本发明属于药物合成技术领域，尤其是涉及坎格雷洛中间体的制备方法和应用。
背景技术：
坎格雷洛是一种静脉注射p2y12抑制剂，它阻断二磷酸腺苷(adp)-诱发血小板激活和集聚，化学结构与三磷酸腺苷(atp)相似。它是首个静脉给药的抗血小板凝集药，用来预防成年患者在经皮冠状动脉介入治疗(pci)过程中，因为凝血造成的冠状动脉堵塞，能有效降低心肌梗死和支架内血栓的风险。2015年6月22日坎格雷洛经美国fda批准上市，授权themedicinescompany开发，制剂规格为50mg冻干粉针剂，商品名kengrealtm。
坎格雷洛的化学名称：n6-[2-(甲硫基)乙基]-2-[(3,3,3-三氟丙基)硫代]-5’-腺苷酸，带二氯亚甲基二磷酸的单酐(n6-[2-(methylthio)ethyl]-2-[(3,3,3,trifluoropropyl)]-5’-adenylicacid，monanhydridewith(dichloromethylene)bisphosphonicacid)的四钠盐。经验式为c17h21n5cl2f3na4o12p3s2和分子量为864.3g/mol。化学结构式如下，用式i表示。
坎格雷洛的制备方法在文献和专利上报道得不多，开发公司(medicines公司)在文献中(j.med.chem.1999,42,213-220)采用2-巯基腺苷为起始原料，其制备可参考文献chem.pharm.bull.25(8)1959-1969(1977)的制备方法，见合成路线1。另一种方法是以硫代巴比妥酸为起始原料，进行七步冗长的反应路径(cn105061431)才得到坎格雷洛的关键中间体式iv，见合成路线2。合成路线1采用的起始原料的来源稀少，价格昂贵，自己合成时需要用到剧毒的二硫化碳以及加压反应，并且有剧毒的硫化氢产生，对生产人员及环境造成伤害，放大生产困难，不适宜工业化生产。合成路线2冗长，总收率低,需要用到雷尼镍氢化高压反应,以及碘甲烷，同样不适宜工业化生产。
合成路线1：
合成路线2：
此外，在纯化方面，现有技术如wo9418216a1(us5721219a)和文献(j.med.chem.1999,42,p213)多半得到铵盐形式再进一步和碘化钠或是碳酸氢钠转换为钠盐形式，如前面合成路线1所示，从如式ix所示的化合物到从如式i所示的化合物需要三步反应而且收率只有4％。
专利cn1613864a中(见纯化路线1)，虽然提纯制备收率已经比上面专利提高6倍，但是需要两次离子交换树脂分离提纯，步骤繁琐，而且会产生大量的洗脱液造成浓缩困难，成本提高，而且得到的铵盐形式还得再进一步和碘化钠或是碳酸氢钠转换为如式i所示的化合物。
纯化路线1：
另外专利cn105061431a中，虽然使用一次deae-sephadexa25离子交换树脂分离纯化，收率也明显提高到54％，但是所得的铵盐形式还得再进一步和碘化钠或是碳酸氢钠转换为如式i所示的化合物。
技术实现要素：
针对现有技术的不足，本发明者们研究获得了一种合成如式iv所示的化合物的方法，包括以下步骤：
步骤一、制备如式iii所示的化合物；
步骤二、由如式iii所示的化合物制备如式iv所示的化合物；
进一步地，步骤一采用如式ii所示的化合物(2,6-二氯嘌呤)与如式v所示的化合物(2-(甲硫基)乙胺)反应得到如式iii所示的化合物；
进一步地，步骤一具体为：将如式ii所示的化合物、如式v所示的化合物、质子溶剂和碱在30℃～120℃下反应，得到如式iii所示的化合物。所述步骤一中的碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钾、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、n-甲基哌啶和n-甲基吗啉或其组合物，优选为三乙胺或碳酸钾。所述质子溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、2-丁醇和叔丁醇或其组合物，优选为乙醇和正丁醇。
进一步地，步骤一具体为：反应瓶中加入如式ii所示的化合物、如式v所示的化合物、乙醇和三乙胺，升温至110℃～120℃后，常压回流至反应完成，冷却到室温，过滤得到滤饼，所述滤饼用饱和碳酸氢钠溶液搅拌，过滤，再用水洗，得到如式iii所示的化合物。
