专利名称:生产4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚和(或)美多心安的方法
本发明是关于制备立体有择型美多心安或其药物上可接受的盐(例如酸加成盐)，和(或)立体有择型4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚的方法，其中包括使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚经受某种微生物作用，这种微生物能够使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙醚立体有择地环氧化，生成至少有80%(重量)S构型的4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚，至少部分地分离4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚和(或)使4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚与异丙胺反应，以及至少部分地分离美多心安和(或)将美多心安转变成其药物上可接受的盐。
众所周知，许多生理活性化合物以立体异构体的混合物形式存在。在绝大多数情况下，这些混合物均是原样在农业和药物中使用的，其理由主要是分离混合物时的花费仍然大于活性增加所带来的潜在好处。所需的生理活性通常取决于一种立体异构体，所以混合物的效力最多也只不过被减小到一半。然而，近代药理学家们看来日益清楚地认识到投药混合物的其它一些问题，在所投药的混合物中一种或多种立体异构体被视为杂质，它仍可能没有所需的疗效，但是却很可能有其它所不希望有的生理作用，例如具有毒性。现在援引几个例子，以说明生理活性与单个立体异构体之间的关系。
在药物领域中，绝大部分β肾上腺能阻滞剂是以混合物形式销售的，虽然其活性只存在于一种立体异构体。例如，被称作贝妥醇(Labetalol)的药物，既具有α肾上腺能阻滞作用又具有β渗肾上腺能阻滞作用，这些作用已证明是由四对异构体的混合物中两对个别的异构体产生的。N.Toda等人在《J.Pharmacol.Exp.Ther.》(207，(1978)，311页)中报告说，在使家兔心肌和气管肌对异丙肾上腺素(一种β肾上腺能受体兴奋剂)应答的减弱作用方面，(-)-美多心安的效力是(|)-美多心安的270至380倍。
生产单一立体异构体β-阻滞剂的现行方法，包括从一些立体异构体的活性前体开始进行一系列化学离析或者冗长的化学合成步骤，例如在美国专利No4408063和《J.Org.Chem.》(41，(1976)3121页)中，由L.M.Weinstok等人对之作了说明。因此，所描述的这些类似制备美多心安S对映体(旋光性立体异构物)的方法，在工业中采用时并不经济。因此，本发明的目的在于提供一种制备这些立体异构体并且可以在经济上引人入胜的方式以工业规模实施的有效方法。
J.Trampes等人证明(第三届欧洲生物技术会议，慕尼黑，1984年9月10-14日)，在气-固相生物反应器或液-液相生物反应器中，一些微生物具有立体有择地使短链烯烃类(C1-C4)转化为相应环氧烷烃类的能力。在美国专利4106986中公开了微生物法制备环氧烷烃的另一实例，其中记载了将直链1-链烯烃类(C1-C20)转化为1，2-环氧烷烃类。在欧洲专利申请0099609中记载有将丙烯和1-辛烯转化为相应的环氧烷烃类的一些实例。但是，取代的链烯烃类的转化，例如4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚的转化，无论如何也不能由这些已知方法(只适于直链链烯烃或者有时适于支链烯烃)来完成。
由于广泛研究和实验的结果，现在出乎意料地找到了一种改进的合成方法，此方法以4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚作原料，使用对于4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚环氧化生成4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚(至少有80%重量的S构型)呈活性的细菌，制备具体的美多心安S对映体和4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚S对映体，然后至少部分地分离4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚以及(或者)使所说的4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚与异丙胺反应，生产所说的美多心安。
更具体地说，本发明是关于制备立体有择型美多心安或者其药物上可接受盐(例如酸加成盐)和(或者)立体有择型4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚的方法，所说的方法包括使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚经受某种微生物的作用，所说的微生物能够使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚立体有择地环氧化，生成至少有80%(重量)S构型4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚，至少部分地分离4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚以及(或者)使4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚与异丙胺反应并且至少部分地分离美多心安和(或者)将美多心安转化为其药物上可接受的盐。
