本发明涉及药物合成领域，具体涉及2’-O-单丁酰环磷腺苷的制备方法。
背景技术：
：二丁酰环磷腺苷钙为环磷腺苷(cAMP)的丁酰化衍生物。作为蛋白酶激活剂，二丁酰环磷腺苷钙可同时激活蛋白激酶A和蛋白激酶C(cAMP仅激活蛋白激酶A)。蛋白激酶是一种别构酶，由两个催化亚基和两个调节亚基组成，催化亚基具有催化蛋白质(或酶)磷酸化作用。故二丁酰环磷腺苷钙可催化人体内最基本的生物化学代谢-氧化磷酸化反应和三羧酸循环，使大多数蛋白质和酶类产生活性，激活人体各种反应，同时产生大量ATP，改善细胞和能量代谢，从而实现其促进神经再生、转化异常细胞、扩张血管、舒张平滑肌、改善心肌缺血等作用。目前临床上主要用于治疗心绞痛、急性心肌梗死的辅助治疗，亦可用于治疗心肌炎、心源性休克、手术后网膜下出血和银屑病，并可辅助其他抗癌药治疗白血病。2’-O-单丁酰环磷腺苷或其盐是药物二丁酰环磷腺苷钙合成工艺中的中间体，同时也是合成工艺中的主要有关物质。环磷腺苷在酰化过程中，羟基经缚酸剂活化后，其酰化速度较氨基快，如果最终酰化反应不完全就会形成2’-O-单丁酰环磷腺苷，其是影响二丁酰环磷腺苷药物质量的关键有关物质。现有技术合成2’-O-单丁酰环磷腺苷或其盐主要采用从环磷腺苷为起始原料合成的方法，其方法中合成与后处理较为麻烦，而且纯度和产率均不高。一种便捷制备2’-O-单丁酰环磷腺苷的方法，以及对有关物质2’-O-单丁酰环磷腺苷的生成机制研究，对于二丁酰环磷腺苷钙药物的质量控制显得尤为关键。技术实现要素：本发明所解决的技术问题在于为了克服现有的2’-O-单丁酰环磷腺苷的制备方法操作复杂及工艺不稳定、产率和纯度都不高的缺陷，提供了一种2’-O-单丁酰环磷腺苷的制备方法。本发明的制备方法通过特定的酸度水解条件实现了2’-O-单丁酰环磷腺苷的高效制备，制得的产品纯度高，收率高，适合工业化生产，可以作为二丁酰环磷腺苷钙制备过程中的标准品的质量控制。本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：本发明提供了2’-O-单丁酰环磷腺苷的制备方法，其包括下述步骤：质子性溶剂中，在酸的作用下，将二丁酰环磷腺苷进行水解反应，即可；所述的水解反应的反应液的pH值为3～5。其中，所述的质子性溶剂可为本领域常规使用的各种质子性溶剂，较佳地为醇类溶剂、腈类溶剂、水和二甲基亚砜(DMSO)中的一种或多种；所述的醇类溶剂较佳地为甲醇和/或乙醇，所述的腈类溶剂较佳地为乙腈。所述的二丁酰环磷腺苷与所述的质子性溶剂的质量体积比较佳地为5～20mg/mL。其中，所述的酸可为本领域水解反应常规使用的酸，较佳地为盐酸、硫酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、甲磺酸和三氟甲磺酸中的一种或多种。其中，所述的二丁酰环磷腺苷与所述的酸的质量体积比较佳地为50～1000g/mL，更佳地为100～200g/mL。其中，所述的反应结束后还可以进行后处理，进一步纯化产物2’-O-单丁酰环磷腺苷；所述的后处理优选包括下述步骤：滤膜过滤，采用制备液相色谱法进行纯化。所述的制备液相色谱法的条件优选如下：流动相A为水，流动相B为甲醇和/或乙腈，检测波长为273nm，以流动相A和流动相B按照下述体积比进行线性梯度洗脱：时间(min)流动相A(％)流动相B(％)090～955～102085153030～5050～70收集15～21min洗脱液，减压浓缩，即可。其中，所述的制备液相色谱法中的制备液相色谱仪较佳地为VarianSD-1PrepStar制备液相色谱仪；色谱柱较佳地为十八烷基硅烷键合硅胶柱(优选参数为5×25cm，填料为KromasilC18，10μm)。