进一步地，步骤二采用如式iii所示的化合物与如式vi-1所示的化合物，或者与如式vi-2所示的化合物，或者与如式vii-1所示的化合物，或者与如式vii-2所示的化合物反应得到如式iv所示的化合物；化学式中，x表示卤素；m表示金属元素；
进一步地，m表示碱金属。
进一步地，m表示na、k或li。
进一步地，x表示cl、br或i。
进一步地，所述步骤二中的反应在碱的存在下进行。所述步骤二中的碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铯、碳酸钾、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、n-甲基哌啶和n-甲基吗啉或其组合物。所述步骤二中的反应溶剂为质子溶剂或非质子溶剂。质子溶剂选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇和水或其组合物。非质子溶剂选自四氢呋喃、乙腈、二氧六环、n，n-二甲基甲酰胺(dmf)、二甲亚砜(dmso)、丙酮、n,n-二甲基乙酰胺(dma)和n-甲基吡咯烷酮或其组合物。所述步骤二的反应温度为40℃～150℃。
本发明还公开了一种合成如式ix所示的化合物的方法，包括如上所述的合成如式iv所示的化合物的方法；
进一步地，还包括以下步骤：
步骤三、由如式iv所示的化合物与如式xi所示的化合物缩合制备如式viii所示的化合物；
步骤四、由如式viii所示的化合物水解脱乙酰基保护基得到如式ix所示的化合物；
其中，r1表示ac或bz；r2表示ac或bz。
进一步地，步骤三具体为：先将如式iv所示的化合物加入到溶液一中，再滴加n,o-双三甲硅基乙酰胺，然后滴加三氟甲磺酸三甲基硅酯，接着滴加溶于所述溶液一的1,2,3,5-四乙酰-β-d-呋喃核糖，反应，得到如式viii所示的化合物；所述溶液一选自乙腈、dmf、二甲氧基乙烷(dme)、dma、甲苯、四氢呋喃、丙酮和dmac或其组合物。进一步地，步骤三具体为：在氮气保护下将如式iv所示的化合物与1,2,3,5-四乙酰-β-d-呋喃核糖加入到溶液二中，再加入四氯化锡，反应，得到如式viii所示的化合物；所述溶液二选自乙腈、dmf、dme、dma、甲苯和四氢呋喃或其组合物。
进一步地，步骤四具体为：将如式viii所示的化合物溶于氨水-甲醇溶液中，水解脱乙酰基保护基得到如式ix所示的化合物。
本发明还公开了如式iv所示的化合物在合成如式ix所示的化合物和/或坎格雷洛中的应用，即如式iv所示的化合物是如上所述的方法得到的。
本发明也公开了如式ix所示的化合物在合成坎格雷洛中的应用，即所述的如式ix所示的化合物是如上所述的方法得到的。
本发明还涉及一种坎格雷洛的合成方法，包括如上所述的合成如式ix所示的化合物的方法，以及还包括：步骤五、如式ix所示的化合物与三氯氧磷和氯屈磷酸单三正丁胺盐反应，经弱碱性钠盐淬灭处理后，纯化，得到坎格雷洛。
进一步地，步骤五中的弱碱性钠盐选自碳酸氢钠、碳酸钠、醋酸钠、柠檬酸钠、磷酸钠和磷酸氢钠。
进一步地，步骤五中的如式ix所示的化合物与三氯氧磷和氯屈磷酸单三正丁胺盐反应的反应温度-20℃～0℃。优选为-10℃。
进一步地，步骤五具体为：将如式ix所示的化合物和质子海绵加入磷酸酯中，冷却至-20℃～0℃滴加三氯氧磷，待如式ix所示的化合物消耗后，加入氯屈磷酸单三正丁胺盐和三正丁胺，-20℃～0℃搅拌2～10小时，反应，经弱碱性钠盐淬灭处理后，纯化，得到坎格雷洛。
在一个具体实施方式中，步骤五中质子海绵是1,8-双二甲氨基萘；如式ix所示的化合物、1,8-双二甲氨基萘、三氯氧磷、氯屈磷酸单三正丁胺盐、三丁胺的摩尔比为1:(1～3):(2～6):(3～8):(3～8)。
在另一个具体实施方式中，步骤五中将如式ix所示的化合物和质子海绵加入磷酸酯中，使得如式ix所示的化合物在磷酸酯溶剂中的浓度为0.1-0.2m；反应底物氯屈磷酸单三正丁胺盐和三正丁胺先溶于无水n,n-二甲基甲酰胺中，其浓度分别为1-2m和1.5-3m，然后再加入到反应体系中进行反应。
进一步地，步骤五中的纯化是用反相树脂提纯进行分离纯化。
进一步地，步骤五中的纯化是用反相树脂进行梯度提纯，洗脱剂为1-15％的2-丙醇水溶液，得到坎格雷洛。优选地，反相树脂为aberchromtm。