本方法最好通过选择某种适当的微生物按照这样的方式实施，使得所形成的美多心安至少有90%(重量)呈S构型。
“适当的微生物”这个术语是指例如属于红球菌属、分支杆菌属、诺卡氏菌属和假单胞菌属之类的细菌。这些微生物任意用聚合物凝胶固定。用于4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚环氧化的微生物包括下列培养物。
珊瑚红诺卡氏菌[Nocardia corallina，这种菌的一例贮存在美国标准菌种收藏所(ATCC)，贮藏号为31338]，红球菌种[Rhodococcus sp.，这种菌的一例贮存在工业细菌收藏中心(NCIB)，，贮藏号为11277)，玫瑰红分支杆菌(Mycobacterium rhodochrous，这种菌种的一例贮存在NCIB，贮存号为9703)，埃氏红球菌(Rhodococcus egui，这种菌种的一例贮存在NCIB，贮藏号为12035)，绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，这种菌种的一例贮存在NCIB，贮存号为12036)，欧氏假单胞菌(Pseudomonas oleovorans，这种菌种的一例贮藏在ATCC，贮藏号为29347)，
臭味假单胞菌(Pseudomonas putida，这种菌种的一例贮存在NCIB，贮藏号为9571)，以及绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，这种菌种的一例贮存在NCIB，贮藏号为8704)。
在实施本发明方法具体优选实施方案时，能够将4-(2-甲氧乙基)-苯烯丙基醚转化为至少有90%(重量)S构型的4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚的微生物，必须从上述微生物中加以选择并培养0.5至10天，然后必须从此培养液中收集这些细菌细胞，将其悬浮于液体培养基中，并且使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚经受这些细胞的作用。
在本发明中使用并且显示环氧化活性的微生物，必须培养大约0.5至10天，然后将这些细胞悬浮于液体培养基中，最好悬浮在最小液体营养介质中，并且使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚经受这些细胞的作用。经过上述大约0.5至10天培养之后，可以从培养介质中将这些细胞分出来，然后将其悬浮于基本培养基中。为了使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚立体有择环氧化而使用的微生物生长，可以使用一些普通培养介质，其中含可同化的碳源(assimilable carbon source)例如葡萄糖、乳酸盐和十四碳烷之类的烃类等、氨源(例如硫酸铵、硝酸铵、氯化铵等)，同时还含有机营养剂源(例如酵母抽取物、麦芽汁、胨、肉膏等)和无机营养剂源(例如磷酸盐、镁、钾、锌、铁和其它微量金属)。在此培养介质中可以加入一种诱导剂(例如二乙氧甲烷)。在这些微生物生长期间保持温度在0和45℃之间，PH在3.5和9之间。最好使微生物在20和37℃的温度范围内，PH为5和8之间生长。
任何公知的方法，只要供给的氧足以满足微生物基础代谢的要求，均可以提供这些微生物生长期间所需的需氧条件。利用供给气体氧，最好是以空气形式提供氧，可以极为方便地做到这一点。在4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚转化为4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚期间，这些微生物可能处于使用上述普通培养基时的生长阶段。这些微生物可以补充以辅助基质。
在4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚转化成4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚期间，可以使用基本培养基使这些微生物保持在基本上非生长阶段。可以使用某种普通培养介质作为基本培养基，必要时其中含有可同化的碳源(例如葡萄糖、乳酸盐、十四碳烷之类的烃类等)、氮源(例如硫酸铵、硝酸铵、氯化铵等)，同时还含有必要的有机营养剂源(例如酵母抽取物、麦芽汁、胨、肉膏等)和必要的无机营养剂源(例如膦酸盐、镁、钾、锌、铁和其它痕量金属)。例如，在隔绝可同化的碳源条件下或者在隔绝氮源的条件下，可以使这些微生物保持在非生长阶段。在此阶段，温度保持在0和45℃之间，PH值保持在3.5和9之间。优先将这些微生物保持在20和37℃之间和PH5和8之间。在此阶段所需的需氧条件，可以通过上述手续提供，只要供给的氧足以满足这些微生物基础代谢的要求而且足以使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚转化为4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚。由上面提到的微生物生产的4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚，可以用任何公知的方法加以回收和提纯。
通过与异丙胺的化学反应，可以将按照本发明生产的(-)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚、(|)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚或其混合物，分别转化为(|)-美多心安、(-)-美多心安或其混合物。在德国专利申请2453324中介绍了一个例子，其中记载了由绝对S-构型的芳基缩水甘油基醚反应，制成绝对S-构型的β肾上腺能受体阻滞剂。
含有占优势量(-)-美多心安化合物的混合物，尤其有利于在医药产品中应用。在医药产品中，可以优先使用至少含80%(重量)S-构型的那些化合物，最好使用至少含90%(重量)S-构型的那些化合物。
