(3,4-二氟-苯基)-2-氧代-胺乙基]氨基]甲基]苯基]-(2E)-2-丙烯酰胺(A6)；N-羟基-3-[4-[[[(1S)-1-异丁基-N-(4-三氮唑-1-基-苯基)-2-氧代-胺乙基]氨基]甲基]苯基]-(2E)-2-丙烯酰胺(A7)；N-羟基-3-[4-[[[(1S)-1-异丁基-N-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-胺乙基]氨基]甲基]苯基]-(2E)-2-丙烯酰胺(A8)；N-羟基-3-[4-[[[(1S)-1-苄基-N-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-胺乙基]氨基]甲基]苯基]-(2E)-2-丙烯酰胺(A9)；N-羟基-3-[4-[[[N-(4-氯-苯基)-2-氧代-胺乙基]氨基]甲基]苯基]-(2E)-2-丙烯酰胺(A10)。本发明进一步提供了上述肉桂酰胺类化合物A的制备方法，其包括下列步骤：在溶剂中，有机碱的作用下，中间体B与氯甲酸异丁酯或氯甲酸乙酯反应，所得酸酐再与羟胺进行取代反应，得到化合物A：其中，所述的R1、R2、R3的定义均同前所述。本发明中，所述的溶剂较佳的为乙酸乙酯、二氯甲烷、乙腈中的一种或多种，进一步优选二氯甲烷；本发明中，所述的有机碱较佳的为三乙胺、N,N-二异丙基乙胺的一种或多种，进一步优选三乙胺；本发明中，所述的羟胺与中间体B的摩尔比较佳的为1:1～5:1，进一步优选2:1；本发明中，取代反应的反应温度较佳的为0℃～50℃，进一步优选20℃～30℃；本发明中，取代反应的反应时间按照本领域中常规测试方法(如TLC或HPLC)确定，本发明中较佳的为4h～48h，进一步优选24h；本发明中，所述的肉桂酰胺类化合物A的制备方法还包括如下步骤：在极性有机溶剂和水的混合溶剂中，碱的作用下，中间体C进行水解反应得到中间体B：其中，所述的R1、R2和R3的定义均同前所述。本发明中，所述的极性有机溶剂较佳的为甲醇、乙醇、四氢呋喃、乙腈中的一种或多种，进一步优选甲醇；本发明中，所述的极性有机溶剂与水的体积比较佳的为1:1～10:1，进一步优选5:1；本发明中，所述的碱较佳的为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸钠的一种或多种，进一步优选氢氧化钠；本发明中，水解反应的反应温度较佳的为30℃～80℃，进一步优选50℃～60℃；本发明中，所述的肉桂酰胺类化合物A的制备方法还包括如下步骤：在极性有机溶剂中，碱的作用下，中间体D和中间体E进行取代反应得到中间体C：其中，所述的R1、R2和R3的定义均同前所述。本发明中，中间体E可通过购买得到；本发明中，所述的极性有机溶剂较佳的为四氢呋喃、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺中的一种或多种，进一步优选乙腈；本发明中，所述的中间体D与中间体E的摩尔比较佳的为1:1～2:1，进一步优选1.2:1；本发明中，所述的碱较佳的为碳酸钾、碳酸钠、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺的一种或多种，进一步优选碳酸钾；本发明中，取代反应的反应温度较佳的为0℃～60℃，进一步优选20℃～30℃；本发明中，所述的肉桂酰胺类化合物A的制备方法还包括如下步骤：将中间体F进行氨基脱保护(Cbz)反应，得到中间体D：其中，所述的R1、R2和R3的定义均同前所述。其中，所述的氨基脱保护方法和条件均为本领域中此类反应的常规方法和条件，如可按照参考文献TetrahedronLett.1981,37,4111-4119中的方法进行，本发明优选的方法和条件包括：在有机溶剂中，在溴化氢或氯化氢的作用下，中间体F脱去苄氧羰基(Cbz)保护基；所述的有机溶剂包括：乙醚、四氢呋喃、二氧六环等，进一步优选四氢呋喃；在极性有机溶剂中，在钯碳的催化下，以甲酸铵或氢气作氢源，中间体F脱去Cbz保护基；极性有机溶剂包括：甲醇、乙醇、异丙醇等，进一步 优选甲醇。本发明中，中间体F可按文献Synlett2011,1,129-133中的方法制备。本发明中，所述的用于制备上述肉桂酰胺类化合物A的中间体D较佳的为如下任一化合物：(S)-2-氨基-N-对氯苯基苯丙酰胺(D1)；(S)-2-氨基-N-对氯苯基丙酰胺(D2)；(S)-2-氨基-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-4-甲基戊酰胺(D3)；(S)-2-氨基-N-(3-氟-4-吗啉-4-基-苯基)-4-甲基戊酰胺(D4)；(S)-2-氨基-N-(4-氯-苯基)-4-甲基戊酰胺(D5)；(S)-2-氨基-N-(3,4-二氟-苯基)-4-甲基戊酰胺(D6)；(S)-2-氨基-N-(4-三氮唑-1-基-苯基)-4-甲基戊酰胺(D7)；(S)-2-氨基-N-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基戊酰胺(D8)；(S)-2-氨基-N-(4-甲氧基-苯基)苯丙酰胺(D9)；2-氨基-N-对氯苯基乙酰胺(D10)。