进一步地，步骤五中经弱碱性钠盐淬灭处理后，分离出水相，用溶液三析出水相中的固体，得到沉淀物，纯化所述沉淀物，得到坎格雷洛；所述溶液三选自二氯甲烷、甲乙酮、丙酮、乙醚、丁基甲醚、氯仿、甲醇、乙醇、四氢呋喃和丁酮或其组合物。
进一步地，步骤五中的淬灭和纯化为：将如式ix所示的化合物与三氯氧磷和氯屈磷酸单三正丁胺盐反应的产物缓慢倒入弱碱性钠盐水溶液中，在15℃～60℃下搅拌2～18小时，静置分离各相；将水相加入到所述溶液三中，得到沉淀物；收集所述沉淀物，通过反相色谱柱纯化，洗脱剂为2～8％的2-丙醇水溶液或者类似极性的溶液，收集纯组分，得到坎格雷洛。
进一步地，步骤五中的淬灭和纯化具体为：将如式ix所示的化合物与三氯氧磷和氯屈磷酸单三正丁胺盐反应的产物缓慢倒入弱碱性钠盐水溶液中，在15℃～50℃下搅拌2～18小时，静置分离各相，并用弱碱性钠盐水溶液洗涤上层有机相；合并水相后缓慢加入到所述溶液三中，得到沉淀物；将所述沉淀物过滤收集，用所述溶液三洗滤饼后干燥，然后通过反相色谱柱纯化，梯度洗脱，洗脱剂为1-15％的2-丙醇水溶液，收集纯组分，干燥，得到坎格雷洛。优选地，洗脱剂为2～8％的2-丙醇水溶液。优选地，采用真空干燥后再通过反向色谱柱纯化。
本发明还涉及一种坎格雷洛的合成方法，即采用如式iii所示的化合物作为坎格雷洛中间体；
本发明中的一种坎格雷洛的合成方法，采用弱碱性钠盐对如式ix所示的化合物与三氯氧磷和氯屈磷酸单三正丁胺盐反应得到的产物进行淬灭处理，纯化，得到坎格雷洛；
进一步地，弱碱性钠盐选自碳酸氢钠。
进一步地，对所述淬灭处理后的产物分离出水相，用溶液三析出所述水相中的固体，得到沉淀物，纯化所述沉淀物，得到坎格雷洛；所述溶液三选自二氯甲烷、甲乙酮、丙酮、乙醚、丁基甲醚和氯仿。
进一步地，所述纯化为采用反相树脂进行纯化。
进一步地，采用反相树脂进行梯度提纯，洗脱剂为1-15％的2-丙醇水溶液。优选地，反相树脂为aberchromtm或其他相似类型的反相树脂。
本发明中的一种坎格雷洛的纯化方法，采用反相树脂进行纯化得到坎格雷洛。
进一步地，采用反相树脂进行梯度提纯，洗脱剂为1-15％的2-丙醇水溶液，得到坎格雷洛。
本发明提供一种提纯制备坎格雷洛的新方法，以解决现有技术中利用阴离子交换树脂，deae–sephadexa25等弱碱性阴离子交换树脂或阴阳离子交换树脂两次分离提纯产率低的缺陷。其特征在于该生产工艺包括如下步骤：1.6-n-(2-(甲硫基)乙基)-2-((3,3,3-三氟丙基)硫代)腺苷(式ix)，与三氯氧磷和(二氯亚甲基)二磷酸三正丁基铵盐(式x)一锅法缩合得坎格雷洛反应粗品溶液；2.用反相树脂梯度提纯进行彻底分离纯化直接得到提纯的坎格雷洛(式i)四钠盐形式。
上述合成方案只是列举了本发明中部分化合物的制备方法，按照本领域的公知技术，技术人员在上述合成方案的基础上，采用类似的方法也可合成本发明的化合物。
本发明所述的“化合物”，包括所有立体异构体、几何异构体、互变异构体和同位素。
本发明所述的“化合物”，可以是不对称的，例如，具有一个或多个立体异构体。除非另有说明，所有立体异构体都包括，如对映异构体和非对映异构体。本发明中含有不对称碳原子的化合物，可以光学活性纯的形式或外消旋形式被分离出来；光学活性纯的形式可以从外消旋混合物拆分，或通过使用手性原料或手性试剂合成。
本发明所述的“化合物”，还包括互变异构体形式；互变异构体形式来源于一个单键与相邻的双键交换并一起伴随一个质子的迁移。
本发明还包括所有同位素的原子，无论是在中间体或最后的化合物；同位素的原子包括具有相同的原子数、但不同质量数的，例如，氢的同位素包括氘和氚。
本发明采用的合成技术路线和纯化技术简单易行，原料来源广泛，条件温和，生产成本低，收率高，环境友好，可得到的纯度高于98％，为工业化生产提供了更有效的合成方法。
附图说明
图1是坎格雷洛的合成路线图。
图2是如式ix所示的化合物的氢谱。
图3是坎格雷洛的1hnmr和31pnmr谱。
具体实施方式
下面结合附图与具体实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护内容不局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。实施本发明的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。
