本发明涉及3-取代萘并[2,3-b]异噁唑-4,9-二酮衍生物在制备抗肿瘤药物及其制备方法和用途，属于抗肿瘤药物领域。
背景技术
nad(p)h:醌氧化还原酶1(nqo1)蛋白又称醌氧化还原酶，是一种黄素酶，由nadh或nad(p)h提供电子催化还原醌类化合物，使各种醌类化合物还原为氢醌类化合物。nqo1与肿瘤发生的易感性密切相关，在多种肿瘤细胞特别是肺癌、结肠癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌等细胞中的表达远高于正常组织。由于nqo1在肿瘤细胞的高表达及其生物活化的特性,它被认为是治疗多种肿瘤的潜在分子靶标。靶向nqo1药物有望实现高选择性、特异性杀灭肿瘤细胞。文献报道一些天然醌类化合物如β-lapachone(β-拉帕醌)、丹参酮等是nqo1酶的底物，在nqo1酶作用下，产生活性氧，选择性杀死肿瘤细胞。这类醌类化合物作用机制是它们能够在nqo1酶作用下，还原成半醌和酚，后者在细胞中氧分子作用下迅速发生自氧化反应，重新转化成醌底物，形成氧化还原循环，该过程产生大量活性氧，从而选择性杀死细胞。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一类化合物3-取代萘并[2,3-b]-异噁唑-4,9-二酮衍生物及其制备方法和用途，其能够在nqo1酶介导下发生还原和自氧化过程，产生活性氧,导致肿瘤细胞死亡。
所述3-取代萘并[2,3-b]异噁唑-4,9-二酮衍生物的化学结构式如通式(i)所示：
其中：
x独立选自碳、氮；r独立选自氢、羟基、乙酸酯基、甲氧基、卤素；r1独立选自1-5个碳烷基链、1-取代碳烷基链、3,4,5-三甲氧基苯基、取代苄基、1-5个脂肪酰基、取代苯甲酰基、ɑ-羟基-芳甲基、ɑ-溴芳甲基。r2为氢、羟基、乙酰氧基、8-甲氧基、卤素。
进一步地，r1为乙基、3,4,5-三甲氧基苯基、苄基、4-甲氧基苄基、3,4-二甲氧基苄基、3,4,5-三甲氧基苄基、4-硝基苄基、4-氯苄基、4-羟基苄基、3-溴-4-甲氧基苄基、3-溴-4-羟基苄基、2-溴-3,4,5-三甲氧苄基、ɑ-溴乙基、ɑ-溴苯甲基、ɑ-羟基乙基、ɑ-羟基苯甲基、ɑ-羟基-3,4-二甲氧基苄基、乙酰基、苯甲酰基、4-甲氧基苯甲酰基、3,4-二甲氧基苯甲酰基。
进一步地，化学结构式为：
本发明进一步地提供3-取代萘并[2,3-b]异噁唑-4,9-二酮衍生物的制备方法，过程如下：1,4-萘醌、5-羟基萘醌或7-溴喹啉醌与不同的醛肟(1-2倍量，摩尔数比)在次氯酸钠(1-1.5倍量，摩尔数比)和三乙胺(1-1.5倍量，摩尔数比)的作用下发生关环反应，反应时间为1-5d，反应温度为0～50℃，反应完全，柱层析可得到c-3取代基为乙基、3,4,5-三甲氧苯基、苄基、4-甲氧基苄基、3,4-二甲氧苄基、3,4,5-三甲氧基苄基、4-硝基苄基、4-氯苄基的萘并[2,3-b]异噁唑-4,9-二酮衍生物。
进一步地，将3-(4-甲氧基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮经三溴化硼脱甲基，得到c-3位取代基为4-羟基苄基、3-溴-4甲氧基苄基、3-溴-4-羟基苄基的萘并[2,3-b]异噁唑-4,9-二酮衍生物。
进一步地，将c-10位亚甲基经nbs、bpo溴代、水解、dmp氧化或者直接用三氧化铬氧化得到c-3酰基取代化合物。
进一步地，所述的3-取代萘并[2,3-b]异噁唑-4,9-二酮衍生物在制备抗肿瘤药物上的应用，肿瘤优选为乳腺癌、结肠癌。
本发明的内容涉及3-取代萘并[2,3-b]异噁唑-4,9-二酮衍生物，其结构式为通式(i)；通式(i)化合物的制备方法。
其制备方法如下：
a.naclo,tea,dcm,rt；b.bbr3,dcm,0℃；c.nbs,bpo,ccl4,80℃；d.nahco3,1,4-二氧六环∶水＝1∶1,90℃；e.dmp,dcm,rt；f.cro3,acoh∶ac2o＝3∶1,rt；g.naclo,dcm,rt.