本发明提供了上述肉桂酰胺类化合物A、其药学可接受的盐、溶剂化物、光学异构体或多晶型物在制备组蛋白去乙酰化酶抑制剂中的应用。本发明还提供了上述肉桂酰胺类化合物A、其药学可接受的盐、溶剂化物、光学异构体或多晶型物在制备用于治疗增殖性疾病的药物中的应用，其中，所述的增殖性疾病优选肿瘤疾病。本发明还提供了一种药物组合物，包括上述肉桂酰胺类化合物A的治疗有效量的肉桂酰胺类化合物A和药学可接受的载体。本发明中，所述的药学可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，较佳的包括：稀释剂、润滑剂、赋形剂、粘合剂、填充剂和崩裂剂中的一种或多种。本发明中，根据治疗目的，可将药物组合物制成各种类型的给药单位剂型，如片剂、丸剂、粉剂、液体、乳液、悬浮液、颗粒剂、胶囊、栓剂和针剂(溶液和悬浮液)等。本发明的如式A所示的肉桂酰胺类化合物或其药学可接受的盐在药物组合物中的含量无特殊限制，通常可为质量百分比0.1％～99.5％，较佳的为质量百分比0.5％～99.0％。在不违背本领域常识的基础上，上述各优化条件可任意组合，即得本发明各较佳实例。除特殊说明外，本发明所用试剂和原料均市售可得。本发明的积极进步效果在于：本发明的新型肉桂酰胺类化合物具有有效且较佳的抗肿瘤活性。具体实施方式下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。实施例1(S)-2-氨基-N-对氯苯基苯丙酰胺(D1)向50mL三颈瓶中依次加入(S)-2-苄氧甲酰氨基-N-对氯苯基苯丙酰胺(F1)(1.0g,2.45mmol)、二氯甲烷(20mL)，冰浴冷却至0℃，0.5h内滴加氢溴酸/乙酸溶液(1.4mL,9.8mmol,40％)，室温搅拌过夜。反应液减压浓缩至干，用甲醇带蒸三次，可得白色固体0.72g。将固体溶于水中，用饱和碳酸钠溶液中和，调pH至8～9，加入二氯甲烷萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，减压浓缩后，可得浅灰色固体0.57g，收率85.3％，M.P.:124～126℃，比旋光度:[α]20D＝-18.2°(c＝0.1,CHCl3)。实施例2(S)-2-氨基-N-对氯苯基丙酰胺(D2)化合物D2的合成，按照实施例1的方法，以(S)-2-苄氧甲酰氨基-N-对氯苯基丙酰胺(F2)为原料制备，收率76.5％，M.P.:108～110℃，比旋光度:[α]20D＝-12.6°(c＝0.1,CHCl3)实施例3(S)-2-氨基-N-(4-氯-苯基)-4-甲基戊酰胺(D5)向50mL三颈瓶中依次加入(S)-2-苄氧甲酰氨基-N-(4-氯-苯基)-4-甲基 戊酰胺(F5)(2.0g,5.34mmol)、甲醇(30mL)、钯碳(0.1g,5％)和甲酸铵(1.0g,16.02mmol)，加热至60℃，搅拌反应4.0h。反应液先过滤，滤液减压浓缩后，加入二氯甲烷，有机层用饱和碳酸钠溶液洗涤，水相用二氯甲烷回提，合并有机层，饱和食盐水洗，减压浓缩后，可得白色固体1.09g，收率84.7％，M.P.:153～155℃，比旋光度:[α]20D＝-8.6°(c＝0.1,CHCl3)。实施例4化合物D3、D4、D6、D7、D8、D9、D10的合成，按照实施例3的方法，分别以(S)-2-苄氧甲酰氨基-N-(4-吡咯烷-1-基-苯基)-4-甲基戊酰胺(F3)、(S)-2-苄氧甲酰氨基-N-(3-氟-4-吗啉-4-基-苯基)-4-甲基戊酰胺(F4)、(S)-2-苄氧甲酰氨基-N-(3,4-二氟-苯基)-4-甲基戊酰胺(F6)、(S)-2-苄氧甲酰氨基-N-(4-三氮唑-1-基-苯基)-4-甲基戊酰胺(F7)、(S)-2-苄氧甲酰氨基-N-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基戊酰胺(F8)、(S)-2-苄氧甲酰氨基-N-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基戊酰胺(F9)、2-苄氧甲酰氨基-N-对氯苯基乙酰胺(F10)为原料制备，化合物对应结构和理化数据见表1。表1通式D所示化合物结构和理化数据实施例5N-羟基-3-[4-[[[(1S)-1-异丁基-N-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-胺乙基]氨基]甲基]苯基]-(2E)-2-丙烯酸甲酯(C8)向250mL三颈瓶中依次加入(S)-2-氨基-N-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基戊酰胺(D8)(3.00g,12.7mmol)、乙腈(80mL)、4-溴甲基肉桂酸甲酯(E)(2.93g,11.5mmol)和碳酸钾(1.75g,12.7mmol)，30℃搅拌反应4.0h。