047] 酶标抗体为含有辣根过氧化物酶、碱性磯酸酶等酶标记的抗体中的一种；
[0048] 稀释缓冲液为抑9.6的0. 05M碳酸盐缓冲液，配制方法示例：取1. 5g的化和 2. 93g的Na肥〇3溶解加d地2〇定容至1000血；
[0049] 洗漆缓冲液为抑7. 4的0. 15MPBS溶液，配制方法示例：取0. 2g的皿2口〇4、2. 90g 的化2册〇4? 12&0、8.Og的NaCl、0. 2g的KC1、0. 5mLTween-20,溶解加dd&O定容至 1000血；
[0050] 封闭液为牛血白清蛋白溶液，配制方法示例：取0.Ig牛血白清蛋白，加入洗漆缓 冲液稀释定容至lOOmL;
[0051] 终止液为2MH2SO4,配制方法示例：取178. 3血的d地2〇,加浓H2SO4定容至200血；
[0052] 底物为甲基联苯胺（TMB)溶液，配制方法示例：取0.5mL浓度为2g/L的甲基联苯 胺己醇溶液，加底物稀释液稀释至lOmL;
[0053] 底物缓冲液抑为5. 0,其中化2册〇4的摩尔浓度为0. 2M、巧樣酸的摩尔浓度为 0. 1M，配制方法示例：取1. 42径化2册〇4、0. 96g巧樣酸，然后加入dd&O至50血，即得；
[0054] 洗脱液的配制方法示例；将木瓜蛋白酶用抑8.0, 0.Imol/LTris-肥I缓冲液配 制成l-2mg/mL，再加入Immol/L二硫苏糖醇值TT)37°C解育30min，得洗脱液；
[005引上样缓冲液可由如下比例的组分配制而成；Tris-HCl;1%漠酪藍；dd&O;甘氨酸 =15. 5 ;2. 5 ;7 ;25,其中Tris-HCl的抑为6.8、摩尔浓度为1M;
[0056] 电泳缓冲液的配制方法如下：取3.OgTris、14. 4g甘氨酸、溶于SOOmLd地2〇中，调 抑至8. 3后，定容至1L;
[0057] 捕获铭的物质为货号为"广州然科公司服10641"的鼠抗化mAb，W下实施方式中 所述的与铭特异性结合的物质、抗Cr抗体、二抗、抗铭抗体均为捕获得铭的物质；
[0058] 本发明提供一种铭-低密度脂蛋白馨合物，铭与低密度脂蛋白通过琉基或/和半 脱氨酸残基馨合而成。
[0059] 具体地，铭-低密度脂蛋白馨合物是由铭通过结合锋指结构、琉基、半脱氨酸残基 中的至少一种结构与低密度脂蛋白上的载脂蛋白B或胆固醇、甘油S醋等结合而形成的馨 合物。
[0060] 本发明还提供铭-低密度脂蛋白馨合物的制备方法，包括W下步骤：
[0061] A)铭-低密度脂蛋白的合成；在提纯源于人体的低密度脂蛋白或按照生物学方法 重组的低密度脂蛋白中加入铭离子进行馨合反应，反应溶液；
[0062] B)铭-低密度脂蛋白馨合物纯化；采用免疫亲和层析法，去除步骤A)反应溶液中 未反应的低密度脂蛋白、特异性抗体和铭离子，即得铭-低密度脂蛋白馨合物，具体包括W 下步骤：
[0063] (1)溶解样品；将上述步骤A)的铭-低密度脂蛋白馨合物溶解于生理盐水中，得 铭-低密度脂蛋白馨合物的溶液；
[0064] (2)平衡层析柱；使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与低密 度脂蛋白特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱；
[0065] 所述能与低密度脂蛋白特异性结合的填料为吸附有可与低密度脂蛋白特异性结 合物质的硅胶或树脂；
[0066] (3)上样；待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤（1)的溶液，然后上柱，使低密 度脂蛋白与填料特异性结合；