第一步反应：该反应为关环反应，以1.4-萘醌和5-羟基-1.4-萘醌为原料，与不同的醛肟在次氯酸钠和三乙胺的作用下，得到3-取代萘并[2,3-b]异噁唑-4,9-二酮衍生物。
第二步反应：该反应为脱甲基反应，以3-(4-甲氧基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮为原料，经三溴化硼脱甲基，得到3-(3-溴-4-甲氧基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮、3-(3-溴-4-羟基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮、3-(4-羟基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮。
第三步反应：该反应为溴代反应，在nbs和bpo的催化下，得到c-10溴代产物。
第四步反应：该反应为水解反应，将溴代产物在1,4-二氧六环∶水＝1∶1的混合溶液中回流反应，得到c-10羟基取代产物。
第五步反应：该反应为氧化产物，将水解产物在二氯甲烷中，用dmp氧化得到c-3位酰基取代化合物。
第六步反应：该反应为氧化反应，在醋酸：醋酐＝3:1的混合溶液中，用三氧化铬氧化，得到c-3酰基取代化合物。
第七步反应：该反应为关环反应，以7-溴喹啉醌为原料，与不同的醛肟在次氯酸钠的氧化下，得到喹啉醌并异噁唑化合物。
选取肿瘤细胞株，通过肿瘤活性筛选方法，测定本发明的化合物对肿瘤细胞的抑制活性。本发明的化合物比参照化合物(β-lapachone,β-拉帕醌)具有更好的抗肿瘤细胞增殖活性，其活性是其2-390倍。该类化合物在nqo1酶作用下，被还原成酚式结构，后者在细胞内氧作用下，被氧化成相应的醌，产生活性氧，从而杀死肿瘤细胞。测定化合物在nqo1酶存在下还原成酚的速率，该速率代表着化合物依赖nqo1酶的还原代谢活性和抗肿瘤活性。结果显示通式(i)化合物依赖nqo1酶的还原活化能力高于参照化合物,最高能够达到其2.5倍。
本发明公开一类靶向nqo1酶的含异恶唑醌类衍生物，作用机制新颖。其对肿瘤细胞的增殖抑制活性高，部分化合物对肿瘤细胞的增殖活性抑制ic50值几十纳摩尔。可用于靶向nqo1酶的抗肿瘤治疗。
附图说明
图1本发明通式(i)化合物的制备方法过程图；
图2为本发明化合物依赖nqo1酶的抗肿瘤作用机制图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述发明。应理解为，这些实施例仅用于说明本发明而不是限制本发明的范围。
实施例1
3-乙基萘并[2,3-d]异噁唑-4,9二酮(化合物1)的制备
219mg(3mmol)丙醛肟溶于二氯甲烷中，加入158mg(1mmol)1,4-萘醌、2ml(1.5mmol)5.5％次氯酸钠溶液、14μl(0.1mmol)三乙胺，室温反应，tlc监测，36h后停止反应，加入100ml水，二氯甲烷萃取(30ml×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩拌样，200-300目硅胶柱纯化，洗脱剂为pe/ea混合溶液体系v(pe)∶v(ea)＝80∶1，得到淡黄色固体105mg，产率为46.2％.mp219.1-220.4℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.30–8.28(m,1h),8.26–8.25(m,1h),7.89–7.83(m,2h),3.13(q,j＝7.5hz,2h),1.44(t,j＝7.5hz,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ179.54,173.35,165.26,163.46,135.08,134.30,133.41,132.30,127.49,127.27,120.35,19.38,11.82.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc13h10no3+,228.0655；found228.0655.
实施例2
3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9二酮(化合物2)的制备
参照实例1的合成方法。1,4-萘醌63mg(0.4mmol)，3,4,5-三甲氧基苯甲醛肟84mg(0.4mmol)，三乙胺5.5μl(0.04mmol)，5.5％的次氯酸钠0.545ml(0.4mmol)，得到淡黄色固体112mg，产率为77.0％.mp182.6-184.3℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.28(ddd,j＝7.5,6.0,1.5hz,2h),7.90–7.83(m,2h),7.63(s,2h),4.00(s,6h),3.96(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ178.71,173.31,166.48,160.67,153.25,140.64,135.31,134.32,133.85,131.60,127.91,127.18,121.27,119.49,106.77,77.30,77.04,76.79,60.95,56.34.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc20h16no6+,366.0972；found366.0980.
实施例3
3-苄基-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物3)的制备
参照实例1的合成方法。1,4-萘醌143mg(0.9mmol)，苯乙醛肟122mg(0.9mmol)，三乙胺12μl(0.09mmol)，5.5％的次氯酸钠1.226ml(0.9mmol)，得到淡黄色固体155mg，产率为59.3％.mp161.6-163.1℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.28–8.17(m,2h),7.87–7.78(m,2h),7.47(d,j＝7.3hz,2h),7.34(dd,j＝10.2,4.7hz,2h),7.26(t,j＝7.3hz,1h),4.44(s,2h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ179.22,173.17,165.39,161.08,135.47,135.07,134.32,133.36,132.30,129.23,128.72,127.49,127.28,127.23,120.18,
31.14.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc18h12no3+,290.0812；found290.0812.
实施例4
3-(4-甲氧基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物4)的制备
参照实例1的合成方法。1,4-萘醌95mg(0.6mmol)，4-甲氧基苯乙醛肟100mg(0.6mmol)，三乙胺8μl(0.06mmol)，5.5％的次氯酸钠溶液1ml(0.74mmol)，得到黄色固体120mg，产率为62.6％.mp152.2-154.4℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.26(d,j＝7.2hz,1h),8.22(d,j＝7.5hz,1h),7.86–7.81(m,2h),7.39(d,j＝8.4hz,2h),6.87(d,j＝8.4hz,2h),4.38(s,2h),3.79(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ179.24,173.20,165.37,161.42,158.77,135.07,134.30,133.36,132.29,130.31,127.48,127.45,127.27,120.13,114.11,55.24,30.32.hrms(esi)m/z[m+na]+calcd.forc19h13nnao4+,342.0737；found342.0739.
实施例5
3-(3,4-二甲氧基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物5)的制备
参照实例1的合成方法。1,4-萘醌75mg(0.47mmol)，3,4-二甲氧基苯乙醛肟93mg(0.47mmol)，三乙胺7μl(0.05mmol)，5.5％的次氯酸钠溶液1.35ml(1mmol)，得到红棕色固体98mg，产率为59.2％.mp175.9-176.9℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.28–8.22(m,2h),7.88–7.81(m,2h),7.05–7.02(m,2h),6.83(d,j＝7.9hz,1h),4.38(s,2h),3.90(s,3h),3.86(s,3h).hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc20h16no5+,350.1023；found350.1021.
实施例6
3-(3,4,5-三甲氧基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物6)的制备
参照实例1的合成方法。1,4-萘醌84mg(0.53mmol)，3,4,5-三甲氧基苯乙醛肟120mg(0.53mmol)，三乙胺7μl(0.05mmol)，5.5％的次氯酸钠溶液1ml(0.74mmol)，得到红棕色固体160mg，产率为79.4％.mp186.3-187.9℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.27(d,j＝7.3hz,1h),8.24(d,j＝7.3hz,1h),7.88–7.82(m,2h),6.74(s,2h),4.37(s,2h),3.88(s,6h),3.82(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ179.27,173.16,165.37,161.02,153.29,137.07,135.13,134.38,133.37,132.26,131.02,127.51,127.27,120.14,106.34,60.80,56.15,31.40.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc21h18no6+,380.1129；found380.1137.
