aOH调节pH至5.8?6.0 ;添加高温α -淀粉酶2000U，搅拌均匀。置于99°C超级恒温水浴槽(配备磁力搅拌装置)中，搅拌均匀，碘试合格；立即用0.lmol/LHCI调节pH至3.0，灭酶终止反应，平衡5min后，用0.1moI/LNaOH中和，调节pH至中性。将淀粉水解液稀释，配置成质量浓度为5% (w/w)的糊精溶液。
[0031]取糊精溶液100mL，缓慢加入乙醇，并不断搅拌，调节至乙醇终浓度20% (v/v)，协同添加聚乙二醇(4000Da)与氯化钠，分别控制其浓度为5% (w/v) ,0.6% (w/v)协同添加聚乙二醇5% (w/v)，置于4°C冰箱中静置24h，离心(4°C，lOOOOrpm，20min)，沉淀经过相应浓度乙醇洗涤，低温干燥获得组分I ;上清液中，缓慢添加乙醇调节至乙醇终浓度为30%(v/v)，协同添加聚乙二醇与氯化钠，分别控制其浓度为5% (w/v) ,0.6% (w/v)协同添加聚乙二醇5% (w/v)，置于4°C冰箱中静置24h，离心(4°C，lOOOOrpm, 20min)，沉淀经过相应浓度乙醇洗涤，低温干燥获得组分2 ;如此重复上述操作，调节至乙醇终浓度为90% (v/v)，协同添加聚乙二醇与氯化钠，分别控制其浓度为5% (w/v)，0.6% (w/v)，分别获得I?8糊精组分，经体积排阻色谱测定不同组分分子量分布特征。
[0032]基于体积排阻色谱法对糊精组分分析，计算糊精分子量和分散系数，获得8个糊精组分分子量信息如下:糊精I重均分子量为121.3kDa，分散系数为1.42 ;糊精2重均分子量为31.2kDa，分散系数为1.12 ;糊精3重均分子量为21.3kDa，分散系数为1.08 ;糊精4重均分子量为14.2kDa，分散系数为1.11 ;糊精5重均分子量为5.2kDa，分散系数为1.15 ；糊精6重均分子量为3.1kDa,分散系数为1.06 ;糊精7重均分子量为2.3kDa，分散系数为1.09 ;糊精8重均分子量为1.5kDa，分散系数为1.03。
[0033]实施例3
[0034]称取10g玉米淀粉于烧杯中；加入150mL去离子水(常温)混合均勾，用0.1mol/LNaOH调节pH至5.8?6.0 ;添加高温α -淀粉酶1000U，搅拌均匀。置于99°C超级恒温水浴槽(配备磁力搅拌装置)中，搅拌均匀，碘试合格；立即用0.lmol/LHCI调节pH至3.0，灭酶终止反应，平衡5min后，用0.1moI/LNaOH中和，调节pH至中性。将淀粉水解液稀释，配置质量浓度为1.5% (w/w)的糊精溶液。
[0035]取糊精溶液100mL，缓慢加入乙醇，搅拌均匀，调节至乙醇终浓度20% (v/v)，协同添加聚乙二醇(SOOODa)与氯化钠，分别控制其浓度为8% (w/v)，I % (w/v)，置于4°C冰箱中静置24h，离心(4°C，lOOOOrpm, 20min)，沉淀经过相应浓度乙醇洗涤，低温干燥获得组分I ;上清液中，缓慢添加乙醇调节至乙醇终浓度为30% (v/v)，协同添加聚乙二醇与氯化钠，分别控制其浓度为8% (w/v), I % (w/v)，协同添加聚乙二醇8% (w/v)，置于4°C冰箱中静置24h，离心(4°C，lOOOOrpm, 20min)，沉淀经过相应浓度乙醇洗涤，低温干燥获得组分2 ;如此重复上述操作，调节乙醇终浓度为90% (v/v)，协同添加聚乙二醇与氯化钠，分别控制其浓度为8% (w/v),l% (w/v)，分别获得I?8醇沉组分，经体积排阻色谱测定不同组分分子量分布O
[0036]基于体积排阻色谱法对糊精组分分析，计算糊精分子量和分散系数，获得9个糊精组分分子量信息如下:糊精I重均分子量为106.3kDa，分散系数为1.24 ;糊精2重均分子量为30.4kDa，分散系数为1.13 ;糊精3重均分子量为23.1kDa,分散系数为1.03 ;糊精4重均分子量为14.2kDa，分散系数为1.07 ;糊精5重均分子量为5.3kDa，分散系数为1.11 ;糊精6重均分子量为3.2kDa，分散系数为1.18 ;糊精7重均分子量为1.7kDa，分散系数为1.21 ;糊精8重均分子量为1.3kDa，分散系数为1.03。
[0037]以上所述仅为本发明的交叉实例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。
【主权项】
1.一种制备分子量窄分布糊精的方法，其特征在于包括以下步骤:(1)淀粉与水按照1:1.5?1:4的质量比例混合均匀，用0.1moI/LNaOH调节pH至.5.8?6.0，然后加入高温α -淀粉酶，其添加量为10?30U/g淀粉，得到混合液； (2)将步骤(I)得到的混合液置于99°C超级恒温水浴槽中，搅拌均匀，经碘试为浅棕色即合格，得到液化液，然后进行灭酶；(3)将步骤(2)得到的液化液稀释，配置成浓度为1.5?10% (w/w)糊精溶液； (4)在糊精溶液中缓慢添加乙醇，调节至乙醇终浓度20%(v/v)，协同添加聚乙二醇与氯化钠，4°C静置24h，离心，沉淀，经过此浓度乙醇洗涤，低温干燥获得组分I ; (5)上清液中，缓慢添加乙醇，调节至乙醇终浓度为30%(v/v)，协同添加聚乙二醇与氯化钠，4°C静置24h，离心，沉淀，经过此浓度乙醇洗涤，低温干燥获得组分2 ; (6)重复上述过程，至乙醇浓度为90%(v/v)为止； 所述组分1、组分2……即为所述各级分子量窄分布糊精。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(4)?(6)均控制聚乙二醇浓度为2?.8 % (w/V).
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于聚乙二醇的数均分子量为4000Da、6000Da或 8000Da。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(4)?(6)均控制氯化钠浓度为0.2?.1.0% (w/v) .
【专利摘要】一种制备分子量窄分布糊精的方法，包括以下步骤：淀粉与水混合均匀，调节pH至5.8～6.0，加入高温α-淀粉酶；置于99℃水浴槽中搅拌均匀，碘试为浅棕色即合格；灭酶；配置成浓度为1.5～10％(w/w)糊精溶液；在糊精溶液中添加乙醇至乙醇20％(v/v)，协同添加聚乙二醇与氯化钠，静置，离心，沉淀，洗涤，干燥获得组分1；上清液中，添加乙醇至终浓度为30％(v/v)，协同添加聚乙二醇与氯化钠，静置，离心，沉淀，洗涤，干燥获得组分2；重复上述过程，至乙醇浓度为90％(v/v)；组分1、2等即为所述各级分子量窄分布糊精。凡提及经有机溶剂逐级或协调聚乙二醇与盐沉淀分离淀粉或糊精方法，均适用本发明技术。
【IPC分类】C12P19-14, C12P19-04
【公开号】CN104789616
【申请号】CN201510224774
【发明人】石贵阳, 王宝石, 胡志杰, 蒋小东, 孙福新, 张 杰, 李由然, 张梁, 丁重阳, 李赢, 顾正华
【申请人】江南大学
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2015年5月5日