一种极长链霉菌菌株sl01、其微生物菌剂及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种生防放线菌菌株SL01、其微生物菌剂及其应用，具体涉及一种极 长链霉菌菌株SL01、其微生物菌剂及其应用。
【背景技术】
[0002] 由尖镰孢萎蔫专化型引起的棉花枯萎病是棉花生产中最严重的病害之一，被称为 棉花的不治之症一"癌症"。该病为害棉花维管束组织，可引起叶片变色、干枯甚至脱落， 常使棉苗枯死、植株畸形，叶片功能下降。轻病株发育迟缓，结铃少，纤维品质和产量下降， 重病株于苗期或蕾铃期枯死，甚至毁种改茬，能在棉株整个生长周期内侵染和为害，老棉区 发病尤为严重，造成巨大损失。
[0003] 目前，防治棉花枯萎病主要采用传统的化学药剂如多菌灵、甲基托布津等，虽然化 学药剂对棉花枯萎病具有一定的防效，但长期使用已造成严重的环境污染，且易引起病原 菌产生抗药性。随着现代农业可持续发展的需要，生物防治作为一种新型的绿色防治措施， 以其低残留、低污染、且不引起病害抗性等优点，已逐渐受到青睐。生物防治的关键在于 挑选出抑菌普广，且对靶标病原菌具较强拮抗能力、持效期长的拮抗微生物及其制剂的制 备。例如现有技术CN201210425944. 4公开了一种生防菌及其在防治棉花枯黄萎病中的应 用，然而该发明中生防菌42561发酵液对棉花枯萎病和棉花黄萎病的盆栽防治效果分别为 36. 73%和44.82% ;对棉花枯黄萎病的田间防治在第三次施药后的第15和30天，其防治 效果分别达到33. 06%和41. 65%，防治效果均不理想。CN201210466796. 0公开了一种防治 棉花病害的生物菌剂及其制备方法，该发明中生物菌剂制备过程复杂，同时成本较高。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是，提供一种能够高效拮抗棉花枯萎病的极长链霉菌 菌株SL01、其微生物菌剂及其应用，该微生物菌剂制备简单，成本低。
[0005] 本发明解决其技术问题采用的技术方案是：
[0006] 本发明之一种极长链霉菌（Streptomyceslongissimus)菌株SL01，革兰氏染色 为阳性，该菌株在高氏平板上生长良好，气生菌丝鲑鱼红色，基内菌丝玫瑰红色，菌落呈圆 形，表面有粉状隆起、褶皱，边缘规则，有土腥味；菌丝直形，不卷曲，有分枝，无横隔，孢子短 柱状，能产生几丁质酶；该菌株淀粉水解和硫化氢产生呈阳性，牛奶不凝固、明胶不液化，可 利用葡萄糖、果糖、山梨糖等，不利用纤维素、鹿糖、阿拉伯糖、木糖；经培养特征、菌体形态、 生理生化特性以及16srDNA序列分析鉴定，菌株SL01属于极长链霉菌；16srDNA序列已经 登录GenBank，SL01的序列号码为KM670435。该菌株已于2014年8月25日进行了保藏，保 藏号为CGMCCNo. 9543 ;保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心， 其简称为CGMCC;保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所， 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，邮编100101。
[0007] 进一步，所述菌株SL01的16SrDNA部分序列的GenBank登录号为KM670435。
[0008] 本发明之一种极长链霉菌菌株SL01在抑制棉花枯萎菌、棉花黄萎菌、西瓜枯萎 菌、番茄叶霉菌、番茄灰霉菌、苹果腐烂菌、棉花炭疽菌和粉红聚端孢菌中的一种或多种植 物病原真菌中的应用。
[0009] 本发明之一种微生物菌剂，包括所述极长链霉菌菌株SL01。
[0010] 进一步，所述极长链霉菌菌株SL01总活菌数不低于IX108cfu/g。
[0011] 本发明之一种微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤： (1) 极长链霉菌SL01的保存：将纯化的SL01菌株接种于高氏培养基斜面上，在25~ 28°C恒温培养箱内培养3~5天后于2~6°C冰箱保存； (2) 极长链霉菌SL01的活化：将保存的极长链霉菌SL01划线转接到高氏平板中，置于 培养箱28~30°C恒温培养4~6天； (3) 极长链霉菌SL01种子液的制备：将步骤（2)中制备的极长链霉菌SL01的菌落接 种到高氏液体培养基中，28~30°C，120~180rpm摇床振荡培养48~96h，调节浓度至 1X107cfu/mL~9X107cfu/mL，得到种子液； (4) 微生物菌剂的制备：将步骤（3)中制备的发酵液无菌操作台内以接种量为20~ 30% (种子液体积数V/基质质量m)与基质混合均匀，28~30°C，相对湿度20~30%，发 酵培养8~10天后，即得微生物菌剂初产物，测定其含菌量并干燥，即得微生物菌剂。
[0012] 进一步，包括以下步骤： (1) 极长链霉菌SL01的保存：将纯化的SL01菌株接种于高氏培养基斜面上，在25°C恒 温培养箱内培养4天后于4°C冰箱保存； (2) 极长链霉菌SL01的活化：将保存的极长链霉菌SL01划线转接到高氏平板中，置于 培养箱28 °C恒温培养5天； (3) 极长链霉菌SL01种子液的制备：将步骤（1)中制备的极长链霉菌SL01的菌落接种 到高氏液体培养基中，28°C，150rpm摇床振荡培养72h，调节浓度至107cfu/mL，得到种子液， 其中，所述高氏液体培养基为可溶性淀粉20g，KN03lg，K2HP040. 5g，MgS04 ? 7H20 0. 5g，NaCl 0? 5g，FeS04 ? 7H20 0?Olg，自来水 1000mL，pH7. 2 ~7. 4,灭菌 1. 05kg/cm2,20min; (4) 微生物菌剂的制备：将步骤（2)中制备的种子液，以接种量为25% ((种子液体积 数V/基质质量m))与基质混合均匀，28°C，相对湿度25 %，发酵培养9天后，即得微生物菌 剂初产物（即菌株SL01发酵液），测定其含菌量并干燥，即得微生物菌剂，其中，所述基质为 85%大米粉、12%玉米結杆、3%小米粉，灭菌1.051^/〇]1 2,2〇111；[11。
[0013] 本发明之一种微生物菌剂在防治棉花枯萎病中的应用。
[0014] 进一步，在室内防治中，将所述微生物菌剂初产物（即菌株SL01发酵液）调节浓 度至2X106cfu/mL~2X107cfu/mL,均匀喷洒植株叶片至径流或10mL/株灌根处理。
[0015] 进一步，在大田防治中，按照微生物菌剂与土壤的质量比为1 : 100充分混匀，在 棉花播种时，按l〇g/颗棉花种子的量拌种施用。
[0016]本发明之极长链霉菌菌株SL01、其微生物菌剂具有如下优点： (1)防病作用：本发明极长链霉菌菌株SL01对棉花枯萎菌的拮抗作用显著，微生物菌 剂初产物盆栽防效可达75. 24% ;且其微生物菌剂中含有IX108cfu/g以上的能够高效拮 抗棉花枯萎病菌生长的极长链霉菌SL01，该微生物菌剂与棉花种子拌种能够有效抑制棉 花枯萎病的发生，从而减少生产中化学药剂的使用，降低环境污染和病原菌抗药性的产生， 提高棉花的产量和品质。实验证明，该微生物菌剂大田单次使用处理150d后，其防效均在 50. 0%以上。 (2) 促生作用：施用本发明微生物菌剂后对棉花植株的营养生长和