反应液先过滤，滤液减压浓缩后，经柱层析纯化，可得白色固体3.77g，收率80.2％。实施例6化合物C1～C7及C9～C10的制备方法同实施例5。实施例7N-羟基-3-[4-[[[(1S)-1-异丁基-N-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-胺乙基]氨基]甲基]苯基]-(2E)-2-丙烯酸(B8)向100mL三颈瓶中依次加入N-羟基-3-[4-[[[(1S)-1-异丁基-N-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-胺乙基]氨基]甲基]苯基]-(2E)-2-丙烯酸甲酯(C8)(3.77g,9.2mmol)、甲醇(50mL)、水(10mL)和氢氧化钠(1.47g,36.8mmol)，60℃搅拌反应2.0h。反应液减压浓缩后，加入水(40mL)，冰浴下缓慢滴加盐酸(2M,20mL)，调pH至6左右，搅拌1.0h，过滤，滤饼用水洗，60℃烘干，得淡棕色固体3.46g，收率95.3％。实施例8化合物B1～B7及B9～B10的制备方法同实施例7。实施例9N-羟基-3-[4-[[[(1S)-1-异丁基-N-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-胺乙基]氨基]甲基]苯基]-(2E)-2-丙烯酰胺(A8)向100mL三颈瓶中依次加入N-羟基-3-[4-[[[(1S)-1-异丁基-N-(4-甲氧基-苯基)-2-氧代-胺乙基]氨基]甲基]苯基]-(2E)-2-丙烯酸(B8)(1.2g,3.03mmol)、二氯甲烷(50mL)和三乙胺(0.91g,9.09mmol)，冰浴下，缓慢滴加氯甲酸 异丁酯(0.62g,4.54mmol)，控制温度0℃～5℃搅拌反应1.0h，加入盐酸羟胺(0.42g,6.06mmol)，室温搅拌过夜。反应液经水洗两次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩后，经柱层析纯化，得淡红色泡沫状产品0.77g，收率62.1％。实施例10化合物A1～A7及A9～A10的制备方法同实施例9。理化数据及1H-NMR数据可见表2和表3。表2化合物A的理化数据表3化合物A的1H-NMR数据应用实施例片剂(重量份)：方法实施例9所得化合物1份，微晶纤维素1份，淀粉5份，甘露糖醇5份，硬脂酸镁0.5份，按照本领域的常规方法制备成片剂。注射剂(重量份)：方法实施例10所得化合物1份，注射用水10份，按照本领域的常规方法制备成注射剂。效果实施例本发明部分目标化合物的体外HDAC抑酶活性实验结果如下：1.实验材料，试剂盒及仪器BioTekSynergy2多功能酶标仪；96孔不透明黑板(Cat:400017，Cayman)；HDACassaybuffer(Cat:10006389，Cayman)；HDACdeveloper(Cat: 10006394，Cayman)；HDACsubstrate(Cat:10006392，Cayman)；HDAC1(HDAC1是HDAC的一个亚型酶，该酶可以调控细胞增殖相关基因表达，具有促进肿瘤细胞增殖的作用。)(Cat:10011618，Cayman)；待测化合物(实施例9、10所得)用DMSO稀释待测化合物，得到5个稀释浓度的溶液。2.实验方法(1)Blank组：将Assaybuffer和底物在37℃下孵育30min，加入HDACdeveloper终止反应，充分混匀后25℃孵育15min，在激发/发射波长(360nm/460nm)下测定荧光强度，既得空白值。(2)100％control组：先将Assaybuffer和HDAC1混合5min后，加入Substrate在37℃下孵育30min，再加入HDACdeveloper终止反应，充分混匀后25℃孵育15min，在(360nm/460nm)下测定荧光强度，既得100％荧光值。(3)TestSample组：将不同浓度的Inhibitor和HDAC1混合，5min后加入Substrate在37℃下孵育30min，再加入HDACdeveloper终止反应，充分混匀后25℃孵育15min，在(360nm/460nm)下测定荧光强度，既得不同浓度化合物荧光值。按照上述公式，计算化合物的抑制率，最后将化合物的抑制率和相应浓度进行S曲线拟合，计算出IC50值。表4抑制剂筛选反应体系(每组设三个复孔)本发明中部分化合物的体外HDAC抑酶活性结果见表5。由表5可得，本发明的部分化合物具有明显的体外HDAC1抑酶活性，与阳性对照药SAHA活性相当。(对照组化合物X为N-羟基-3-[4-[[[N-苯基-2-氧代-胺乙基]氨基]甲基]苯基]-(2E)-2-丙烯酰胺。)表5化合物A1～A10的体外HDAC1抑酶活性(IC50)No.IC50ofHDAC1/nM编号IC50ofHDAC1/nMA1182A6112A2165A786A375A8155A463A9215A5134A10833B48513对照组SAHA45对照组X1559当前第1页1 2 3