本发明涉及一种新型丝氨酸衍生物、该等的制备制程、可使用于该等的制程的中间体及含有该化合物的药物组成物。本发明还涉及关于丝氨酸衍生物在治疗中的用途，例如作为生长激素促分泌素受体(也被称为生长激素释放肽受体或GHSRIa受体)的调节剂和/或用于治疗和/或预防癌症厌食症/恶病质；由抗癌药物引起的恶病质及厌食症；由抗癌药物引起的痛觉过敏；COPD(chronic obstructive pulmonary disease：慢性阻塞性肺病)/COPD恶病质；肌少症；饮食失调症及神经性饮食失调症；体重降低抑制；癌症患者术后早期恢复；慢性呼吸道感染；炎症；IBD(inflammatory bowel disease：炎症性肠病)；FD(functional-dyspepsia：功能性消化不良)；便秘；糖尿病性胃轻瘫及胃轻瘫；心脏衰竭；心肌梗塞；糖尿病神经病变；帕金森氏症；多发性硬化症；生长激素缺乏症的诊断及治疗；老年人QOL(quality of life：生活质量)的改善；脊髓损伤患者的肠道运动障碍；术后肠阻塞；及由吗啡诱导的肠阻塞。
背景技术：
生长激素释放肽是用于生长激素(GH)促分泌素受体的内源性配体。生长激素释放肽最初从胃里被纯化，是位置3的丝氨酸被n-辛酰化的28氨基酸肽类激素。生长激素释放肽具有较强的GH释放活性，因此被认为在维持GH释放及能量平衡方面发挥重要的作用(非专利文献1)。尤其，认为具有较强的食欲刺激活性。此外，已知生长激素释放肽激动剂对癌症厌食症/恶病质(非专利文献2、3及4)；由抗癌药物引起的恶病质及厌食症(非专利文献4及5)；由抗癌药物引起的痛觉过敏(非专利文献5)；COPD/COPD恶病质(非专利文献6及7)；肌少症(非专利文献8)；饮食失调症及神经性饮食失调症(非专利文献9)；体重降低抑制(非专利文献10)；癌症患者术后早期恢复(非专利文献11)；慢性呼吸道感染(非专利文献7)；炎症(非专利文献12)；IBD(非专利文献12)；FD(非专利文献4)；便秘(非专利文献9)；糖尿病性胃轻瘫及胃轻瘫(非专利文献4及13)；心脏衰竭(非专利文献14、15及16)；心肌梗塞(非专利文献14、15及16)；糖尿病神经病变(非专利文献17)；帕金森氏症(非专利文献18)；多发性硬化症(非专利文献19)；生长激素缺乏症的诊断及治疗(非专利文献20)；老年人QOL的改善(非专利文献20)；脊髓损伤患者的肠道运动障碍(非专利文献21)；术后肠阻塞(非专利文献4及22)；及由吗啡诱导的肠阻塞(非专利文献22)的治疗和/或预防有用。
以往技术文献
非专利文献
{非专利文献1}Scientifica 2013,Article ID 518909(http：//dx.doi.org/10.1155/2013/518909),25pages,2013
{非专利文献2}The Oncologist 12,594-600,2007.
{非专利文献3}Support Care Cancer 21,2409-2415,2013
{非专利文献4}Neurogastroenterol Motil 20,177-184,2008
{非专利文献5}Endocrinology 149,455-460,2008
{非专利文献6}BMC Pulmonary Medicine 13,37-46,2013
{非专利文献7}Methods in Enzymology 514,399-407,2012
{非专利文献8}Arch Med Sci 9,166-171,2013
{非专利文献9}Frontiers in Endocrinology 4,1-27,2013
{非专利文献10}Ann intern Med 149,601-611,2008
{非专利文献11}Gastric Cancer 17,200-205,2014
{非专利文献12}Mol Nutr Food Res 52,855-866,2008
{非专利文献13}Neurogastroenterol Motil 25,e140-e150,2013
{非专利文献14}Journal of Cardiology 59,8-13,2012
{非专利文献15}Curr Opin Clin Nutr Metab Care 16,619-624,2013
{非专利文献16}Endocrinology 153,2436-2443,2012
{非专利文献17}Biochemical and Biophysical Research Communications 389,405-408,2009
{非专利文献18}Stereotact Funct Neurosurg 90,104-112,2012
{非专利文献19}Ir J neurol 12,60-65,2013
{非专利文献20}Drug Discovery Today 4,497-506,1999
{非专利文献21}Neurogastroenterol Motil 21,71-77,2009
{非专利文献22}Peptides 26,1598-1601,2005
发明的概要
发明要解决的技术课题
因此，希望找到调节生长激素释放肽受体活性的新化合物。
用于解决技术课题的手段
[1]本发明提供一种下述化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：
{化学式1}
其中：
A为芳基；优选芳基为苯基、萘基或吡啶基；进一步优选芳基为苯基或吡啶基；更进一步优选A为苯基、2-吡啶基或3-吡啶基；
X为CH或N；
R1独立地选自由(1)氢、(2)卤素、(3)C1-6烷基，其中，该烷基未被取代或被一个以上的独立地选自卤素、羟基、-O-C1-6烷基、氨基、C1-6烷基氨基及(C1-6烷基)(C1-6烷基)N-中的取代基取代、(4)-O-C1-6烷基，其中，该烷基未被取代或被一个以上的独立地选自卤素、羟基、-O-C1-6烷基、氨基、C1-6烷基氨基及(C1-6烷基)(C1-6烷基)N-中的取代基取代、(5)-CN及(6)-SO2C1-6烷基所构成的群组；优选R1独立地选自由以下所构成的群组；(1)氢、(2)卤素、(3)三氟甲基、(4)三氟甲氧基及(5)-CN；进一步优选R1独立地选自由以下所构成的群组：(1)氢、(2)-F、(3)-Cl、(4)三氟甲基、(5)三氟甲氧基及(6)-CN；
R2为氢或C1-6烷基，其中，该烷基未被取代或被一个以上的独立地选自卤素、羟基、-O-C1-6烷基、氨基、C1-6烷基氨基及(C1-6烷基)(C1-6烷基)N-中的取代基取代；优选R2为C1-6烷基，其中，该烷基未被取代或被1至3个独立地选自卤素中的取代基取代；进一步优选R2为甲基或二氟乙基；更进一步优选R2为甲基或2,2-二氟乙基；
p为1、2、3,或4；当p为2以上时，R1可相同或不同；优选p为1或2。
[2]本发明提供[1]所述的上述化学式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
A为苯基、萘基或吡啶基。
[3]本发明提供[1]或[2]所述的上述化学式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
A为苯基、萘基或吡啶基；
R2为氢或C1-C6烷基，其中，该烷基未被取代或被1至3个独立地选自卤素中的取代基取代。
[4]本发明提供[1]至[3]中任一项所述的上述化学式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
A为苯基、萘基或吡啶基；
R1独立地选自由以下所构成的群组；(1)氢、(2)卤素、(3)三氟甲基、(4)三氟甲氧基、(5)-CN及(6)-SO2C1-6烷基；
R2为C1-6烷基，其中，该烷基未被取代或被1至3个独立地选自卤素中的取代基取代。
[5]本发明提供[1]至[4]中任一项所述的上述化学式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
A为苯基、萘基或吡啶基；
R1独立地选自由以下所构成的群组；(1)氢、(2)-F,(3)-Cl(4)三氟甲基、(5)三氟甲氧基、(6)-CN及(7)-SO2CH3；
R2为甲基或二氟乙基。
[6]本发明提供[1]至[5]中任一项所述的上述化学式(I)所表示的化合物或其药学上可接受的盐，其中：
A为苯基、2-吡啶基或3-吡啶基；
R1独立地选自由以下所构成的群组；(1)氢、(2)-F、(3)-Cl、(4)三氟甲基、(5)三氟甲氧基及(6)-CN；
R2为甲基或2,2-二氟乙基。
[7]本发明的合适的个别化合物如下：
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2,4-二氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,5-二氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-(2-(三氟甲基)苯氧基)丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,4-二氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-甲氧基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(萘-2-基氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(萘-1-基氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-((5-氯吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氰基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-(吡啶-2-基氧基)丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-((5-氟吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氰基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-3-(2-氯苯氧基)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-3-(3-氯苯氧基)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-甲氧基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；及
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
或其药学上可接受的盐。
[8]本发明的更合适的个别化合物如下：
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2,4-二氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,4-二氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-甲氧基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氰基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-3-(2-氯苯氧基)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-甲氧基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
2-氨基-N-((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；及
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺；
或其药学上可接受的盐。
[9]本发明提供一种药物组成物，其包含[1]至[8]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。
[10]本发明提供[9]所述的药物组成物，其还包含另一药理活性剂。
[11]本发明提供治疗患有由生长激素释放肽受体介导的病症或紊乱的包括人在内的动物的方法，其包含将有效量的[1]至[8]中任一项所述的化学式(I)的化合物或药学上可接受的盐给药于前述受治者。
[12]本发明提供[11]所述的方法，其中，前述病症或紊乱选自由以下所构成的群组：癌症厌食症/恶病质；由抗癌药物引起的恶病质及厌食症；由抗癌药物引起的痛觉过敏；COPD/COPD恶病质；肌少症；饮食失调症及神经性饮食失调症；体重降低抑制；癌症患者术后早期恢复；慢性呼吸道感染；炎症；IBD；FD；便秘；糖尿病性胃轻瘫及胃轻瘫；心脏衰竭；心肌梗塞；糖尿病神经病变；帕金森氏症；多发性硬化症；生长激素缺乏症的诊断及治疗；老年人QOL的改善；脊髓损伤患者的肠道运动障碍；术后肠阻塞；及由吗啡诱导的肠阻塞；以及其组合。
[13]本发明提供[1]至[8]中任一项所述的化合物或药学上可接受的盐或其组成物在制造用于治疗由生长激素释放肽受体介导的病症或紊乱的药物中的用途。
[14]本发明提供[13]所述的用途，其中，前述病症或紊乱选自由以下所构成的群组：癌症厌食症/恶病质；由抗癌药物引起的恶病质及厌食症；由抗癌药物引起的痛觉过敏；COPD/COPD恶病质；肌少症；饮食失调症及神经性饮食失调症；体重降低抑制；癌症患者术后早期恢复；慢性呼吸道感染；炎症；IBD；FD；便秘；糖尿病性胃轻瘫及胃轻瘫；心脏衰竭；心肌梗塞；糖尿病神经病变；帕金森氏症；多发性硬化症；生长激素缺乏症的诊断及治疗；老年人QOL的改善；脊髓损伤患者的肠道运动障碍；术后肠阻塞；及由吗啡诱导的肠阻塞；以及其组合。
[15]本发明提供[1]至[8]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗由生长激素释放肽受体介导的病症或紊乱。
[16]本发明提供一种药物组成物的制备制程，其包含将[1]至[8]中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂进行混合。
[17]本发明提供一种在有意识的禁食小鼠中生长激素(GH)反应的测定过程，其包含将测试化合物口服给药于BALB/c小鼠。
[18]本发明提供一种在大鼠中顺铂-诱导的恶病质/厌食症的测定过程，其包含在傍晚将测试化合物及顺铂给药于处理得当的大鼠。
[19]本发明提供一种在承载有AH-130细胞的大鼠中恶病质(体重降低及肌肉萎缩)的测定过程，其包含将测试化合物口服给药于腹膜内注射了大于1×108的AH-130腹水肝癌细胞的未成熟的雄性大鼠。
发明效果
本发明的丝氨酸衍生物是生长激素释放肽受体激动剂，并且具有多种治疗应用，特别是用于治疗癌症厌食症/恶病质；由抗癌药物引起的恶病质及厌食症；由抗癌药物引起的痛觉过敏；COPD/COPD恶病质；肌少症；饮食失调症及神经性饮食失调症；体重降低抑制；癌症患者术后早期恢复；慢性呼吸道感染；炎症；IBD；FD；便秘；糖尿病性胃轻瘫及胃轻瘫；心脏衰竭；心肌梗塞；糖尿病神经病变；帕金森氏症；多发性硬化症；生长激素缺乏症的诊断及治疗；老年人QOL的改善；脊髓损伤患者的肠道运动障碍；术后肠阻塞；及由吗啡诱导的肠阻塞。
如下述方案I所说明，本发明的特征在于位于丝氨酸衍生物的中央部分的丝氨酸部分。Pfizer Inc.于WO97/24369中揭示了生长激素释放肽受体激动剂，其被视为结构上接近的先前技术。最接近的化合物被认为是WO97/24369中的实施例183的化合物，其是方案II中所说明的高丝氨酸衍生物。与高丝氨酸的例子相比，本发明的丝氨酸衍生物对生长激素释放肽受体显现出更好的活性。如本说明书的实验中的表7所示，从高丝氨酸衍生物去除一个碳会使该活性急剧增加。
{化学式2}
方案I：丝氨酸衍生物
{化学式3}
方案II：高丝氨酸衍生物
相对于本领域中公开的其他化合物，本发明的化合物可显示出更少的毒性、良好的吸收与分布、良好的溶解度、更少的血浆蛋白质结合、更少的药物-药物相互作用、良好的代谢稳定性、HERG通道中的减少的抑制活性和/或减少的QT延长。
具体实施方式
如同本领域技术人员领会到的那样，本申请中所使用的术语“卤素”或“卤代”意在包括氟代、氯代、溴代及碘代。类似地，如在C1-6中所示，1-6定义为用于认定具有1、2、3、4、5或6的个数。基于上述定义，如在C1-6烷基中所示，C1-6定义为用于认定烷基基团具有1、2、3、4、5或6个碳原子。被指定为用取代基独立地取代的基团可独立地被多个那样的取代基取代。
本申请中所使用的术语“烷基”是指直链饱和一价烃基或分支的饱和一价烃基，例如指甲基、乙基、丙基、2-丙基、丁基(包括所有异构形态)、戊基(包括所有异构形态)等。
本申请中所使用的术语“芳基”是指可含有选自O、N及S中的0至4个杂原子的单碳环或双碳环或者单杂环或双杂环，但并不限定于苯基、萘基、苯并呋喃基、苯并呋吖基、苯并咪唑啉酮基、苯并咪唑基、苯并异噻唑基、苯并异恶唑基、苯并噻二唑基、苯并噻唑基、苯并恶二唑基、苯并恶唑啉基、苯并恶唑基、苯并噻吩基、苯并三唑基、咔唑基、咔啉基、色满基、噌啉基、2,3-二氧代吲哚基、呋喃基、呋吖基、呋喃并吡啶基、呋喃并吡咯基、咪唑基、咪唑并吡嗪基、咪唑并吡啶基、咪唑并嘧啶基、咪唑并噻唑基、吲唑基、吲哚嗪基、吲哚啉基、吲哚基、异苯并呋喃基、异色满基、异吲哚基、异喹啉基、异恶唑并吡啶基、异恶唑啉基、异恶唑基、异噻唑基、萘啶基、恶唑啉基、恶二唑基、恶唑基、氧杂环丁烷基、2-氧代吲哚基、酞嗪基、吡唑并吡啶基、吡唑并嘧啶基、吡唑基、吡嗪基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡啶并嘧啶基、吡咯并吡啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹恶啉基、四唑并吡啶基、四唑基、噻二唑基(thiadiazolyl)、噻唑基、噻吩基、噻吩并吡嗪基、噻吩并吡唑基、噻吩并吡啶基、噻吩并吡咯基、三唑并嘧啶基、三唑基、4-氧代-1,4-二氢喹啉基、2-氧代-1,2-二氢吡啶基、4-氧代-1,4-二氢嘧啶基、2-氧代-1,2-二氢喹啉基、4-氧代-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶基、4-氧代-1,4-二氢-1,8-萘啶基及该等的N-氧化物。
本申请中所使用的术语“治疗”是指缓解指定的病症、消除或减轻病症的病状、延迟或消除病症的进展、以及预防或迟缓有病史的患者或受治者中该病症的复发。
本申请中所使用的术语“傍晚”是指约16:00至24:00，优选约17:00至20:00。
如果没有特别提及，本申请中所使用的冠词“a”或“an”是指其所提及的对象的单数形和复数形。
本申请中所使用的术语“动物”包括哺乳动物对象或非哺乳动物对象。合适的哺乳动物对象的例子可包括但并不限定于人、啮齿类、伴侣动物、家畜及灵长类。合适的啮齿类可包括但并不限定于小鼠、大鼠、地鼠、沙鼠及豚鼠。合适的伴侣动物可包括但并不限定于猫、狗、兔及雪貂。合适的家畜可包括但并不限定于马、山羊，羊、猪、牛、美洲驼及羊驼。合适的灵长类可包括但并不限定于黑猩猩、狐猴、猕猴、狨猴、蜘蛛猴、松鼠猴及长尾猴。合适的非哺乳动物对象的例子可包括但并不限定于鸟类、爬虫类、两栖类及鱼类。鸟类的非限制性例子包括鸡、火鸡、鸭及鹅。优选哺乳动物对象为人。
本发明的化合物的盐也包含于本发明的范畴内。由于该等的药学上的使用潜力，优选化学式(I)的化合物的盐为药学上可接受。合适的药学上可接受的盐可包括酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐可通过化学式(I)的化合物与合适的无机酸或有机酸(诸如氢溴酸、盐酸、氢碘酸、硫酸、硝酸、磷酸、对甲苯磺酸、甲磺酸或萘磺酸)任意地在诸如有机溶剂之类的合适的溶剂中反应形成，以获得通常通过例如结晶及过滤而分离的盐。化学式(I)的化合物的药学上可接受的酸加成盐的例子包括HCI、HBr、HI、硫酸盐或硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐或磷酸氢盐、乙酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、糖酸盐、反丁烯二酸盐、顺丁烯二酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、葡糖酸盐、樟脑磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐及双羟萘酸盐。关于合适的药学盐，请查看文献[Berge et al,J.Pharm,Sci,66,1-19,1977；P L Gould,International Journal of Pharmaceutics,33(1986),201-217]；及[Bighley et al,Encyclopedia of Pharmaceutical Technology,Marcel Dekker Inc,New York 1996,Volume 13,page 453-497]。例如三氟乙酸盐等药学上不可接受的其他盐可对本发明的化合物的制备有用，该等构成本发明的另一方面。本发明在其范畴内包括化学式(I)的化合物的盐的所有可能的化学计量及非化学计量形态。
有机化学领域的技术人员将理解很多有机化合物能够与溶剂形成错合物，该等有机化合物在溶剂内反应或从溶剂中沉淀或结晶化。该等错合物被称为“溶剂化物”。例如，含水的错合物被称为“水合物”。本发明的化合物的溶剂化物在本发明范畴内。
具有非药学上可接受的抗衡离子或相关溶剂的盐及溶剂化物包括在本发明的范围内，例如在制备化学式(I)的其他化合物及其药学上可接受的盐时用作中间体。
化学式(I)的化合物可以以晶体形态具备多形体，其包括在本发明的范畴内。
另外，化学式(I)的化合物的所谓的“前体药物”也包括在本发明的范畴内。因此，其本身可能几乎或完全不具有药理活性的化学式(I)的化合物的特定衍生物当给药于体内或体表时，例如可通过水解或水解性断裂而转化为具有目标活性的化学式(I)的化合物。该种衍生物以“前体药物”提及。关于前体药物用途的进一步的信息可查看下述文献：Pro-drugs as Novel Delivery Systems,Vol.14,ACS Symposium Series(T Higuchi and W Stella)and Bioreversible Carriers in Drug Design,Pergamon Press,1987(ed.E B Roche,American Pharmaceutical Association)。
依本发明的前体药物可通过例如将化学式(I)的化合物中存在的合适的官能基作为例如文献：Design of Prodrugs by H.Bundgaard(Elsevier，1985)中所记载的“前体部分(pro-moiety)”，由本领域技术人员周知的特定部分取代而进行制备。依本发明的前体药物的一部分例子包括以下：
(i)当化学式(I)的化合物中含有醇官能基(-OH)时，羟基被在体内可转化为羟基的部分取代的化合物。前述在体内可转化为羟基的部分是指，例如通过水解和/或酶例如酯酶在体内可变换为羟基的部分。前述部分的例子包括但并不限定于在体内可容易水解的酯基及醚基。优选用酰氧基烷基、1-(烷氧基羰氧基)烷基、酞基及酰氧基烷氧基羰基(例如新戊酰氧基甲氧基羰基)取代羟基的氢的部分；及
(ii)当化学式(I)的化合物中含有氨基时，将通过与合适的酸性卤化物或合适的酸酐的反应而制备的吡咯并吡啶酮衍生物作为前体药物来举例说明。作为前体药物，尤其优选吡咯并吡啶酮衍生物为-NHCO(CH2)2OCH3、-NHCOCH(NH2)CH3等。
依前述实施例及其他前体药物类型的实施例的替换基团的进一步的实施例可查看上述参考文献。