美多心安药物上可接受盐的一个实例，是用美多心安和L-酒石酸制成的美多心安酒石酸盐。在本说明书中将要提到，用对映体过量(S-R/S+R)的百分数表示旋光纯度。
本发明将参照实施例和附图加以进一步说明，但是这些实施例并不限制本发明范围。
附图的简要说明。
图1表明的是，在铕位移试剂存在下，(|)和(±)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚的部分质子核磁共振谱。
A(±)或(|)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚，无位移试剂B(±)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚，含Eu(hfc)3;Eu(hfc)/(±)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚＝0.10C(|)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚，含Eu(hfc)3;Eu(hfc)/(±)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚＝0.12。
图2表明的是(-)美多心安的质子核磁共振谱。
图3表明的是用(-)美多心安的C.I(CH4)测定的质谱实施例Ⅰ利用埃氏红球菌(Rhodococcus equi)NCIB 12035使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚转化为4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚在处于ASM矿物盐介质(100ml，其中含0.02%酵母抽取物)中的十四碳烷上，30℃下使埃氏红球菌(Rhodococcus equi NCIB 12035)生长。经过72小时培养之后将得到的大约一半生物量，转移到250ml三角烧瓶之中，在此三角烧瓶中含有ASM(50ml)酵母抽取物(至0.02%)、十四烷基(0.15ml)、辛烷(1ml)吐温-80(Tween-80聚环氧乙烷山梨糖醇单油酸酯，(0.05ml)和4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚(0.05ml)。30℃下将瓶内容物在轨道振荡器(orbital shaker)加以培养，将试样萃入二氯甲烷之中，然后用在Varian 3700柱气相色谱法加以分析(柱在WHP100-120上3%OVI，50cm×2mm内径，100-200℃，10℃/分，N230CC/分)。ASM含有NH4Cl(0.535克/升)、K3H2PO4(0.531克/升)、Na2HPO4(0.866克/升)、K2SO4(0.174克/升)、MgSO4·7H2O(0.037克/升)、CaCl2·2H2O(0.00735克/升)、TK3痕量元素(1.0ml/升)和FeSO4·7H2O(1.0ml0.1M溶液/升)、TK3含有ZnSO4·7H2O(0.288克/升)、MnSO4·4H2O(0.224克/升)、H3BO3(0.0618克/升)、CuSO4·5H2O(0.1248克/升)、Na2M-oO4·2H2O(0.0484克/升)、CoCl2·6H2O(0.0476克/升)、KI(0.083克/升)、1M H2SO4(1ml/升)，PH＝7.0。
经过48小时之后，出现产品(|)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚，而且直到96小时之前一直增加，此时环氧化物量大约是剩下4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚的15%。
为了积累足够量的(|)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚，用二氯甲烷(350ml)萃取10×50ml和5×500ml培养液中的培养肉汤(条件如上所述)。用Na2SO4干燥此萃取液，蒸除溶剂，在硅胶柱上用己烷-乙醚作梯度洗脱(用30%乙醚洗脱环氧化物)，以此来纯化环氧化物，制得(|)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚(353mg)其|α|D25＝|8.11°(C＝0.95，乙醇)。
在铕位移试剂Eu(hfc)3存在下，用质子核磁共振法研究了(|)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚的旋光纯度(见图1)。加入位移试剂之后，在化学合成的(±)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚中每对质子[标记作(a)和(b)]的信号包络线(图1A)向低磁场方向移动，而且每个包络线分裂成两个相等强度的信号包络线[图1B，(a)|(b)]。但是在同样条件下，在微生物法生产的(|)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚中，每对质子的信号包络线，只有一条包络线可以检测[图1C，(a)|(b)]。因此，经测定用微生物环氧化作用法生产的(|)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚的旋光纯度，在质子核磁共振实验误差范围内为100%。
