一种煤地质微生物形态和数量的检测方法与流程

文档序号:12412567阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种煤地质微生物形态和数量的检测方法,其特征是包括如下步骤:

1)煤样或水样采集,

2)微生物菌体的收集,

3)菌体前处理:厌氧条件下,将备用滤膜上菌体,用去氧无菌水洗下来,制成菌悬液,

根据观察目的不同,加入荧光染色剂DAPI(即4',6-二脒基-2-苯基吲哚),低速震荡培养,待染色剂与微生物反应,

(4)荧光显微镜分析:将反应好的微生物样品,适量滴在载玻片上,进行镜检,

(5)微生物形态分析:使用Image pro Plus软件测量菌体大小体积,

(6)微生物数量分析:将制备好的染色菌液,取适量滴入细胞计数板内,在荧光显微镜下镜检,统计计算出数量。

2.根据权利要求1所述的煤地质微生物形态和数量的检测方法,其特征是所述步骤(1)中,

水样采集过程,使用水样取样瓶,取样前将取样瓶进行高温高压灭菌,在无菌工作台内,用氮气置换瓶体内空气,将配制好的新鲜还原剂溶液装入底部,然后从进液口灌入水样,将水样与还原剂混匀,取回待用,

煤样采样过程:使用煤样取样罐,取样前将取样罐进行高温高压灭菌,将催化剂装在罐盖底部,从进气口一通入氮气置换罐体内空气,从下至上,能充分置换气体,取样时,将煤样装入罐体内,盖好罐盖,再通入氮气充分置换罐体,取回待用。

3.根据权利要求2所述的煤地质微生物形态和数量的检测方法,其特征是,所述的水样取样瓶构造是,瓶体(3),瓶体(3)上口封闭,瓶体(3)下设有可拆卸的还原剂瓶底(5),在瓶口处设有进气液管(2)和出气液管)(1),所述的进气液管(2)下口比出气液管(1)下口低。

4.根据权利要求2所述的煤地质微生物形态和数量的检测方法,其特征是所述的煤样取样罐的构造是,罐体(9),罐体(9)下方设有进气口一(10),罐体(9)上方设有罐盖(8),罐盖(8)内装有催化剂(7),穿过罐盖(8)设有出气口(6)。

5.根据权利要求1所述的煤地质微生物形态和数量的检测方法,其特征是,所述的步骤(2)微生物菌体的收集方法,具体如下

操作前进行高温高压灭菌,在超净工作台内,放好微孔滤膜,进气口二连接氮气阀,真空连接好,对过滤装置进行预抽过程,使得整个装置充满氮气,保持厌氧环境,预抽后,加入待滤样,进气口依然连接氮气阀,开始抽滤工作,完毕后取微孔滤膜待用,

所述待滤样为采集到的水体菌水样;所述的待滤样为采集到的煤体菌水样,制备方法是采集到的煤样在厌氧条件下,研磨细,加入去氧无菌水,震荡摇匀,静置,取上清液。

6.根据权利要求5所述的煤地质微生物形态和数量的检测方法,其特征是,所述收集装置的构造,锥形废液瓶(15),联通器(14),待滤样品瓶(12),待滤样品瓶(12)和锥形废液瓶(15)通过联通器(14)连接,在联通器(14)一侧设有抽气口(16),在待滤样品瓶(12)上方设有进气口二(11),在待滤样品瓶(12)和联通器(14)之间设有微孔滤膜(17),并且通过夹子(13)固定。

7.根据权利要求2所述的煤地质微生物形态和数量的检测方法,其特征是还原剂为L-半胱氨酸和或碳酸氢钠。

8.根据权利要求2所述的煤地质微生物形态和数量的检测方法,其特征是催化剂为钯粒。

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