时在pH7. 4环境下不带电或带负电，增加了脂质复合物的 体内稳定性，减小因过多正电荷引起的细胞毒性，其作为基因药物载体对siRNA实现安全、 有效递送；
[0048] (3)本发明的两亲性衍生物制备而成的脂质体，可体外有效转载基因药物进入细 胞，特异性沉默目的基因；
[0049] (4)本发明的两亲性衍生物制备而成的脂质体，在溶酶体pH4. 0的酸性条件下，化 合物电离带正电，从而可以与溶酶体膜中的磷脂阴离子作用，形成适应非双层结构的离子 对，继而破坏内涵体膜，实现内涵体逃逸。同时，可体内有效转载基因药物经过血液循环及 细胞内障碍，进入肝脏细胞。
【附图说明】
[0050] 通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、 目的和优点将会变得更明显：
[0051 ] 图1为3- (1-叔丁氧羰酰哌嗪-4-yl)丙酸的两亲性衍生物MPZ的结构图；
[0052] 图2为3-(1-叔丁氧羰酰哌嗪-4-yl)丙酸两亲性衍生物MPZ的反应流程示意图；
[0053] 图3为3-(1-叔丁氧羰酰哌嗪-4-yl)丙酸两亲性衍生物MPZ的质谱图；
[0054] 图4为3- (1-叔丁氧羰酰哌嗪-4-yl)丙酸两亲性衍生物MPZ的核磁图；
[0055] 图5为3-(1-叔丁氧羰酰哌嗪-4-yl)丙酸的两亲性衍生物Ml的结构图；
[0056] 图6为3- (1-叔丁氧羰酰哌嗪-4-yl)丙酸的两亲性衍生物M2的结构图；
[0057] 图7为MPZ脂质/luciferase-siRNA复合物凝胶阻滞电泳考察包封率示意图；
[0058] 图8为Ml脂质/luciferase-siRNA复合物凝胶阻滞电泳考察包封率示意图；
[0059] 图9为M2脂质/luciferase-siRNA复合物凝胶阻滞电泳考察包封率示意图；
[0060] 图10为MPZ脂质/luciferase-siRNA复合物H1299细胞转染基因沉默结果示意 图；
[0061] 图11为MPZ脂质/luciferase-siRNA复合物H1299细胞转染BCA蛋白结果示意 图；
[0062] 图12为Ml脂质/luciferase-siRNA复合物H1299细胞转染基因沉默示意图；
[0063] 图13为Ml脂质/luciferase-siRNA复合物H1299细胞转染BCA蛋白结果示意 图；
[0064] 图14为M2脂质/luciferase-siRNA复合物H1299细胞转染基因沉默示意图；
[0065] 图15为M2脂质/luciferase-siRNA复合物H1299细胞转染BCA蛋白结果示意 图；
[0066] 图16为MPZ脂质/Cy-5-siRNA复合物在体内给药后的肝脏细胞分布示意图；
[0067] 图17为Ml脂质/Cy-5-siRNA复合物在体内给药后的肝脏细胞分布示意图；
[0068] 图18为M2脂质/Cy-5-siRNA复合物在体内给药后的肝脏细胞分布示意图。
【具体实施方式】
[0069] 下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术 人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术 人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明 的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按章制造 厂商所建议的条件。
[0070] 实施例1、3_(1_叔丁氣羰酰哌嗪-4-vl)丙酸两亲件衍牛物MPZ
[0071] 图1为3-(1-叔丁氧羰酰哌嗪-4-yl)丙酸两亲性衍生物MPZ结构图；其合成方法 如图2所示，具体为：N-甲基哌嗪、亚油酸等作为原料，按照如下步骤得到MPZ脂质。图3为 两亲性化合物MPZ进行核磁共振图谱结果，图4为其质谱图谱结果。
[0072] 步骤一：
[0073]