实施例7
3-(4-硝基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物7)的制备
参照实例1的合成方法。1,4-萘醌87mg(0.55mmol)，4-硝基苯乙醛肟100mg(0.55mmol)，三乙胺8μl(0.055mmol)，5.5％的次氯酸钠溶液1.1ml(0.81mmol)，得到淡黄色固体32mg，产率为17.4％.mp180.6-183.1℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.28(d,j＝6.9hz,1h),8.21(d,j＝8.0hz,3h),7.88–7.83(m,2h),7.64(d,j＝8.3hz,2h),4.55(s,2h).hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc18h11n2o5+,335.0662；found335.0661.
实施例8
3-(4-氯苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物8)的制备
参照实例1的合成方法。1,4-萘醌94mg(0.6mmol)，4-氯苯乙醛肟101mg(0.6mmol)，三乙胺8μl(0.055mmol)，5.5％的次氯酸钠溶液1.2ml(0.88mmol)，得到淡黄色固体148mg，产率为77.0％.mp201.5-204.3℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.27(d,j＝7.2hz,1h),8.22(d,j＝7.1hz,1h),7.87–7.82(m,2h),7.40(d,j＝8.0hz,2h),7.31(d,j＝7.7hz,2h),4.41(s,2h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ179.22,173.09,165.48,160.71,135.14,134.43,133.87,133.26,133.24,132.29,130.62,128.88,127.56,127.30,120.07,30.56.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc18h11clno3+,324.0422；found324.0418.
实施例9
3-(3-溴-4-甲氧基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物9)、3-(4-羟基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物10)、3-(3-溴4-羟基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物11)的制备
120mg(0.38mmol)化合物4溶于10ml无水二氯甲烷中，加入0.56ml1m三溴化硼二氯甲烷溶液，氮气保护下0℃反应，tlc监测，48h后停止反应，加入100ml水，二氯甲烷萃取(30ml×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩拌样，200-300目硅胶柱纯化，洗脱剂为pe/ea混合溶液体系v(pe)∶v(ea)＝15∶1，得到黄色固体化合物96mg，产率为4.0％；化合物1074mg，产率为64.5％；淡黄色固体化合物1140mg，产率为27.8％。
化合物9.mp184.4-185.7℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.28–8.26(m,1h),8.24–8.22(m,1h),7.81–7.81(m,2h),7.63(d,j＝2.2hz,1h),7.39(dd,j＝8.5,2.2hz,1h),6.87(d,j＝8.5hz,1h),4.36(s,2h),3.88(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ179.23,173.13,165.46,160.87,155.13,135.12,134.40,133.93,133.30,132.31,129.38,128.89,127.55,127.33,120.07,111.97,111.79,56.25,29.94.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc19h13brno4+,398.0022,400.0002；found398.0016,400.0002.
化合物10.mp201.2-203.4℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.27–8.25(m,1h),8.23–8.21(m,1h),7.86–7.80(m,2h),7.34(d,j＝8.5hz,2h),6.79(d,j＝8.5hz,2h),4.95(brs,1h),4.36(s,2h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ179.27,173.21,165.39,161.39,154.78,135.09,134.33,133.35,132.29,130.52,127.59,127.50,127.28,120.13,115.56,30.31.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc18h12no4+,306.0761；found306.0759.
化合物11.mp201.2-203.4℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.27(d,j＝7.1hz,1h),8.23(d,j＝7.1hz,1h),7.88–7.82(m,2h),7.57(s,1h),7.34(d,j＝8.4hz,1h),6.99(d,j＝8.4hz,1h),5.47(brs,1h),4.35(s,2h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ179.24,173.11,165.47,160.84,151.53,135.13,134.41,133.29,132.53,132.30,130.16,128.97,127.55,127.33,120.04,116.20,110.28,29.94.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc18h11brno4+,383.9866,385.9846；found383.9859,385.9844.
实施例10
3-(1-溴乙基)萘并[2,3-d]异噁唑-4,9二酮的制备
85mg(0.37mmol)化合物1溶于6ml四氯化碳中，加入200mg(1.12mmol)nbs和9mg(0.037mmol)bpo，80℃回流反应7d，tlc监测，反应完全，加入100ml水，二氯甲烷萃取(30ml×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩拌样，200-300目硅胶柱纯化，洗脱剂为pe/ea混合溶液体系v(pe)∶v(ea)＝80∶1，得到淡黄色固体96mg，产率为84.1％.mp216.3-217.6℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.30–8.28(m,2h),7.91–7.85(m,2h),5.63(q,j＝7.0hz,1h),2.26(d,j＝7.0hz,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ178.52,173.02,165.78,163.10,135.32,134.56,133.29,132.08,127.58,119.11,34.16,22.66.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc13h9brno3+,305.9760,307.9740；found305.9756,307.9747.
实施例11
3-[(3,4-二甲氧基苄基)(羟基)甲基]-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物13)的制备
参照实例10的合成方法。化合物523mg(0.066mmol)，nbs18mg(0.1mmol)，bpo1.6mg(0.006mmol)，得到黄色固体22mg，产率91.7％.mp186.3-187.4℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.29–8.28(m,1h),8.25–8.23(m,1h),7.88–7.87(m,2h),7.10(s,1h),7.01(d,j＝8.3hz,1h),6.86(d,j＝8.3hz,1h),6.21(s,1h),5.09(brs,1h),3.91(s,3h),3.87(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ180.63,172.74,165.81,164.34,149.24,149.03,135.31,135.11,132.73,132.07,131.86,127.86,127.84,120.57,118.03,111.03,109.11,68.54,55.95,55.90.hrms(esi)m/z[m-oh]+calcd.forc20h14no5+,348.0866；found348.0868.
