一种食物中沙门氏菌属含量的检测方法与流程

文档序号:12412691阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种食物中沙门氏菌属含量的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一,样品采集:用预先灭菌的采样瓶采集食物10g,食物采集后立即放入冰盒内保存,2-5h内进行检测;步骤二,食物的浓缩:对于沙门氏菌浓度低的食物,真空抽滤1000mL食物通过微孔滤膜,过滤完毕后取出滤膜,置于已灭菌的烧杯中,加入10mL磷酸盐缓冲液,该磷酸盐缓冲液的pH值为7.4,用磁力搅拌洗脱滤膜30min;弃滤膜,保存洗脱产物,取洗脱产物1mL,加入到9mL超纯水中,混匀后再取出1mL,加入到9mL超纯水中,依次梯度稀释,得到、和三种稀释度的样品;对于沙门氏菌浓度高的食物,取原水1mL,加入到9mL超纯水中,混匀后再取出1mL,加入到9mL超纯水中,依次梯度稀释,得到10-0、10-1和10-2稀释度的样品;步骤三,食物前增菌:将10-0、10-1和10-2这三种稀释度的样品分别加入前增菌液混匀,每个稀释度做5份,放入37℃恒温培养箱中培养24h;步骤四,选择性增菌:将各个稀释度样品的前增菌产物1mL转入到100mL选择性增菌液中并混匀,在42℃下进行选择性增菌培养24h;步骤五,平板划线分离:挑取选择性增菌产物,分别在XLD平板和BS平板上划线分离和培养,其中,XLD平板在37℃下培养24h,BS平板在37℃下培养48h;步骤六,阳性菌落的鉴定:培养完毕,观察在XLD和BS平板上生长的菌落形态,分别挑取不同形态的菌落,置于PCR反应管中,以沙门氏菌属通用引物进行扩增,扩增片段长度为284bp;并对PCR产物在100V下电泳10-30min,观察在284bp位置上是否有明亮的扩增条带出现,若有,则该菌落为沙门氏菌阳性;所述的沙门氏菌属通用引物包括上游引物139和下游引物141;在所述XLD平板中使沙门氏菌属通用引物和阳性菌落接触以形成经接种的培养装置;在高于40℃的温度下温育培养装置第一时间段;观察所述培养装置;步骤七,鉴定XLD和BS两种平板上的阳性菌落,并进行互补计数,对于每个稀释度的样品,对应的XLD平板和BS平板只要有其一是阳性平板,则该稀释度即为阳性;以阳性组合的方式记录平板上阳性菌落的结果,对照MPN表查找对应的MPN值,除以在步骤二中食物浓缩的倍数,得到100mL食物的沙门氏菌活体含量。

2.根据权利要求1所述的食物中沙门氏菌属含量的检测方法,其特征在于,其中所述培养装置被提供为薄膜培养装置,所述薄膜培养装置具有以基本上脱水的形式设置在其中的所述营养物质培养基、所述第一选择剂、所述第一区别性指示剂系统和所述第二区别性指示剂系统。

3.根据权利要求1所述的食物中沙门氏菌属含量的检测方法,其特征在于,所述的PCR扩增的条件是:(1)PCR反应体系总体积25µL,其中各成分终浓度为:引物139和引物141各0.4μmol/L,0.75UTaq酶,0.8mmol/LdNTPs,2.5mmol/LMgCl2;(2)PCR扩增反应在PCR仪上进行,反应条件为:95℃预变性5min;95℃,30s,65℃,30s,72℃,30s,进行30个循环;最后72℃延伸4min。

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