一种短小芽孢杆菌培养基的制作方法

本发明涉及一种微生物培养基，具体涉及一种短小芽孢杆菌培养基。

背景技术：
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短小芽孢杆菌(bacilluspumilus)为芽孢杆菌目、芽孢杆菌科、短小芽孢杆菌属，菌体细杆状，一般为0.6～0.7μm×2.0～3.0μm，革兰氏阳性。是一种饲用微生物菌种，适用于猪、禽类、反刍动物，也适用于鱼、虾等水产动物。可防治小麦根腐病、草莓灰霉病，具有开发为农用菌剂的潜力。

目前，对于芽孢杆菌的工业化液体深层发酵工艺，普遍存在着发酵水平偏低，芽孢形成不一致，产品质量不稳定等缺陷。一般多采取调整发酵过程中的温度、压力、通气搅拌等工艺条件来提高有效活菌数量，或对菌种的芽胞采用高温处理，使之在工业发酵过程中能同步形成芽孢，从而提高芽孢形成的数量和比例，来缩短发酵时间，但这些方法实际操作起来甚为麻烦，而且增加了生产成本。现有技术中已有芽孢杆菌培养基，如发明专利cn102391964b公开的一种芽孢杆菌培养基，其组分含有玉米浆、葡萄糖、磷酸氢二钾、硫酸铵、硫酸镁、酵母膏、蛋白胨、碳酸钙、红糖、豆芽汁、水；该培养基可促使短小芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌快速进入对数生长期，发酵液菌数平均可提高20％以上，芽孢比例大于90％；可使发酵周期缩短4-6小时，从而大大提高产品质量，降低生产成本。鉴于此，针对于短小芽孢杆菌的特征，提供一种专门用于培养短小芽孢杆菌的培养基。

技术实现要素：
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本发明的目的旨在提供一种适合短小芽孢杆菌快速生长的培养基，提高菌落形成的数量和比例，缩短发酵时间。

本发明采取以下技术方案：

一种短小芽孢杆菌培养基，以重量百分比计其各组分为：麦芽糖4.0～5.0％，大豆蛋白胨3.0～4.0％，磷酸氢二钾0.01～0.03％，其余为水。

本发明的有益效果是该培养基可促使短小芽孢杆菌生物量增加，较现有技术的培养基，菌落形成的数量和比例以及发酵时间整体显著增加85％以上，从而更大幅度地提高了产品质量，降低了生产成本。

附图说明：

图1是本发明具体实施方式中初始培养基与优化培养基效果比较图。

具体实施方式：

下面结合具体实施方式对本发明的技术方案进行进一步地说明。

实施例1

(1)用短小芽孢杆菌发酵。用不同碳源培养基发酵如下：

碳源分别为葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、山梨醇、d-聚糖、d-木糖和可溶性蛋白，重量百分比为1.5％；其余氮源固定均为牛肉膏0.5％，胰蛋白胨1.5％；无机盐均为nacl0.5％；水96％。

采用常规的发酵工艺在250ml的恒温摇床中发酵，用紫外分光光度法测定od275值，麦芽糖培养基较其他培养基od275值明显增加，最高可增加112.03％。

(2)用短小芽孢杆菌发酵。用不同氮源培养基发酵如下：

氮源分别为酵母浸粉、胰蛋白胨、大豆蛋白胨、牛肉膏，重量百分比为1.5％；碳源固定均为葡萄糖1.5％；无机盐均为nacl0.5％；水96.5％。

采用常规的发酵工艺在250ml的恒温摇床中发酵，用紫外分光光度法测定od275值，大豆蛋白胨培养基较其他培养基od275值明显增加，最高可增加145.54％。

(3)用短小芽孢杆菌发酵。用不同无机盐培养基发酵如下：

无机盐分别为na2hpo4、kcl、k2hpo4、mgso4·7h20、kh2po4、nacl，重量百分比为0.5％，碳源固定均为葡萄糖1.5％；氮源固定均为胰蛋白胨1.5％；水96.5％。