实施例12
3-(2-溴-3,4,5-三甲氧基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物14)的制备
参照实例10的合成方法。化合物615mg(0.04mmol)，nbs18mg(0.1mmol)，bpo5mg(0.02mmol)，得到淡黄色固体16mg，产率88.5％.mp142.0-142.8℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.29(d,j＝7.2hz,1h),8.26(d,j＝7.2hz,1h),7.89–7.83(m,2h),6.88(s,1h),4.58(s,2h),3.92(s,3h),3.90(s,3h),3.85(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ179.40,173.15,165.33,160.10,152.68,151.26,142.46,135.16,134.44,133.37,132.30,130.43,127.57,127.34,120.39,111.37,110.01,61.08,60.98,56.19,32.11.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc21h17brno6+,458.0234,460.0213；found458.0229,460.0214.
实施例13
3-(1-羟基乙基)萘并[2,3-d]异恶唑-4,9二酮(化合物15)的制备
74mg(0.24mmol)化合物12溶于20ml1,4-二氧六环∶水＝1∶1溶液中，加入10mg(0.12mmol)碳酸氢钠，90℃反应，tlc监测，4d后停止反应，加入100ml水，二氯甲烷萃取(30ml×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩拌样，200-300目硅胶柱纯化，洗脱剂为pe/ea混合溶液体系v(pe)∶v(ea)＝10∶1，得到淡黄色固体28mg，产率为47.5％.mp185.6-187.1℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.35–8.26(m,2h),7.94–7.87(m,2h),5.26(q,j＝6.6hz,1h),4.42(brs,1h),1.74(d,j＝6.7hz,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ180.87,172.87,165.76,165.21,135.32,135.06,132.84,132.16,127.86,127.79,120.67,63.13,21.51.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc13h10no4+,244.0604；found244.0601.
实施例14
3-乙酰基萘并[2,3-d]异噁唑-4,9二酮(化合物16)的制备
20mg(0.08mmol)化合物15溶于5ml二氯甲烷中，加入70mg(0.16mmol)dmp，室温下反应，tlc监测，2.5h后停止反应，加入100ml水，二氯甲烷萃取(30ml×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩拌样，200-300目硅胶柱纯化，洗脱剂为pe/ea混合溶液体系v(pe)∶v(ea)＝8∶1，得到淡黄色固体15mg，产率为75.8％.mp212.7-213.9℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.30(d,j＝7.5hz,2h),7.89(dt,j＝18.8,7.4hz,2h),2.84(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ189.44,176.65,172.88,166.21,158.66,135.63,134.53,133.57,131.58,128.07,127.46,119.75,29.67.hrms(esi)m/z[m+na]+calcd.forc13h7nnao4+,264.0267；found264.0264.
实施例15
3-苯甲酰基-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物17)的制备
29mg(0.1mmol)化合物3溶于6ml醋酸∶醋酐＝3∶1的混合溶液中，加入30mg(0.3mmol)三氧化铬，室温下反应9h，tlc监测，反应完全，加入100ml水，乙酸乙酯萃取(30ml×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩拌样，200-300目硅胶柱纯化，洗脱剂为pe/ea混合溶液体系v(pe)∶v(ea)＝30∶1，得到黄色固体26mg，产率为85.5％.mp163.1-164.6℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.35–8.33(m,1h),8.25–8.24(m,1h),8.11(d,j＝7.5hz,2h),7.91–7.87(m,2h),7.74(t,j＝5.7,1h),7.58(t,j＝7.8hz,2h).13cnmr(101mhz,cdcl3)δ183.91,177.07,172.79,165.25,157.85,135.51,135.23,134.93,134.64,133.27,131.97,130.44,129.02,127.81,127.68,121.27.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc18h10no4+,304.06043；found304.06177.
实施例16
3-(4-甲氧基苯乙酰基)-萘并[2,3-d]异恶噁唑-4,9-二酮(化合物18)的制备
参照实例15的合成方法。化合物438mg(0.12mmol)，三氧化铬36mg(0.36mmol)，得到黄色固体36mg，产率为90.7％.mp163.8-165.2℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.33–8.30(m,1h),8.25–8.22(m,1h),8.07(d,j＝9.0hz,2h),7.89–7.85(m,2h),7.02(d,j＝8.5hz,2h),3.93(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ182.11,177.14,172.86,165.34,165.16,158.00,135.47,134.57,133.31,133.01,131.97,128.12,127.78,127.63,121.26,114.36,55.72.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc19h12no5+,334.07100；found334.06992.
实施例17
3-(3,4-二甲氧基苯乙酰基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物19)的制备
参照实例15的合成方法。化合物560mg(0.17mmol)，三氧化铬52mg(0.51mmol)，得到黄色固体45mg，产率为72.1％.mp153.7-155.2℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.34–8.32(m,1h),8.25–8.23(m,1h),7.90–7.86(m,2h),7.76(s,1h),7.60(d,j＝8.5hz,1h),6.94(d,j＝8.5hz,1h),4.01(s,3h),4.00(s,3h).hrms(esi)m/z[m+na]+calcd.forc20h13nnao6+,386.0635；found386.0632.
实施例18
5-羟基-3-乙基萘并[2,3-d]异噁唑-4,9二酮(化合物20)、8-羟基-3-乙基萘并[2,3-d]异恶噁-4,9二酮(化合物21)的制备
292mg(4mmol)丙醛肟溶于二氯甲中，加入10.8ml(8mmol)5.5％的次氯酸钠溶液，室温下反应2h，tlc监测，反应完全，分离二氯甲烷层，加入174mg(1mmol)5-羟基-1,4-萘醌和14μl(0.1mmol)三乙胺，室温下反应，tlc监测，13h停止反应，浓缩拌样，200-300目硅胶柱纯化，洗脱剂为pe/ea混合溶液体系v(pe)∶v(ea)＝100∶1，得到黄色固体化合物2020mg，产率为10.4％；黄色固体化合物2127mg，产率为14.1％。
化合物20.mp202.7-204.3℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ12.18(s,1h),7.83(dd,j＝7.5,1.0hz,1h),7.70(t,j＝8.0hz,1h),7.38(dd,j＝8.5,1.0hz,1h),3.12(q,j＝7.5hz,2h),1.45(t,j＝7.5hz,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ185.73,172.51,165.53,163.20,162.70,136.58,132.58,126.63,120.76,120.22,115.37,19.42,11.81.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc13h10no4+,244.0604；found244.0600.
