一种新的杀虫蛋白及其核苷酸序列的制作方法

文档序号:12776952阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种杀虫蛋白,其具有如(I)和(II)中的至少一种的氨基酸序列:

(I)SEQ ID No.2所示的氨基酸序列;

(II)与如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的一致性在95%以上,且与如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列;与如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的一致性在98%以上,且与如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列;优选其氨基酸序列为与如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列的一致性在99.5%以上,且与如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列具有相同功能的氨基酸序列。

2.一种核苷酸序列,所述核苷酸序列为编码如权利要求1所述的杀虫蛋白的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的核苷酸序列,其特征在于,当所述杀虫蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示时,编码所述杀虫蛋白的所述核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

4.一种组合物,其包括如权利要求1所述的杀虫蛋白。

5.根据权利要求4所述的组合物,其特征在于,当所述杀虫蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示时,编码所述杀虫蛋白的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

6.一种含有根据权利要求2或3所述的核苷酸序列,且能产生如权利要求1所述的杀虫蛋白的转基因微生物;

优选所述转基因微生物包括芽胞杆菌(Bacillus)、假单胞菌(Pseudomonas)、肠杆菌(Escherichia)和酵母(Saccharomyces)中的至少一种;

优选所述芽胞杆菌包括苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)、枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)、萎缩芽胞杆菌(Bacillus atrophaeus)和蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)中的至少一种;所述假单胞菌包括荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens);所述肠杆菌包括大肠杆菌(Escherichia coli)。

7.根据权利要求2或3所述的核苷酸序列在制备转基因植物中的应用,其中,所述转基因植物能够产生如权利要求1所述的杀虫蛋白;所述转基因植物包括十字花科(Cruciferae)、茄科(Solanaceae)、伞形科(Umbelliferae)、葫芦科(Cucurbitaceae)、天南星科(Araceae)、禾本科(Liliaceae)、豆科(Leguminosae)、蝶形花科(Papilionaceae)、藜科(Chenopodiaceae)、菊科(Compositae)和锦葵科(Malvaceae)中的至少一种;

优选所述转基因植物包括芸薹属(Brassica)、萝卜属(Raphanus)、烟草属(Nicotiana)、蕃茄属(Lycopersicon)、茄属(Solanum)、辣椒属(Capsicum)、胡萝卜属(Daucus)、芹属(Apium)、欧芹属(Petroselinum)、茴香属(Foeniculum)、南瓜属(Cucurbita)、黄瓜属(Cucumis)、冬瓜属(Benincasa)、丝瓜属(Luffa)、西瓜属(Citrullus)、甜瓜属(Cucumis)、磨芋属(Amorphophallus)蜀黍属(Zea)、高梁属(Sorghum)、狗尾巴草属(Setaria)、稻属(Oryza)、甘蔗属(Saccharum)、小麦属(Triticum)、大豆属(Glycine)、苜蓿属(Medicago)、甜菜属(Beta)、莴苣属(Lactuca)、向日葵属(Helianthus)和秋葵属(Abelmoschus esculentus)中的至少一种;

优选所述转基因植物包括油菜(Brassica campestris)、大白菜(Brassica rapa)、小白菜(Brassica chinensis)、甘蓝(Brassica oleracea)、萝卜(Raphanus sativus)、番茄(Lycopersicon esculentum)、马铃薯(Solanum tuberosum)、茄子(Solanum melongena)、旱芹(Apium graveolens)、欧芹(Petroselinum crispum)、小茴香(Foeniculum vulgare)、西葫芦(Cucurbita pepo)、南瓜(Cucurbita moschata)、黄瓜(Cucumis sativus)、冬瓜(Benincasa hispida)、丝瓜(Luffa acutangula)、西瓜(Citrullus lanatus)、甜瓜(Cucumis melo)、磨芋(Amorphophallus rivieri)、玉米(Zea mays)、高粱(Sorghum bicolor)、谷子(Setaria italica)、水稻(Oryza sativa)、甘蔗(Saccharum officinarum)、小麦(Triticum aestivum)、大豆(Glycine max)、苜蓿(Medicago sativa)、甜菜(Beta vulgaris)、莴苣(Lactuca sativa)、向日葵(Helianthus)和秋葵(Abelmoschus esculentus)中的至少一种。

8.一种制备如权利要求1所述的杀虫蛋白的方法,其包括利用根据权利要求6所述的转基因微生物,和/或利用根据权利要求7所述的应用中的转基因植物来生产所述杀虫蛋白;优选还包括在利用所述转基因微生物和/或转基因植物生产所述杀虫蛋白后,纯化所述杀虫蛋白使所述杀虫蛋白的纯度达到80%以上,更优选使所述杀虫蛋白的纯度达到90%以上,甚至是使所述杀虫蛋白的纯度达到99%以上。

9.根据权利要求1所述的杀虫蛋白,根据权利要求4或5所述的组合物,根据权利要求6所述的转基因微生物,以及根据权利要求7所述的应用中的转基因植物中的至少一种在防鞘翅目(Coleoptera)中的至少一种害虫中的应用;优选在防治鳃金龟科(Melolonthidae)中的至少一种害虫中的应用;特别优选在防治鳃金龟属(Holotrichia)中的至少一种害虫中的应用;最优选在防治华北大黑鳃金龟(Holotrichia oblita)中的应用。

10.根据权利要求1所述的杀虫蛋白的单克隆抗体,优选所述单克隆抗体为仅特异识别所述杀虫蛋白的单克隆抗体。

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