本发明涉及农药技术领域，尤其涉及一种克里本类芽孢杆菌颗粒剂及其制备方法。
背景技术：
克里本类芽孢杆菌属于芽孢杆菌科，类芽孢杆菌属的一种，该菌广谱性好，抑菌活性高，对多种植物病害都有防治效果，另外该杀菌种发酵过程中产生的次生代谢物多聚果糖对植物还具有促生特性，同时该菌株还有解磷作用，具有很高的市场价值。
目前常用的是克里本类芽孢杆水剂，不便运输、包装成本大、不易存储的因素，生物活性持效短，药效受到影响，使得其在推广和使用中具有一定的区域性。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种克里本类芽孢杆菌颗粒剂。本发明提供的克里本类芽孢杆菌颗粒剂生物活性高、抑菌效果好，且易于运输和储存。
本发明提供了一种克里本类芽孢杆菌颗粒剂，包括以下重量份数的组分：
克里本类芽孢杆菌4份；
助剂13～18份；
填料55～68份；
水18～20份。
优选的是，所述的克里本类芽胞杆菌菌种的生物保藏号为cgmccno.7996。
优选的是，所述助剂包括白砂糖和玉米淀粉，所述白砂糖和玉米淀粉的质量比为1：(4～7.5)。
优选的是，所述填料包括滑石粉和高岭土；所述滑石粉和高岭土的质量比为(1～2.5)：1。
优选的是，所述颗粒剂中克里本类芽胞杆菌的含量为190～210iu/mg。
优选的是，所述颗粒剂的干燥减量≤6％。
优选的是，所述颗粒剂的ph值为6～8。
优选的是，所述颗粒剂的悬浮率≥80％。
本发明还提供了上述技术方案所述颗粒剂的制备方法，包括以下步骤：将克里本类芽孢杆菌、助剂、填料和水混合后搅拌，进行气流粉碎，得到颗粒剂。
本发明还提供了上述技术方案所述颗粒剂或上述技术方案所述制备方法得到的颗粒剂在防治水稻纹枯病中的应用。
本发明提供了一种克里本类芽孢杆菌颗粒剂，包括以下重量份数的组分：克里本类芽孢杆菌4份；助剂13～18份；填料55～68份和水。本发明提供的克里本类芽孢杆菌颗粒剂生物活性高、抑菌效果好，且易于运输和储存。
生物保藏说明
克里本类芽孢杆菌(paenibacilluskribbensis)，于2013年08月13日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，生物保藏编号为cgmccno.7996。
附图说明
图1为本发明实施例3提供的克里本类芽孢杆菌抑菌谱。
具体实施方式
本发明提供了一种克里本类芽孢杆菌颗粒剂，包括以下重量份数的组分：
克里本类芽孢杆菌4份；
助剂13～18份；
填料55～68份；
水18～20份。
在本发明中，所述克里本类芽孢杆菌颗粒剂包括4份的克里本类芽胞杆菌。本发明所述克里本类芽孢杆菌的菌种保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，生物保藏编号为cgmccno.7996。本发明对所述克里本类芽胞杆菌的制备方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的克里本类芽胞杆菌的制备方法即可。在本发明中，所述颗粒剂中克里本类芽胞杆菌的含量为190～210iu/mg，更优选为200iu/mg。
以所述4份克里本类芽胞杆菌为基准，本发明提供的克里本类芽孢杆菌颗粒剂包括13～18份的助剂，优选为15份。在本发明中，所述助剂优选包括白砂糖和玉米淀粉，所述白砂糖和玉米淀粉的质量比优选为1：(4～7.5)，更优选为1：5。在本发明中，所述白砂糖起到粘结剂的作用，所述玉米淀粉属于崩解剂，加快入水稀释速度。本发明对所述白砂糖和玉米淀粉的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的白砂糖和淀粉的市售产品即可。
以所述4份克里本类芽胞杆菌为基准，本发明提供的克里本类芽孢杆菌颗粒剂包括55～68份的填料，优选为60份。在本发明中，所述填料优选包括滑石粉和高岭土；所述滑石粉和高岭土的质量比优选为(1～2.5)：1。在本发明中，所述滑石粉起到润滑作用，加快造粒时的出粒速度；所述高岭土属于填充料，起到稀释作用。本发明对所述滑石粉和高岭土的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的滑石粉和高岭土的常规市售产品即可。
在本发明中，所述颗粒剂的干燥减量≤6％。
在本发明中，所述颗粒剂的ph值为6～8。
在本发明中，所述颗粒剂的悬浮率≥80％。
在本发明中，所述颗粒剂的粒径为1.0～1.2mm。
本发明还提供了上述技术方案所述颗粒剂的制备方法，包括以下步骤：将克里本类芽孢杆菌、助剂、填料和水混合后搅拌，进行气流粉碎，得到颗粒剂。
在本发明中，所述搅拌的时间优选为0.8～2h，更优选为1h。
本发明对气流粉碎的装置没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的气流粉碎机即可。如qyf-60气流粉碎机。具体的，在具体气流粉碎过程中，轴密封压力优选为0.1～0.15mpa，更优选为0.12mpa；出料气封压力优选为0.15mpa；脉冲压力优选为0.4～0.6mpa，更优选为0.5mpa；进料压力优选为0.75～0.85mpa，更优选为0.8mpa；粉碎打料速度优选为200～300kg/h，更优选为240kg/h；粉碎投料量优选为800～1000kg/批，更优选为850kg/批；捏合水量控制优选为20～25％，更优选为23％；造粒温度控制优选为50～60℃，更优选为55℃。
本发明还提供了上述技术方案所述颗粒剂或上述技术方案所述制备方法得到的颗粒剂在防治水稻纹枯病中的应用。
下面结合具体实施例对本发明提供的一种克里本类芽孢杆菌颗粒剂及其制备方法做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。
实施例1
克里本类芽孢杆菌一级种子液的制备：将保藏的克里本类芽孢杆菌菌种接种于装有活化培养基的茄型瓶中，28℃培养12h进行活化培养，完成菌种活化；活化后的克里本类芽孢杆菌菌种按照1％的接种量接种于克里本类芽孢杆菌一级液体培养基中，一级液体培养基包括以下质量含量的组分：蔗糖3％、硝酸钠0.15％、磷酸氢二钾0.1％、硫酸镁0.05％、氯化钾0.05％、硫酸铁0.002％，余量为水。克里本类芽孢杆菌一级液体培养的温度为30℃，初始ph值为7.5，进入培养24h内按照15m3/h通气量进行通气培养，液体培养24h后按照20m3/h的通气量进行通气培养，光照培养30h后，停止培养，得到克里本类芽孢杆菌一级种子液。
克里本类芽孢杆菌二级种子液的制备：将得到的克里本类芽孢杆菌一级种子液以10％接种量接种于克里本类芽孢杆菌二级液体培养基中，二级液体培养基包括以下质量含量的组分：蔗糖1.5％、葡萄糖1.5％、黄豆粉1.0％、硫酸铵0.05％、磷酸氢二钾0.05％、氯化钙0.1％，余量为水。二级液体培养的温度为32℃，ph值为7.5，进入培养24h内，通气量为150m3/h，培养24h后，通气量为250m3/h，每小时搅拌2次，每次搅拌时间为15min，光照培养48h后，停止培养，得到克里本类芽孢杆菌二级种子液。
克里本类芽孢杆菌的制备：将得到的克里本类芽孢杆菌二级种子液以10％接种量接种于克里本类芽孢杆菌三级液体培养基中，三级液体培养基包括以下质量含量的组分：葡萄糖2.5％、玉米粉1％、硫酸铵0.05％、磷酸氢二钾0.05％、氯化钙0.1％，余量为水。三级液体培养的温度为30℃，ph值为7.5，进入培养24h内，通气量为2000m3/h，培养24h后，通气量为1000m3/h，每小时搅拌2次，每次搅拌时间为15min，光照培养65h后，停止培养，得到克里本类芽孢杆菌三级培养液，采用蝶式离心机在5000rpm条件下离心20min，得到上清液和浓缩液，将浓缩液经喷雾干燥塔干燥，得到克里本类芽孢杆菌。
实施例2
取实施例1得到的克里本类芽胞杆菌4kg，与10kg白砂糖、5.5kg玉米淀粉、10kg滑石粉、5kg高岭土和20kg水混合搅拌1h，进行气流粉碎，轴密封压力为0.12mpa；出料气封压力为0.15mpa；脉冲压力为0.6mpa；进料压力为0.85mpa；粉碎打料速度为240kg/h；粉碎投料量为850kg/批；捏合水量控制为20％；造粒温度控制为55℃，复配成200iu/mg克里本类芽孢杆菌颗粒剂。
实施例3
将实施例2制备得到的克里本类芽胞杆菌颗粒剂用水稀释50～1000倍，对纹枯病的抑菌活性分别与农业部登记的丙环唑对比。
1)克里本类芽孢杆菌抑菌谱
将克里本发酵原液稀释50倍对22种植物病原菌进行抑菌活性测定，实验结果如图1所示。结果表明，克里本发酵液对所有测试的22种病原菌均表现出不同程度的抑菌活性，克里本发酵液对蔬菜、水果及烟草常见病害具有一定的抑制作用，可用于防治多种农作物真菌性病害，抗菌谱较广。
2)200iu/mg克里本类芽孢杆菌颗粒剂不同稀释倍数抑菌效果
为探究克里本类芽孢杆菌颗粒剂最佳抑菌稀释倍数，对其设置稀释倍数梯度观测抑菌效果，以0.5ppm丙环唑溶液作对照，同等条件下，0.5ppm丙环唑溶液对水稻纹枯病的抑菌率为80.06％，克里本类芽孢杆菌颗粒剂稀释不同倍数的抑菌效果如表1所示。可见随着稀释倍数的增加，克里本类芽孢杆菌颗粒剂抑菌效果呈下降趋势，稀释200倍时的抑菌效果相当于0.5ppm丙环唑溶液的抑菌效果，在稀释1000倍条件下，仍对水稻纹枯病菌具有一定的抑制效果。
表1克里本类芽孢杆菌颗粒剂稀释不同倍数抑菌率
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。