化合物21.mp210.7-212.3℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ11.78(s,1h),7.78(dd,j＝7.4,1.0hz,1h),7.73(t,j＝8.0hz,1h),7.35(dd,j＝8.4,1.0hz,1h),3.11(q,j＝7.5hz,2h),1.43(t,j＝7.5hz,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ178.55,178.14,165.01,163.57,163.38,137.81,133.61,125.38,120.86,120.36,115.17,19.36,11.77.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc13h10no4+,244.0604；found244.0604.
实施例19
5-羟基-3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9二酮(化合物22)、8-羟基-3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9二酮(化合物23)的制备
参照实例18的合成方法。3,4,5-三甲氧基苯甲醛42mg(0.2mmol)，5.5％的次氯酸钠溶液0.4ml(0.3mmol)，5-羟基-1,4-萘醌35mg(0.2mmol)，三乙胺5.5μl(0.02mmol)，得到黄色固体化合物2226mg，产率为33.9％；黄色固体化合物2321mg，产率为27.4％。
化合物22.mp186.3-187.9℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ12.35(s,1h),7.89(d,j＝7.4hz,1h),7.74(t,j＝7.9hz,1h),7.54(s,2h),7.43(d,j＝8.5hz,1h),4.01(s,6h),3.98(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ185.29,172.51,166.62,163.13,160.73,153.32,140.89,136.69,132.07,127.07,120.96,120.67,119.35,115.62,107.06,61.00,56.41.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc20h10no7+,382.0921；found382.0919.
化合物23.mp192.2-193.7℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ11.74(s,1h),7.87(d,j＝7.5hz,1h),7.77(t,j＝8.0hz,1h),7.66(s,2h),7.38(d,j＝8.5hz,1h),4.02(s,6h),3.97(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ177.88,177.80,166.30,163.21,160.85,153.29,140.75,138.05,134.02,125.19,121.11,121.05,120.09,114.77,106.78,60.99,56.37.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc20h10no7+,382.0921；found382.0919.
实施例20
5-羟基-3-苄基-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物24)、8-羟基-3-苄基-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物25)的制备
参照实例18的合成方法。苯乙醛肟67.5mg(0.5mmol)，5.5％的次氯酸钠溶液1ml(0.74mmol)，5-羟基-1,4-萘醌87mg(0.5mmol)，三乙胺7μl(0.05mmol)，得到黄色固体化合物2440mg，产率为26.2％；黄色固体化合物2557mg，产率为37.4％。
化合物24.mp169.8-171.4℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ12.12(s,1h),7.81(d,j＝7.4hz,1h),7.68(t,j＝8.0hz,1h),7.45(d,j＝7.5hz,2h),7.35(t,j＝8.0hz,3h),7.28(t,j＝7.5hz,1h),4.43(s,2h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ185.31,172.35,165.66,162.67,160.81,136.61,135.23,132.55,129.21,128.76,127.33,126.63,120.77,120.05,115.34,31.14.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc18h12no4+,306.0761；found306.0756.
化合物25.mp172.4-174.1℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ11.76(s,1h),7.76(dd,j＝7.5,1.5hz,1h),7.71(t,j＝8.0hz,1h),7.45(d,j＝7.5hz,2h),7.34(t,j＝7.5hz,3h),7.28–7.25(m,1h),4.43(s,2h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ178.24,177.97,165.15,163.40,161.20,137.82,135.33,133.54,129.22,128.74,127.28,125.41,120.69,120.41,115.18,31.11.hrms(esi)m/z[m+na]+calcd.forc18h11nnao4+,328.0580；found328.0578.
实施例21
5-羟基-3-(4-甲氧基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物26)、8-羟基-3-(4-甲氧基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物27)的制备
参照实例18的合成方法。4-甲氧基苯乙醛肟91mg(0.55mmol)，5.5％的次氯酸钠溶液1.1ml(0.81mmol)，5-羟基-1,4-萘醌95mg(0.55mmol)，三乙胺7μl(0.05mmol)，得到黄色固体化合物2653mg，产率为28.7％；黄色固体化合物2760mg，产率为32.5％。
化合物26.mp162.2-164.7℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ12.14(s,1h),7.81(d,j＝7.5hz,1h),7.68(t,j＝8.0hz,1h),7.37(dd,j＝8.5hz,3h),6.88(d,j＝8.5hz,2h),4.37(s,2h),3.80(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ185.32,172.35,165.61,162.64,161.13,158.82,136.58,132.53,130.30,127.19,126.60,120.74,119.99,115.33,114.13,55.25,30.31.hrms(esi)m/z[m+na]+calcd.forc19h13nnao5+,358.0686；found358.0688.
化合物27.mp170.2-171.9℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ11.75(s,1h),7.75(d,j＝7.0hz,1h),7.70(t,j＝8.0hz,1h),7.36(d,j＝8.5hz,2h),7.32(d,j＝8.0hz,1h),6.86(d,j＝8.5hz,2h),4.35(s,2h),3.78(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ178.25,177.97,165.11,163.36,161.53,158.78,137.81,133.54,130.31,127.30,125.38,120.63,120.39,115.16,114.11,55.24,30.28.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc19h14no5+,336.0866；found336.0870.
实施例22
5-羟基-3-(3,4-二甲氧基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物28)、8-羟基-3-(3,4-二甲氧基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物29)的制备
参照实例18的合成方法。3,4-二甲氧基苯乙醛肟138mg(0.7mmol)，5.5％的次氯酸钠溶液1.5ml(1.1mmol)，5-羟基-1,4-萘醌123mg(0.7mmol)，三乙胺10μl(0.07mmol)，得到黄色固体化合物2855mg，产率为21.3％；黄色固体化合物2940mg，产率为15.5％。
化合物28.mp178.2-179.4℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ12.14(s,1h),7.80(d,j＝7.2hz,1h),7.67(t,j＝8.0hz,1h),7.35(d,j＝8.4hz,1h),7.01–6.99(m,2h),6.82(d,j＝8.0hz,1h),4.35(s,2h),3.90(s,3h),3.86(s,3h).13cnmr(101mhz,cdcl3)δ185.39,172.35,165.63,162.67,161.05,149.01,148.26,136.64,132.52,127.57,126.65,121.46,120.80,120.00,115.34,112.31,111.20,55.91,55.87,30.75.hrms(esi)m/z[m+na]+calcd.forc20h15nnao6+,388.0792；found388.0789.