[0067] (4)洗脱；使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 05-0.lOmol/L的 化2册〇4溶液进行洗脱；
[0068] (5)收集；收集步骤（4)的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复原；
[0069] (6)透析；将步骤巧）的洗脱液，装透析袋，用d地2〇透析除盐，换水S次后，4°C透 析过夜，收集样本；
[0070] (7)平衡层析柱；采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能 与铭特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱；
[0071] 所述能与铭特异性结合的填料为吸附有可与铭特异性结合物质的硅胶或树脂；
[0072] (8)上样；待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤化）中样本，然后上柱；
[0073](9)洗脱；使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0. 5-1. Omol/L的 化2册〇4溶液进行洗脱；
[0074] (10)收集；收集洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复原；
[007引 （11)透析；将步骤（10)中的收集的洗脱液，装透析袋，用(1化0透析除盐，换水立 次后，4°C透析过夜，收集样本，即得铭-低密度脂蛋白馨合物。
[0076]C);对铭-低密度脂蛋白馨合物的鉴定，具体包括W下步骤：
[0077] (1)制备胶床；W琼脂糖凝胶、聚丙締酷胺凝胶中的一种作为介质制备胶床；
[007引 似加样；取步骤B)中提取纯化得到的铭-低密度脂蛋白馨合物，加入上样缓冲 液，并混匀，然后加样于样品槽中；
[007引 做电泳：连接电泳板，进行电泳；
[0080] (4)检测；在胶床上找出含铭的蛋白条带，将该蛋白条带取出，将蛋白条带溶解， 然后再采用ICP-MS或AAS检测是否含有铭W及检测铭的含量。
[0081] 本发明还提供一种至少包括如上述的铭-低密度脂蛋白馨合物作为标准品的试 剂盒。
[0082] 在本发明中，能实现本发明目的的试剂盒可W列出W下几种，但并不限于此。
[0083] -种检测血样中铭-低密度脂蛋白馨合物的试剂盒，包括；含有可用于捕获低密 度脂蛋白的蛋白的包被液、封闭液、洗漆缓冲液、可捕获铭的物质作为二抗、酶标抗体、底 物、终止液、稀释缓冲液、阳性对照、阴性对照等。
[0084] -种检测血样中铭-低密度脂蛋白馨合物的试剂盒，包括；含有可用于捕获低密 度脂蛋白的蛋白的包被液、封闭液、洗漆缓冲液、洗脱液、阳性对照、阴性对照等。
[0085] -种检测血样中铭-低密度脂蛋白馨合物的试剂盒，包括；含有可用于捕获低密 度脂蛋白的蛋白的包被液、封闭液、洗漆缓冲液、洗脱液、酸化剂、过氧化氨、标准品、阴性对 照等。
[0086] -种检测血样中铭-低密度脂蛋白馨合物的试剂盒，包括提取全血中低密度脂蛋 白所需提取试剂、复溶液、含有可用于捕获铭的物质的包被液、封闭液、洗漆缓冲液、酶标抗 体、底物、终止液、稀释缓冲液、标准品、阴性对照等。
[0087] -种检测血样中铭-低密度脂蛋白馨合物的试剂盒，包括提取全血中低密度脂蛋 白所需提取试剂、复溶液、阳性对照、阴性对照等。
