本发明涉及食品制备领域,具体涉及啤酒废酵母制备多肽的方法。
背景技术:
许多小分子肽不仅能提供人体生长、发育所需的营养物质与能量,而且还具有防病治病、调节人体生理机能的功能。这些功能是原蛋白质和其组成氨基酸所不具备的,目前已从酪蛋白、乳清蛋白、大豆蛋白、豌豆蛋白、玉米蛋白、卵白蛋白、丝蛋白、胶原蛋白、水产蛋白等的酶解物中制得一系列功能各异的生物活性肽。但是利用啤酒废酵母制备多肽的研究却未见报道。
技术实现要素:
本发明提供了一种啤酒废酵母制备多肽的方法。首先对啤酒废酵母进行预处理,除去杂质,之后对预处理后的啤酒废酵母采用自溶法制备啤酒废酵母多肽液,制得的啤酒废酵母多肽液采用等电点沉淀法去除核酸,之后对去除核酸的多肽液进行脱色处理,然后进行凝胶层析,经过真空浓缩后,干燥得多肽。
所述的对啤酒废酵母的预处理方法为将啤酒废酵母加入两倍0~4℃无菌水,添加啤酒废酵母质量1%的NaHCO3,反应15min,倾去上清液,再用蒸馏水洗涤两次,离心得干净废酵母。
所述的自溶法制备啤酒废酵母多肽液为称取预处理后的酵母泥与蒸馏水,预处理后的酵母泥与蒸馏水质量比为1∶2,自溶时间为30~40h,溶液的pH为6~6.5,自溶温度为40~50℃,自溶促进剂NaCl的用量为预处理后的酵母泥质量的4%。
所述的等电点法去除核酸为用6mol/L HCl溶液将啤酒废酵母多肽液pH调整至核酸等电点,将核酸沉淀下来,然后通过离心去除杂质,取得上清液。
所述的脱色处理为将去除核酸的啤酒废酵母多肽液的pH调节至3~3.5,加入去除核酸的啤酒废酵母多肽液质量3%的颗粒状活性炭,在温度40~50℃下脱色3~4h。
所述的凝胶层析法用到的凝胶为经过pH等于7.0Tris-HCl缓冲液溶胀的凝胶SephadexG-25,洗脱流速为0.5mL/min。
所述的干燥得多肽的方法为真空冷冻干燥。
有益效果
本发明以啤酒废酵母作为原料,变废为宝,同时制备工艺简单易行,制得的多肽氨基酸含量丰富,具有较高的营养价值。
具体实施方式
原料及仪器
啤酒废酵母 北京燕京啤酒股份有限公司;
NaCl、NaHCO3、NaOH、HCl、三氯乙酸 分析纯 天津大茂化学试剂厂
PHS-25型精密数显酸度计 上海伟业仪器厂;
TG328A型分析天平 奥豪斯国际贸易(上海)有限公司;
梅特勒一托利多AG135天平 上海梅特勒仪器公司;
电热恒温水浴锅 天津太斯特仪器有限公司;
TDL-40B型离心机 上海安亭科学仪器厂;
YXQ-LS-50SI型立式压力蒸汽灭菌器 上海博迅实业有限公司医疗设备厂;
SephadexG-25 Superfine Amersham Biosciences公司;
UV-2550紫外分光光度计 日本岛津公司;
Biochrom30型氨基酸自动分析仪 Amersham Biosciences公司;
AKTA purifine制备色谱仪 Amersham Biosciences公司;
F 1.6×100cm层析柱 上海亚荣公司;
旋转蒸发仪RE-52B 上海亚荣生化仪器厂;
真空干燥器 上海跃进医疗器械厂;
ALPHAl-4 冷冻干燥机德国;
实施例1
将北京燕京啤酒股份有限公司的啤酒废酵母加入两倍4℃无菌水,添加啤酒废酵母质量1%的NaHCO3,反应15min,倾去上清液,再用蒸馏水洗涤两次,离心得干净废酵母。称取预处理后的酵母泥与蒸馏水,预处理后的酵母泥与蒸馏水质量比为1∶2,加入预处理后的酵母泥质量4%的自溶促进剂NaCl,将溶液的pH调至6.5,在温度为40℃下自溶35h,得啤酒废酵母多肽液。用6mol/L HCl溶液将啤酒废酵母多肽液pH调整至核酸等电点,将核酸沉淀下来,然后通过离心去除杂质,取得上清液。将去除核酸的啤酒废酵母多肽液的pH调节至3.5, 加入去除核酸的啤酒废酵母多肽液质量3%的颗粒状活性炭,在温度50℃下脱色4h。之后用经过pH等于7.0Tris-HCl缓冲液溶胀的凝胶SephadexG-25进行凝胶层析,洗脱流速为0.5mL/min。真空浓缩后,真空冷冻干燥得多肽。
经过精制后所得到的啤酒废酵母多肽液为澄清透明黄色液体,略带苦味,有酵母特殊的香味。
将啤酒废酵母多肽液经过凝胶层析分离、冷冻干燥所得啤酒废酵每多肽为乳白色精细粉末,略微发黄,略带苦味,有酵母特殊的香味,易溶于水。
制得的多肽含有16种氨基酸,其中包括7种人体必需氨基酸,氨基酸总量为967mg/100mL。
以上实施例可以说明本发明制得的多肽中氨基酸含量丰富,具有较高的营养价值,同时制备工艺简单。