实施例Ⅱ(|)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚转化为(-)-美多心安将含有(|)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚(290毫克，见实施例Ⅰ)和异丙胺(1.84ml)的无水乙醇(6.2ml)溶液，回流加热3小时，然后蒸发去除溶剂。将得到的油状物溶于二氯甲烷(10ml)中，用0.2N HCl(10ml)萃取，然后用二氯甲烷(2×10毫升)洗涤酸性萃取液。用2N NaOH(3ml)碱化酸层，产品用二氯甲烷(10ml)萃取。用硫酸钠干燥二氯甲烷萃取液，蒸发溶剂后得到粘稠的固体。产品经己烷重结晶得到(-)-美多心安(260mg)，其|α|D25＝-5.46°(C＝1.01，乙醇)，熔点为42-45℃。正如预期的那样，用化学法制备的(±)-美多心安(熔点为49-51℃)无旋光性。(-)-美多心安的质子核磁共振谱和质谱(图2-3)以及(±)-美多心安的这些谱(未给出)，与所需的结构一致，而且与美多心安酒石酸盐试样的质子核磁共振谱无法区别。
在反相高压液相色谱柱[Lichrosorb RP8(10μm)，25cm×1/4英寸外径，4.9mm内经，流动相在0.1M Na-磷酸盐缓冲液中的40%乙腈，PH3.0，2.5ml/分，紫外探测器]上分离(-)-美多心安的S-亮氨酰非对映酰胺衍生物，用这种方法测定了(-)-美多心安旋光纯度。按照J.Hermansson和C.J.Von Bahr在《J.Chrom.》(227，113页(1982)上所述的方法，通过使美多心安与叔丁氧羰基-S-亮氨酸(BOC-S-亮氨酸)的对称酐反应，然后用三氯乙酸除去叔丁氧羰基行分析，得到了两个强度相等的峰，这与外消旋物所预期的情况相同。由光纯度为95.4%。
实施例Ⅲ利用绿脓假单胞菌菌株473(Pseudomonas aeruginosa strain 473)，使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚转化为4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚，然后转化为(-)-美多心安将细胞(已经在30℃下于含有0.75%钠的乳酸盐和0.05%二乙氧甲烷的ASM矿物盐介质中生长了24小时)重新悬浮在ASM中至体积等于原培养体积的1/10，用这种方法制备绿脓假单胞菌(Pseudomonas aerugi-nosa NCIB12036)悬浮液。
在30℃下和220转/分下，将细胞悬浮液(1100ml)与4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚(3.3克)一起培养24小时之后用二氯甲烷(500ml)萃取此反应混合物，用Na2SO4干燥此萃取液，蒸发溶剂得到油状物(2.67克)。用硅胶纯化(按照实施例Ⅰ)，得到(+)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚(930mg)，其|α|D25＝8.21°(C＝0.943，乙醇)。
在铕位移试剂Eu(hfc)3存在下，用质子核磁共振测量(按照实施例Ⅰ)了旋光纯度，在质子核磁共振测量实验误差范围内，其测得值为100%。
使用(|)-4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚(694mg)(按照实施例Ⅱ的方法)制备了(-)-美多心安(579mg)，熔点为44-46℃，|α|D25＝-5.49°(C＝1.02，乙醇)。经测定其旋光纯度等于98%(按照实施例Ⅱ的方法)。此母液经重结晶，制得(-)-美多心安(113mg)，旋光纯度为96%。
实施例Ⅳ用绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa NCIB8704)使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚转化为(|)4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚，然后将其转化为(-)-美多心安在30℃下，将绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa NCIB8704)细胞悬浮液(200ml，按照实施例Ⅲ的方法制备)加4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚(2克)培养24小时，然后按照实施例Ⅲ的方法对悬浮液进行萃取和提纯，得到(|)4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚(91mg)。在铕位移试剂Eu(hfc)3存在下用质子核磁共振法测定(按照实施例Ⅰ)了此环氧化物的旋光纯度，在质子核磁共振测量误差范围内，测得的旋光纯度为100%。
使用(|)4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚(76mg)，按照实施例Ⅱ的方法制备(-)-美多心安(55mg)，其熔点为42-45℃，|α|D25＝-4.93°(C＝0.944，乙醇)，利用其S-亮氨酰非对映衍生物(与实施例Ⅱ中的相同)的高压液相色谱测定了旋光纯度，其值为98.8%。蒸发母液后产生(-)-美多心安(17mg)，其旋光纯度为95.2%。
实施例Ⅴ用臭味假单胞菌(Pseudomonas putida NCIB 9571)使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚转化为(|)4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚，然后将其转化为(-)-美多心安在30℃下，加4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚(1克)，将臭味假单胞菌(Pseudomonas putida NCIB 9571)的细胞悬浮液(200ml，按照实施例Ⅲ的制备)培养24小时，然后萃取到二氯甲烷中，纯化(按照实施例Ⅲ)，得到(|)4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚(324mg)其|α|D25＝+6.42°(C＝0.88，乙醇)。在铕位移试剂Eu(hfc)3存在下用质子核磁共振法测定(按照实施例Ⅰ)了旋光纯度，在质子核磁共振试验误差范围内，测得为100%。