图1示出了本发明的一个具体实施方式中坎格雷洛的合成路线。在该实施方式中，包括：
步骤一、采用如式ii所示的化合物(2,6-二氯嘌呤)与如式v所示的化合物(2-(甲硫基)乙胺)反应得到如式iii所示的化合物(2-氯-n-(2-(甲硫基)乙基)-7h-嘌呤-6-胺)。
步骤二、采用如式iii所示的化合物与如式vi-2所示的化合物，或者与如式vii-2所示的化合物反应得到如式iv所示的化合物(6-n-(2-(甲硫基)乙基)-2-((3,3,3-三氟丙基)硫代)-9h-嘌呤)。如式vii-2所示的化合物中的m表示碱金属，比如na、k或li。如式vi-2所示的化合物中的x表示卤素，比如cl、br或i。
步骤三、由如式iv所示的化合物与如式xi所示的化合物缩合制备如式viii所示的化合物。化学式中的r1表示ac或bz；r2表示ac或bz。
步骤四、在碱存在下，由如式viii所示的化合物水解脱乙酰基保护基得到如式ix所示的化合物。
步骤五：
步骤5.1、如式ix所示的化合物与三氯氧磷反应得到如式xii所示的化合物；
步骤5.2、如式xii所示的化合物与如式x所示的化合物(氯屈磷酸单三正丁胺盐)反应，然后经弱碱性钠盐淬灭处理；
步骤5.3、将步骤5.2淬灭处理后的产物用反相树脂纯化得到如式i所示的化合物(坎格雷洛)。
实施例1：2-氯-n-(2-(甲硫基)乙基)-7h-嘌呤-6-胺(2-chloro-n-(2-(methylthio)ethyl)-7h-purin-6-amine，为如式iii所示的化合物)的合成
在100毫升烧瓶中，加入2-(甲硫基)乙胺(6.8克，57.5毫摩尔，1.2当量)，丁醇(50毫升)，三乙胺(11.6克，115毫摩尔，2当量)和2,6-二氯嘌呤(8.96克，48毫摩尔，1当量)。加热混合物至100℃搅拌6小时。冷却混合物到室温，过滤得到白色滤饼。将此滤饼加入150毫升饱和碳酸氢钠溶液搅拌30分钟，过滤，滤饼用水洗(100毫升)。真空干燥滤饼得到10.9克产物，即如式iii所示的化合物。产率93％，hplc纯度96％。
如式iii所示的化合物的氢谱数据：1hnmr(300mhz,d6-dmso)δ12.93(s,1h),8.17(s,1h),8.12(s,1h),3.62(dd,j＝13.4,6.4hz,2h),2.7(q,2h),2.1(s,3h)。
实施例2：2-氯-n-(2-(甲硫基)乙基)-7h-嘌呤-6-胺(如式iii所示的化合物)的合成
在250毫升烧瓶中，加入2-(甲硫基)乙胺(21克，230毫摩尔，1.5当量)，乙醇(50毫升)，三乙胺(39克，389毫摩尔，2.5当量)和2,6-二氯嘌呤(29克，150毫摩尔，1当量)。加热混合物至100℃搅拌6小时。冷却混合物到室温，加200ml水继续搅拌30分钟。过滤得到白色滤饼。将此滤饼加入400毫升饱和碳酸氢钠溶液搅拌30分钟，过滤，滤饼用水洗(150毫升)。真空干燥滤饼得到28.4克产物，即如式iii所示的化合物。产率78％，hplc纯度97％。
实施例3：6-n-(2-(甲硫基)乙基)-2-((3,3,3-三氟丙基)硫代)-9h-嘌呤(如式iv所示的化合物)的合成
如式iii所示的化合物(0.243克，1当量，1毫摩尔)，异硫脲盐化合物(如式vi-2所示的化合物，0.45克，1.5当量，1.5毫摩尔)和氢氧化钠(120毫克，3当量，3毫摩尔)溶解在2毫升干燥的dmf内，加热至100℃搅拌3天。未反应完全，再加入异硫脲盐化合物(如式vi-2所示的化合物，0.3克，1当量，1毫摩尔)和naoh(0.08毫克，2当量，2毫摩尔)继续加热至115℃反应24小时。该反应的进程通过hplc监测，将反应物冷却至室温，加入水(6毫升)。将混合物搅拌30分钟所形成淡黄色沉淀物。该固体通过真空过滤分离，而滤液丢弃。滤饼用水(20ml)洗。真空干燥得到纯的产物(0.250克，77％产率；hplc纯度98.5％)，即如式iv所示的化合物。
如式iv所示的化合物的氢谱数据：1hnmr(300mhz,d6-dmso)δ12.82(s,1h),7.98(s,1h),7.89(s,1h),3.63(dd,j＝13.4,6.4hz,2h),3.24(dd,j＝9.9,5.6hz,2h),2.80–2.59(m,4h),2.09(s,3h).