采用常规的发酵工艺在250ml的恒温摇床中发酵，用紫外分光光度法测定od275值，kh2po4培养基较其他培养基od275值明显增加，最高可增加63.03％。

实施例2

(1)用短小芽孢杆菌发酵。用不同重量百分比的麦芽糖做如下培养基：

麦芽糖重量百分比分别为：0.5％，1.0％，1.5％，2.0％，2.5％，3.0％，3.5％，4.0％，4.5％，5.0％；氮源固定均为胰蛋白胨5.0％；无机盐均为nacl1.67％。

采用常规的发酵工艺在250ml的恒温摇床中发酵，用紫外分光光度法测定od275值，4.5％麦芽糖培养基较其他培养基od275值明显增加，最高可增加83.09％。

(2)用短小芽孢杆菌发酵。用不同重量百分比的大豆蛋白胨做如下培养基：

大豆蛋白胨重量百分比分别为：0.5％，1.0％，1.5％，2.0％，2.5％，3.0％，3.5％，4.0％，4.5％，5.0％；碳源固定均为葡萄糖5.0％；无机盐均为nacl1.67％，其他为水。

采用常规的发酵工艺在250ml的恒温摇床中发酵，用紫外分光光度法测定od275值，3.5％大豆蛋白胨培养基较其他培养基od值明显增加，最高可增加757.63％。

(3)用短小芽孢杆菌发酵。用不同重量百分比的kh2po4做如下培养基：

kh2po4重量百分比分别为：0.01％，0.02％，0.03％，0.04％，0.05％，0.06％，0.07％，0.08％；碳源固定均为葡萄糖5.0％；氮源固定均为胰蛋白胨5.0％。采用常规的发酵工艺在250ml的恒温摇床中发酵，用紫外分光光度法测定od值，0.02％kh2po4培养基较其他培养基od275值明显增加，最高可增加121.1％。

实施例3

用短小芽孢杆菌发酵。在单因素试验的基础上，选择麦芽糖用量(a)、大豆蛋白胨用量(b)、无机盐kh2po4用量(c)为考察因素，以od275值为评价指标，选择l9(3³)正交设计试验优化短小芽孢杆菌培养基成分。

结果表明：三个因素对od275值的影响大小依次为c无机盐kh2po4用量>a麦芽糖用量>b大豆蛋白胨用量，三个因素a、b、c对短小芽孢杆菌的发酵均有显著影响。取各因素较高水平的组合，得短小芽孢杆菌发酵培养基组分为a2b3c1。a2b3c1组合培养基较其他组合培养基od275值明显增加，最高可增加166.6％。

实施例4

用短小芽孢杆菌发酵。进行优化前后对比试验，结果可参见图1：初始培养基与优化培养基效果比较。短小芽孢杆菌分别在优化后的培养基(a2b3c1)与优化前的培养基即基础培养基(葡萄糖1.5％，牛肉膏0.5％，胰蛋白胨1.5％，无机盐nacl0.5％，水96％)采用常规的发酵工艺在250ml的恒温摇床中发酵，用紫外分光光度法测定od275值，优化后的培养基较优化前od275值显著增加86.51％。

技术特征：

技术总结
本发明公开了一种短小芽孢杆菌培养基，其以重量百分比计各组分为：麦芽糖4.0～5.0％，大豆蛋白胨3.0～4.0％，磷酸氢二钾0.01～0.03％，其余为水。该培养基可促使短小芽孢杆菌生物量增加，较现有技术的培养基，菌落形成的数量和比例以及发酵时间整体显著增加85％以上，从而更大幅度地提高了产品质量，降低了生产成本。

技术研发人员：张新慧;张晓佳;张文晋;王建寰;余建强;李明;付雪艳;高晓娟;赵云生;吴秀丽
受保护的技术使用者：宁夏医科大学
技术研发日：2018.09.18
技术公布日：2018.12.11