此外，化学式(I)的化合物能够以前体药物的形式给药。本申请中所使用的术语即化学式(I)的化合物的“前体药物”是给药于患者时最终在体内释放化学式(I)的化合物的化合物功能性衍生物。当以前体药物的形式给药化学式(I)的化合物时，本领域技术人员可实施下列中的一种以上：(a)变更前述化合物的体内起效时间；(b)变更前述化合物的体内作用持续时间；(c)变更前述化合物的体内输送或分布；(d)变更前述化合物的体内溶解度；以及(e)克服前述化合物所面临的副作用或其他难点。用于制备前体药物的典型的功能性衍生物包括在体内以化学形态或酶的形态裂解的化合物的变形后的形态。包括磷酸盐、酰胺、酯、硫代酯、碳酸盐及氨基甲酸盐的制备的该等变形后的形态对本领域技术人员而言是周知的。
特定的化学式(I)的化合物可存在一个以上的手性碳原子。在该情况下，化学式(I)的化合物作为立体异构物存在。本发明扩展至包括对映异构物、非对映异构物及其混合物例如外消旋体在内的诸如化学式(I)的化合物的立体异构物形态之类的所有光学异构物。不同的立体异构物形态可通过常规方法相互分离或分解，或者任意给定的异构物可通过常规的立体选择性或非对称合成来得到。
本申请中，特定化合物可以以多种互变异构物形态存在，且应该理解为本发明包括所有该种互变异构物形态。
本发明还包括本发明的化合物的所有合适的同位素变体(isotopic variation)。本发明的同位素变体被定义为至少一个原子被具有相同的原子数但原子质量与自然界中常见的原子的原子质量不同的原子替代。可掺入于本发明的化合物中的同位素的例子分别包括诸如2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F及36Cl之类的氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟及氯的同位素。本发明的特定同位素变体，例如掺入了诸如3H或14C之类的放射性同位素对药物和/或基质组织分布研究有用。从制备的容易性及可检测性的观点考虑，尤其优选氚(即3H)及碳-14(即14C)的同位素。并且，由诸如重氢(即2H)之类的同位素进行的取代由于更好的代谢稳定性,可提供在特定治疗方面的优势，因此有些情况可以优选例如增加的体内半衰期或减少的剂量的需要。本发明的化合物的同位素变体一般能够通过诸如解说性方法之类的常规程序来进行制备，或者能够通过在后述的化合物中所记载的使用适当的同位素变体的合适的制剂来进行制备。
本发明的另一实施形态还提供化学式(I)的化合物及其药学上可接受的盐或溶剂化物，其用于医学疗法，尤其用于治疗由生长激素释放肽受体介导的紊乱。
本发明的另一实施形态是有关用于预防和/或治疗由生长激素释放肽受体介导的紊乱的生长激素释放肽受体活性的调节方法。
本发明的另一实施形态提供治疗患有由生长激素释放肽受体介导的紊乱的包括人在内的动物的方法，其包括将有效量的化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物给药于前述受治者。该种治疗包含给药治疗有效量的包括其药学上可接受的盐或溶剂化物的化学式(I)的化合物的步骤。该种治疗也可包含给药治疗有效量的含有包括其药学上可接受的盐或溶剂化物的化学式(I)的化合物的药物组成物的步骤。
本发明的另一实施形态提供化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在制备用于治疗由生长激素释放肽受体介导的紊乱的药物中的用途。
在生长激素释放肽受体中，内源性配体的生长激素释放肽的作用显示为有效的生长激素释放活性、食欲刺激、胃运动的促进及酸分泌、积极的心血管功效及对骨形成的直接作用。因此，生长激素释放肽受体调节剂在生长激素不足、饮食失调症、胃肠道疾病、心血管疾病、骨质疏松症、老化及分解代谢状态或慢性消耗性综合症的治疗中可获得有益的效果(Kojima and Kangawa,Nature Clinical Practice,Feb 2006,VoI.2,No.2,80-88)。生长激素释放肽受体调节剂在睡眼障碍的治疗中也可获得有益的效果(Brain Research,1088(2006)131-140)。
与生长激素释放肽受体有关、因此可由生长激素释放肽受体介导的、生长激素释放肽受体调节剂可获得有益的效果的特定紊乱包括肥胖症及肥胖症相关风险因素。并且，肥胖症相关风险因素包括糖尿病、糖尿病相关并发症、代谢综合症、心血管疾病(包括动脉粥样硬化及异常血脂症)，但并不限定于此。
在由生长激素释放肽受体介导的其他疾病和/或病症中，生长激素释放肽包括以下：生长激素不足状态的治疗、肌肉质量的增加、骨密度的增加、男性及女性治疗性性功能障碍的治疗、促进体重增加、促进体重维持、促进食欲增加(例如促进体重增加、体重维持或食欲增加对具有伴有体重降低的紊乱的患者或治疗中的患者有用)。伴有体重降低的疾病或紊乱的例子包括厌食症、暴食症、癌症恶病质、AIDS、消耗症、恶病质及虚弱老年人的消耗症。伴有体重降低的治疗的例子包括化疗法、放射线疗法、临时或永久性固定化及透析。
疾病或病症进一步包括睡眼障碍、充血性心脏衰竭、代谢障碍、记忆功能改善、乳腺癌、甲状腺癌、改善缺血性神经或肌肉损伤。
本发明的化合物通过调节生长激素释放肽受体的活性来发挥功能。该等可通过作为激动剂、部分激动剂、反向激动剂、拮抗剂或部分拮抗剂发挥作用而使受体活化/非活化。
饮食失调症包括：神经性厌食症(307.1)，包括亚型限制型(Restricting Type)及暴食/清除型(Binge-Eating/Purging Type)；神经性暴食症(307.51)，包括亚型清除型及非清除型；肥胖症；强迫性饮食失调症；暴食症；及另行指定的饮食失调症(307.50)[上述所列疾病后面的括号内的数字是指Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders，第4版，由American Psychiatric Association(DSM-IV)出版和/或the International Classification of Diseases，第10版(ICD-10)中的分类代码]。
本发明的另一实施形态提供化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在制备用于治疗饮食失调症的药物中的用途。
本发明的另一实施形态提供治疗患有饮食失调症的包括人在内的动物的方法，其包括将有效量的化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物给药于前述受治者。
胃肠道疾病包括胃肠阻塞、胃溃疡及诸如克罗恩氏病及溃疡性结肠炎之类的炎症性肠病。本发明的化合物也有可能对与胃食管反流和/或消化不良有关的症状的缓解、有或没有食欲-/代谢相关的恶病质的治疗有用，并且在麻痹性肠阻塞或假梗阻及诸如便秘型大肠急躁症之类的与便秘有关的病症的治疗中有用。
心血管疾病包括心脏衰竭及扩张型心肌病。
分解代谢状态或慢性消耗性综合症可在术后患者中出现，并且包括AIDS-相关消耗性综合症及诸如癌症恶病质之类的癌症相关消耗性综合症。
虽然可以在治疗中使用治疗有效量的化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物作为化学原料而给药，但也可将活性成分作为药物组成物。因此，本发明的另一实施形态中提供在一种以上的药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的混合物中含有化学式(I)的化合物或药学上可接受的盐或其溶剂化物的药物组成物。载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂的其他成分相容，且对其接受者无害。本发明的另一实施形态还提供包含将化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与一种以上的药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂进行混合的药物组成物的制备制程。
本发明的药物组成物可被配制成通过任何适当的途径例如口服(包括口腔或舌下)、直肠、鼻腔、局部(包括口腔、舌下或经皮)、阴道或非口服(包括皮下、肌肉内、静脉内或皮内)途径给药。因此，本发明的药物组成物可被配制为例如片剂、胶囊、粉末、颗粒、锭剂、霜剂或液体制剂，诸如口服或无菌非口服溶液或悬浮液。这样的药学制剂可通过药学领域中周知的任何方法进行制备，例如可通过将活性成分与载体或赋形剂结合来进行制备。
用于口服给药的片剂及胶囊可以是单位剂量型，且可含有：诸如结合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、黄芪胶、或聚乙烯吡咯烷酮；填充剂，例如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨糖醇或甘氨酸；压片润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇或二氧化硅；崩解剂，例如马铃薯淀粉；或可接受的润湿剂，诸如十二烷基硫酸钠之类的常规赋形剂。片剂可按照药学实践中周知的方法进行包衣。口服液体制剂可以是例如水性或油性悬浮液、溶液、乳液、糖浆或酏剂的形态，或者是可在使用前用于与水或其他合适的媒介物进行重构(reconstitution)的干燥产物。该种液体制剂可含有常规添加剂：诸如悬浮剂，例如山梨糖醇、甲基纤维素、葡萄糖浆、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪；乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇单油酸酯或阿拉伯胶；非水性媒介物(可包括食用油)，例如杏仁油、诸如甘油、丙二醇或乙醇之类的油脂；防腐剂，例如甲基或丙基对羟基苯甲酸或山梨酸；及根据需要可含有常规的调味剂或着色剂。
本发明的局部制剂可呈现为例如软膏、霜剂或乳液、眼膏及眼或耳滴剂、浸渍敷料(impregnated dressing)及气溶胶，且可含有诸如防腐剂、帮助药物浸透的溶剂、软膏及霜剂形态的润肤剂之类的适当的常规添加剂。制剂也可含有诸如霜剂或软膏基质及乳液用乙醇或油醇之类的相容的常规载体。该种载体可以在制剂中以约1％至高达约98％的含有量存在。更通常地，该等会形成高达约80％的制剂。
适合于非口服给药的药学制剂包括：水性及非水性无菌注射液，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂及使给药对象的血液与制剂具有等张性的溶质等；及水性或非水性无菌悬浮液，其可包含悬浮剂及增稠剂。制剂可以以例如密封安瓿及小瓶等单位剂量或多剂量容器提供，并且可以以在使用前仅需要立即添加例如注射用水等无菌液体载体的冷冻干燥(冻干)的状态储存。临时注射液和悬浮液可由无菌粉末、颗粒及片剂进行制备。
用于直肠给药的药学制剂可以以栓剂或灌肠剂的形式提供。
载体为固体的适合于鼻腔给药的药学制剂可包含具有例如20至500微米范围的粒子尺寸的较粗的粉末，该粉末采取以在鼻子靠近容器的状态下例如以通过鼻道的迅速吸入的鼻烟的形式给药。载体为液体的合适的制剂以包含活性成分的水性或油性溶液鼻喷雾剂或鼻滴剂的形式给药。
适合于吸入给药的药学制剂包括微细颗粒的粉尘或气雾，其可通过例如剂量加压气溶胶、喷雾器或吸入器等各种计量装置来生成。
适合于阴道给药的药学制剂可以以子宫托、卫生棉条(tampons)、霜剂、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾制剂的形式提供。
应当理解，除了上述提及的成分以外，根据所需制剂类型,该制剂还可包含在领域中常见的其他的制剂。
化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物的治疗有效量取决于包括例如人或其他动物的年龄及体重、需要治疗的确切病症及其严重程度、制剂的性质、以及给药途径等在内的许多因素，并且最终由护理医师或兽医做出判断。但是，用于治疗由生长激素释放肽受体介导的紊乱的化学式(I)的化合物的有效量一般在一天0.1至100mg/kg的范围内(对象(动物)的体重)，更通常地在一天1至10mg/kg(体重)的范围内。因此，对于70kg的成年动物，一天的实际用量通常是70至700mg，并且，该用量可以一天单一剂量或者更通常地以一天的总用量相同的方式一天多次剂量(例如两次、三次、四次、五次或六次)地提供。药学上可接受的盐或其溶剂化物的有效量可按照化学式(I)的化合物其本身的有效量的比例来确定。
用于在本发明中使用的的化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物可以与一种以上的其他治疗剂组合使用。因此，在另一实施形态中，本发明提供化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与另外的治疗剂(抗肥胖剂可成为一例)的组合。在又一实施形态中，本发明还提供包含化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与另一治疗剂的组合在治疗由生长激素释放肽受体介导的紊乱中的用途。
当化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物与一种以上的其他治疗剂组合使用时，该化合物可以依次或同时通过任何方便的途径给药。
上面提及的组合为了方便使用，可以以药学制剂的形式提供，因此包含如上所定义的组合的药学制剂最佳地与药学上可接受的载体或赋形剂药学制剂一起构成本发明的另一形态。该种组成物的各构成要素可以以分开的或结合的药物制剂依次或同时给药。
当在结合于同一制剂中时，可以理解该两种化合物必须是稳定的且彼此以及与制剂中的其他组分相容，并且可以被配制用于给药。当分开配制时，可以以任何方便的制剂提供，为方便起见，可以以该化合物在该领域周知的方式提供。
当一种化合物与针对相同疾病有效的第二治疗活性剂组合使用时，各化合物的剂量可能与单独使用化合物时的剂量不同。本领域技术人员可容易掌握适当的剂量。
本发明的化合物特别在炎性痛和泌尿系统疾病或紊乱的治疗中可以有效地与另一药理活性化合物或者两种以上的其他药理活性化合物结合。例如，生长激素释放肽受体激动剂、尤其是化学式(I)的化合物或其前体药物或其药学上可接受的盐或溶剂化物可以与选自以下中的一种以上的药剂组合而同时、依次或分开给药：
-阿片镇痛剂，例如吗啡、海洛因、氢吗啡酮、氧吗啡酮、左啡诺、左洛啡烷、美沙酮、哌替啶、芬太奴、可卡因、可待因、双氢可待因、氧可酮、氢可酮、丙氧芬、纳美芬、纳洛芬、纳洛酮、纳曲酮、丁丙诺啡、布托啡诺、纳布啡或喷他佐辛；
-非甾体类抗炎药(NSAID)，例如阿司匹林、双氯芬酸、二氟尼柳、依托度酸、芬布芬、非诺洛芬、氟苯柳、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、酮咯酸、甲氯芬那酸、甲灭酸、美洛昔康、萘丁美酮、萘普生、尼美舒利、硝基氟吡洛芬、奥沙拉秦、奥沙普秦、保泰松、吡罗昔康、柳氮磺吡啶、舒林酸、托美汀或佐美酸；
-巴比妥酸盐类镇定剂，例如异戊巴比妥、阿普比妥、仲丁比妥、布他比妥、普罗米那、美沙比妥、美索比妥、戊巴比妥、苯巴比妥、司可巴比妥、他布比妥、硫戊巴比妥或戊硫代巴比妥；
-具有镇定作用的苯二氮卓，例如氯氮唑、氯卓酸盐(clorazepate)、地西泮、氟西泮、劳拉西泮、奥沙西泮、替马西泮或三唑仑；
-具有镇定作用的H1拮抗剂，例如苯海拉明、吡拉明、异丙嗪、扑尔敏或氯环嗪；
-镇定剂，例如苯乙派啶酮、甲丙氨酯、甲喹酮或氯醛比林；
-骨骼肌缓和剂，例如巴氯芬、卡立普多、氯唑沙宗、环苯扎林、美索巴莫或奥芬那君；
-NMDA受体拮抗剂，例如右美沙芬((+)-3-羟基-N-甲基吗啡喃)或其代谢产物右啡烷((+)-3-羟基-N-甲基吗啡喃)、氯胺酮、美金刚、吡咯喹啉醌、顺式-4-(膦酰甲基)-2-呱啶甲酸、布地品、EN-3231(MorphiDex(商标)、吗啡与右美沙芬的组合制剂)、托吡酯、奈拉美生(neramexane)或包含NR2B拮抗剂的培净福太(perzinfotel)，例如艾芬地尔、曲索罗地(traxoprodil)或(-)-(R)-6-{2-[4-(3-氟苯基)-4-羟基-1-呱啶基]-1-羟基乙基-3，4-二氢-2(1H)-喹啉酮；
-α-肾上腺素能作用药，例如多沙唑嗪、坦洛新、可乐定、胍法辛、右美托咪定、莫达非尼或4-氨基-6,7-二甲氧基-2-(5-甲烷-磺酰胺基-1,2,3,4-四氢异喹啉-2-基)-5-(2-吡啶)喹唑啉；
-三环抗抑郁药，例如地昔帕明、丙米嗪、阿米替林或去甲替林；
-抗惊厥药，例如卡马西平、拉莫三嗪、托吡酯或丙戊酸；
-速激肽(NK)拮抗剂，尤其是NK-3、NK-2或NK-1拮抗剂，例如(αR,9R)-7-[3,5-双(三氟甲基)苄基]-8,9,10,11-四氢-9-甲基-5-(4-甲苯基)-7H-[1,4]二氮杂芳辛并[2,1-g][1,7]-萘啶-6,13-二酮(TAK-637)、5-[[(2R,3S)-2-[(1R)-1-[3,5-双(三氟甲基)苯基]乙氧基-3-(4-氟苯基)-4-吗啉]-甲基]-1,2-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-酮(MK-869)、阿瑞匹坦、拉奈匹坦、达匹坦或3-[[2-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯基]-甲基氨基]-2-苯基呱啶(2S,3S)；
-毒蕈碱拮抗剂，例如奥昔布宁、托特罗定、丙哌维林、曲司氯铵、达非那新、索非那新、替米维林及异丙托溴铵；
-COX-2选择性抑制剂，例如塞来考昔、罗非考昔、帕瑞考昔、伐地考昔、地拉考昔、依托考昔或芦米考昔；
-煤焦油镇痛剂、尤其是扑热息痛；
-神经安定剂，例如氟哌利多、氯丙嗪、氟呱啶醇、奋乃静、硫利达嗪、美索达嗪、三氟拉嗪、氟奋乃静、氯氮平、奥氮平、利司哌酮、齐拉西酮、喹硫平、舍吲哚、阿立哌唑、索奈哌唑、布南色林、伊洛哌酮、哌罗匹隆、雷氯必利、佐替平、联苯芦诺、阿塞那平、鲁拉西酮、胺磺必利、帕利哌酮(balaperidone)、帕潘立酮(palindore)、依利色林、奥沙奈坦、利莫纳班、美克林坦(meclinertant)、Miraxion(商标)或沙立佐坦(sarizotan)；
-辣椒素(vanilloid)受体激动剂(例如树脂毒素)或拮抗剂(例如辣椒平)；
-瞬时受体电位阳离子通道亚型(V1、V2、V3、V4、M8、M2、A1)激动剂或拮抗剂；
-β-肾上腺素能作用药，例如普萘洛尔；
-局部麻醉剂，例如美西律；
-皮质类固醇，例如地塞米松；
-5-HT受体激动剂或拮抗剂、尤其是5-HT1B/1D激动剂，例如依来曲坦、舒马普坦、那拉曲坦、佐米曲坦或利扎曲坦；
-5-HT2A受体拮抗剂，例如R(+)-α-(2,3-二甲氧基-苯基)-1-[2-(4-氟苯基乙基)]-4-呱啶甲醇(MDL-100907)；
-胆碱能(烟碱性)镇痛剂，例如伊普尼可林(TC-1734)、(E)-N-甲基-4-(3-吡啶基)-3-丁烯-1-胺(RJR-2403)、(R)-5-(2-吖丁啶基甲氧基)-2-氯吡啶(ABT-594)或烟碱；
-Tramadol(商标)；
-PDEV抑制剂，例如5-[2-乙氧基-5-(4-甲基-1-哌嗪基磺酰基)苯基]-1-甲基-3-正丙基-1,6-二氢-7H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(西地那非)、
(6R,12aR)-2,3,6,7,12,12a-六氢-2-甲基-6-(3,4-亚甲二氧基苯基)-吡嗪并[2’,1’:6,1]-吡啶并[3,4-b]吲哚-1,4-二酮(IC-351或他达拉非)、
2-[2-乙氧基-5-(4-乙基-哌嗪-1-基-磺酰基)-苯基]-5-甲基-7-丙基-3H-咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-酮(伐地那非)、
5-(5-乙酰基-2-丁氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-乙基-3-吖丁啶基)-2,6-二氢-7H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、
5-(5-乙酰基-2-丙氧基-3-吡啶基)-3-乙基-2-(1-异丙基-3-吖丁啶基)-2,6-二氢-7H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、
5-[2-乙氧基-5-(4-乙基哌嗪-1-基磺酰基)吡啶-3-基]-3-乙基-2-[2-甲氧基乙基]-2,6-二氢-7H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮、
4-[(3-氯-4-甲氧基苄基)氨基]-2-[(2S)-2-(羟甲基)吡咯烷-1-基]-N-(嘧啶-2-基甲基)嘧啶-5-羧酰胺、
3-(1-甲基-7-氧代-3-丙基-6,7-二氢-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)-N-[2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙基]-4-丙氧基苯磺酰胺；
-α-2-δ配体，例如加巴喷丁、普瑞巴林、3-甲基加巴喷丁、(3-(氨基甲基)双环[3.2.0]庚-3-基)乙酸、(3S,5R)-3-(氨基甲基)-5-甲基庚酸、(3S,5R)-3-氨基-5-甲基庚酸、(3S,5R)-3-氨基-5-甲基辛酸、(2S,4S)-4-(3-氯苯氧基)脯胺酸、(2S,4S)-4-(3-氟苄基)脯胺酸、[(1R,5R,6S)-6-(氨基甲基)双环[3.2.0]庚-6-基]乙酸、3-((1-(氨基甲基)环己基)甲基)-4H-[1,2,4]恶二唑-5-酮、C-[1-((1H-四唑-5-基)甲基)环庚基]甲胺、(3S,4S)-(1-(氨基甲基)-3,4-二甲基环戊基)乙酸、(3S,5R)-3-(氨基甲基)-5-甲基辛酸、(3S,5R)-3-氨基-5-甲基壬酸、(3S,5R)-3-氨基-5-甲基辛酸、(3R,4R,5R)-3-氨基-4,5-二甲基庚酸及(3R,4R,5R)-3-氨基-4,5-二甲基辛酸；
-大麻素；
-代谢型谷胺酸亚型1受体(mGluR1)拮抗剂；
-血清素再吸收抑制剂，例如舍曲林、舍曲林代谢产物去甲基舍曲林、氟西汀、去甲氟西汀(氟西汀去甲基代谢产物)、氟伏沙明、帕罗西汀、西酞普兰、西酞普兰代谢产物去甲基西酞普兰、草酸依地普仑、d,l-芬氟拉明、非莫西汀、伊福西汀、氰基度琉平(cyanodothiepin)、利托西汀、达泊西汀、奈法唑酮、西文氯胺及曲唑酮；
-去甲肾上腺素(norepinephrine)再吸收抑制剂，例如马普替林、洛非帕明、米氮平、羟丙替林、非唑拉明、托莫西汀、米安色林、安非他酮、安非他酮代谢产物羟基安非他酮、诺米芬辛及维洛沙秦(Vivalan(商标))、尤其是选择性去甲肾上腺素再吸收抑制剂，例如瑞波西汀、尤其是(S,S)-瑞波西汀；
-双血清素-去甲肾上腺素再吸收抑制剂，例如文拉法辛、文拉法辛代谢产物O-去甲文拉法辛、氯米帕明、氯米帕明代谢产物去甲氯米帕明、度洛西汀、米那普仑及丙米嗪；
-诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)抑制剂，例如
S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-L-同型半胱胺酸、
S-[2-[(1-亚氨基乙基)-氨基]乙基]-4,4-二氧代-L-半胱胺酸、
S-[2-[(1-亚氨基乙基)氨基]乙基]-2-甲基-L-半胱胺酸、
(2S,5Z)-2-氨基-2-甲基-7-[(1-亚氨基乙基)氨基]-5-庚酸、
2-[[(1R,3S)-3-氨基-4-羟基-1-(5-噻唑基)-丁基]硫基]-5-氯-3-吡啶甲腈；
2-[[(1R,3S)-3-氨基-4-羟基-1-(5-噻唑基)丁基]硫基]-4-氯苯腈、