实施例4：6-n-(2-(甲硫基)乙基)-2-((3,3,3-三氟丙基)硫代)-9h-嘌呤(如式iv所示的化合物)的合成
如式iii所示的化合物(0.6克，1当量，2.48毫摩尔)，异硫脲盐化合物(如式vi-2所示的化合物，2.23克，3当量，7.45毫摩尔)和csoh(2.23毫克，6当量，14.9毫摩尔)溶解在6毫升干燥的dmf内，加热至115℃搅拌2天。未反应完全，再加入异硫脲盐化合物(如式vi-2所示的化合物，0.75克，1当量，2.48毫摩尔)和csoh(0.75毫克，2当量，4.96毫摩尔)继续加热至115℃反应24小时。该反应的进程通过hplc监测，反应完全。将反应物冷却至室温，加入水(60毫升)。将混合物搅拌30分钟所形成淡黄色沉淀物。该固体通过真空过滤分离，而滤液丢弃。滤饼用水(20ml)洗。真空干燥得到纯的产物(0.668克，80％产率)。母液浓缩用柱层析分离得到0.111克产物，即如式iv所示的化合物。合并产率92％(0.779克)hplc纯度99％。
实施例5：6-n-(2-(甲硫基)乙基)-2-((3,3,3-三氟丙基)硫代)-9h-嘌呤(如式iv所示的化合物)的合成
如式iii所示的化合物(2克，1当量，8.23毫摩尔)，3,3,3-三氟丙烷-1-硫醇钠(如式vii-2所示的化合物，m为na，1.5克，1.2当量，9.9毫摩尔)和碳酸铯(2.67克，1当量，8.23毫摩尔)溶解在10毫升干燥的dmf内，加热至100℃搅拌8小时。该反应的进程通过hplc监测，反应完全。将反应物冷却至室温，加入水(40毫升)。将混合物搅拌30分钟所形成淡黄色沉淀物。该固体通过真空过滤分离，而滤液丢弃。滤饼用水(20ml)洗。真空干燥得到的产物使用硅胶柱分离得到0.9克产品。产率27％。
实施例6：6-n-(2-(甲硫基)乙基)-2-((3,3,3-三氟丙基)硫代)-9h-嘌呤(如式iv所示的化合物)的合成
如式iii所示的化合物(0.486克，1当量，2毫摩尔)，3,3,3-三氟丙烷-1-硫醇(如式vii-1所示的化合物，0.583克，1.2当量，2.4毫摩尔)和氢氧化钠(240毫克，3当量，6毫摩尔)溶解在2毫升干燥的dmf内，加热至100℃搅拌8小时。该反应的进程通过hplc监测，反应完全。将反应物冷却至室温，加入水(40毫升)。将混合物搅拌30分钟所形成淡黄色沉淀物。该固体通过真空过滤分离，而滤液丢弃。滤饼用水(20ml)洗。真空干燥得到的产物使用硅胶柱分离得到0.28克产品。产率41％。
实施例7：6-n-(2-(甲硫基)乙基)-2-((3,3,3-三氟丙基)硫代)-9h-嘌呤(如式iv所示的化合物)的合成
如式iii所示的化合物(1.2克，1当量，4.96毫摩尔)，异硫脲化合物(如式vi-1所示的化合物，2.56克，3当量，14.9毫摩尔)和氢氧化钾(1.67克，6当量，29.8毫摩尔)溶解在10毫升干燥的dmso内，加热至115℃搅拌2天。未反应完全，再加入异硫脲化合物(如式vi-2所示的化合物，0.85克，1当量，4.96毫摩尔)和氢氧化钾(834毫克，3当量，14.9毫摩尔)继续加热至115℃反应24小时。该反应的进程通过hplc监测，反应完全。将反应物冷却至室温，加入水(100毫升)。将混合物搅拌30分钟所形成淡黄色沉淀物。该固体通过真空过滤分离，而滤液丢弃。滤饼用水(30ml)洗。真空干燥得到纯的产物(0.56克，73％产率，hplc纯度98.7％)。
实施例8：6-n-(2-(甲硫基)乙基)-2-((3,3,3-三氟丙基)硫代)-9h-嘌呤(如式iv所示的化合物)的合成
如式iii所示的化合物(0.6克，1当量，2.48毫摩尔)，异硫脲盐化合物(如式vi-2所示的化合物，2.23克，3当量，7.45毫摩尔)和氢氧化钾(834毫克，6当量，14.9毫摩尔)溶解在6毫升干燥的dmso内，加热至115℃搅拌2天。未反应完全，再加入异硫脲盐化合物(如式vi-2所示的化合物，0.75克，1当量，2.48毫摩尔)和氢氧化钾(417毫克，3当量，7.5毫摩尔)继续加热至115℃反应24小时。该反应的进程通过hplc监测，反应完全。将反应物冷却至室温，加入水(60毫升)。将混合物搅拌30分钟所形成淡黄色沉淀物。该固体通过真空过滤分离，而滤液丢弃。滤饼用水(20ml)洗。真空干燥得到纯的产物(0.56克，67％产率)。
