一种从海带中提取抗氧化肽的方法与流程

文档序号:11107623阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种海带抗氧化肽的分离方法,其特征在于:通过加入缓冲液溶解离心制备海带抗氧化肽粗提液,再经过柱平衡、上样、洗涤、洗脱、柱再生、沉淀、离心、脱水和真空干燥等步骤初步分离纯化,得到一种海带抗氧化肽产品。

2.根据权利要求1所述的制备海带抗氧化肽的方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:

(1)溶解离心:取海带干粉,先用PBS缓冲液将海带干粉溶解,搅拌2-8h,10000r/min离心5-60min,取上清液;将沉淀溶于2-10倍(w/v)蒸馏水后继续搅拌2-8h后再次10000r/min离心5-60min,取上清液;再将沉淀溶解于2-10倍(w/v)蒸馏水进行第三次搅拌,离心后取上清液,作为上柱液;

(2)柱平衡:用平衡缓冲液平衡柱体,用恒流泵控制流速为100-700ml/min,平衡时间1-5小时;

(3)上样:将上柱液加入层析柱,恒流泵控制流速为100-700ml/min;上样结束后,用平衡缓冲液洗涤层析柱,恒流泵控制流速为200-800ml/min;

洗涤:用洗涤缓冲液洗涤层析柱,恒流泵控制流速为200-800ml/min;

(5)洗脱:洗涤结束后,用洗脱液洗脱层析柱,恒流泵控制流速为300-900ml/min;洗脱的同时,使用核酸蛋白检测仪粗略测量流出液100-640nmOD值,当OD值接近0.05-0.95时改用紫外分光光度计精密测量OD值,当流出液OD值在0.2-0.7以上,开始收集流出液,直到OD值在0.2-0.7以下,停止收集流出液;

(6)柱再生:洗脱结束后,用氢氧化钠溶液的再生液洗涤层析柱,之后再用纯化水洗涤层析柱,流速均用恒流泵控制在100-1000ml/min;

(7)沉淀:计量收集流出液体积,转入不锈钢桶内,边搅边加入流出液体积2-8倍量(v/v)的冷乙醇,乙醇温度不超过-5℃,静置沉淀12-36小时,至乙醇澄清沉淀物全部沉于不锈钢桶底部;

(8)离心、脱水:用软管自然虹吸上层乙醇,下层沉淀物装入离心杯用低速大容量冷冻离心机离心,使固液分离,设定离心转速不低于2500-5000rpm;离心结束后,弃去上层母液,收集下层固体,按固体物重量1:2-1:9(w/v)比例于离心杯内加入无水乙醇脱水1-4次,再按上述步骤离心,收集固体物干燥;

(9)真空干燥:将上述盛有离心固体物的离心杯放置于真空干燥箱,干燥10-35小时以上,干燥后即得产品。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:步骤(1)中,按干粉重量1:5-1:90(w/v)的比例量取PBS缓冲液,PBS缓冲液pH7.2~7.4,其中NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO410mmol/L, KH2PO4 2mmol/L。

4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:步骤(2)中,平衡缓冲液为0.05mol/L乙酸钠溶液(pH 3.0-7.5)。

5.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:步骤(4)中,洗涤缓冲液为取0.1mol/L乙酸钠溶液(pH 2.0-9.0)。

6.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:步骤(5)中,洗脱液为1.0mol/L氯化钠溶液(pH2.5-10.0)。

7.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:步骤(6)中,再生液为0.1-1.0mol /L氢氧化钠溶液。

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