(2S,4R)-2-氨基-4-[[2-氯-5-(三氟甲基)苯基]硫基]-5-噻唑丁醇、
2-[[(1R,3S)-3-氨基-4-羟基-1-(5-噻唑基)丁基]硫基]-6-(三氟甲基)-3-吡啶甲腈、
2-[[(1R,3S)-3-氨基-4-羟基-1-(5-噻唑基)丁基]硫基]-5-氯苯腈、或
N-[4-[2-(3-氯苄基氨基)乙基]苯基]噻吩-2-甲脒或胍乙基二硫化物；
-乙酰胆碱酯酶抑制剂，例如多奈哌齐；
-前列腺素E2 4亚型(EP4)拮抗剂，例如N-[({2-[4-(2-乙基-4,6-二甲基-1H-咪唑并[4,5-c]吡啶-1-基)苯基]乙基}氨基)-羰基]-4-甲基苯磺酰胺、或
4-[(1S)-1-({[5-氯-2-(3-氟苯氧基)吡啶-3-基]羰基}氨基)乙基]苯甲酸；
-白三烯B4拮抗剂；例如1-(3-联苯基-4-基甲基-4-羟基-苯并二氢呋喃-7-基)-环戊羧酸(CP-105696)、5-[2-(2-羧乙基)-3-[6-(4-甲氧基苯基)-5E-己烯基]氧基苯氧基]-戊酸(ONO-4057)或DPC-11870；
-5-脂肪氧合酶抑制剂，例如齐留通、6-[(3-氟-5-[4-甲氧基-3,4,5,6-四氢-2H-吡喃-4-基])苯氧基甲基]-1-甲基-2-喹诺酮(ZD-2138)或2,3,5-三甲基-6-(3-吡啶基甲基)-1,4-苯醌(CV-6504)；
-钠通道阻断剂，例如利多卡因；
-钙通道阻断剂，例如齐考诺肽、唑尼沙胺、米贝拉地尔；
-5-HT3拮抗剂，例如昂丹司琼；
-降钙素基因相关肽(CGRP)拮抗剂；
-缓激肽(BK1及BK2)拮抗剂；
-电压门控钠依赖性通道阻断剂(Nav1.3、Nav1.7、Nav1.8)；
-电压依赖性钙通道阻断剂(N-型、T-型)；
-P2X(离子通道型ATP受体)拮抗剂；
-酸-敏感离子通道(ASIC1a、ASIC3)拮抗剂；
-血管收缩素AT2拮抗剂；
-趋化因子CCR2B受体拮抗剂；
-组织蛋白酶(B，S，K)抑制剂；
-σ1受体激动剂或拮抗剂；及
其药学上可接受的盐及溶剂化物。
尤其，优选本发明的治疗剂或预防剂能够与化疗剂、免疫治疗剂、利尿剂等组合使用。
化疗剂的例子包括：诸如环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、白消安、尼莫司汀、雷莫司汀、替莫唑胺等烷基化剂；诸如胺甲喋呤、氟尿嘧啶、替加氟、卡莫氟、去氧氟尿苷、卡培他滨、阿糖胞苷、安西他滨、依诺他滨、阿糖胞苷十八烷基磷酸盐(cytarabine ocfosfate)、吉西他滨、巯嘌呤、氟达拉滨等核酸代谢物；诸如多柔比星、道诺霉素(daunorubicin)、吡柔比星、表阿霉素(epirubicin)、伊达比星、米托蒽醌、丝裂霉素C、博来霉素、培洛霉素等抗肿瘤抗生素；诸如长春新碱、长春碱、长春地辛、长春瑞滨、紫杉醇、多烯紫衫醇等微管抑制剂；诸如顺铂、卡铂、奈达铂等铂类药物；诸如伊立替康、拓扑替康(nogitecan)、依托泊苷等拓朴异构酶抑制剂；诸如曲妥珠单抗、利妥昔单抗、伊马替尼(imanitib)等分子靶向治疗剂；等等。
免疫治疗剂的例子包括胞壁酰二肽衍生物、香菇多糖、西佐糖(sizofiran)、乌苯美司、溶链菌(picibanil)、云芝多糖(krestin)、干扰素、白细胞介素、粒细胞集落刺激因子、红细胞生成素等。
利尿剂的例子包括：诸如可可碱水杨酸钠之类的黄嘌呤衍生物药剂；诸如乙噻嗪(ethiazide)、环戊甲噻嗪、三氯甲噻嗪、氢氯噻嗪、氢氟甲噻嗪、苄氢氯噻嗪、戊氟噻嗪、泊利噻嗪(polythiazide)、甲氯噻嗪等利尿药；诸如螺内酯、三胺喋呤等抗醛固酮药；诸如乙酰唑胺等碳酸酐酶抑制剂；诸如氯噻酮、美夫西特、吲达帕胺、呋塞米、阿佐酰胺等氯苯磺酰胺药物；异山梨醇、依他尼酸、吡咯他尼、布美他尼等。
该种组合提供包括治疗中的协同活性在内的显著的优势。
包括但并不限定于本说明书中引用的专利和专利申请，且通过参考而并入本文中的所有出版物，如同每个单独的出版物在这里被充分阐述那样，具体且单独地通过参考而被并入本文中。
一般合成
在整个本申请中，以下述含义使用下述略语：
DCM 二氯甲烷
DMA N,N-二甲基乙酰胺
DME 1,2-二甲氧基乙烷
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
EDC 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐
EtOAc 醋酸乙酯
EtOH 乙醇
ESI 电喷洒游离
HOBT 1-羟基苯并三唑
HBTU 苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯
HPLC 高压液相层析
LC 液相色谱
LG 离去基
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
MHz 兆赫兹
MS 质谱分析
NMR 核磁共振
PG 保护基
T3P 2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷(trioxatriphosphinane)2,4,6-三氧化物
TBME 甲基叔丁醚
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层层析
tR 滞留时间
UV 紫外线
术语“碱”对所使用的碱的种类同样没有特别限制，在此可同等地使用在该种类型的反应中通常使用的任意碱。该种碱的例子包括以下：碱金属氢氧化物，例如氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸钾及氢氧化钡；碱金属氢化物，例如氢化锂、氢化钠及氢化钾；碱金属醇盐，例如甲醇钠、乙醇钠及叔丁醇钾；碱金属碳酸盐，例如碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾及碳酸铯；碱金属碳酸氢盐，例如碳酸氢锂、碳酸氢钠及碳酸氢钾；胺，例如N-甲基吗啉、三乙胺、三丙胺、三丁胺、二异丙基乙胺、N-甲基呱啶、吡啶、4-吡咯烷吡啶、皮考啉，2,6-二(叔丁基)-4-甲基吡啶、喹啉、N,N-二甲基苯胺、N,N-二乙基苯胺、1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯(DBN)、1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(DABCO)、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、卢剔啶及可力丁；碱金属氨基化物，例如氨基锂、氨基钠、氨基钾、二异丙氨基锂、二异丙氨基钾、二异丙氨基钠、双(三甲硅基)氨基锂及双(三甲硅基)氨基钾。其中，优选三乙胺、二异丙基乙胺、DBU、DBN、DABCO、吡啶、卢剔啶、可力丁、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、碳酸钾、碳酸氢钾、氢氧化钾、磷酸钾、氢氧化钡及碳酸铯。
前述反应一般且优选在惰性溶剂的存在下进行。只要不对反应或试剂带来坏影响、且溶剂可以将试剂溶解至至少某种程度，则对所使用的溶剂种类并没有特别限制。适当的溶剂的例子非限定性地包括以下：卤代烃，例如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳及二氯乙烷；醚，例如二乙醚、二异丙醚、THF及二恶烷；芳香族烃，例如苯、甲苯及硝基苯；酰胺，例如DMF、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)及六甲基磷酰三胺；胺，例如N-甲基吗啉、三乙胺、三丙胺、三丁胺、二异丙基乙胺、N-甲基呱啶、吡啶、4-吡咯烷吡啶、N,N-二甲基苯胺及N,N-二乙基苯胺；醇，例如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇及丁醇；腈，例如乙腈及苄腈；亚砜，例如二甲基亚砜(DMSO)及环丁砜；酮，例如丙酮及二乙酮。在该等溶剂中，优选包含DMF、DMA、DMSO、THF、二乙醚、二异丙醚、乙二醇二甲醚、乙腈、二氯甲烷、二氯乙烷及氯仿，但并不限定于此。
实施例
用下述非限定性实施例对本发明进行说明，如没有特别提及，所有试剂均是市售品，所有操作均在室温至环境温度即约18-25℃范围内进行；使用旋转蒸发器在减压下并在到达约60℃的浴温度下进行溶剂的蒸发；用薄层层析(TLC)或LC-MS(低分辨质谱)监控反应，仅以说明的目的给出反应时间；用以下技术中的至少一种来确认所有分离化合物的结构和纯度：TLC(Merck硅胶60F254预涂TLC板或Merck NH2F254预涂HPTLC板)、质谱分析或NMR。仅以说明的目的给出收率。使用Wakogel(注册商标)C-300HGT或Fuji Silysia Chromatorex(注册商标)DM2035(氨基型，30-50微米)或Biotage silica(32-63mm，KP-Sil)或Biotage氨基结合硅(35-75mm，KP-NH)来进行快速管柱层析。通过下述装置获得低分辨质谱资料(ESI)。
装置；带有UV2487检测器及ZQ2000质谱仪的Waters Alliance 2695 HPLC系统
利用下述装置及条件，使用HPLC(制备型LC-MS)执行化合物的提纯。
装置；Waters MS-trigger Auto-purification系统
管柱；Waters XBridge C18，19×50mm，5微米粒子尺寸
条件A：甲醇或乙腈/0.05％(v/v)氨水溶液
条件B：甲醇或乙腈/0.05％(v/v)甲酸水溶液
HPLC滞留时间的确定条件：
方法：QC1
装置：带有TUV检测器及ZQ2000质谱仪的Waters ACQUITY Ultra Performance LC
管柱：Waters ACQUITY C18，2.1×100mm，1.7微米粒子尺寸
管柱温度：60℃
流速：0.7mL/min
运行时间：3min
UV检测：210nm
MS检测：ESI正/负模式
流动相：
A1：10mM乙酸铵
B1：乙腈
表1.梯度程式：
{表1}
方法：QC2
装置：带2996PDA检测器及ZQ2000质谱仪的Waters Alliance2795 HPLC系统
管柱：XBridge C18，4.6×50mm，3.5微米粒子尺寸
管柱温度：45℃
流速：1.2mL/min
运行时间：4.5min
UV检测：210-400nm(扫描范围)
MS检测：ESI正/负模式
流动相：
A：水
B：乙腈
C：1％甲酸水溶液
D：1％氨水溶液
表2.梯度程式：
{表2}
利用下述装置及条件执行光学纯度评估：
装置：带有2996PDA detector的Waters Alliance2695 HPLC系统
管柱：DAICEL CHIRALCEL OD-H，4.6×250mm，5微米粒子尺寸
管柱温度：25℃(室温)
流动相：正己烷/2-丙醇/二乙胺＝90/10/0.1(v/v/v)
流速：1mL/min
运行时间：30min
自动取样器温度：5℃
UV检测：259nm
对于四甲基硅烷(TMS)以百万分之一(parts per Million)(ppm)作为内部标准，没有特别提及就可以使用氘代氯仿(99.8％D)或二甲基亚砜(99.9％D)来作为溶剂，并以270MHz(JEOL JNM-LA 270分光仪)或300MHz(JEOL JNM-LA300)确定NMR资料；所使用的常规略语如下：s＝单线、d＝双重线、t＝三重线、q＝四重线、m＝多重线、br＝广域等。化学记号具有该等通常的含义；M(摩尔/升)、L(升)、mL(毫升)、g(克)、mg(毫克)、mol(摩尔)、mmol(毫摩尔)。
每个制备化合物一般由ChemBioDraw(Ultra,version 12.0,CambridgeSoft)命名。
化学式(I)的所有丝氨酸衍生物可通过以下示出的一般方法中所记载的程序进行制备，或者可通过实施例部分及制备部分中所记载的具体方法或在该等方法施加通常变更来进行制备。本发明不仅包括化学式(I)的丝氨酸衍生物的该等制备制程的任意一种以上，而且还包括使用于其中的任意的新型中间体。
在下述一般方法中，除非另有说明，关于化学式(I)的丝氨酸衍生物的描述如前面所定义。
{化学式4}
<方案A>
在步骤A-a中，化学式(III)的化合物可通过去保护、接着通过对应的盐的动态动力学拆分，由化学式(II)的化合物进行制备。去保护可通过本领域技术人员所周知的常规方法来实施(由T.W.Greene et al.编辑的“Protective Groups in Organic Synthesis Forth Edition”(John Wiley&Sons,2007)中所记载的典型的氨基保护基)。此外，去保护的化合物可使用合适的溶剂，通过使用诸如D-酒石酸之类(但并不限定于此)的光学纯酸的动态动力学拆分转换为光学纯盐。合适的溶剂的例子包括诸如DCM(二氯甲烷)、丙酮、EtOAc、THF及水。动态动力学拆分可在温度约0至150℃、进一步优选在约20至100℃下进行。动态动力学拆分可进行一段时间，一般情况下进行约1hr至48hr。
在步骤A-b中，化学式(IV)的化合物可使用诸如T3P、HBTU及EDC-HOBT之类(但并不限定于此)的合适的缩合剂，通过与化学式(VII-a)的化合物的酰胺化，由化学式(III)的化合物进行制备。优选缩合可在诸如三乙胺及N,N-二异丙基乙胺之类的碱的存在下，在诸如EtOAc、THF、DMF、DMA及DCM之类的合适的溶剂中，在约-70至60℃的温度下进行约1-24小时。
在步骤A-c中，化学式(V)的化合物可通过去保护，由化学式(IV)的化合物进行制备。去保护可通过本领域技术人员所周知的常规方法来实施(由T.W.Greene et al.编辑的“Protective Groups in Organic Synthesis Forth Edition”(John Wiley&Sons,2007)中所记载的典型的氨基保护基)。
在步骤A-d中，化学式(VI)的化合物可使用诸如T3P、HBTU及EDC-HOBT之类(但并不限定于此)的合适的缩合剂，通过与2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸的酰胺化，由化学式(V)的化合物进行制备。优选缩合可在诸如三乙胺及N,N-二异丙基乙胺之类的碱的存在下，在诸如EtOAc、THF、DMF、DMA及DCM之类的合适的溶剂中，在约0至60℃的温度下进行约1-24小时。
在步骤A-e中，化学式(I)的化合物可通过去保护，由化学式(VI)的化合物进行制备。去保护可通过本领域技术人员所周知的常规方法来实施(由T.W.Greene et al.编辑的“Protective Groups in Organic Synthesis Forth Edition”(John Wiley&Sons,2007)中所记载的典型的氨基保护基)。
在步骤A-f中，化学式(VI)的化合物可使用诸如T3P、HBTU及EDC-HOBT之类(但并不限定于此)的合适的缩合剂，通过与化学式(VII-b)的化合物的酰胺化，由化学式(III)的化合物进行制备。优选缩合可在诸如三乙胺及N,N-二异丙基乙胺之类的碱的存在下，在诸如EtOAc、THF、DMF、DMA及DCM之类的合适的溶剂中，在约-40至60℃的温度下进行约1-24小时。
{化学式5}
<方案B>
在步骤B-a中，化学式(IX)的化合物可通过与化学式(XIV)的化合物的Mitsunobu反应，由化学式(VIII)的化合物进行制备。Mitsunobu反应可在作为偶联剂的偶氮-二羧酸酯(包括但并不限定于诸如偶氮二羧酸二乙酯、偶氮二羧酸二异丙酯、偶氮二羧酸二叔丁酯及双(2-甲氧基乙基)偶氮二羧酸酯)的存在下，在有机溶剂中进行，并且，可在诸如三苯基膦之类的合适的还原剂(但并不限定于此)的存在下，于惰性有机溶剂中进行。合适的惰性有机溶剂的例子包括诸如THF、1,4-二恶烷、MeCN、TBME及甲苯。反应可在约-20至150℃的温度下进行，进一步优选在约0至60℃下进行。在一般情况下，反应时间为约30分钟至48小时，进一步优选约30分钟至24小时。
在步骤B-b中，化学式(X)的化合物可通过去保护，由化学式(IX)的化合物进行制备。去保护可通过本领域技术人员所周知的常规方法来实施(由T.W.Greene et al.编辑的“Protective Groups in Organic Synthesis Forth Edition”(John Wiley&Sons,2007)中所记载的典型的氨基保护基)。
在步骤B-c中，化学式(XI)的化合物可通过氨基部分的保护，由化学式(X)的化合物进行制备。保护可通过本领域技术人员所周知的常规方法来进行(由T.W.Greene et al.编辑的“Protective Groups in Organic Synthesis Forth Edition”(John Wiley&Sons,2007)中所记载的典型的氨基保护基)。
在步骤B-d中，化学式(VII-a)的化合物可通过化学式(XI)的酯化合物的水解进行制备。水解可通过常规程序进行。在典型的程序中，水解在碱性条件下例如在氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂的存在下进行。合适的溶剂包括水、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、2-甲氧基乙醇、乙二醇、THF、DME、1,4-二恶烷、DMF、及DMA，但并不限定于此。反应可在约20至100℃的温度下进行约10min至24hr。
在步骤B-e中，化学式(XII)的化合物可通过酸性条件下的处理来进行制备。在典型的程序中，反应可在酸性条件下例如在氢氯酸、氢溴酸的存在下进行。合适的溶剂包括水、1,4-二恶烷、THF、MeCN，但并不限定于此。反应可在约50至120℃的温度下进行约1hr至24hr。
在步骤B-f中，化学式(VII-a)的化合物可通过氨基部分的保护，由化学式(XII)的化合物进行制备。保护可通过本领域技术人员所周知的常规方法来进行(由T.W.Greene et al.编辑的“Protective Groups in Organic Synthesis Forth Edition”(John Wiley&Sons,2007)中所记载的典型的氨基保护基)。
在步骤B-g中，化学式(XIII)的化合物可通过氨基部分的保护，由化学式(X)的化合物进行制备。保护可通过本领域技术人员所周知的常规方法来进行(由T.W.Greene et al.编辑的“Protective Groups in Organic Synthesis Forth Edition”(John Wiley&Sons,2007)中所记载的典型的氨基保护基)。
在步骤B-h中，化学式(VII-b)的化合物可通过化学式(XIII)的酯化合物的水解进行制备。水解可通过常规程序进行。在典型的程序中，水解在碱性条件下例如在氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化锂的存在下进行。合适的溶剂包括水、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、2-甲氧基乙醇、乙二醇、THF、DME、1,4-二恶烷、DMF及DMA，但并不限定于此。反应可在约20至100℃的温度下进行约10min至24hr。
{化学式6}
<方案C>
在步骤C-a中，化学式(II)的化合物可通过与化学式(XVI)的化合物原位形成腙，接着进行闭环，由化学式(XV)的化合物进行制备。反应可在金属乙酸盐(包括但并不限定于诸如乙酸钠、乙酸钾及乙酸锂)的存在下进行。合适的溶剂包括甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、2-甲氧基乙醇、乙二醇、THF、DME及1,4-二恶烷，但并不限定于此。反应可在约50至150℃的温度下进行约1hr至48hr。
下述合成中的所有起始原料能够商购、或者能够通过中间体合成部分中另行提及的本领域技术人员所周知的常规方法来得到。
核合成部分
如下制备核化合物。将核化合物的名称及结构示于表3。
核1：3a-苄基-2-(2,2-二氟乙基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮2,2,2-三氟乙酸酯
步骤1：3a-苄基-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-羧酸叔丁酯
在回流温度下，将1-叔丁基3-甲基3-苄基-4-氧代哌啶-1,3-二羧酸酯(2.4g，7.0mmol)、(2,2-二氟乙基)肼盐酸盐(930mg，7.0mmol)与乙酸钠(2.3g，28mmol)的EtOH(40mL)混合物搅拌24hr。冷却至室温之后，在真空中浓缩混合物。用EtOAc(80mL)稀释残留物。用水清洗稀释的混合物，并经Na2SO4干燥。进行过滤之后，在真空中浓缩滤液。通过管柱层析(硅胶，用25％EtOAc的己烷进行洗脱)提纯残留物而获得作为白色固体的标题化合物(1.8g，65％的收率)。
MS(ESI)m/z：394(M+H)+
步骤2：3a-苄基-2-(2,2-二氟乙基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮2,2,2-三氟乙酸酯
在0℃下，在3a-苄基-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-羧酸叔丁酯(100mg，0.25mmol)的DCM(3mL)溶液中添加三氟乙酸(2mL)，并在相同温度下，将混合物搅拌1hr。在真空中浓缩混合物而获得作为浅黄色胶状物的标题化合物(104mg，＞99％的收率)。
MS(ESI)m/z：294(M+H)+,292(M-H)-
核2：(R)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2S,3S)-2,3-二羟基琥珀酸酯
步骤1：2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-羧酸叔丁酯
以与核1的步骤1类似的方式，以87％的收率(3600mg，浅紫色胶状物)由1-叔丁基3-甲基4-氧代-3-(吡啶-2-基甲基)哌啶-1,3-二羧酸酯(3700mg，11mmol)制备标题化合物。
1H-NMR(270MHz,CDCl3)delta 8.38(1H,d,J＝3.9Hz),7.58-7.50(1H,m),7.13-7.05(2H,m),5.94-5.30(1H,m),4.75-4.40(2H,br),4.10-3.76(2H,m),3.42-3.26(2H,m),2.93-2.50(4H,m),1.53(9H,s)。
MS(ESI)m/z：395(M+H)+。
步骤2：(R)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
将2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-羧酸叔丁酯(4.9g，13mmol，外消旋)的DCM(50mL)溶液冷却至0℃，并缓慢添加三氟乙酸(4.1mL)。在室温下将混合物搅拌1.5hr，接着冷却至0℃。在相同温度下，在生成的悬浮液中添加三乙胺(9.6mL，69mmol)。用DCM(50mL)稀释所生成的黄色的透明溶液，并用盐水(30mL×3)清洗，经Na2SO4干燥，过滤，并在真空中浓缩而获得作为褐色油性的标题化合物(3.8g，＞100％的收率)。
MS(ESI)m/z：295(M+H)+。
1H-NMR(270MHz,CDCl3)delta 8.41(1H,d,J＝5.9Hz),7.58-7.51(1H,m),7.14-7.06(2H,m),5.76(1H,tt,J＝55.7Hz,4.6Hz),4.16-3.72(2H,m),3.53-3.32(4H,m),2.74-2.52(4H,m)。未观察到NH。
MS(ESI)m/z：295(M+H)+。