实施例9：o,o,o-三乙酰基-6-n-(2-(甲硫基)乙基)-2-((3,3,3-三氟丙基)硫代腺苷(如式viii所示的化合物，r1＝ac，r2＝ac)的合成
室温下，将如式iv所示的化合物19.38g(60mmol)加入到200ml乙腈中，体系呈悬浊状态，将n,o-双三甲硅基乙酰胺(bsa)(19.62克，96mmol，1.6eq.)室温下滴加入混合物，加热至60℃，搅拌1小时，体系逐渐变为澄清。将混合物降至室温，三氟甲磺酸三甲基硅酯(tmsotf)(15.98克，72mmol，1.6eq.)滴加到体系中，搅拌30min，将1,2,3,5-四乙酰-β-d-呋喃核糖(如式xi所示的化合物，r1＝ac，r2＝ac，22.9g，72mmol，1.2eq.)溶于200ml乙腈中，滴加到反应体系中，升温至60℃反应6小时，hplc监测原料基本反应完毕，停止反应，降至室温，浓缩至干。向体系中加入400ml乙酸乙酯，溶解。有机相依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水各洗涤2次，干燥，50℃真空旋干，得42g油状物，即o,o,o-三乙酰基-6-n-(2-(甲硫基)乙基)-2-((3,3,3-三氟丙基)硫代腺苷，产品不用分离直接进行下一步，因此为如式viii所示的化合物(r1＝ac，r2＝ac)的粗品。
实施例10：如式ix所示的化合物的合成
室温下，将实施例9得到的如式viii所示的化合物(r1＝ac，r2＝ac)的粗品(60mmol)溶于600ml浓度为0.1mol/l的氢氧化钠-乙醇溶液中，搅拌反应30min，tlc监测原料反应完毕，向体系中加入7.2克(120mmol)冰乙酸，搅拌20min，将体系50℃真空旋蒸至剩余50ml，再向体系中加入350ml水，析出大量固体，过滤，50℃烘干，得23g类白色产物，即如式ix所示的化合物，收率85％，hplc纯度98.5％。
如式ix所示的化合物的分子量和氢谱数据：如式ix所示的化合物的氢谱图见图2，以下是其分子量和氢谱数据：
ms:470[m+h]
1hnmr(400mhz,dmso-d6),ppm:8.27(s,1h),8.13-8.11(m,1h),5.82-5.81(d,j＝6hz,2h),5.43-5.42(s,j＝6.4hz,1h),5.18-5.17(s,j＝4.8hz,1h),5.08-5.05(s,j＝5.6hz,1h),4.59-4.54(m,1h),4.13-4.10(m,1h),3.93-3.92(d,j＝3.6hz,1h),3.67-3.61(m,3h),3.56-3.51(m,1h),3.29-3.24(m,2h),2.73-2.69(m,4h),2.09(s,3h)
实施例11：o,o,o-三乙酰基-6-n-(2-(甲硫基)乙基)-2-((3,3,3-三氟丙基)硫代腺苷(如式viii所示的化合物，r1＝bz，r2＝bz)的合成
室温下，将如式iv所示的化合物3.23g(10mmol)加入到30ml甲苯中，体系呈悬浊状态，将n,o-双三甲硅基乙酰胺(bsa)(6.05克，30mmol，3eq.)室温下滴加入混合物，加热至100℃，搅拌半小时，体系逐渐变为澄清。将混合物降至室温，三氟甲磺酸三甲基硅酯(tmsotf)(4.4克，30mmol，3eq.)滴加到体系中，搅拌30min，将1-乙酰-2,3,5-苯甲酰-β-d-呋喃核糖(如式xi所示的化合物，r1＝bz，r2＝bz，15.1g，30mmol，3eq.)溶于30ml甲苯中，滴加到反应体系中，升温至100℃反应1小时，hplc监测原料基本反应完毕，停止反应，降至室温，浓缩至干。向体系中加入50ml乙酸乙酯，溶解。有机相依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水各洗涤2次，干燥，50℃真空旋干，得7.5g油状物，即o,o,o-三乙酰基-6-n-(2-(甲硫基)乙基)-2-((3,3,3-三氟丙基)硫代腺苷，产品不用分离直接进行下一步，因此为如式viii所示的化合物(r1＝bz，r2＝bz)的粗品。
实施例12：如式ix所示的化合物的合成
