脂肪间充质干细胞诱导成肝脏样细胞的方法与流程

文档序号:11936623阅读:来源:国知局

技术特征:

1.脂肪间充质干细胞诱导成肝脏样细胞的方法,其特征是包括以下步骤:

(1)脂肪间充质干细胞的原代培养与传代;

将脂肪间充质干细胞原代接种培养,待接种后细胞密度达90%以上,则传代;

(2)细胞培养;

进行传代后接种,并恒温培养;培养基为a-MEM+10~20v/v%FBS或DMEM+10~20v/v%FBS;

(3)成肝脏样细胞诱导培养;

细胞贴壁后,将培养基更换为成肝诱导培养基,每隔3~4天换一次成肝诱导培养基;

所述成肝诱导培养基为含有20-50ng/mL FGF4、50-150ng/mL HGF、20-40ng/mL OSM、20-50ng/mL aFGF、1-20μmol/L Dex、50-200μmol/L VPP、1-10mmol/L Vc和1X胰岛素转铁蛋白硒的基础培养基;

所述基础培养基为含5~10v/v%FBS的DMEM培养基;

(4)成肝脏样细胞诱导;

成肝脏样细胞诱导培养7~15天,即诱导成肝脏样细胞。

2.根据权利要求1所述的脂肪间充质干细胞诱导成肝脏样细胞的方法,其特征在于,所述原代接种时间为72小时。

3.根据权利要求1所述的脂肪间充质干细胞诱导成肝脏样细胞的方法,其特征在于,所述传代按1:2~3传代。

4.根据权利要求1所述的脂肪间充质干细胞诱导成肝脏样细胞的方法,其特征在于,步骤(1)中,若细胞密度未达90%,则半量换液,延长培养一天传代。

5.根据权利要求1所述的脂肪间充质干细胞诱导成肝脏样细胞的方法,其特征在于,所述传代后接种是指:取对数生长的第2~4代细胞,以1×104/cm2的浓度进行传代后接种。

6.根据权利要求1所述的脂肪间充质干细胞诱导成肝脏样细胞的方法,其特征在于,所述恒温培养是指:于5v/v%CO2和37℃条件下恒温培养。

7.根据权利要求1所述的脂肪间充质干细胞诱导成肝脏样细胞的方法,其特征在于,所述细胞贴壁是指细胞培养24h后见细胞贴壁生长。

8.根据权利要求1所述的脂肪间充质干细胞诱导成肝脏样细胞的方法,其特征在于,所述成肝诱导培养基中还含有20ng/mL EGF和/或10ng/mL bFGF。

9.一种成肝诱导培养基,其特征是:所述成肝诱导培养基为细胞诱导成肝脏样细胞的培养基;所述成肝诱导培养基为含有20-50ng/mL FGF4、50-150ng/mL HGF、20-40ng/mL OSM、20-50ng/mL aFGF、1-20μmol/L Dex、50-200μmol/L VPP、1-10mmol/L Vc和1X胰岛素转铁蛋白硒的基础培养基;

所述基础培养基为含5~10v/v%FBS的DMEM培养基。

10.根据权利要求9所述的一种成肝诱导培养基,其特征在于,所述细胞为脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脐血干细胞或脐带干细胞;所述成肝诱导培养基中还含有20ng/mL EGF和/或10ng/mL bFGF。

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