包含多个同源核苷酸序列的载体的制作方法

文档序号:12577584阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种经修饰的牛痘安卡拉(MVA)病毒载体,其包含两个大小为300个核苷酸的核苷酸序列,各核苷酸序列编码100个氨基酸,

其中由所述两个核苷酸序列中的各核苷酸序列编码的100个氨基酸具有至少75%的氨基酸同一性;

其中所述两个核苷酸序列中的一个具有至少75个核苷酸不同于另一个核苷酸序列,

其中所述不同核苷酸不改变由所述两个核苷酸序列编码的相同氨基酸,其中所述载体为病毒载体,

其中所述两个核苷酸序列在取代后具有不大于9个连续核苷酸的同一性序列段,

其中所述两个核苷酸序列编码全长的和截短的RSV-F蛋白。

2.一种用于产生权利要求1所述的经修饰的牛痘安卡拉(MVA)病毒载体的方法,所述方法包括以下步骤:

a)提供第一核苷酸序列,其大小为300个核苷酸,编码100个氨基酸;

b)提供第二核苷酸序列,其大小为300个核苷酸,编码100个氨基酸,其中由所述两个核苷酸序列中的各核苷酸序列编码的100个氨基酸具有至少75%的氨基酸同一性,且其中所述两个核苷酸序列中的一个具有至少75个核苷酸不同于另一个核苷酸序列,其中所述不同核苷酸不改变由所述两个核苷酸序列编码的相同氨基酸,其中所述两个核苷酸序列在取代后具有不大于9个连续核苷酸的相同的序列段;和

c)将所述两个差异核苷酸序列插入MVA载体中;并且,

其中所述两个核苷酸序列编码全长的和截短的RSV-F蛋白。

3.一种降低经修饰的牛痘安卡拉(MVA)病毒载体内的分子内重组的方法,所述载体含有两个大小为300个核苷酸的核苷酸序列,各核苷酸序列均编码100个氨基酸,其中由所述两个核苷酸序列中的各核苷酸序列编码的100个氨基酸具有至少75%的氨基酸同一性,所述方法包括取代在一个或两个核苷酸序列中的核苷酸以产生显示至少75个核苷酸不同的两个差异序列,其中所述不同核苷酸不改变由所述两个核苷酸序列编码的相同氨基酸,其中所述两个核苷酸序列在取代后具有不大于9个连续核苷酸的相同的序列段,其中所述两个核苷酸序列编码全长的和截短的RSV-F蛋白。

4.一种产生经修饰的牛痘安卡拉(MVA)病毒的方法,该病毒包含两个同源核苷酸序列,所述方法包括以下步骤:

a)提供MVA病毒,其包含大小为300个核苷酸的编码100个氨基酸的核苷酸序列;

b)将大小为300个核苷酸的编码100个氨基酸的第二核苷酸序列插入至所述MVA病毒中;

其中由所述两个核苷酸序列中的各核苷酸序列编码的100个氨基酸具有至少75%的氨基酸同一性;且

其中所述两个核苷酸序列中的一个具有至少75个核苷酸不同于另一个核苷酸序列,

其中所述不同核苷酸不改变由所述两个核苷酸序列编码的相同氨基酸,

其中所述两个核苷酸序列在取代后具有不大于9个连续核苷酸的相同的序列段,并且其中所述两个核苷酸序列编码全长的和截短的RSV-F蛋白。

5.根据权利要求1所述的载体或权利要求2-4任一项所述的方法,其中所述MVA病毒为保藏在ECACC的编号为V00083008的MVA-BN。

6.根据权利要求1或5所述的载体或权利要求2-5任一项所述的方法,其中所述至少75个不同的核苷酸是被取代的。

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