室温下，将实施例11得到的如式viii所示的化合物(r1＝bz，r2＝bz)的粗品(10mmol)溶于100ml浓度为0.1mol/l的氨水-甲醇溶液中，搅拌反应1小时，tlc监测原料反应完毕，向体系中加入1.2克(20mmol)冰乙酸，搅拌20min，将体系50℃真空旋蒸至剩余50ml，再向体系中加入350ml水，析出大量固体，过滤，50℃烘干，得2.6g类白色产物，即如式ix所示的化合物，收率57％，hplc纯度97.5％。
实施例13：o,o,o-三乙酰基-6-n-(2-(甲硫基)乙基)-2-((3,3,3-三氟丙基)硫代腺苷(如式viii所示的化合物，r1＝ac，r2＝ac)的合成
在室温并在氮气保护下，将式iv化合物3.8g(12mmol)与1,2,3,5-四乙酰-β-d-呋喃核糖(如式xi所示的化合物，r1＝ac，r2＝ac，4.6g，72mmol，1.2eq.)加入到100ml乙腈中，体系呈悬浊状态，将室温下滴加入氯化锡(iv)(2.8ml，24mmol，2eq.)，体系逐渐变为澄清浅黄色溶液。将混合物降至室温，继续搅拌约18小时，hplc监测原料基本反应完毕，停止反应，浓缩至干。向体系中加入50ml乙酸乙酯，溶解。有机相依次用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水各洗涤2次，干燥，50℃真空旋干，得8.6g油状物，即o,o,o-三乙酰基-6-n-(2-(甲硫基)乙基)-2-((3,3,3-三氟丙基)硫代腺苷，产品不用分离直接进行下一步，因此为如式viii所示的化合物(r1＝ac，r2＝ac)的粗品。
实施例14：如式ix所示的化合物的合成
室温下，将实施例13得到的如式viii所示的化合物(r1＝ac，r2＝ac)的粗品(12mmol)溶于60ml浓度为0.1mol/l的氨水-甲醇溶液中，搅拌反应1.5小时，tlc监测原料反应完毕，向体系中加入1.44克(24mmol)冰乙酸，搅拌20min，将体系50℃真空旋蒸至剩余5ml，再向体系中加入70ml水，析出大量固体，过滤，50℃烘干，得4.1g类白色产物，即如式ix所示的化合物，收率75％，hplc纯度97％。
实施例15：坎格雷洛(如式i所示的化合物)的合成
将如式ix所示的化合物(5.00克，1.0当量，10.6毫摩尔)和质子海绵(3.42克，1.5当量，16.0毫摩尔)加入到经烘箱干燥的圆底烧瓶中。然后加入磷酸三乙酯(95毫升)并将溶液冷却至-10℃并用氮气脱气30分钟。三氯氧磷(4.90克，3当量，31.9毫摩尔)以大约0.5毫升/20分钟的速率加入到该冷却的溶液中。2.5小时后，lc-ms检测如式ix所示的化合物消耗完毕。维持溶液在-10℃氯屈磷酸单三正丁胺盐(9.1克，4.0当量，21.3毫摩尔)，三丁胺(4.95克，5当量，26.6毫摩尔)溶解在30毫升dmf中，滴加入到剧烈搅拌的反应液中。将反应在-10℃下搅拌2小时。将粗混合物缓慢倒入碳酸氢钠水溶液(1.0升)。在室温下搅拌18小时，将溶液静置，分离各相，并用碳酸氢钠水溶液(200毫升)的新鲜溶液洗涤上层有机相。将合并的水相缓慢加入到丙酮中，搅拌产生白色沉淀物。将沉淀物通过真空过滤收集，用丙酮洗滤饼。所收集的白色粉末在真空中干燥18小时，得到粗固体。粗产物通过反相色谱柱纯化。收集纯组分并旋转蒸发浓缩至100ml。剩余的溶剂，通过冷冻干燥得到白色粉末(5.9g,收率71％)，即为坎格雷洛(如式i所示的化合物)，hplc纯度是98.7％。图3是坎格雷洛的1hnmr和31pnmr谱。坎格雷洛的分子量、1hnmr和31pnmr谱数据：
ms:774，776，778[m-h+]
1hnmr(300mhz,d2o)δ8.25(s,1h),5.96(d,j＝5.5hz,1h),4.67–4.62(m,1h),4.57–4.46(m,1h),4.35–4.08(m,3h),3.67(s,2h),3.20(dd,j＝8.9,6.6hz,2h),2.71(t,j＝6.7hz,2h),2.67–2.47(m,2h),2.03(s,3h).31pnmr(122mhz,d2o)δ8.35(d,j＝13.8hz),3.61–1.05(m),-10.63(d,j＝30.7hz).