步骤3：(R)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2S,3S)-2,3-二羟基琥珀酸酯
(R)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(ca.12.5mmol)溶液溶解于DCM(6mL)和丙酮(20mL)中的溶液。在室温下，在混合物中添加D-酒石酸(2.07g，13.8mmol)的丙酮-水(7:3，10mL)溶液。混合物立即变为白色浆液。再次添加丙酮(10mL)，使混合物更容易搅拌。在室温下彻夜搅拌之后，过滤混合物，用冷丙酮(10mL)清洗固体，并在减压下以40℃干燥3小时而得到作为白色固体的标题化合物(4.68g，84％)。
1H NMR(DMSO-d6,270MHz)delta 8.33(1H,d,J＝5.9Hz),7.66-7.60(1H,m),7.19-7.08(2H,m),5.96(1H,tt,J＝55.3Hz,4.0Hz),4.28(2H,s),4.03-3.74(2H,m),3.62(1H,d,J＝14.1Hz),3.41-3.18(4H,m),3.14(1H,d,J＝14.1Hz),2.50-2.33(2H,m)。
MS(ESI)m/z：295(M+H)+。
{表3}
中间体合成部分
如下制备中间体化合物。将中间体化合物的名称及结构示于表4。
中间体1：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2,4-二氟苯氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(2,4-二氟苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
在0℃下，在(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(800mg，2.2mmol)、2,4-二氟苯酚(370mg，2.9mmol)及三苯基膦(760mg，2.9mmol)的THF(15mL)搅拌溶液中滴加双(2-甲氧基乙基)偶氮二羧酸酯(670mg，2.9mmol)的THF(2mL)溶液。在室温下将混合物搅拌2hr。浓缩混合物，并用EtOAc(50mL)稀释残留物。用饱和的NaHCO3水溶液、接着用盐水清洗稀释的混合物，并经Na2SO4干燥。进行过滤之后，浓缩滤液。通过管柱层析(硅胶，用3％至13％EtOAc的己烷进行洗脱)提纯残留物而获得作为无色胶状物的标题化合物(771mg，74％的收率)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.52(6H,d,J＝7.3Hz),7.30-7.16(9H,m),6.99-6.72(3H,m),4.29(1H,d,J＝9.5,5.2Hz),4.02(1H,dd,J＝9.5,6.9Hz),3.78-3.71(1H,m),3.24(3H,s),2.88(1H,d,J＝10.3Hz)。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2,4-二氟苯氧基)丙酸酯
在室温下，在(R)-甲基3-(2,4-二氟苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(760mg，1.6mmol)的DCM(10mL)搅拌溶液中添加三氟乙酸(3.7mL)，并在相同温度下，将混合物搅拌2hr。在混合物中添加MeOH(25mL)，并将生成的混合物搅拌5min，接着在真空中浓缩。将残留物溶解于DCM(20mL)中，接着，在室温下，将三乙胺(0.67mL，4.8mmol)及二碳酸二叔丁酯(530mg，2.4mmol)依次添加到混合物中。在室温下搅拌2hr之后，在真空中浓缩混合物。通过管柱层析(硅胶，用5％至14％EtOAc的己烷进行洗脱)提纯残留物而获得作为无色油的标题化合物(470mg，88％的收率)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 6.96-6.75(3H,m),5.53(1H,d,J＝8.8Hz),4.66-4.63(1H,m),4.42(1H,dd,J＝8.8,2.9Hz),4.25(1H,dd,J＝9.2,3.3Hz),3.79(3H,s),1.46(9H,s)。
MS(ESI)m/z：232(M-Boc+H)+。
步骤3：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2,4-二氟苯氧基)丙酸
在(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2,4-二氟苯氧基)丙酸酯(470mg，1.4mmol)的THF(10mL)搅拌溶液中添加LiOH一水合物(65mg，1.6mmol)，接着，将水(2mL)添加到混合物中。在室温下，将混合物搅拌30min。在混合物中添加0.5N氢氯酸(hydrochloric acid)(2mL),并用EtOAc(50mL×2)萃取混合物。将萃取物经Na2SO4干燥。进行过滤之后，在真空中浓缩滤液。通过管柱层析(硅胶，用9％MeOH的DCM进行洗脱)提纯残留物而获得作为无色胶状物的标题化合物(200mg，45％的收率)。
MS(ESI)m/z：318(M+H)+,316(M-H)-。
中间体2：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-苯氧基丙酸
步骤1：(R)-甲基3-苯氧基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以23％的收率(390mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(1.4g，3.9mmol)和苯酚(0.73g，7.8mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.54-7.49(6H,m),7.30-7.16(11H,m),6.96(1H,t,J＝7.3Hz),6.88(2H,d,J＝8.0Hz)4.26(1H,dd,J＝9.2,4.8Hz),4.03-4.00(1H,m),3.76-3.72(1H,m),3.22(3H,s),2.88(1H,br s)。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-苯氧基丙酸酯
以与中间体1的步骤2类似的方式，以87％的收率(230mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-苯氧基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(390mg，0.89mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.28(2H,t,J＝7.7Hz),6.98(1H,t,J＝7.3Hz),6.88(2H,d,J＝8.1Hz),5.52(1H,d,J＝8.0Hz),4.67(1H,dt,J＝8.8,2.6Hz),4.40(1H,dd,J＝9.2,2.7Hz),4.20(1H,dd,J＝9.5,2.9Hz),3.77(3H,s),1.49(9H,s)。
MS(ESI)m/z：232(M-Boc+H)+。
步骤3：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-苯氧基丙酸
以与中间体1的步骤3类似的方式，以73％的收率(150mg，无色胶状物)由(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-苯氧基丙酸酯(220mg，0.75mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：282(M+H)+,280(M-H)-。
中间体3：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-氯苯氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(4-氯苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以56％的收率(730mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(1.0g，2.8mmol)和4-氯苯酚(0.46g，3.6mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.53-7.49(6H,m),7.28-7.16(11H,m),6.82-6.77(2H,m),4.20(1H,dd,J＝9.2,4.8Hz),4.00-3.95(1H,m),3.80-3.67(1H,m),3.23(3H,s),2.87(1H,d,J＝10.3Hz)。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-氯苯氧基)丙酸酯
以与中间体1的步骤2类似的方式，以95％的收率(480mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-(4-氯苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(720mg，1.5mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.23(2H,d,J＝8.8Hz),6.81(2H,d,J＝9.5Hz),5.49(1H,d,J＝8.1Hz),4.74-4.61(1H,m),4.37(1H,dd,J＝9.2,2.7Hz),4.18(1H,dd,J＝9.5,2.9Hz),3.72(3H,s),1.46(9H,s)。
MS(ESI)m/z：230(M-Boc+H)+。
步骤3：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-氯苯氧基)丙酸
以与中间体1的步骤3类似的方式，以58％的收率(260mg，无色胶状物)由(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-氯苯氧基)丙酸酯(480mg，1.4mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：316(M+H)+,314(M-H)-。
中间体4：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氯苯氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(3-氯苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以76％的收率(890mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(900mg，2.5mmol)和3-氯苯酚(420mg，3.2mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.53-7.13(16H,m),6.95-6.70(3H,m),4.23(1H,dd,J＝9.2,4.7Hz),3.99(1H,dd,J＝9.5,6.6Hz),3.77-3.68(1H,m),3.23(3H,s),2.88(1H,d,J＝10.3Hz)。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氯苯氧基)丙酸酯
以与中间体1的步骤2类似的方式，以73％的收率(450mg，无色油)由(R)-甲基3-(3-氯苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(880mg，1.8mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.20(1H,t,J＝8.1Hz),6.96(1H,d,J＝8.0Hz),6.89(1H,t,J＝2.2Hz),6.77(1H,dd,J＝8.4,2.6Hz),5.49(1H,d,J＝4.4Hz),4.69-4.65(1H,m),4.38(1H,dd,J＝9.2,2.6Hz),4.20(1H,dd,J＝8.8,2.9Hz),3.78(3H,s),1.46(9H,s)。
MS(ESI)m/z：230(M-Boc+H)+。
步骤3：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氯苯氧基)丙酸
以与中间体1的步骤3类似的方式，以57％的收率(240mg，无色胶状物)由(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氯苯氧基)丙酸酯(440mg，1.3mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：316(M+H)+,314(M-H)-。
中间体5：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3,5-二氯苯氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(3,5-二氯苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以42％的收率(530mg，无色固体)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(900mg，2.5mmol)和3,5-二氯苯酚(530mg，3.2mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.51(6H,d,J＝7.3Hz),7.35-7.17(9H,m),6.98-6.95(1H,br s),6.78(2H,d,J＝1.5Hz),4.21(1H,dd,J＝9.2,4.8Hz),3.97(1H,dd,J＝8.8,6.6Hz),3.74-3.67(1H,m),3.25(3H,s),2.88(1H,d,J＝10.3Hz)。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3,5-二氯苯氧基)丙酸酯
以与中间体1的步骤2类似的方式，以85％的收率(320mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-(3,5-二氯苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(520mg，1.0mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 6.98(1H,d,J＝1.5Hz),6.79(2H,d,J＝1.5Hz),5.45(1H,d,J＝8.8Hz),4.68-4.65(1H,m),4.37(1H,dd,J＝8.8,1.5Hz),4.20(1H,dd,J＝9.2,2.6Hz),3.79(3H,s),1.46(9H,s)。
MS(ESI)m/z：264(M-Boc+H)+。
步骤3：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3,5-二氯苯氧基)丙酸
以与中间体1的步骤3类似的方式，以48％的收率(140mg，无色胶状物)由(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3,5-二氯苯氧基)丙酸酯(310mg，0.85mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：250(M-Boc+H)+,348(M-H)-。
中间体6：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-(三氟甲基)苯氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(2-(三氟甲基)苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以55％的收率(690mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(900mg，2.5mmol)和2-(三氟甲基)苯酚(530mg，3.2mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.56-7.46(7H,m),7.30-7.17(10H,m),7.04-6.96(2H,m),4.36(1H,dd,J＝8.8,3.6Hz),4.07-4.02(1H,m),3.82-3.74(1H,m),3.22(3H,s),2.92(1H,d,J＝10.3Hz)。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-(三氟甲基)苯氧基)丙酸酯
以与中间体1的步骤2类似的方式，以86％的收率(420mg，无色油)由(R)-甲基3-(2-(三氟甲基)苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(680mg，1.3mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.56(1H,d,J＝8.1Hz),7.49(1H,t,J＝8.1Hz),7305(1H,t,J＝7.3Hz),6.96(1H,d,J＝8.1Hz),5.51(1H,d,J＝8.8Hz),4.72(1H,dt,J＝8.8,2.6Hz),4.48(1H,dd,J＝8.8,2.2Hz),4.30(1H,dd,J＝9.2,2.6Hz),3.78(3H,s),1.46(9H,s)。
MS(ESI)m/z：364(M+H)+。
步骤3：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-(三氟甲基)苯氧基)丙酸
以与中间体1的步骤3类似的方式，以55％的收率(220mg，无色胶状物)由(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-(三氟甲基)苯氧基)丙酸酯(410mg，1.1mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：250(M-Boc+H)+,348(M-H)-。
中间体7：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3,4-二氟苯氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(3,4-二氟苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以56％的收率(660mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(900mg，2.5mmol)和3,4-二氟苯酚(420mg，3.2mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.52-7.49(6H,m),7.30-7.17(9H,m),7.05(1H,q,J＝9.3Hz),6.73-6.65(1H,m),6.59-6.53(1H,m),4.17(1H,dd,J＝9.5,5.1Hz),3.94(1H,dd,J＝9.5,6.6Hz),3.73-3.66(1H,m),3.24(3H,s),2.87(1H,d,J＝10.3Hz)。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3,4-二氟苯氧基)丙酸酯
以与中间体1的步骤2类似的方式，以81％的收率(370mg，无色油)由(R)-甲基3-(3,4-二氟苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(650mg，1.4mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.06(1H,q,J＝9.3Hz),6.75-6.67(1H,m),6.61-6.55(1H,m),5.46(1H,d,J＝8.0Hz),4.70-4.61(1H,m),4.34(1H,dd,J＝8.8,2.9Hz),4.16(1H,dd,J＝9.5,2.9Hz),3.78(3H,s),1.46(9H,s)。
MS(ESI)m/z：332(M+H)+。
步骤3：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3,4-二氟苯氧基)丙酸
以与中间体1的步骤3类似的方式，以57％的收率(200mg，浅褐色胶状物)由(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3,4-二氟苯氧基)丙酸酯(360mg，1.1mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：318(M-Boc+H)+,316(M-H)-。
中间体8：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氯苯氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(2-氯苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以68％的收率(880mg，无色固体)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(1000mg，2.8mmol)和2-氯苯酚(460mg，3.2mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.53(6H,d,J＝7.3Hz),7.36-6.92(11H,m),6.93-6.88(2H,m),4.35(1H,dd,J＝8.8,5.1Hz),4.05-3.99(1H,m),3.85-3.78(1H,m),3.24(3H,s),2.91(1H,d,J＝10.3Hz)。
MS(ESI)m/z：494(M+Na+H)+。
步骤2：(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氯苯氧基)丙酸酯
以与中间体1的步骤2类似的方式，以90％的收率(550mg，无色油)由(R)-甲基3-(2-氯苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(870mg，1.8mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.35(1H,dd,J＝8.1,1.5Hz),7.21(1H,td,J＝7.7,1.5Hz),6.96-6.90(2H,m),5.60(1H,d,J＝8.8Hz),4.76-4.66(1H,m),4.45(1H,dd,J＝9.2,2.6Hz),4.27(1H,dd,J＝9.5,2.9Hz),3.80(3H,s),1.46(9H,s)。
MS(ESI)m/z：330(M+H)+。
步骤3：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氯苯氧基)丙酸
以与中间体1的步骤3类似的方式，以51％的收率(260mg，无色胶状物)由(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氯苯氧基)丙酸酯(540mg，1.6mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：216(M-Boc+H)+,314(M-H)-.
中间体9：(R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
与中间体1的步骤1类似的方式，以35％的收率(550mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(1000mg，2.8mmol)和3,5-双(三氟甲基)苯酚(830mg，3.6mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.52(6H,d,J＝7.3Hz),7.34-7.18(12H,m),4.28(1H,dd,J＝9.5,4.4Hz),4.03(1H,dd,J＝9.5,6.6Hz),3.81-3.70(1H,m),3.28(3H,s),2.93(1H,d,J＝9.5Hz)。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-甲基3-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤2类似的方式，以96％的收率(390mg，无色油)由(R)-甲基3-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(540mg，0.94mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.50(1H,s),7.31(2H,s),5.50(1H,d,J＝8.0Hz),4.79-4.69(1H,m),4.49(1H,dd,J＝9.1,2.6Hz),4.33(1H,8.8,2.9Hz),3.81(3H,s),1.46(9H,s)。
MS(ESI)m/z：432(M+H)+。
步骤3：(R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸
以与中间体1的步骤3类似的方式，以30％的收率(110mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸酯(380mg，0.88mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：418(M+H)+,416(M-H)-。
中间体10：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氟苯氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(3-氟苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以74％的收率(1400mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(1500mg，4.2mmol)和3-氟苯酚(610mg，5.4mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.60-7.48(6H,m),7.31-7.15(10H,m),6.70-6.55(3H,m),4.22(1H,dd,J＝9.9,5.3Hz),3.99(1H,dd,J＝9.2,6.6Hz),3.76-3.68(1H,m),3.23(3H,s),2.88(1H,d,J＝10.5Hz)。
MS(ESI)m/z：478(M+Na)+。
步骤2：(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氟苯氧基)丙酸酯
以与中间体1的步骤2类似的方式，以77％的收率(290mg，无色油)由(R)-甲基3-(3-氟苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(550mg，1.2mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.26-7.18(1H,m),6.72-6.57(3H,m),5.48(1H,d,J＝7.9Hz),4.72-4.62(1H,m),4.38(1H,dd,J＝9.2,2.6Hz),4.20(1H,dd,J＝9.2,3.3Hz),3.78(3H,s),1.46(9H,s)。
MS(ESI)m/z：314(M+H)+。
步骤3：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氟苯氧基)丙酸
以与中间体1的步骤3类似的方式，以29％的收率(80mg，无色胶状物)由(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氟苯氧基)丙酸酯(290mg，0.93mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：300(M+H)+,298(M-H)-。
中间体11：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-甲氧基苯氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(3-甲氧基苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以43％的收率(830mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(1500mg，4.2mmol)和3-甲氧基苯酚(670mg，5.4mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.60-7.50(6H,m),7.30-7.13(10H,m),6.54-6.40(3H,m),4.24(1H,dd,J＝9.2,5.3Hz),4.01(1H,dd,J＝9.2,6.6Hz),3.82(3H,s),3.80-3.70(1H,m),3.23(3H,s),2.88(1H,d,J＝10.5Hz)。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-甲氧基苯氧基)丙酸酯
以与中间体1的步骤2类似的方式，以93％的收率(530mg，浅褐色油)由(R)-甲基3-(3-甲氧基苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(820mg，1.8mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.17(1H,t,J＝8.2Hz),6.55-6.44(3H,m),5.49(1H,d,J＝7.9Hz),4.68-4.62(1H,m),4.38(1H,dd,J＝9.6,2.3Hz),4.18(1H,dd,J＝9.2,2.6Hz),3.78(3H,s),3.77(3H,s),1.46(9H,s)。
MS(ESI)m/z：326(M+H)+。
步骤3：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-甲氧基苯氧基)丙酸
以与中间体1的步骤3类似的方式，以43％的收率(220mg，无色胶状物)由(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-甲氧基苯氧基)丙酸酯(530mg，1.6mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：312(M+H)+,310(M-H)-。
中间体12：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氟苯氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(2-氟苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以71％的收率(890mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(1000mg，2.8mmol)和2-氟苯酚(400mg，3.6mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.52(6H,d,J＝7.2Hz),7.28-7.15(9H,m),6397-6.87(4H,m),4.32(1H,dd,J＝9.2,5.3Hz),4.06(1H,dd,J＝9.9,6.6Hz),3.78(1H,br s),3.23(3H,s),2.89(1H,br s)。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氟苯氧基)丙酸酯
以与中间体1的步骤2类似的方式，以89％的收率(550mg，无色油)由(R)-甲基3-(2-氟苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(890mg，2.0mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.10-7.02(2H,m),6.98-6.90(2H,m),5.54(1H,d,J＝7.9Hz),4.71-4.61(1H,m),4.46(1H,dd,J＝9.2,2.6Hz),4.27(1H,dd,J＝9.6,3.0Hz),3.78(3H,s),1.46(9H,s)。
MS(ESI)m/z：314(M+H)+。
步骤3：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氟苯氧基)丙酸
以与中间体1的步骤3类似的方式，以50％的收率(260mg，无色糖浆)由(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氟苯氧基)丙酸酯(550mg，1.7mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：300(M+H)+,298(M-H)-。
中间体13：(R)-2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酰胺基)-3-(4-氰基苯氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(4-氰基苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以49％的收率(630mg，白色固体)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(1000mg，2.8mmol)和4-羟基苯甲腈(660mg，5.5mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.58(2H,d,J＝8.6Hz),7.56-7.48(6H,m),7.30-7.15(9H,m),6.91(2H,d,J＝8.6Hz),4.25(1H,dd,J＝9.2,4.6Hz),4.03(1H,dd,J＝9.2,5.9Hz),3.74(1H,m),3.25(3H,s),2.90(1H,d,J＝9.9Hz)。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-甲基2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酰胺基)-3-(4-氰基苯氧基)丙酸酯
在室温下，在(R)-甲基3-(4-氰基苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(630mg，1.4mmol)的DCM(8mL)搅拌溶液中缓慢添加三氟乙酸(3mL)，并在相同温度下将混合物搅拌2hr。在混合物中添加MeOH(1mL)。将生成的混合物搅拌5min，接着在真空中浓缩。将残留物溶解于DCM(5mL)中，接着，在室温下将2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸(280mg，1.4mmol)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(WSC，390mg，2.0mmol)、1H-苯并[d][1,2,3]三唑-1-醇(HOBt，210mg，1.4mmol)及三乙胺(0.94mL，6.8mmol)依次添加到溶液中。彻夜搅拌之后，将饱和的NaHCO3水溶液添加到混合物中，并用DCM(30mL×2)萃取混合物。将萃取物经Na2SO4干燥。进行过滤之后，在真空中浓缩滤液。通过管柱层析(硅胶，用25％至50％EtOAc的己烷进行洗脱)提纯残留物而获得作为白色固体的标题化合物(220mg，40％的收率)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.57(2H,d,J＝8.6Hz),7.33(1H,m),6.93(2H,d,J＝8.6Hz),4.97(1H,m),4.84(1H,m),4.43(1H,dd,J＝9.2,3.3Hz),4.29(1H,dd,J＝9.2,2.6Hz),3.78(3H,s),1.49(3H,s),1.47(3H,s),1.33(9H,s)。
MS(ESI)m/z：406(M+H)+,404(M-H)-。
步骤3：(R)-2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酰胺基)-3-(4-氰基苯氧基)丙酸
以与中间体1的步骤3类似的方式，以24％的收率(51mg，无色油)由(R)-甲基2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酰胺基)-3-(4-氰基苯氧基)丙酸酯(220mg，0.54mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：392(M+H)+。
中间体14：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(萘-2-基氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(萘-2-基氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以32％的收率(430mg，白色固体)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(1000mg，2.8mmol)和萘-2-醇(520mg，3.6mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.77-7.70(3H,m),7.56-7.40(7H,m),7.40-7.10(12H,m),4.39(1H,dd,J＝9.2,4.6Hz),4.17-4.08(1H,m),3.82-3.77(1H,m),3.24(3H,s),2.94(1H,d,J＝10.6Hz)。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(萘-2-基氧基)丙酸酯
以与中间体1的步骤2类似的方式，以95％的收率(290mg，无色油)由(R)-甲基3-(萘-2-基氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(430mg，0.88mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.78-7.64(3H,m),7.47-7.32(2H,m),7.15-7.09(2H,m),5.55(1H,d,J＝8.6Hz),4.75-4.68(1H,m),4.52(1H,dd,J＝9.2,2.6Hz),4.33(1H,dd,J＝9.2,3.3Hz),3.78(3H,s),1.47(9H,s)。
MS(ESI)m/z：246(M-Boc+H)+。
步骤3：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(萘-2-基氧基)丙酸
以与中间体1的步骤3类似的方式，以46％的收率(130mg，无色糖浆)由(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(萘-2-基氧基)丙酸酯(290mg，0.84mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：332(M+H)+,330(M-H)-。
中间体15：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(萘-1-基氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(萘-1-基氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以46％的收率(920mg，白色固体)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(1500mg，4.2mmol)和萘-1-醇(780mg，5.4mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 8.16(1H,d,J＝8.6Hz),7.78(1H,d,J＝7.9Hz),7.56(6H,d,J＝7.9Hz),7.50-7.33(4H,m),7.30-7.17(9H,m),6.81(1H,d,J＝7.9Hz),4.46(1H,dd,J＝8.9,4.9Hz),4.26-4.20(1H,m),3.93-3.85(1H,m),3.25(3H,s),3.01(1H,d,J＝10.5Hz)。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(萘-1-基氧基)丙酸酯
以与中间体1的步骤2类似的方式，以＞99％的收率(650mg，无色油)由(R)-甲基3-(萘-1-基氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(910mg，1.9mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 8.15-8.12(1H,m),7.81-7.78(1H,m),7.52-7.44(3H,m),7.36(1H,t,J＝7.9Hz),6.78(1H,d,J＝7.9Hz),5.63(1H,d,J＝8.6Hz),4.87-4.77(1H,m),4.52(1H,dd,J＝9.2,2.7Hz),4.42(1H,dd,J＝8.9,2.3Hz),3.79(3H,s),1.46(9H,s)。
MS(ESI)m/z：246(M-Boc+H)+。
步骤3：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(萘-1-基氧基)丙酸
以与中间体1的步骤3类似的方式，以69％的收率(420mg，无色糖浆)由(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(萘-1-基氧基)丙酸酯(640mg，1.9mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：332(M+H)+,330(M-H)-。
中间体16：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((5-氯吡啶-3-基)氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-((5-氯吡啶-3-基)氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以37％的收率(720mg，白色固体)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(1500mg，4.2mmol)和5-氯吡啶-3-醇(700mg，5.4mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 8.20(1H,d,J＝1.3Hz),8.16(1H,d,J＝2.0Hz),7.53-7.45(6H,m),7.34-7.15(10H,m),4.25(1H,dd,J＝9.2,4.6Hz),4.02(1H,dd,J＝9.2,6.6Hz),3.77-3.69(1H,m),3.27(3H,s),2.95(1H,d,J＝9.9Hz)。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((5-氯吡啶-3-基)氧基)丙酸
在室温下，在(R)-甲基3-((5-氯吡啶-3-基)氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(600mg，1.3mmol)的二恶烷(10mL)溶液中添加6N氢氯酸(3mL)。在回流温度下，将混合物搅拌4hr。冷却至室温之后，在真空中浓缩混合物而获得白色固体。将白色固体悬浮于二恶烷(5mL)中，并将饱和的NaHCO3水溶液(1mL)和二-叔丁基二碳酸酯(550mg，2.5mmol)依次添加到混合物中。在室温下，将混合物搅拌5hr，并用水(40mL)进行稀释。用DCM(10mL×2)清洗混合物，并通过添加2N氢氯酸(～pH5)而使水层酸化。用EtOAc(40mL×2)萃取水层，并将萃取物经Na2SO4干燥。进行过滤之后，在真空中浓缩滤液而获得作为无色胶状物的标题化合物(390mg，97％的收率)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 8.24(1H,s),8.18(1H,s),7.32-7.27(1H,m),5.59(1H,d,J＝7.2Hz),4.75-4.66(1H,m),4.53-4.45(1H,m),4.40-4.33(1H,m),1.47(9H,s)。未观察到COOH。
MS(ESI)m/z：317(M+H)+,315(M-H)-。
中间体17：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氰基苯氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(3-氰基苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以23％的收率(580mg，无色固体)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(2000mg，5.5mmol)和3-羟基苯甲腈(1000mg，8.3mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.52(6H,d,J＝7.3Hz),7.50-7.16(11H,m),7.11-7.08(2H,m),4.26-4.21(1H,m),4.03-3.97(1H,m),3.77-3.69(1H,m),3.25(3H,s),2.90(1H,d,J＝9.9Hz)。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氰基苯氧基)丙酸酯
以与中间体1的步骤2类似的方式，以93％收率(370mg，浅黄色油)由(R)-甲基3-(3-氰基苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(570mg，1.2mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.41-7.36(1H,m),7.28(1H,d,J＝6.6Hz),7.14-7.10(2H,m),5.48(1H,d,J＝7.9Hz),4.69(1H,d,J＝7.9Hz),4.41(1H,dd,J＝9.2,2.6Hz),4.25(1H,dd,J＝9.2,3.3Hz),3.79(3H,s),1.46,1.49(9H,s)。
MS(ESI)m/z：221(M-Boc+H)+。
步骤3：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氰基苯氧基)丙酸
以与中间体1的步骤3类似的方式，以45％的收率(150mg，无色胶状物)由(R)-甲基2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氰基苯氧基)丙酸酯(360mg，1.1mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：307(M+H)+。
中间体18：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(吡啶-2-基氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(吡啶-2-基氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，分别使用代替双(2-甲氧基乙基)偶氮二羧酸酯和三苯基膦的(E)-二氮烯-1,2-二基双(哌啶-1-基甲酮)(ADDP，7000mg，28mmol)和三丁基膦(5600mg，28mmol)，以15％的收率(887mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(5000mg，14mmol)和吡啶-2-醇(2000mg，21mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(吡啶-2-基氧基)丙酸
以与中间体16的步骤2类似的方式，以38％的收率(210mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-(吡啶-2-基氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(860mg，2.0mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：283(M+H)+,281(M-H)-。
中间体19：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((5-氟吡啶-3-基)氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-((5-氟吡啶-3-基)氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以40％的收率(760mg，白色固体)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(1500mg，4.2mmol)和5-氟吡啶-3-醇(560mg，5.0mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((5-氟吡啶-3-基)氧基)丙酸
以与中间体16的步骤2类似的方式，以46％的收率(230mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-((5-氟吡啶-3-基)氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(760mg，1.7mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：301(M+H)+,299(M-H)-。
中间体20：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以81％的收率(2300mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(2000mg，5.5mmol)和6-(三氟甲基)吡啶-2-醇(900mg，5.5mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.68(1H,t,J＝7.9Hz),7.51(6H,d,J＝7.9Hz),7.28-7.14(10H,m),6.88(1H,d,J＝8.6Hz),4.78(1H,dd,J＝10.9,4.9Hz),4.47(1H,dd,J＝10.9,6.9Hz),3.77(1H,quint,J＝5.6Hz),3.16(3H,s),2.86(1H,d,J＝10.5Hz)。
MS(ESI)m/z：观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)丙酸
以与中间体16的步骤2类似的方式，以70％的收率(580mg，无色固体)由(R)-甲基3-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(1200mg，2.4mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：251(M-Boc+H)+,349(M-H)-。
中间体21：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-氟苯氧基)丙酸
步骤1：(R)-甲基3-(4-氟苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯
以与中间体1的步骤1类似的方式，以15％的收率(95mg，无色胶状物)由(R)-甲基3-羟基-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(0.50g，1.4mmol)和4-氟苯酚(0.20g，1.8mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：478(M+Na)+，且观察到243(正离子)的片段信号。
步骤2：(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-氟苯氧基)丙酸
以与中间体16的步骤2类似的方式，以72％的收率(45mg，无色油)由(R)-甲基3-(4-氟苯氧基)-2-(三苯甲基氨基)丙酸酯(95mg，0.21mmol)制备标题化合物。
1H NMR(270MHz,CDCl3)：delta 7.00-6.93(2H,m),6.86-6.80(2H,m),5.49(1H,d,J＝7.9Hz),4.68(1H,d,J＝8.6Hz),4.40(1H,dd,J＝9.2,2.6Hz),4.19(1H,dd,J＝9.2,3.3Hz)。
MS(ESI)m/z：300(M+H)+,298(M-H)-。
{表4-1}
{表4-2}
实施例1：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2,4-二氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2,4-二氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在氮气氛下，将(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(100mg，0.25mmol)的EtOAc(3mL)悬浮液冷却至-5℃，并在相同温度下，将三乙胺(0.18mL，1.3mmol)滴加到悬浮液中。搅拌20min之后，在相同温度下，将(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2,4-二氟苯氧基)丙酸(113mg，0.36mmol，中间体1的步骤3)的EtOAc(2mL)溶液和2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(0.30mL，0.51mmol；在EtOAc中的1.7M溶液)依次添加到混合物中。在-5℃下搅拌1hr之后，通过添加饱和的NaHCO3水溶液(5mL)而使混合物淬灭。用水稀释混合物，并用EtOAc(20mL×3)进行萃取。用盐水清洗合并的有机层，并经Na2SO4干燥。进行过滤之后，在真空中浓缩滤液。通过管柱层析(硅胶，用50％EtOAc的己烷进行洗脱)提纯残留物而获得作为无色固体的标题化合物(72mg，52％的收率)。
MS(ESI)m/z：543(M+H)+
步骤2：(R)-5-((R)-2-氨基-3-(2,4-二氟苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
在0℃下，在((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2,4-二氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(70mg，0.13mmol)的DCM(1mL)搅拌溶液中一次性添加三氟乙酸(1mL)，并在相同温度下持续搅拌1hr。在真空中浓缩混合物，并用DCM(5mL)稀释残留物。用饱和的NaHCO3水溶液、接着用盐水清洗萃取的溶液，并经Na2SO4干燥。进行过滤之后，在真空中浓缩滤液而获得作为无色胶状物的标题化合物(66mg，＞99％的收率)。
MS(ESI)m/z：443(M+H)+
步骤3：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2,4-二氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在室温下，在(R)-5-((R)-2-氨基-3-(2,4-二氟苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(66mg，0.15mmol)、2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸(38mg，0.19mmol)及三乙胺(0.083mL，0.60mmol)的DCM(1mL)溶液中添加苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU，68mg，0.18mmol)。搅拌1hr之后，在真空中浓缩混合物。使残留物通过短管柱层析(氨基-凝胶，用EtOAc进行洗脱)而获得作为无色胶状物的标题化合物(60mg，87％的收率)。
MS(ESI)m/z：628(M+H)+,626(M-H)-
步骤4：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2,4-二氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
在0℃下，在(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2,4-二氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(81mg，0.13mmol)的DCM(1mL)搅拌溶液中添加三氟乙酸(1mL)的一部分，并在相同温度下持续搅拌2hr。在真空中浓缩混合物，并用DCM(5mL)稀释残留物。用饱和的NaHCO3水溶液、接着用盐水清洗，并经Na2SO4干燥。进行过滤之后，去除溶剂和挥发物。通过制备型LC-MS提纯残留物而获得11mg(16％的收率)标题化合物。
将制备型LC-MS和品质检验(QC)方法的条件示于表5。
实施例2：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以50％的收率(510mg，白色固体)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(800mg，2.0mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-苯氧基丙酸(630mg，2.2mmol，中间体2的步骤3)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.31-7.15(5H,m),7.10-6.90(3H,m),6.87(2H,d,J＝7.9Hz),5.52-5.42(1H,m),5.23-5.05(2H,m),4.61-4.50(1H,m),4.26-4.08(2H,m),3.23(1H,d,J＝13.2Hz),3.09(3H,s),3.08-2.90(2H,m),2.66-2.50(2H,m),1.45(9H,s)。未观察到NHBoc。
MS(ESI)m/z：507(M+H)+,505(M-H)-。
步骤2：(R)-5-((R)-2-氨基-3-苯氧基丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例1的步骤2类似的方式，以95％的收率(390mg，白色固体)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(800mg，2.0mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：407(M+H)+。
步骤3：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤3类似的方式，以99％的收率(560mg，白色固体)由(R)-5-((R)-2-氨基-3-苯氧基丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(390mg，0.96mmol)和2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸(230mg，1.2mmol)制备标题化合物。
1H NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.35-7.12(5H,m),7.10-7.04(2H,m),7.00-6.84(3H,m),5.52-5.42(1H,m),5.07(1H,d,J＝12.5Hz),4.85(1H,br s),4.64-4.52(1H,m),4.30-4.22(1H,m),4.16-4.10(1H,m),3.19(1H,d,J＝13.8Hz),3.07(3H,s),3.05-2.85(2H,m),2.64-2.50(2H,m),1.51(3H,s),1.49(3H,s),1.38(9H,s)未观察到CONH和NHBoc。
MS(ESI)m/z：592(M+H)+,590(M-H)-。
步骤4：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以86％的收率(395mg，白色固体)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(550mg，0.93mmol)制备标题化合物。在该情况下，通过管柱层析(NH-凝胶，用0％至80％EtOAc的己烷进行洗脱)提纯标题化合物。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)delta 8.45(1H,d,J＝7.3Hz),7.30-7.15(5H,m),7.12-6.85(5H,m),5.45-5.35(1H,m),5.09(1H,d,J＝12.5Hz),4.61(1H,d,J＝10.6Hz),4.24(2H,d,J＝6.6Hz),3.22(1H,d,J＝13.1Hz),3.08(3H,s),3.10-2.85(3H,m),2.65-2.48(2H,m),1.40(3H,s),1.35(3H,s)。未观察到NH2。
MS(ESI)m/z：492(M+H)+,490(M-H)-。
产物的一部分通过制备型LC-MS进行进一步提纯而获得标题化合物。
实施例3：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以53％的收率(73mg，白色固体)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(100mg，0.25mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-氯苯氧基)丙酸(110mg，0.36mmol，中间体3的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：541(M+H)+。
步骤2：(R)-5-((R)-2-氨基-3-(4-氯苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例1的步骤2类似的方式，以＞99％的收率(61mg，无色胶状物)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(70mg，0.13mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：441(M+H)+。
步骤3：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤3类似的方式，以94％的收率(81mg，无色胶状物)由(R)-5-((R)-2-氨基-3-(4-氯苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(61mg，0.14mmol)和2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸(35mg，0.17mmol)制备标题化合物。
1H-NMR(300MHz,CDCl3)delta 7.31-7.18(5H,m),7.09-7.08(2H,m),6.82(2H,d,J＝8.8Hz),5.46(1H,q,J＝7.1Hz),5.08(1H,d,J＝12.5Hz),4.86(1H,s),4.62-4.51(1H,m),4.31-4.20(1H,m),4.16-4.03(1H,m),3.19(1H,d,J＝13.9Hz),3.08-2.86(7H,m),2.65-2.53(2H,m),1.50(3H,s),1.49(3H,s),1.37(9H,s)。
MS(ESI)m/z：626(M+H)+,624(M-H)-。
步骤4：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以16％的收率(11mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(81mg，0.13mmol)制备标题化合物。
实施例4：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以61％收率(105mg，无色胶状物)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(100mg，0.25mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氯苯氧基)丙酸(120mg，0.38mmol，中间体4的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：541(M+H)+。
步骤2：(R)-5-((R)-2-氨基-3-(3-氯苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例1的步骤2类似的方式，以＞99％的收率(79mg，无色固体)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(95mg，0.18mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：441(M+H)+。
步骤3：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤3类似的方式，以＞99％的收率(100mg，无色胶状物)由(R)-5-((R)-2-氨基-3-(3-氯苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(68mg，0.15mmol)和2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸(39mg，0.19mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：626(M+H)+,624(M-H)-。
步骤4：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以14％的收率(11mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(92mg，0.15mmol)制备标题化合物。
实施例5：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,5-二氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,5-二氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以47％的收率(86mg，无色胶状物)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(130mg，0.32mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3,5-二氯苯氧基)丙酸(130mg，0.38mmol，中间体5的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：575(M+H)+。
步骤2：(R)-5-((R)-2-氨基-3-(3,5-二氯苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例1的步骤2类似的方式，以＞99％的收率(70mg，无色胶状物)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,5-二氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(76mg，0.13mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：475(M+H)+。
步骤3：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,5-二氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤3类似的方式，以＞99％的收率(89mg，无色胶状物)由(R)-5-((R)-2-氨基-3-(3,5-二氯苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(61mg，0.13mmol)和2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸(33mg，0.16mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：660(M+H)+,658(M-H)-.
步骤4：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,5-二氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以18％的收率(12mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,5-二氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(81mg，0.12mmol)制备标题化合物。
实施例6：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-(2-(三氟甲基)苯氧基)丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-(2-(三氟甲基)苯氧基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以66％的收率(77mg，无色胶状物)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(130mg，0.32mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-(三氟甲基)苯氧基)丙酸(85mg，0.24mmol，中间体6的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：575(M+H)+,573(M-H)-。
步骤2：(R)-5-((R)-2-氨基-3-(2-(三氟甲基)苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例1的步骤2类似的方式，以86％的收率(45mg)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-(2-(三氟甲基)苯氧基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(64mg，0.11mmol)制备标题化合物。
步骤3：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-(2-(三氟甲基)苯氧基)丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤3类似的方式，以＞99％的收率(79mg，无色胶状物)由(R)-5-((R)-2-氨基-3-(2-(三氟甲基)苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(45mg，0.095mmol)和2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸(23mg，0.11mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：660(M+H)+,658(M-H)-。
步骤4：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-(2-(三氟甲基)苯氧基)丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以22％的收率(14mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-(2-(三氟甲基)苯氧基)丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(75mg，0.11mmol)制备标题化合物。
实施例7：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,4-二氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,4-二氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以66％的收率(73mg，无色胶状物)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(130mg，0.32mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3,4-二氟苯氧基)丙酸(77mg，0.24mmol，中间体7的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：543(M+H)+,541(M-H)-。
步骤2：(R)-5-((R)-2-氨基-3-(3,4-二氟苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例1的步骤2类似的方式，以92％的收率(54mg)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,4-二氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(72mg，0.13mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：443(M+H)+。
步骤3：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,4-二氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤3类似的方式，以＞99％的收率(91mg，无色胶状物)由(R)-5-((R)-2-氨基-3-(3,4-二氟苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(54mg，0.12mmol)和2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸(23mg，0.11mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：628(M+H)+,626(M-H)-。
步骤4：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,4-二氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以15％的收率(12mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,4-二氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(91mg，0.15mmol)制备标题化合物。
实施例8：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以60％的收率(66mg，无色固体)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(80mg，0.20mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氯苯氧基)丙酸(77mg，0.24mmol，中间体8的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：541(M+H)+,539(M-H)-。
步骤2：(R)-5-((R)-2-氨基-3-(2-氯苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例1的步骤2类似的方式，以＞99％的收率(58mg)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(61mg，0.11mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：441(M+H)+。
步骤3：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤3类似的方式，以96％的收率(79mg，无色胶状物)由(R)-5-((R)-2-氨基-3-(2-氯苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(58mg，0.13mmol)和2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸(32mg，0.16mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：626(M+H)+,624(M-H)-。
步骤4：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以22％的收率(13mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氯苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(69mg，0.11mmol)制备标题化合物。
实施例9：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以43％的收率(54mg，无色胶状物)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(80mg，0.20mmol)和(R)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(100mg，0.24mmol，中间体9的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：643(M+H)+,641(M-H)-。
步骤2：(R)-5-((R)-2-氨基-3-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例1的步骤2类似的方式，以91％的收率(40mg)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(52mg，0.081mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：543(M+H)+。
步骤3：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤3类似的方式，以＞99％的收率(55mg，无色胶状物)由(R)-5-((R)-2-氨基-3-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(40mg，0.074mmol)和2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸(32mg，0.16mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：728(M+H)+,726(M-H)-。
步骤4：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以32％的收率(14mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.069mmol)制备标题化合物。
实施例10：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以45％的收率(48mg，无色胶状物)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(80mg，0.20mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氟苯氧基)丙酸(79mg，0.26mmol，中间体10的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：525(M+H)+,523(M-H)-。
步骤2：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，在((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，0.057mmol)的DCM(2mL)搅拌溶液中一次性添加三氟乙酸(2mL)，并在相同温度下持续搅拌2hr。在真空中浓缩混合物而获得黄色糖浆。将残留物溶解于DCM(4mL)中。在室温下，将混合物添加到三乙胺(0.017mL，0.23mmol)和苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU，27mg，0.072mmol)中。搅拌1hr之后，在真空中浓缩混合物。使残留物通过短管柱层析(氨基-凝胶，用EtOAc进行洗脱)而获得作为白色固体的标题化合物(51mg，＞99％的收率)。
MS(ESI)m/z：610(M+H)+,608(M-H)-。
步骤3：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以32％的收率(13mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(48mg，0.079mmol)制备标题化合物。
实施例11：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-甲氧基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-甲氧基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以62％的收率(85mg，无色胶状物)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(80mg，0.20mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-甲氧基苯氧基)丙酸(103mg，0.33mmol，中间体11的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：537(M+H)+,535(M-H)-。
步骤2：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-甲氧基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例10的步骤2类似的方式，以96％的收率(78mg，白色固体)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-甲氧基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(70mg，0.13mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：622(M+H)+,620(M-H)-。
步骤3：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-甲氧基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以18％的收率(9mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-甲氧基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(60mg，0.097mmol)制备标题化合物。
实施例12：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以57％的收率(76mg，无色胶状物)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(100mg，0.25mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氟苯氧基)丙酸(114mg，0.38mmol，中间体12的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：525(M+H)+,523(M-H)-。
步骤2：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例10的步骤2类似的方式，以＞99％的收率(74mg，无色胶状物)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(60mg，0.11mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：610(M+H)+,608(M-H)-。
步骤3：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以22％的收率(11mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(60mg，0.098mmol)制备标题化合物。
实施例13：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(萘-2-基氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(萘-2-基氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以45％的收率(90mg，白色固体)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(140mg，0.36mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(萘-2-基氧基)丙酸(130mg，0.39mmol，中间体14的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：557(M+H)+,555(M-H)-。
步骤2：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(萘-2-基氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例10的步骤2类似的方式，以＞99％的收率(100mg，无色胶状物)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(萘-2-基氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(87mg，0.15mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：642(M+H)+,640(M-H)-。
步骤3：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(萘-2-基氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以14％的收率(13mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(萘-2-基氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.16mmol)制备标题化合物.
实施例14：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(萘-1-基氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(萘-1-基氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以67％的收率(140mg，无色胶状物)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(150mg，0.38mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(萘-1-基氧基)丙酸(150mg，0.46mmol，中间体15的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：557(M+H)+,555(M-H)-。
步骤2：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(萘-1-基氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例10的步骤2类似的方式，以82％的收率(120mg，无色胶状物)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(萘-1-基氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，0.23mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：642(M+H)+,640(M-H)-。
步骤3：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(萘-1-基氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以14％的收率(13mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(萘-1-基氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(110mg，0.17mmol)制备标题化合物。
实施例15：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-((5-氯吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-((5-氯吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以53％的收率(170mg，无色胶状物)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(250mg，0.64mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((5-氯吡啶-3-基)氧基)丙酸(180mg，0.58mmol，中间体16的步骤2)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：542(M+H)+,540(M-H)-。
步骤2：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-((5-氯吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例10的步骤1类似的方式，以86％的收率(170mg，白色固体)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-((5-氯吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(160mg，0.30mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：627(M+H)+,625(M-H)-。
步骤3：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-((5-氯吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以11％的收率(16mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-((5-氯吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(170mg，0.27mmol)制备标题化合物。
实施例16：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氰基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氰基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以42％的收率(110mg，无色胶状物)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(190mg，0.48mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氰基苯氧基)丙酸(150mg，0.48mmol，中间体17的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：532(M+H)+,530(M-H)-。
步骤2：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氰基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例10的步骤2类似的方式，以＞99％的收率(113mg，无色胶状物)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氰基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(86mg，0.16mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：617(M+H)+,615(M-H)-。
步骤3：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氰基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以14％的收率(12mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氰基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.17mmol，实施例X的步骤X)制备标题化合物。
实施例17：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-(吡啶-2-基氧基)丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-(吡啶-2-基氧基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以68％的收率(140mg，无色胶状物)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(160mg，0.41mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(吡啶-2-基氧基)丙酸(140mg，0.49mmol，中间体18的步骤2)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：508(M+H)+,506(M-H)-。
步骤2：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-(吡啶-2-基氧基)丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例10的步骤2类似的方式，以86％的收率(130mg，无色固体)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-(吡啶-2-基氧基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，0.25mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：593(M+H)+,591(M-H)-。
步骤3：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-(吡啶-2-基氧基)丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以12％的收率(12mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-(吡啶-2-基氧基)丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，0.20mmol)制备标题化合物。
实施例18：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-((5-氟吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-((5-氟吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以58％的收率(120mg，无色固体)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(150mg，0.38mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((5-氟吡啶-3-基)氧基)丙酸(130mg，0.42mmol，中间体19的步骤2)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：526(M+H)+,524(M-H)-
步骤2：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-((5-氟吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例10的步骤2类似的方式，以95％的收率(120mg，无色胶状物)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-((5-氟吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(110mg，0.20mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：611(M+H)+,609(M-H)-。
步骤3：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-((5-氟吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以15％的收率(13mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-((5-氟吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(110mg，0.17mmol)制备标题化合物。
实施例19：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以78％的收率(170mg，无色固体)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(150mg，0.38mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)丙酸(150mg，0.42mmol，中间体20的步骤2)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：576(M+H)+,574(M-H)-
步骤2：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例10的步骤2类似的方式，以98％的收率(180mg，无色胶状物)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(160mg，0.28mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：661(M+H)+,659(M-H)-。
步骤3：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以8％的收率(12mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-((6-(三氟甲基)吡啶-2-基)氧基)丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(170mg，0.26mmol)制备标题化合物。
实施例20：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氰基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氰基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以36％的收率(29mg，白色固体)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(51mg，0.13mmol)和(R)-2-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酰胺基)-3-(4-氰基苯氧基)丙酸(51mg，0.13mmol，中间体13的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：617(M+H)+,617(M-H)-
步骤2：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氰基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以54％的收率(13mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氰基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(29mg，0.047mmol)制备标题化合物。
实施例21：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((2R)-1-(3a-苄基-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(非对映异构物混合物)
以与实施例1的步骤1类似的方式，以84％的收率(120mg，无色胶状物)由3a-苄基-2-(2,2-二氟乙基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮2,2,2-三氟乙酸酯(100mg，0.26mmol，核1的步骤2)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-苯氧基丙酸(86mg，0.31mmol，中间体2的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：557(M+H)+,555(M-H)-
步骤2：(1-(((2R)-1-(3a-苄基-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(非对映异构物混合物)
以与实施例10的步骤2类似的方式，以＞99％的收率(200mg，白色固体)由((2R)-1-(3a-苄基-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，0.22mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：642(M+H)+,640(M-H)-。
步骤3：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以6％的收率(10mg)由(1-(((2R)-1-(3a-苄基-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.31mmol)制备标题化合物。
在该情况下，在制备型LC-MS条件下，收集所希望的非对映异构物作为极性更强的非对映异构物。
实施例22：2-氨基-N-((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以40％的收率(50mg，无色胶状物)由(R)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2S,3S)-2,3-二羟基琥珀酸酯(100mg，0.23mmol，核2的步骤3)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-苯氧基丙酸(76mg，0.27mmol,中间体2的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：558(M+H)+,556(M-H)-。
步骤2：(R)-5-((R)-2-氨基-3-苯氧基丙酰基)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
在室温下，在((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.090mmol)的DCM(1mL)搅拌溶液中添加三氟乙酸(5mL)，并在相同温度下将混合物搅拌30min。在真空中浓缩混合物。通过强阳离子交换柱(Isolute(注册商标)SCX，1g/6mL，Biotage)提纯残留物而获得作为透明无色胶状物的标题化合物(35mg，84％的收率)。
MS(ESI)m/z：458(M+H)+。
步骤3：2-氨基-N-((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-3-苯氧基丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
将(R)-5-((R)-2-氨基-3-苯氧基丙酰基)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(34mg，0.074mmol)的溶液和2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸(18mg，0.089mmol)的EtOAc(2mL)冷却至0℃。在混合物中依次添加三乙胺(0.031mL，0.22mmol)和2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(0.087mL，0.15mmol；1.7M溶液的EtOAc)，并在相同温度下，将生成的混合物搅拌1hr。在真空中浓缩混合物。接着，将三氟乙酸(2mL)添加到残留物中，并在室温下将混合物搅拌30min。在真空中浓缩混合物。通过强阳离子交换柱(BondElute(注册商标)SCX，1g/6mL，Varian Inc.)提纯残留物，接着通过制备型LC-MS进一步提纯而获得10mg(25％的收率)标题化合物。
实施例23：2-氨基-N-((R)-3-(2-氯苯氧基)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-3-(2-氯苯氧基)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以30％的收率(40mg，无色胶状物)由(R)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2S,3S)-2,3-二羟基琥珀酸酯(100mg，0.23mmol，核2的步骤3)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氯苯氧基)丙酸(85mg，0.27mmol，中间体8的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：592(M+H)+,590(M-H)-。