用异丙胺使(|)4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚(214mg)缩合(按照实施例Ⅱ的方法)，产生(-)-美多心安(146mg)，其熔点为44-46℃，|α|D25＝-5.00°(C＝1.01，乙醇)，旋光纯度经测定(按照实施例Ⅱ的方法)等于98%。蒸发母液，产生旋光纯度为97.5%的(-)-美多心安(9mg)。
实施例Ⅵ用欧氏假单胞菌(Pseudomonas oleovorans AT CC 29347)使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚转化为(|)4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚，然后将其转化为(-)-美多心安在30℃下，将欧氏假单胞菌(Pseudomonas oleovorans AT CC 29347)的(Pseudomonas putida NCIB9571)的细胞悬浮液(200ml，按照实施例Ⅲ的制备)与4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚(2克)共同培养5小时。用二氯甲烷萃取，用硅胶纯化(按照实施例Ⅰ)，产生(|)4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚(289mg)其|α|D25＝+8.02°(C＝1.16，乙醇)。在铕位移试剂Eu(hfc)3存在下，用质子核磁共振法测定了旋光纯度(按照实施例Ⅰ)，在质子核磁共振测量误差范围内，测得值为100%。
使(|)4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚(171mg)与异丙胺反应(按照实施例Ⅱ的方法)，得到(-)-美多心安(154mg)，其熔点为44-45℃，|α|D25＝-5.27°(C＝0.967，乙醇)，基于S-亮氨酰非对映衍生物的高压液相色谱，测定的旋光纯度为98.4%(按照实施例Ⅱ的方法)蒸发母液，产出旋光纯度为92.2%的(-)-美多心安。
实施例Ⅶ由4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚向(|)4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚的微生物转化法使含有吐温-80(0.05ml)、十四碳烷(0.05ml)和4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚(0.05ml的矿物盐培养基(50ml)接种以珊瑚红诺卡氏菌(No-cardia corallina ATCC31338)、红球菌种(Rhodococcus SP NCIB11277)或玫瑰红分支杆菌(Mycobacterium rhodochrous NCIB9703)(在0.5%的十四碳烷上预生长了72小时)，然后在30℃下培养。在第24和96小时取一些试样，用二氯甲烷萃取，用气相色谱法加以分析。
在每种情况下检测了相当于4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚的每个峰，其转化率如下24小时后，玫瑰红与支杆菌(Mycobacterium rhodochrous)2%;96小时后红球菌种(Rhodococcus SP.)1%;96小时后珊瑚红诺卡氏菌(Nocordia corallina)5%用二氯甲烷萃取使用珊瑚红诺卡氏菌(Nocardia corallina 500ml，培养液，条件同上)扩大实验时得到的内容物，然后用硅胶纯化并进行质子核磁共振分析，此时得到了另一种构型的结构。由4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚的质子核磁共振铕位移谱证明旋光纯度为100%，并且与用埃氏红球菌时(Rhodococcus equi)制得(+)4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚的铕质子核磁共振谱相同。
实施例Ⅷ用欧氏假单胞菌(Pseudomonas oleovorans ATCC 29347)转化4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚为4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚欧氏假单胞菌(Pseudomonas oleovorans ATCC 29347)悬浮液，是将细胞(已经在30℃下培养到静止期(stationary phase)，培养基为含0.75%丙三醇和0.05%二乙氧甲烷，PH为7的PSX矿物盐培养)重新悬浮于PH7.5的PSX中，使之体积等于原培养体积1%的方法制备的。
在导轨式摇床上，于37℃下加4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚(50微升)和葡萄糖(50毫克)培养细胞悬浮液(10毫升，干重12.6克/升，置于250毫升三角瓶中)。萃入二氯甲烷中之后，用气相色谱法监测(条件如上述例中所述)生成的4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚。6小时之后，此培养混合物中4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚的量为7.30克/升。
权利要求