其中，所述的水解反应的温度较佳地为10～30℃，即在室温下即可完成反应。其中，所述的水解反应的时间较佳地为10～15天。本发明还提供了2’-O-单丁酰环磷腺苷盐的制备方法，其包括下述步骤：极性有机溶剂中，2’-O-单丁酰环磷腺苷与碱金属盐或碱土金属盐反应即可。其中，所述的极性有机溶剂可为本领域常规使用的各种极性有机溶剂，较佳地为乙腈、甲醇和乙醇中的一种或多种。其中，所述的碱金属盐较佳地为氯化钠和/或硫酸钠；所述的碱土金属盐较佳地为氯化钙、氯化钡、醋酸钙和硝酸钡中的一种或多种。其中，所述的2’-O-单丁酰环磷腺苷与碱金属盐或碱土金属盐的摩尔比较佳地为1∶(1～1.1)，更佳地1∶1。在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。本发明所用试剂和原料均市售可得。本发明的积极进步效果在于：本发明的制备方法通过特定的酸度水解条件实现了2’-O-单丁酰环磷腺苷的高效制备，制得的产品纯度高达99.8％，收率达77％以上、甚至高达87％，适合工业化生产，可以作为二丁酰环磷腺苷钙制备过程中的标准品的质量控制。具体实施方式下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。实施例12’-O-单丁酰环磷腺苷的制备取2g二丁酰环磷腺苷置于500mL三口烧瓶中，加入190mL纯化水与10mL乙腈溶解，搅拌中加入20μL三氟乙酸，反应液pH值为3，25℃下反应14天。用滤膜过滤反应液。将上述滤液注入制备液相色谱(美国VarianSD-1PrepStar)的色谱柱(5×25cm，填料为KromasilC18，10μm)中。流动相A为纯化水，流动相B为制备级乙腈，紫外检测波长为273nm，洗脱梯度为：时间(min)流动相A(％)流动相B(％)0955208515305050收集15-21min的洗脱液。洗脱液真空抽除乙腈，得到的浓缩液进行冻干，得纯度99.8％的白色固体粉末1.49g，收率为87.3％。质谱分析：WatersAcquityUPLC-QTOFPremier超高效液相色谱-质谱联用仪(美国Waters)，Masslynx软件分析系统；色谱柱为AcquityBEHC18色谱柱(美国Waters)(2.1×100mm，1.7μm)，串联质谱离子源为电喷雾离子源(ESI)，正离子扫描模式检测，毛细管电压为3.0kV，离子源温度为100℃，雾化气温度为350℃，雾化气流量为600.0L·hr-1，碰撞电压分别为4.0eV(MS)和15.0～30.0eV(MS/MS)，扫描范围m/z100～1000。在一级全扫描质谱图中，显示准分子离子峰m/z为400.1029和两个副峰。对于准分子离子峰，匹配度最高的分子式为C14H19N5O7P。进行二级全扫描分析，得到五个主要碎片离子，以精确分子量匹配分子式，其中m/z为136.0602匹配的分子式为C5H6N5，m/z为266.0433匹配的分子式为C9H14O7P，m/z为97.0277匹配的分子式为C5H5O2，m/z为176.9941匹配的分子式为C5H6O5P，m/z为195.0052匹配的分子式为C5H8O6P。通过上述碎片离子峰情况可知其为2’-O-单丁酰环磷腺苷。核磁分析：BruckAVANCEIII400MHz核磁共振波谱仪(德国Bruck)，采用氘代DMSO溶剂进行分析。各信号归属：δ＝8.39(s，1H)；8.25(s，1H)；7.72(s，2H)；6.22(s，1H)；5.77-5.78(d，1H)；5.21-5.25(m，1H)；4.40-4.49(m，1H)；4.16-4.21(m，1H)；4.05-4.11(m，1H)；2.41-2.44(t，2H)；1.56-1.62(m，2H)；0.90-0.94(t，3H)。共17个H，1-2.5ppm为丁酰基相应氢原子，4-6.3ppm为呋喃糖相应氢原子，7-8.5ppm为腺嘌呤相应H。其中δ＝7.72处为N6-氨基的两个质子，受共轭效应影响明显，化学位移向低场移动。红外分析：Thermo-FisherNicolet6700型傅里叶红外光谱分析仪(美国Thermo-Fisher)。IR图谱各主要吸收峰归属：1741cm-1为2’位酯C＝O伸缩振动峰；1090cm-1为酯C-O-C伸缩振动峰；1694cm-1为C＝N伸缩振动峰；1640cm-1为N-H面内弯曲振动峰；1249cm-1为C-N。综合上述MS、NMR、IR结果，白色固体为2’-O-单丁酰环磷腺苷。实施例22’-O-单丁酰环磷腺苷的制备取2g二丁酰环磷腺苷置于500mL三口烧瓶中，加入190mL纯化水和10mL甲醇溶解，搅拌中加入17μL浓盐酸，反应液pH值为3，25℃下反应14天。用滤膜过滤反应液。将上述滤液处理后注入制备液相色谱(美国VarianSD-1PrepStar)的色谱柱(5×25cm，填料为KromasilC18，10μm)中。流动相A为纯化水，流动相B为制备级乙腈，紫外检测波长为273nm，洗脱梯度为：时间(min)流动相A(％)流动相B(％)0955208515305050收集15-21min的洗脱液。洗脱液真空抽除乙腈，得到的浓缩液进行冻干，得纯度99.8％的白色固体粉末1.37g，收率为80.5％。MS、NMR、IR结果同实施例1，表明白色固体为2’-O-单丁酰环磷腺苷。实施例32’-O-单丁酰环磷腺苷的制备取2g二丁酰环磷腺苷置于500mL三口烧瓶中，加入200mL纯化水溶解，搅拌中加入2μL三氟甲磺酸，反应液pH值为4，25℃下反应15天。用滤膜过滤反应液。将上述滤液处理后注入制备液相色谱(美国VarianSD-1PrepStar)的色谱柱(5×25cm，填料为KromasilC18，10μm)中。流动相A为纯化水，流动相B为制备级甲醇，紫外检测波长为273nm，洗脱梯度为：时间(min)流动相A(％)流动相B(％)0955208515305050收集15-21min的洗脱液。洗脱液真空抽除甲醇，得到的浓缩液进行冻干，得纯度99.8％的白色固体粉末1.32g，收率为77.6％。MS、NMR、IR结果同实施例1，表明白色固体为2’-O-单丁酰环磷腺苷。实施例42’-O-单丁酰环磷腺苷的制备取2g二丁酰环磷腺苷置于500mL三口烧瓶中，加入300mL纯化水和100mL乙醇溶解，搅拌中加入10μL甲酸，反应液pH值为5，30℃下反应14天。用滤膜过滤反应液。将上述滤液处理后注入制备液相色谱(美国VarianSD-1PrepStar)的色谱柱(5×25cm，填料为KromasilC18，10μm)中。流动相A为纯化水，流动相B为制备级乙腈，紫外检测波长为273nm，洗脱梯度为：时间(min)流动相A(％)流动相B(％)0955208515305050收集15-21min的洗脱液。洗脱液真空抽除乙腈，得到的浓缩液进行冻干，得纯度99.8％的白色固体粉末1.35g，收率为79.3％。MS、NMR、IR结果同实施例1，表明白色固体为2’-O-单丁酰环磷腺苷。实施例52’-O-单丁酰环磷腺苷的制备取2g二丁酰环磷腺苷置于500mL三口烧瓶中，加入80mL纯化水和20mLDMSO溶解，搅拌中加入40μL乙酸，反应液pH值为4，10℃下反应10天。用滤膜过滤反应液。将上述滤液处理后注入制备液相色谱(美国VarianSD-1PrepStar)的色谱柱(5×25cm，填料为KromasilC18，10μm)中。流动相A为纯化水，流动相B为制备级乙腈，紫外检测波长为273nm，洗脱梯度为：时间(min)流动相A(％)流动相B(％)09010208515303070收集15-21min的洗脱液。洗脱液真空抽除乙腈，得到的浓缩液进行冻干，得纯度99.8％的白色固体粉末1.32g，收率为77.6％。MS、NMR、IR结果同实施例1，表明白色固体为2’-O-单丁酰环磷腺苷。实施例62’-O-单丁酰环磷腺苷的制备取2g二丁酰环磷腺苷置于500mL三口烧瓶中，加入190mL纯化水和10mL甲醇溶解，搅拌中加入10μL硫酸，反应液pH值为3，25℃下反应14天。用滤膜过滤反应液。将上述滤液处理后注入制备液相色谱(美国VarianSD-1PrepStar)的色谱柱(5×25cm，填料为KromasilC18，10μm)中。流动相A为纯化水，流动相B为制备级乙腈，紫外检测波长为273nm，洗脱梯度为：时间(min)流动相A(％)流动相B(％)0955208515304060收集15-21min的洗脱液。洗脱液真空抽除乙腈，得到的浓缩液进行冻干，得纯度99.8％的白色固体粉末1.32g，收率为77.6％。MS、NMR、IR结果同实施例1，表明白色固体为2’-O-单丁酰环磷腺苷。实施例72’-O-单丁酰环磷腺苷的制备取2g二丁酰环磷腺苷置于500mL三口烧瓶中，加入190mL纯化水和10mL甲醇溶解，搅拌中加入20μL甲磺酸，反应液pH值为3，25℃下反应14天。用滤膜过滤反应液。将上述滤液处理后注入制备液相色谱(美国VarianSD-1PrepStar)的色谱柱(5×25cm，填料为KromasilC18，10μm)中。流动相A为纯化水，流动相B为制备级乙腈，紫外检测波长为273nm，洗脱梯度为：时间(min)流动相A(％)流动相B(％)0955208515304060收集15-21min的洗脱液。洗脱液真空抽除乙腈，得到的浓缩液进行冻干，得纯度99.8％的白色固体粉末1.37g，收率为80.5％。MS、NMR、IR结果同实施例1，表明白色固体为2’-O-单丁酰环磷腺苷。对比例1取2g二丁酰环磷腺苷置于500mL三口烧瓶中，加入190mL纯化水与10mL乙腈溶解，搅拌中加入盐酸至反应液pH值为0，25℃下反应1天。得到产物进行分析，HPLC图谱分析结果显示产物中，2’-O-单丁酰环磷腺苷的摩尔百分含量占比为33.5％(换算成质量为0.57g，收率为33.5％)，N6-单丁酰环磷腺苷的质量百分含量占比为14.7％，二丁酰环磷腺苷的摩尔百分含量占比为38.2％，环磷腺苷的摩尔百分含量占比为10.7％，副产物较多。对比例2取2g二丁酰环磷腺苷置于500mL三口烧瓶中，加入190mL纯化水与10mL乙腈溶解，搅拌中加入盐酸至反应液pH值为1，25℃下反应1天。得到产物进行分析，HPLC图谱分析结果显示产物中，2’-O-单丁酰环磷腺苷的摩尔百分含量占比为45.3％(换算成质量为0.77g，收率为45.3％)，N6-单丁酰环磷腺苷的摩尔百分含量占比为1.2％，二丁酰环磷腺苷的摩尔百分含量占比为51.2％，环磷腺苷的摩尔百分含量占比为1.0％，副产物较多。实施例82’-O-单丁酰环磷腺苷钠的制备上述冻干得到的2’-O-单丁酰环磷腺苷纯品500mg溶于10mL乙醇中，与溶解有73mg氯化钠的50mL氯化钠水溶液1∶1摩尔量反应，抽真空除去有机相，浓缩液经冻干得到纯度为99.8％的2’-O-单丁酰环磷腺苷钠白色粉末523.6mg，收率为99.0％。当前第1页1 2 3