步骤2：(R)-5-((R)-2-氨基-3-(2-氯苯氧基)丙酰基)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例22的步骤2类似的方式，以89％的收率(33mg，无色油)由((R)-3-(2-氯苯氧基)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(40mg，0.068mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：492(M+H)+。
步骤3：2-氨基-N-((R)-3-(2-氯苯氧基)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例22的步骤3类似的方式，以28％的收率(10mg)由(R)-5-((R)-2-氨基-3-(2-氯苯氧基)丙酰基)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(30mg，0.060mmol)制备标题化合物。
实施例24：2-氨基-N-((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以31％的收率(41mg，无色胶状物)由(R)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2S,3S)-2,3-二羟基琥珀酸酯(100mg，0.23mmol，核2的步骤3)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氟苯氧基)丙酸(81mg，0.27mmol，中间体12的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：576(M+H)+,574(M-H)-。
步骤2：(R)-5-((R)-2-氨基-3-(2-氟苯氧基)丙酰基)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例22的步骤2类似的方式，以92％的收率(31mg，无色油)由((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(41mg，0.071mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：476(M+H)+。
步骤3：2-氨基-N-((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(2-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例22的步骤3类似的方式，以30％的收率(11mg)由(R)-5-((R)-2-氨基-3-(2-氟苯氧基)丙酰基)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(31mg，0.065mmol)制备标题化合物。
实施例25：2-氨基-N-((R)-3-(3-氯苯氧基)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-3-(3-氯苯氧基)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以37％的收率(49mg，无色胶状物)由(R)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2S,3S)-2,3-二羟基琥珀酸酯(100mg，0.23mmol，核2的步骤3)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氯苯氧基)丙酸(85mg，0.27mmol，中间体4的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：592(M+H)+,590(M-H)-。
步骤2：(R)-5-((R)-2-氨基-3-(3-氯苯氧基)丙酰基)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例22的步骤2类似的方式，以87％的收率(36mg，无色油)由((R)-3-(3-氯苯氧基)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(49mg，0.083mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：492(M+H)+。
步骤3：2-氨基-N-((R)-3-(3-氯苯氧基)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例22的步骤3类似的方式，以22％的收率(9mg)由(R)-5-((R)-2-氨基-3-(3-氯苯氧基)丙酰基)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(36mg，0.072mmol，实施例22的步骤3)制备标题化合物。
实施例26：2-氨基-N-((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-甲氧基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-甲氧基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以48％的收率(64mg，无色胶状物)由(R)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2S,3S)-2,3-二羟基琥珀酸酯(100mg，0.23mmol，核2的步骤3)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-甲氧基苯氧基)丙酸(84mg，0.27mmol，中间体11的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：588(M+H)+,586(M-H)-。
步骤2：(R)-5-((R)-2-氨基-3-(3-甲氧基苯氧基)丙酰基)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例22的步骤2类似的方式，以82％的收率(43mg，无色油)由((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-甲氧基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(64mg，0.11mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：488(M+H)+。
步骤3：2-氨基-N-((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-甲氧基苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例22的步骤3类似的方式，以24％的收率(12mg)由(R)-5-((R)-2-氨基-3-(3-甲氧基苯氧基)丙酰基)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(43mg，0.089mmol)制备标题化合物。
实施例27：2-氨基-N-((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以36％的收率(47mg，无色胶状物)由(R)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2S,3S)-2,3-二羟基琥珀酸酯(100mg，0.23mmol，核2的步骤3)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(3-氟苯氧基)丙酸(100mg，0.34mmol，中间体10的步骤3)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：576(M+H)+,574(M-H)-。
步骤2：(R)-5-((R)-2-氨基-3-(3-氟苯氧基)丙酰基)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例22的步骤2类似的方式，以91％的收率(35mg，无色油)由((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(47mg，0.082mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：476(M+H)+。
步骤3：2-氨基-N-((R)-1-((R)-2-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3a-(吡啶-2-基甲基)-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(3-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例22的步骤3类似的方式，以36％的收率(15mg)由(R)-5-((R)-2-氨基-3-(3-氟苯氧基)丙酰基)-2-(2,2-二氟乙基)-3a-(吡啶-2-基甲基)-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(35mg，0.074mmol)制备标题化合物。
实施例28：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤1类似的方式，以56％的收率(45mg，白色固体)由(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(60mg，0.15mmol)和(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(4-氟苯氧基)丙酸(45mg，0.15mmol，中间体16的步骤2)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：525(M+H)+,523(M-H)-。
步骤2：(R)-5-((R)-2-氨基-3-(4-氟苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例1的步骤2类似的方式，以定量收率(37mg，无色油)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(45mg，0.086mmol)制备标题化合物。
步骤3：(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤3类似的方式，以96％的收率(50mg，无色油)由(R)-5-((R)-2-氨基-3-(4-氟苯氧基)丙酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(37mg，0.86mmol)和2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸(26mg，1.3mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：610(M+H)+。
步骤4：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤4类似的方式，以22％的收率(11mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-3-(4-氟苯氧基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(45mg，0.074mmol)制备标题化合物。
将制备型LC-MS和品质检验(QC)方法的条件示于表5。
{表5-1}
{表5-2}
{表5-3}
比较例1：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-4-苯氧基丁烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-羟基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在氮气氛下，将(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯(1500mg，3.81mmol)的EtOAc(30mL)悬浮液冷却至-50℃，并在相同温度下滴加三乙胺(1.06mL，7.62mmol)来实现(R)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(2R,3R)-2,3-二羟基琥珀酸酯的游离碱化(freebasing)及三乙基酒石酸铵(triethylammonium tartrate)的盐形成。将混合物搅拌15min之后，将补加量的三乙胺(1.59mL，11.4mmol)滴加到混合物中，并在-50℃下将混合物搅拌10min。在混合物中添加溶解于EtOAc(20mL)中的三乙基铵(R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-羟基丁酸酯(triethylammonium(R)-2-((tert-butoxycarbonyl)amino)-4-hydroxybutanoate)15min，并添加2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷2,4,6-三氧化物(4.49mL，7.63mmol，EtOAc中的1.7M溶液)10min。在-50℃下，将混合物另行搅拌2hr，并在相同温度下，通过添加饱和的NaHCO3水溶液(50mL)使反应淬灭。将混合物加热至室温，用水(50mL)稀释，并用EtOAc(50mL×3)萃取。用盐水清洗合并的有机层，并经Na2SO4干燥。进行过滤之后，在真空中浓缩滤液。通过管柱层析(硅胶，用5％MeOH的EtOAc进行洗脱)提纯残留物而获得作为无色固体的标题化合物(1170mg，69％的收率)。
MS(ESI)m/z：445(M+H)+。
步骤2：
((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-4-苯氧基丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，在((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-羟基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.45mmol)、苯酚(64mg，0.68mmol)及三苯基膦(236mg，0.90mmol)的THF(8mL)溶液中逐滴添加双(2-甲氧基乙基)偶氮二羧酸酯(211mg，0.90mmol)的THF(1mL)溶液。在室温下彻夜搅拌之后，用水稀释混合物，并用EtOAc萃取。用饱和的NaHCO3水溶液和盐水清洗萃取物，并经Na2SO4干燥。进行过滤之后，在真空中浓缩滤液。通过管柱层析(硅胶，15％至50％EtOAc的己烷)提纯残留物而获得作为白色固体的标题化合物(194mg，83％的收率)。
MS(ESI)m/z：521(M+H)+。
步骤3：
(R)-5-((R)-2-氨基-4-苯氧基丁酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
在0℃下，在((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-4-苯氧基丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(194mg，0.37mmol)的DCM(5mL)溶液中添加三氟乙酸(2mL)，并在相同温度下将混合物搅拌30min。接着，在真空中浓缩混合物，用DCM稀释残留物，用饱和的NaHCO3水溶液、接着用盐水清洗混合物，并经Na2SO4干燥。进行过滤之后，在真空中浓缩滤液。通过管柱层析(硅胶，用10％至50％EtOAc的己烷进行洗脱)提纯残留物而获得作为无色胶状物的标题化合物(104mg，67％的收率)。
MS(ESI)m/z：421(M+H)+。
步骤4：
(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-4-苯氧基丁烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在室温下，在(R)-5-((R)-2-氨基-4-苯氧基丁酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(100mg，0.24mmol)、2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-甲基丙酸(73mg，0.36mmol)及三乙胺(0.13mL，0.95mmol)的DCM(6mL)悬浮液中添加苯并三氮唑-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU，48mg，0.36mmol)。在相同温度下彻夜搅拌之后，在真空中浓缩混合物。使残留物通过短管柱层析(硅-胶，用2％至20％EtOAc的己烷进行洗脱)而获得作为无色固体的标题化合物(131mg，91％的收率)。
MS(ESI)m/z：506(M-Boc+H)+。
步骤5：
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-4-苯氧基丁烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
在0℃下，在(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-1-氧代-4-苯氧基丁烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，0.22mmol)的DCM(4mL)溶液中添加三氟乙酸(2mL)。在相同温度下搅拌2hr之后，在真空中浓缩混合物。用DCM稀释残留物，用饱和的NaHCO3水溶液和盐水清洗混合物，并经Na2SO4干燥。进行过滤之后，去除过滤的溶剂和挥发物。通过制备型LC-MS提纯残留物而获得9.4mg(9％的收率)作为浅褐色固体的标题化合物。
将制备型LC-MS和品质检验(QC)方法的条件示于表6。
比较例2：2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3,4-二氟苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：
((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3,4-二氟苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤2类似的方式，以＞99％的收率(187mg，油)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-羟基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.34mmol)和3,4-二氟苯酚(132mg，1.0mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：557(M+H)+,555(M-H)-。
步骤2：
(R)-5-((R)-2-氨基-4-(3,4-二氟苯氧基)丁酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例1的步骤3类似的方式，以41％的收率(62mg，黄色固体)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3,4-二氟苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(187mg，0.34mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：457(M+H)+。
步骤3：
(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3,4-二氟苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤4类似的方式，以＞99％的收率(84mg，无色固体)由(R)-5-((R)-2-氨基-4-(3,4-二氟苯氧基)丁酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(60mg，0.13mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：542(M-Boc+H)+。
步骤4：
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3,4-二氟苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤5类似的方式，以12％的收率(9.3mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3,4-二氟苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(84mg，0.13mmol)制备标题化合物。
比较例3：
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：
((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤2类似的方式，以45％的收率(213mg，白色固体)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-羟基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(130mg，0.29mmol)和3,5-双(三氟甲基)苯酚(202mg，0.88mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：601(M-tBu+H)+。
步骤2：
(R)-5-((R)-2-氨基-4-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)丁酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例1的步骤3类似的方式，以62％的收率(50mg，褐色固体)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(213mg，0.15mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：557(M+H)+。
步骤3：
(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤4类似的方式，以＞99％的收率(67mg，白色固体)由(R)-5-((R)-2-氨基-4-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)丁酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(50mg，0.090mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：742(M+H)+。
步骤4：
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤5类似的方式，以23％的收率(12mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3,5-双(三氟甲基)苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(59mg，0.080mmol)制备标题化合物。
比较例4：
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(4-氟苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：
((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(4-氟苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤2类似的方式，以45％的收率(213mg，白色固体)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-羟基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(60mg，0.14mmol)和4-氟苯酚(30mg，0.27mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：601(M-tBu+H)+。
步骤2：
(R)-5-((R)-2-氨基-4-(4-氟苯氧基)丁酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例1的步骤3类似的方式，以13％的收率(24mg，褐色胶状物)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(4-氟苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(191mg，0.43mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：439(M+H)+。
步骤3：
(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(4-氟苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤4类似的方式，以82％的收率(28mg，无色胶状物)由(R)-5-((R)-2-氨基-4-(4-氟苯氧基)丁酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(24mg，0.055mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：624(M+H)+,622(M-H)-。
步骤4：
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(4-氟苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤5类似的方式，以42％的收率(9.8mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(4-氟苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(28mg，0.045mmol)制备标题化合物。
比较例5：
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-((5-氟吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丁烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：
((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-((5-氟吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤2类似的方式，以＞99％的收率(182mg，浅褐色胶状物)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-羟基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.34mmol)和5-氟吡啶-3-醇(57mg，0.51mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：540(M+H)+。
步骤2：
(R)-5-((R)-2-氨基-4-((5-氟吡啶-3-基)氧基)丁酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮
以与实施例1的步骤3类似的方式，以21％的收率(32mg，浅褐色固体)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-((5-氟吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(182mg，0.34mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：440(M+H)+。
步骤3：
(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-((5-氟吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤4类似的方式，以89％的收率(38mg，浅褐色固体)由(R)-5-((R)-2-氨基-4-((5-氟吡啶-3-基)氧基)丁酰基)-3a-苄基-2-甲基-4,5,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3(3aH)-酮(30mg，0.068mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：625(M+H)+,623(M-H)-。
步骤4：
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-((5-氟吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丁烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤5类似的方式，以32％的收率(9.7mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-((5-氟吡啶-3-基)氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(38mg，0.061mmol)制备标题化合物。
比较例6：
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3-氰基苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
步骤1：
((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3-氰基苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃下，在((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-羟基-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.34mmol)、3-羟基苯甲腈(60mg，0.51mmol)及三丁基膦(0.17mL，0.38mmol)的THF(2mL)溶液中逐滴添加1,1’-(偶氮羰基)-二哌啶(170mg，0.65mmol)的THF(4mL)溶液。在室温下搅拌3天之后，将混合物用饱和的NaHCO3水溶液和EtOAc稀释来进行分离。将有机层经Na2SO4干燥。进行过滤之后，在真空中浓缩滤液。通过管柱层析(硅胶，50％至75％的EtOAc的己烷)提纯残留物而获得作为无色胶状物的标题化合物(105mg，57％的收率)。
MS(ESI)m/z：546(M+H)+,544(M-H)-。
步骤2：
3-((R)-3-氨基-4-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-氧代丁氧基)苯甲腈
以与实施例1的步骤3类似的方式，以＞99％的收率(74mg，浅褐色油)由((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3-氰基苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(91mg，0.17mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：446(M+H)+。
步骤3：
(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3-氰基苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
以与实施例1的步骤4类似的方式，以＞99％的收率(105mg，黄色胶状物)由3-((R)-3-氨基-4-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-氧代丁氧基)苯甲腈(74mg，0.17mmol)制备标题化合物。
MS(ESI)m/z：631(M+H)+,629(M-H)-。
步骤4：
2-氨基-N-((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3-氰基苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)-2-甲基丙酰胺
以与实施例1的步骤5类似的方式，以19％的收率(17mg)由(1-(((R)-1-((R)-3a-苄基-2-甲基-3-氧代-3a,4,6,7-四氢-2H-吡唑并[4,3-c]吡啶-5(3H)-基)-4-(3-氰基苯氧基)-1-氧代丁烷-2-基)氨基)-2-甲基-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(105mg，0.17mmol)制备标题化合物。
{表6}
体外药理学测定
在稳定表达人生长激素释放肽受体的HEK293细胞中由生长激素释放肽受体激动活性诱导的Ca2+内流的测量
在37℃下，将稳定表达人生长激素释放肽受体的HEK293细胞在5％CO2的加湿培养箱中保持于添加有10％胎牛血清、100单位/ml青霉素、100microg/ml链霉素及500microg/ml G418的达尔伯克氏改良伊格尔培养基(Dulbecco’s modified Eagle medium)(高葡萄糖)，并使其生长至60-80％的细胞汇合度(confluence)。在测定前一天，将细胞以10,000细胞/孔的密度接种于涂有多聚-D-赖氨酸的384-孔板(BD FALCON)，并在培养箱中彻夜培养。
在测定当天，用分析缓冲液(20mM HEPES，pH7.4的Hanks’平衡盐溶液)将细胞清洗三次，并在室温下培养1小时，从而加载0.5microM Fluo-4AM试剂(Invitrogen)。
去除Fluo-4，并用分析缓冲液清洗之后，在细胞中添加各种化合物的浓缩液。用荧光成像读板仪(fluorescence imaging plate reader)FDSS6000(Hamamatsu Photonics)监控细胞内钙浓度的变化。
由11-点剂量-反应研究确定本发明的化合物的EC50值。使用各数据点的复孔(duplicate wells)平均值来生成曲线。最后，使用通过XL拟合(ID Business Solutions Ltd)确定的最佳拟合剂量曲线来计算出EC50值。
所有被测化合物在上述测定中显示出小于约500nanoM的EC50。
优选化合物在上述测定中显示出小于约50nanoM的EC50。
进一步优选化合物在上述测定中显示出小于约10nanoM的EC50。
优选化合物如下：
实施例1-8、10-14、16及21-27。
进一步优选化合物如下：
实施例9、17、18及20。
表7.丝氨酸衍生物与高丝氨酸衍生物之间的生长激素释放肽EC50的比例
{表7}
体内药理学测定
在有意识的小鼠中的生长激素(GH)反应
从Charles River Japan购入雌性BALB/c小鼠(7周龄)，并在每一个笼子容纳四只或五只动物。彻夜禁食之后，口服给药测试化合物。在给药后的5、10、30分钟，采集血液样品。在每个时间点使用两只或三只动物。使用EIA试剂盒(Rat Growth Hormone EIA KIT，SPI-Bio,France)测定小鼠GH的血浆浓度。
本发明的化合物在上述测定中显示出大于等于15ng/ml的小鼠GH的血浆浓度。
麻醉的大鼠一般用于研究生长激素释放肽化合物(常规方法参考以下：Endocrinol Japan 31(1984)539-547,Journal of Endocrinology 171(2001)481-489,Gastroenterology 123(2002)1120-1128,Peptides 32(2011)1001-1007)。在常规测定中，需要静脉内给药测试化合物，因此该等不适用于口服药物的探索性调研。但是，上述测定可在禁食状态下口服给药，其在药物探索中对测试化合物的生长激素释放的评估有用。这是用于评估生长激素释放的，在有意识的禁食小鼠中生长激素(GH)反应的测定过程的第一个实例。
在大鼠中顺铂-诱导的恶病质/厌食症的影响
从Japan SLC,Inc.购入雄性Wistar大鼠(7-8周龄)，在12-小时光照、12-小时黑暗的循环(早上8点开灯)下，分别单独地容纳于温度和湿度经控制的腔室中。使大鼠适应实验环境至少5天，并进行两次处理。随意供给食物和水。大鼠被分类为所谓的假手术对照组和顺铂处理组这两组。从第0天至第2天，在光照周期的末期腹膜内给药顺铂(0.6mg/kg/day，Wako Pure Chemical)。对于假手术大鼠仅提供生理盐水。在即将给药顺铂之前，将测试化合物口服给药3天(从第0天至第2天)。为了预防顺铂-诱导的中毒性肾损害，在给药盐或顺铂之后，立即皮下给药2-3mL的生理盐水。从第0天至第4天，每天测定体重及食物消耗量。
在用顺铂处理的大鼠中观察到体重及食物消耗量统计上的显著减少。化合物的口服给药使用顺铂处理的大鼠的体重及食物消耗量显著增加。
有一些关于生长激素释放肽在短期内显示出影响减少食物的消耗量的报道(常规方法参考以下：Endocrinology 149(2008)455-460,Endocrinology 151(2010)3773-3782,Neurogastroenterol Motil 25(2013)373-e292,Peptides 46(2013)13-19,Vitamins and Hormones 92(2013)301-317)。但没有关于在5天的研究中，生长激素释放肽激动剂显示出抑制持续的体重降低和抑制食物摄取量的减少的报道。当适用5天常规测定方法时，该等研究因大鼠中的顺铂-诱导的中毒性肾损害而未能获得成功。为了解决该问题作出了巨大努力。最后，惊奇地发现如下改变条件会带来成功的结果：1)在傍晚给药；2)使用适应实验环境至少5天且至少两次被处理得当的大鼠；及3)加载盐，其对恶病质/厌食症的评估有用。这是大鼠中顺铂-诱导的恶病质/厌食症的测定过程中的首例。
对承载有(bearing)AH-130细胞的大鼠中的恶病质的影响
从Japan SLC,Inc.购入雄性Wistar大鼠(4周龄)，在12-小时光照、12-小时黑暗的循环(早上8点开灯)下，分别单独地容纳于温度和湿度经控制的腔室中。使大鼠适应实验环境至少5天，并进行两次处理。随意供给食物和水。大鼠被分类为所谓的假手术对照组和肿瘤承载(tumor bearers)组。在第0天，后者腹膜内注射大于1×108的AH-130腹水肝癌细胞(Tohoku University,Sendai,Japan)。对于假手术大鼠仅提供PBS。肿瘤承载组进一步分类为处理组和未处理组，前者在光照周期的末期口服给药测试化合物9天(第0天至第8天)。一周测定两次体重。在实验结束时，用CO2处死大鼠，解剖胸大肌并进行称重。
在接种AH-130腹水肝癌细胞5天后，与假手术组相比，体重明显减少。在给药本发明的化合物的大鼠中，与对照组相比，第9天的体重及胸大肌重量显著增加。
没有关于生长激素释放肽激动剂抑制持续的体重降低的报道。为了解决该问题作出了巨大努力。最后，惊奇地发现如下改变条件会带来成功的结果：1)利用未成熟的大鼠来代替成熟大鼠；2)增加细胞数(大于1×108的AH-130腹水肝癌细胞)；及3)在傍晚给药。上述测定过程对药物探索中的恶病质的评估有用。这是在承载有AH-130细胞的大鼠中的恶病质(体重降低及肌肉萎缩)的测定过程中的第一个成功的实施例。