小鼠或人类的全能性干细胞quteASCs诱导及培养建系方法与流程

文档序号:12411344阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种小鼠或人类的全能性干细胞quteASCs诱导及培养建系方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)小鼠或人类早期胚胎的准备

材料来源是3-8天的小鼠早期胚胎或3-14天的人类早期胚胎;

2)ASCs过渡型干细胞诱导建系

将步骤1)中获得小鼠胚胎或者人类早期胚胎在KSOM培养液体外培养2天后,通过用台氏酸去掉胚胎的透明带,然后把裸露的胚胎在不使用血清替代物和饲养层细胞的条件下,在N2B27基础培养液中添加碱性纤维母细胞生长因子bFGF、激活素A的AF培养液中进行干细胞诱导建系处理;

500ml ASCs干细胞诱导建系的AF培养液组成:

获得的干细胞称为ASCs过渡型干细胞;

3)quteASCs多能性干细胞诱导传代

把获得的ASCs过渡型干细胞通过Wnt基因、BMP4基因干细胞信号通路调控,进一步诱导培养获得多能性干细胞quteASCs;具体方法为:首先,在不使用血清替代物和饲养层细胞的条件下,在N2B27基础培养液中添加激活素A、BMP4、CHIR99021和LIF的ABCL培养液进行干细胞诱导,培养10-14天后ASCs细胞中开始出现绿色标记细胞GOF-GFP,把绿色细胞克隆挑出传代或者继续培养形成细胞杂合体通过流式细胞仪把绿色细胞分离纯化,在同样条件下进行干细胞培养增殖传代2-3天,用细胞消化液消化后采用同样培养液和方法继续传代20代以上;

500ml quteASCs多能性干细胞诱导的ABCL培养液组成:

2.根据权利要求1所述的小鼠或人类的全能性干细胞quteASCs诱导及培养建系方法,其特征在于,所述步骤1)中,3-8天的小鼠早期胚胎来源于体外受精或者从母体子宫回收;3-14天的人类早期胚胎来源于体外受精或者从母体子宫回收。

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