[0088] -种检测血样中铭-低密度脂蛋白馨合物的试剂盒，包括提取全血中低密度脂蛋 白所需提取试剂、复溶液、酸化剂、过氧化氨、阳性对照、阴性对照等。
[0089] -种检测血样中铭-低密度脂蛋白馨合物的试剂盒，包括提取全血中低密度脂蛋 白所需提取试剂、胶床介质、复溶液、加样缓冲液、溶解胶床上含铭的蛋白条带所需液体、含 有可用于捕获铭的物质的包被液、封闭液、洗漆缓冲液、酶标抗体、底物、终止液、阳性对照、 阴性对照等。
[0090] 一种检测血样中铭-低密度脂蛋白馨合物的试剂盒，包括提取全血中低密度脂蛋 白所需提取试剂、胶床介质、复溶液、加样缓冲液、溶解胶床上含铭的蛋白条带所需液体、阳 性对照、阴性对照等。
[0091] 一种检测血样中铭-低密度脂蛋白馨合物的试剂盒，包括提取全血中低密度脂蛋 白所需提取试剂、胶床介质、复溶液、加样缓冲液、溶解胶床上含铭的蛋白条带所需液体、硝 酸、过氧化氨、阳性对照、阴性对照等。
[0092] 上述几种试剂盒中，所述阳性对照为标准品，即馨合有重金属铭的低密度脂蛋白 馨合物或馨合有重金属铭的BSA馨合物；所述阴性对照为稀释缓冲液。
[0093] 上述试剂盒用于检测铭-低密度脂蛋白馨合物，W提高检测的准确性和重复性， 并使之在临床中得到推广。
[0094] 本发明还提供一种定量检测铭-低密度脂蛋白馨合物的方法，W已知含量的上述 的铭-低密度脂蛋白馨合物作为标准品，采用W下方法之一对样品进行检测；酶联免疫法、 酶联免疫与原子吸收光谱结合法、酶联免疫与电感禪合等离子体质谱结合法、提纯铭-低 密度脂蛋白馨合物与酶联免疫结合法、提纯铭-低密度脂蛋白馨合物与原子吸收光谱结合 法、提纯铭-低密度脂蛋白馨合物与电感禪合等离子体质谱结合法、电泳与酶联免疫或原 子吸收光谱或电感禪合等离子体质谱结合法。在本发明中，用检测铭-低密度脂蛋白馨合 物的方法可W列出的有W下几种，但并不限于W下几种。
[0095] 方法一：酶巧免疫法巧LISA法）检测铭-低密度脂蛋白馨合物，按照如下步骤检 测；
[0096] 1)包被；用稀释缓冲液将可W捕获低密度脂蛋白的蛋白稀释至250-2000倍，加入 ELISA板微孔中，4°C过夜16-18小时，或37°C水浴1-3小时，储存冰箱；
[0097] 2)封闭；移去稀释缓冲液，并用洗漆缓冲液进行洗漆，待洗漆完成后，加入封闭 液，37°C放置1小时，移去封闭液，并用洗漆缓冲液进行洗漆，洗漆完成后，ELISA板于37°C放置1小时；
[009引扣加待测样本，并且温育；从循环系统取样，作待测样本；W已知含量的铭-低密 度脂蛋白馨合物作标准品；用稀释缓冲液将待测样本和标准品均稀释至10-40倍，加至微 孔中，37°C作用1-2小时；
[0099] 4)加入可W捕获铭的物质，并且温育；移去待测样本，并用洗漆缓冲液进行洗漆， 待洗漆完成后，加入用稀释缓冲液稀释5000-40000倍的抗铭抗体，37°C作用1-2小时，使抗 铭抗体与低密度脂蛋白上的金属铭反应；
[0100] 5)酶结合物温育；移去抗铭抗体，洗漆，加入用稀释缓冲液稀释的HRP酶标抗体， 37°C作用1-2小时，使其与HRP酶标抗体反应；
[0101] 6)底物温育；移去酶标抗体，并用洗漆缓冲液进行洗漆，待洗漆完成后，加入底 物，37°C避光作用30分钟；
[0102] 7)终止反应；滴加终止液至每一微孔；
[0103] 8)取波长450皿，加完终止液后，将WLISA板置于酶标仪上分别读取待测样本组和 标准品的0D值，绘制标准曲线，通过与标准品组比较，求得待测样本的含量。
[0104] 本方法中，步骤8)也可不使用酶标仪，直接通过显色情