实施例16：坎格雷洛(如式i所示的化合物)的合成
将如式ix所示的化合物(5.00克，1.0当量，10.6毫摩尔)和质子海绵(3.42克，1.5当量，16.0毫摩尔)加入到经烘箱干燥的圆底烧瓶中。然后加入磷酸三乙酯(95毫升)并将溶液冷却至-10℃并用氮气脱气30分钟。三氯氧磷(4.90克，3当量，31.9毫摩尔)以大约0.5毫升/20分钟的速率加入到该冷却的溶液中。2.5小时后，lc-ms检测如式ix所示的化合物消耗完毕。维持溶液在-10℃氯屈磷酸单三正丁胺盐(9.1克，4.0当量，21.3毫摩尔)，三丁胺(4.95克，5当量，26.6毫摩尔)溶解在30毫升dmf中，滴加入到剧烈搅拌的反应液中。在-10℃加入反应液。将反应在-10℃下搅拌2小时。将粗混合物缓慢倒入碳酸氢钠水溶液(1.0升)。在室温下搅拌18小时，然后在50℃搅拌4小时。将溶液静置，分离各相，并用碳酸氢钠水溶液(200毫升)的新鲜溶液洗涤上层有机相。将合并的水相缓慢加入到甲醇中，搅拌产生白色沉淀物。将沉淀物通过真空过滤收集，用甲醇洗滤饼。所收集的白色粉末在真空中干燥18小时，得到粗固体。粗产物通过反相色谱柱纯化。收集纯组分并旋转蒸发浓缩至100ml。剩余的溶剂，通过真空冷冻干燥得到白色粉末(4.5g,收率54％；hplc纯度是98.5％)，即为坎格雷洛(如式i所示的化合物)。
实施例17：坎格雷洛(如式i所示的化合物)的合成
将如式ix所示的化合物(25.00克，1.0当量，53毫摩尔)和质子海绵(17.1克，1.5当量，80毫摩尔)加入到经烘箱干燥的圆底烧瓶中。然后加入磷酸三乙酯(475毫升)并将溶液冷却至-10℃并用氮气脱气30分钟。三氯氧磷(20.4克，2.5当量，132毫摩尔)以大约5毫升/20分钟的速率加入到该冷却的溶液中。2.5小时后，lc-ms检测如式ix所示的化合物消耗完毕。维持溶液在-10℃氯屈磷酸单三正丁胺盐(91.0克，4.0当量，212毫摩尔)，三丁胺(50克，5当量，265毫摩尔)溶解在30毫升dmf中，滴加入到剧烈搅拌的反应液中。将反应在-10℃下搅拌2小时。将粗混合物缓慢倒入碳酸氢钠水溶液(3.5升)。在室温下搅拌18小时，然后在50℃搅拌2小时，将溶液静置，分离各相，并用碳酸氢钠水溶液(500毫升×2)的新鲜溶液洗涤上层有机相。将合并的水相缓慢加入到丙酮中，搅拌产生白色沉淀物。将沉淀物通过真空过滤收集，用丙酮洗滤饼。所收集的白色粉末在真空中干燥18小时，得到粗固体。粗产物通过反相色谱柱纯化。收集纯组分并旋转蒸发浓缩至100ml。剩余的溶剂，通过冷冻干燥得到白色粉末(26.6g,收率58％；hplc纯度是98.8％)，即为坎格雷洛(如式i所示的化合物)。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例，仅为了说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让本领域技术人员能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。