化合物29.mp182.2-183.4℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ11.75(s,1h),7.76(d,j＝7.2hz,1h),7.71(t,j＝8.0hz,1h),7.33(d,j＝8.4hz,1h),7.02–7.00(m,2h),6.82(d,j＝8.0hz,1h),4.35(s,2h),3.90(s,3h),3.85(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ178.29,177.97,165.13,163.39,161.44,148.99,148.21,137.84,133.56,127.71,125.42,121.44,120.65,120.40,115.16,112.33,111.19,55.90,55.86,30.73.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc20h16no6+,366.0972；found366.0969.
实施例23
5-羟基-3-(3,4,5-三甲氧基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物30)、8-羟基-3-(3,4,5-二甲氧基苄基)-萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物31)的制备
参照实例18的合成方法。3,4,5-三甲氧基苯乙醛肟67.5mg(0.3mmol)，5.5％的次氯酸钠溶液0.675ml(0.5mmol)，5-羟基-1,4-萘醌52mg(0.3mmol)，三乙胺4μl(0.03mmol)，得到黄色固体化合物3034mg，产率为28.7％；黄色固体化合物3135mg，产率为29.5％。
化合物30.mp137.3-139.1℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ12.15(s,1h),7.81(d,j＝7.5hz,1h),7.68(t,j＝7.8hz,1h),7.36(d,j＝8.5hz,1h),6.70(s,2h),4.35(s,2h),3.88(s,6h),3.82(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ185.46,172.31,165.65,162.73,160.76,153.33,137.19,136.71,132.53,130.73,126.68,120.85,120.01,115.35,106.36,60.81,56.17,31.41.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc21h18no7+,396.1078；found396.1075.
化合物31.mp133.9-135.6℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ11.76(s,1h),7.78(d,j＝6.5hz,1h),7.73(t,j＝8.0hz,1h),7.35(d,j＝8.5hz,1h),6.72(s,2h),4.35(s,2h),3.88(s,6h),3.82(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ178.30,177.94,165.14,163.43,161.14,153.33,137.84,137.19,133.59,130.86,125.44,120.67,120.39,115.18,106.41,60.79,56.16,31.36.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc21h18no7+,396.1078；found396.1075.
实施例24
3-苯基-5-乙酸酯基萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物32)的制备
50mg(0.164mmol)化合物24溶于2ml二氯甲烷中，加入1.4ml(15.3mmol)乙酸酐、0.785ml(9.77mmol)吡啶和2mg(0.0164mmol)dmap，室温下反应10min，tlc监测，反应完全，加入50ml水，二氯甲烷萃取(30ml×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩拌样，200-300目硅胶柱纯化，洗脱剂为pe/ea混合溶液体系v(pe)∶v(ea)＝20∶1，得到黄色固体17mg，产率为29.9％.mp159.4-161.0℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.24–8.21(m,1h),7.82(t,j＝7.9hz,1h),7.48–7.45(m,1h),7.43(d,j＝7.5hz,2h),7.34(t,j＝7.5hz,2h),7.27(t,j＝8.0hz,1h),4.42(s,2h),2.51(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ178.18,172.35,169.36,164.11,161.34,150.63,135.40,135.18,134.24,131.49,129.25,128.69,127.24,126.07,124.47,120.75,31.06,21.13.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc20h14no5+,348.0866；found348.0868.
实施例25
3-苯基-8-乙酸酯基萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物33)的制备
参照实例24的合成方法。化合物2550mg(0.164mmol)，乙酸酐1.4ml(15.3mmol)，吡啶0.785ml(9.77mmol)，dmap2mg(0.0164mmol)，得到黄色固体20mg，产率为35.2％.mp167.0-169.8℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.18(d,j＝7.8hz,1h),7.84(t,j＝7.9hz,1h),7.44(d,j＝7.8hz,3h),7.34(t,j＝7.6hz,2h),7.26(t,j＝7.4hz,1h),4.42(s,2h),2.49(s,3h).hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc20h14no5+,348.0866；found348.0860.
实施例26
3-苯基-5,7-二溴-8-羟基萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物34)的制备
30mg(0.1mmol)化合物25溶于12mlch3cn∶h2o＝6∶1混合溶液中，加入675mg(1.1mmol)过硫酸氢钾和30mg(0.25mmol)溴化钾，45℃反应2d，tlc监测，反应完全，抽滤除去过硫酸氢钾和溴化钾，滤液加入50ml水，二氯甲烷萃取(30ml×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩拌样，200-300目硅胶柱纯化，洗脱剂为pe/ea混合溶液体系v(pe)∶v(ea)＝20∶1，得到黄色固体29mg，产率为63.8％.mp180.1-181.3℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ13.19(s,1h),8.27(s,1h),7.46(d,j＝7.4hz,2h),7.35(t,j＝7.4hz,2h),7.28(t,j＝7.3hz,1h),4.45(s,2h).hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc18h10br2no4+,463.8950；found463.8951.
实施例27
3-苯基-8-甲氧基萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物35)的制备
46mg(0.15mmol)化合物25溶于6ml三氯化碳中，加入107mg(0.75mmol)碘甲烷和140mg(0.60mmol)氧化银，70℃反应25h，tlc监测，反应完全，过滤除去氧化银，滤液加入50ml水，二氯甲烷萃取(30ml×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩拌样，200-300目硅胶柱纯化，洗脱剂为pe/ea混合溶液体系v(pe)∶v(ea)＝3∶1，得到黄色固体35mg，产率为72.7％.mp176.3-178.4℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.85(d,j＝7.5hz,1h),7.75(t,j＝8.0hz,1h),7.46(d,j＝7.5hz,2h),7.37(d,j＝8.5hz,1h),7.33(t,j＝7.5hz,2h),7.26(t,j＝7.3hz,1h),4.40(s,2h),4.06(s,3h).hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc19h14no4+,320.0917；found320.0921.