1.一种制备立体有择型美多心安或其药物上可接受的盐(如酸加成盐)，和(或者)立体有择型4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚的方法，其中包括--使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚经受某种微生物作用，所说的微生物能够使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚立体有择地环氧化，生成至少含80%(重量)S构型的4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚，--至少部分地分离4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚，和(或者)--使4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚与异丙胺反应并且--至少部分地分离美多心安和(或者)将美多心安转化为其药物上可接受的盐。
2.按照权利要求
1所述的方法，其中所说的微生物能够将4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚转化为至少含90%(重量)S构型的4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚。
3.按照权利要求
1-2所述的方法，其中所说的微生物是属于红球菌属(Rhodococcus)、分支杆菌属(Mycobacterium)、诺卡氏菌属(Nocardia)或假单胞菌属(Pseudomonas)的细菌。
4.按照权利要求
3所述的方法，其中所说的细菌属于红球菌属(Rhodococcus)。
5.按照权利要求
3所述的方法，其中所说的细菌属于分支杆菌属(Mycobacterium)。
6.按照权利要求
3所述的方法，其中所说的细菌属于诺卡氏菌属(Nocardia)。
7.按照权利要求
3所述的方法，其中所说的细菌属于假单胞菌属(Pseudomonas)。
8.按照上述权利要求
中任何一项所述的方法，其中所说的细菌是被聚合物凝胶固定化的细菌。
9.按照权利要求
1所述的方法，其中使用的所说微生物是珊瑚红诺卡氏菌(Nocardia corallina)，优先用珊瑚红诺卡氏菌(Nocardia corallina ATCC 31338)。
10.按照权利要求
1所述的方法，其中使用的所说微生物是红球菌种(Rhodococcus SP.)，优先使用红球菌种(Rhodococcus SP.NCIB 11277)。
11.按照权利要求
1所述的方法，其中使用的所说微生物是玫瑰红分支杆菌(Mycobacterium rhodochrous)，优先使用玫瑰红分支杆菌(Mycobacterium rhodochrous NCIB 9703)。
12.按照权利要求
1所述的方法，其中使用的所说微生物是埃氏菌(Rhodococcus equi)，优先使用埃卡氏菌属(Rhodococcus equi，NCIB 12035)。
13.按照权利要求
1所述的方法，其中使用的所说微生物是绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，优先使用绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa NCIB 12036)。
14.按照权利要求
1所述的方法，其中使用的所说微生物是欧氏假单胞菌(Pseudomonas oleovorans)，优先使用欧氏假单胞菌(Pseudomonas oleovorans)(ATCC 29347)。
15.按照权利要求
1所述的方法，其中使用的所说微生物是臭味假单胞菌(Pseudomonas qutida)，优先使用臭味假单胞菌(Pseudomonas qutida，NCIB 9571)。
16.按照权利要求
1所述的方法，其中使用的所说微生物是绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，优先使用绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa NCIB 8704)。
17.一种生产美多心安的方法，其中包括使按照权利要求
1-2所述的方法生产的4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚与异丙胺反应。
18.按照上述权利要求
中任何一项方法所生产的美多心安和(或者)4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚。
19.一种按照权利要求
18所述的至少含80%(重量)S构型的化合物。
20.一种按照权利要求
18-19中所述的至少含90%(重量)S构型的化合物。
21.一种至少含有按照权利要求
18-20中一种化合物的药物产品。
22.一种实质上按照权利要求
1所述的方法，如上文有关实施例所述的方法。
专利摘要
其方法的特征包括使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚与微生物作用能够使4-(2-甲氧乙基)-苯基烯丙基醚环氧化，生成至少含80％(重量)S构型的4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚，至少部分地分离4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚和(或)使4-(2-甲氧乙基)-苯基缩水甘油基醚与异丙胺反应并且至少部分地分离美多心安和(或)将美多心安转化为其药物上可接受的盐。
文档编号C12R1/38GK86100965SQ86100965
公开日1986年10月1日 申请日期1986年2月13日
发明者费利浦·加里思·托马斯, 罗伯特森·布朗·威廉姆, 伯托拉·莫罗·阿蒂利奥, 科格·海恩·希蒙, 马克斯·阿瑟·弗里德里克, 瓦茨·彼得·道格拉斯 申请人:吉斯特-布罗卡迪斯公司, 国际壳牌研究有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan