本实用新型属于生物检测技术领域，具体涉及一种鸡白血病检测试剂盒。
背景技术：
鸡白血病(Avain Leukosis，AL)是由鸡白血病病毒(Avain Leukosis Virus，ALV)引起的一种肿瘤性传染病，可引起感染鸡免疫抑制和多组织器官发育迟缓、萎缩以及肿瘤等。鸡白血病除了对鸡群造成直接危害外，还可使鸡群免疫失败，继发感染，导致染病鸡群的生产性能下降，尤其是产蛋率和蛋的品质下降，给我国养禽业带来了巨大的损失。目前该病无有效的治疗方法，也没有合适的疫苗进行免疫预防，只能采取淘汰净化的方法控制。
聚合酶链式反应(PCR)是目前动物疫病检测的主流技术，PCR可检测出ALV-J前病毒DNA，包括来自血液、肿瘤组织、病毒感染的组织或细胞培养物的样本。与普通PCR法相比，实时荧光定量PCR法在封闭的体系中进行扩增和实时检测，无需电泳就可以对结果进行分析，避免了传统PCR产物的污染和EB(溴化乙锭)带来的危害，自动化程度高，重复性好，检测周期短，广泛应用于科研和临床检测。因此，应用荧光PCR技术建立快速、灵敏的鸡白血病病毒检测方法对于全面诊断、有效控制鸡白血病具有重要的作用。
技术实现要素：
本实用新型的目的是提供一种鸡白血病病毒荧光PCR检测试剂盒，包括盒体和盒盖，盒体内设有衬垫，衬垫上设有：10×PCR缓冲液容器孔，内置10×PCR缓冲液；DNA聚合酶容器孔，内置DNA聚合酶；dNTP容器孔，内置dNTP；上下游引物容器孔，内置上下游引物；荧光探针容器孔，内置荧光探针；双蒸水容器孔，内置双蒸水；阳性对照品容器孔，内置阳性对照品；阴性对照品容器孔，内置阴性对照品。
本实用新型的检测试剂盒能够快速、准确、灵敏的检测鸡全血、组织样品或喉拭子、泄殖腔拭子等样品中的鸡白血病病毒。
所述检测用特异性引物和探针核苷酸序列为：
上游引物：5’-AGAAAGACCCGGAGAAGAC-3’
下游引物：5’-ACACGTTTCCTGGTTGGTT-3’
探针：5’-ATTTCCGTTGTCCCAGGGGTGG-3’
所述探针的5’端荧光报告基团是FAM，3’端标记的是荧光淬灭基团TAMRA。
本检测试剂盒于-18℃以下保存。
本实用新型检测试剂盒荧光PCR反应体系：10×PCR缓冲液2.5μL，DNA聚合酶0.5μL，dNTP 3μL，上下游引物2μL，荧光探针1μL，DNA模板5μL，双蒸水11μL，总体积为25μL。每次检测均应设立阳性对照和阴性对照，在PCR反应体系中的使用量均为5μL。
本实用新型检测试剂盒荧光PCR反应条件：
第一步：95℃5min；
第二步：95℃10s，55℃10s，72℃30s，5个循环；
第三步：95℃5s，60℃30s，40个循环，60℃设置采集荧光信号。
本实用新型检测试剂盒荧光PCR结果判定：
1.ALV-J阳性对照和阴性对照：阳性对照有S形扩增曲线，Ct值应≤30，阴性对照无S形扩增曲线，且无Ct值。
2.有S形扩增曲线，且Ct值≤30时，为ALV-J核酸阳性；无Ct值且无S形扩增曲线，为ALV-J核酸阴性。
3.若30＜Ct值＜40时，则重复一次。若再次扩增后Ct值＜40，判为ALV-J核酸阳性，否则判为阴性。
本实用新型鸡白血病病毒荧光PCR检测试剂盒，根据ALV-J特异性env基因序列设计引物和探针，结合实时荧光定量PCR技术检测鸡白血病病毒，此试剂盒可应用于检测鸡全血、组织样品或喉拭子、泄殖腔拭子等样品中的鸡白血病病毒，具有检测结果准确性高、特异性强、灵敏度高以及检测快速、使用方便等优点，具有很高的推广应用价值。
附图说明
图1为本实用新型检测试剂盒的结构示意图。
具体实施方式
本实用新型结合附图和具体实施例作进一步说明。应该理解，这些实施例仅用于说明实用新型，而不用于限制本实用新型的范围。
实施实例1.
本实用新型鸡白血病病毒荧光PCR检测试剂盒采用荧光实时监控PCR扩增的检测技术，适用于鸡全血、组织样品或喉拭子、泄殖腔拭子等样品中的鸡白血病病毒的特异性检测。本实用新型试剂盒包括盒体1和盒盖2，盒体内设有衬垫3，衬垫3上设有：10×PCR缓冲液容器孔4，内置10×PCR缓冲液；DNA聚合酶容器孔5，内置DNA聚合酶；dNTP容器孔6，内置dNTP；上下游引物容器孔7，内置上下游引物；荧光探针容器孔8，内置荧光探针；双蒸水容器孔9，内置双蒸水；阳性对照品容器孔10，内置阳性对照品；阴性对照品容器孔11，内置阴性对照品。
检测用特异性引物和荧光探针为：
上游引物：5’-AGAAAGACCCGGAGAAGAC-3’；
下游引物：5’-ACACGTTTCCTGGTTGGTT-3’；
荧光探针：5’-FAM-ATTTCCGTTGTCCCAGGGGTGG-TAMRA-3’。
本检测试剂盒于-18℃以下保存。
荧光PCR反应体系：10×PCR缓冲液2.5μL，DNA聚合酶0.5μL，dNTP 3μL，上下游引物2μL，荧光探针1μL，DNA模板5μL，双蒸水11μL，总体积为25μL。
每次检测均应设立阳性对照和阴性对照，在PCR反应体系中的使用量均为5μL。
荧光PCR反应条件：
第一步：95℃5min；
第二步：95℃10s，55℃10s，72℃30s，5个循环；
第三步：95℃5s，60℃30s，40个循环，60℃设置采集荧光信号。
结果判定：
1.ALV-J阳性对照和阴性对照：阳性对照有S形扩增曲线，Ct值应≤30，阴性对照无S形扩增曲线，且无Ct值。
2.有S形扩增曲线，且Ct值≤30时，为ALV-J核酸阳性；无Ct值且无S形扩增曲线，为ALV-J核酸阴性。
3.若30＜Ct值＜40时，则重复一次。若再次扩增后Ct值＜40，判为ALV-J核酸阳性，否则判为阴性。