实施例28
3-苯甲酰基-8-甲氧基萘并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物36)的制备
20mg(0.06mmol)化合物35溶于6ml醋酸∶醋酐＝3∶1的混合溶液中，加入30mg(0.3mmol)三氧化铬，室温下反应，tlc监测，4d后停止反应，加入100ml水，乙酸乙酯萃取(30ml×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩拌样，200-300目硅胶柱纯化，洗脱剂为pe/ea混合溶液体系v(pe)∶v(ea)＝30∶1，得到黄色固体12mg，产率为57.5％.165.2-167.8℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.11(dd,j＝8.3,1.5hz,2h),7.89(dd,j＝7.5,1.0hz,1h),7.81(t,j＝8.0hz,1h),7.73(t,j＝7.5hz,1h),7.57(t,j＝7.8hz,2h),7.43(d,j＝8.0hz,1h),4.11(s,3h).hrms(esi)m/z[m+na]+calcd.forc19h11nnao5+,356.0529；found356.0527.
实施例29
3-乙基喹啉并[2,3-d]异噁唑-4,9二酮(化合物37)的制备
146mg(2mmol)丙醛肟溶于二氯甲烷中，加入5.4ml(4mmol)5.5％次氯酸钠溶液，室温下反应2h，tlc监测，反应完全，分离二氯甲烷层，加入99mg(0.4mmol)7-溴喹啉醌，室温下反应，tlc监测，5d后停止反应，反应液浓缩拌样，200-300目硅胶柱纯化，洗脱剂为pe/ea混合溶液体系v(pe)∶v(ea)＝5∶1，得到淡黄色固体10mg，产率为13.2％.mp205.9-207.1℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.14(dd,j＝4.6,1.7hz,1h),8.60(dd,j＝7.9,1.7hz,1h),7.81(dd,j＝7.9,4.6hz,1h),3.15(q,j＝7.5hz,2h),1.46(t,j＝7.5hz,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ178.09,171.25,165.32,163.38,154.91,148.19,135.35,130.50,128.26,120.29,19.43,11.74.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc12h9n2o3+,229.0608；found229.0605.
实施例30
3-(3,4,5-三甲氧基苯基)-喹啉并[2,3-d]异噁唑-4,9二酮(化合物38)的制备
参照实例29的合成方法。3,4,5-三甲氧基苯甲醛63mg(0.3mmol)，5.5％的次氯酸钠0.4ml(0.3mmol)，7-溴喹啉醌70mg(0.3mmol)，得到淡黄色固体24mg，产率为22.0％.mp202.3-203.7℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.17(dd,j＝4.5,1.5hz,1h),8.67(dd,j＝8.0,1.5hz,1h),7.84(dd,j＝8.0,4.5hz,1h),7.64(s,2h),4.03(s,6h),3.98(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ177.43,171.38,166.61,160.72,155.05,153.37,147.54,140.95,135.98,131.05,128.49,120.91,119.43,106.81,61.00,56.39.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc19h15n2o6+,367.0925；found367.0930.
实施例31
3-苄基-喹啉并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物39)的制备
参照实例29的合成方法。苯乙醛肟67.5mg(0.5mmol)，5.5％的次氯酸钠1.35ml(1mmol)，7-溴喹啉醌119mg(0.5mmol)，得到淡黄色固体42mg，产率为28.7％.mp186.3-187.6℃.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ9.11(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),8.56(dd,j＝7.6,1.6hz,1h),7.78(dd,j＝8.0,4.8hz,1h),7.45(d,j＝7.6hz,2h),7.36–7.32(m,2h),7.28–7.25(m,1h),4.45(s,2h).13cnmr(101mhz,cdcl3)δ177.75,171.09,165.43,161.03,154.91,148.14,135.36,135.10,130.45,129.21,128.78,128.25,127.37,120.11,31.19.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc17h11n2o3+,291.07642；found291.07510.
实施例32
3-(4-甲氧基苄基)-喹啉并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物40)的制备
参照实例29的合成方法。4-甲氧基苯乙醛肟66mg(0.4mmol)，7-溴喹啉醌94mg(0.4mmol)，5.5％的次氯酸钠1ml(0.74mmol)，得到淡黄色固体30mg，产率为23.4％.mp189.0-190.1℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.12(d,j＝3.5hz,1h),8.56(d,j＝7.5hz,1h),7.78(dd,j＝7.5,4.5hz,1h),7.38(d,j＝9.0hz,2h),6.88(d,j＝8.5hz,2h),4.39(s,2h),3.79(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ177.75,171.11,165.37,161.34,158.81,154.87,148.10,135.34,130.45,130.30,128.26,127.06,120.04,114.13,55.23,30.34.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc18h13n2o4+,321.0870；found321.0875.
实施例33
3-(3,4-二甲氧基苄基)-喹啉并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物41)的制备
参照实例29的合成方法。3,4,5-三甲氧基苯乙醛肟82mg(0.42mmol)，7-溴喹啉醌100mg(0.42mmol)，5.5％的次氯酸钠0.85ml(0.63mmol)，得到淡黄色固体40mg，产率为27.0％.mp192.7-194.3℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.12(d,j＝4.0hz,1h),8.57(d,j＝8.0hz,1h),7.79(dd,j＝8.0,4.5hz,1h),7.02(d,j＝8.5hz,1h),7.00(s,1h),6.82(d,j＝8.5hz,1h),4.38(s,2h),3.90(s,3h),3.85(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ177.77,171.10,165.37,161.23,154.87,148.98,148.24,148.08,135.31,130.46,128.27,127.46,121.45,120.05,112.35,111.21,55.89,55.84,30.77.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc19h15n2o5+,351.0975；found351.0975.
实施例34
3-(3,4,5-三甲氧基苄基)-喹啉并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物42)的制备
参照化合物c1的合成方法。3,4,5-三甲氧基苯乙醛肟90mg(0.4mmol)，7-溴喹啉醌94mg(0.4mmol)，5.5％的次氯酸钠1ml(0.74mmol)，得到淡黄色固体42mg，产率为27.6％.mp197.1-198.3℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.13(dd,j＝4.6,1.5hz,1h),8.58(dd,j＝7.9,1.5hz,1h),7.80(dd,j＝7.9,4.6hz,1h),6.72(s,2h),4.37(s,2h),3.88(s,6h),3.82(s,3h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ177.79,171.07,165.36,160.93,154.90,153.29,148.07,137.11,135.34,130.62,130.50,128.29,120.07,106.32,60.77,56.14,31.43.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc20h17n2o6+,381.10811；found381.10663.
实施例35
3-[溴(苯基)甲基]-喹啉并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮的制备
102mg(0.35mmol)化合物39溶于30ml四氯化碳中，加入157mg(0.88mmol)nbs和43mg(0.18mmol)bpo，80℃反应35h，tlc监测，反应完全，加入100ml水，二氯甲烷萃取(30ml×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩拌样，200-300目硅胶柱纯化，洗脱剂为pe/ea混合溶液体系v(pe)∶v(ea)＝5∶1，得到淡黄色固体92mg，产率为71.1％.mp201.9-203.2℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.15(d,j＝4.5hz,1h),8.58(d,j＝8.0hz,1h),7.81(dd,j＝7.5,4.5hz,1h),7.71(d,j＝8.0hz,2h),7.43(t,j＝7.5hz,2h),7.38(t,j＝7.3hz,1h),6.65(s,1h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ177.20,170.84,165.68,161.71,155.14,147.97,136.17,135.51,130.35,129.46,128.94,128.89,128.43,118.64,39.55.
实施例36
3-[羟基(苯基)甲基]-喹啉并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物44)的制备
32mg(0.087mmol)化合物43溶于10ml1,4-二氧六环∶水＝1∶1的混合溶液中，90℃反应20h，tlc监测，反应完全，加入100ml水，二氯甲烷萃取(30ml×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩拌样，200-300目硅胶柱纯化，洗脱剂为pe/ea混合溶液体系v(pe)∶v(ea)＝5∶1，得到淡黄色固体20mg，产率为75.2％.mp190.9-192.6℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.16(d,j＝4.5hz,1h),8.57(d,j＝8.0hz,1h),7.81(dd,j＝8.0,4.5hz,1h),7.52(d,j＝7.5hz,2h),7.41(t,j＝7.5hz,2h),7.34(t,j＝7.5hz,1h),6.30(s,1h),4.82(brs,1h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ179.11,170.62,165.79,164.15,155.47,147.95,138.94,135.72,130.01,128.81,128.53,128.37,125.81,120.37,68.71.hrms(esi)m/z[m+h]+calcd.forc17h11n2o4+,307.0713；found307.0712.
实施例37
3-苯甲酰基-喹啉并[2,3-d]异噁唑-4,9-二酮(化合物45)的制备
15mg(0.049mmol)化合物44溶于5ml二氯甲烷中，加入42mg(0.098mmol)dmp，室温反应2.5h，tlc监测，反应完全，加入30ml水，二氯甲烷萃取(30ml×3)，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩拌样，200-300目硅胶柱纯化，洗脱剂为pe/ea混合溶液体系v(pe)∶v(ea)＝1∶1，得到淡黄色固体12mg，产率为80.5％.mp196.3-197.2℃.1hnmr(500mhz,cdcl3)δ9.18(dd,j＝4.5,1.5hz,1h),8.60(dd,j＝8.0,1.5hz,1h),8.13(dd,j＝8.5,1.0hz,2h),7.83(dd,j＝7.8,4.8hz,1h),7.75(t,j＝7.5hz,1h),7.60(t,j＝7.8hz,2h).13cnmr(126mhz,cdcl3)δ183.42,175.67,170.70,165.29,157.67,155.23,147.79,135.81,135.40,134.75,130.51,129.08,128.60,121.14。
实施例38:化合物活性
化合物被nqo1酶还原代谢速率测定原理：nadph在nqo1酶(ec1.6.5.2)和化合物的作用下，nadph可被氧化成nadp+，该过程发生时，340nm波长下的吸光值发生变化。根据吸光值的变化可计算出nadph被氧化成nadp+的速率。该速率表示化合物被nqo1酶活化的强度。
将化合物和酶在37度孵育，然后加入nadph，然后开始反应，每10秒钟记录一次相应的340nm吸光值，测定5分钟内340nm吸光值的变化。还原速率单位为μmolnadph/min/μmolnqo1。化合物被nqo1酶还原代谢速率见表1。结果显示通式(i)化合物具有更高的依赖于nqo1酶还原代谢速率。
化合物抗肿瘤活性测试
实验方法
1).收集对数期乳腺癌(t-47d、mda-mb-231)、结肠癌(ht-29、sw480)细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100μl，铺板使待测细胞调密度至3000个每孔，(边缘孔用无菌pbs填充)；2).于5％二氧化碳，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底(96孔平底板)，12h后加入浓度梯度的药物，6个浓度梯度，每孔100μl，设3个复孔；3).于5％二氧化碳，37℃孵育48h，倒置显微镜下观察细胞生长情况；4).每孔加入20μlmtt溶液(5mg/ml，即0.5％mtt)，继续培养4h；5).终止培养，小心吸去孔内培养液；6).每孔加入100μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪570nm处测量各孔的吸光值(od值)；7).同时设置调零孔(培养基、mtt、二甲基亚砜)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、mtt、二甲基亚砜)；8).将各复孔od值取平均值，计算细胞成活率和抑制率，计算公式如下：
成活率＝药物组od值取平均值/对照组od值取平均值×100％
抑制率＝100％－成活率
根据每个化合物的测试浓度及其对应的抑制率，计算出该化合物的ic50值。
测试结果
化合物对t-47d、mda-mb-231、ht-29、sw480抑制活性如表1所示，结果显示通式(i)化合物具有很强的抗肿瘤活性。
表1化合物的活性