[0074] 将30g亚油酸（反应物1)及THF(320ml)加入反应器中。将73ml的红铝溶液 (60% wt/vol)的甲苯溶液缓慢滴加至反应器中，滴加过程中保持温度在0°C左右。滴加完 毕后，室温反应2小时。溶液冷却至0°C,缓慢加入饱和硫酸钠溶液。滴加完毕后,30min内 滴入130ml乙酸乙酯，并剧烈搅拌。反应液过滤，固体用乙酸乙酯冲洗，合并有机相，浓缩。 产物溶解于80ml乙酸乙酯中，用水洗两次，并用无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩有机相除去溶 剂，得到中间产物2(28. 8g)。
[0075] 步骤二：
[0076]
[0077]500ml反应器中加入25g中间产物2及210ml二氯甲烷（DCM)，然后加入53ml三 乙胺及I. 15g DMAP (2. Omol)，溶液冷却至-KTC。32. 7g甲烷磺酸酐溶于45ml DCM中，缓慢 滴加至反应器中，并保持反应液温度在〇°C以下。滴加完毕，继续保持0°C反应1小时。反 应完毕后，80ml冰水加入反应液中，水相用DCM抽提。合并有机相，有机相用稀盐酸，水及饱 和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，浓缩有机相除去有机溶剂，得到产品3 (32. 3g)。
[0078] 步骤三：
[0079]
[0080] 玻璃反应器中110ml DMF及30g产品3,冷却至-KTC。11. 5g LiBr溶于IlOml DMF，搅拌并缓慢滴加至反应器中，并保持反应液温度在0°C以下。滴加完毕后，反应液升温 至45°C，搅拌过夜。反应完毕后，加入300ml水，并用240ml正己烷抽提，水相继续用2*45ml 正己烷抽提。合并有机相，用水及饱和盐水洗涤，硫酸钠（17g)干燥。过滤，浓缩有机相除去 有机溶剂，得到粗品27. 5g。用60-120目硅胶纯化（正己烷为流动相），得到纯品4约23g。
[0081] 步骤四：
[0082]
[0083] 三口烧瓶中加入2. 21gMg及12ml无水乙醚。反应器中充入氩气。20g产物4溶解 于40ml无水乙醚中。氩气保护下，8ml该溶液滴加至反应器中，并继续加入0. 2ml二溴甲 烷。反应液在水浴中升温至40°C。反应开始后，移去热源，将剩余32ml溶液滴加至反应器 中，让混合物保持轻微回流状态。滴加完毕后，加热使其保持回流状态反应。反应完毕后， 反应液用冰浴冷却至KTC以下，然后缓慢加入甲酸乙酯的乙醚溶液（2. 2ml溶于32ml乙醚 中）。滴加完毕后，室温反应过夜。然后加入56ml冰水及10%的硫酸溶液，分离有机相，水 相用乙醚抽提。合并有机相，用盐水洗涤，硫酸钠干燥。过滤，浓缩有机相除去有机溶剂，得 到粗品（醇及甲酸酯混合物）16g。粗品用100mLTHF溶解，加入NaOH溶液（7. 5g溶于150ml 水中），加热至65°C反应18小时。反应完全后，反应物冷却至室温，并用乙醚抽提，合并有 机相，用40ml盐水洗涤。硫酸钠干燥。过滤，浓缩有机相。粗品用60-120目硅胶纯化（4% 乙醚/正己烷），得到纯品DLM6a(ll. 6g)(产率40% )。
[0084] 步骤五：
[0085]
[0086] 三口烧瓶加入 DLML Ig 和IOmlDCM。依次加入溴丙酸 477mg，EDC. HCL747mg， DMAP38mg，DIPEA0. 8ml。反应器在油浴中升温至50°C，搅拌反应18-20小时。反应完毕后， 15ml水加入反应液中，溶液分层，水相用DCM抽提。合并有机相，有机相用盐水洗涤，硫酸钠 干燥。过滤，浓缩有机相除去有机溶剂，得到粗产品1.5g。用60-120目硅胶纯化（正己烷 为流动相），得到纯品8约800mg(57. 8% )。
[0087] 步骤六：
[0088]
[0089] 三口烧瓶中加入8(800)mg，加入DMF40ml使其完全溶解，依次加入N-甲基哌嗪 (1200mg)，NaI180mg，K 2C03350mg，反应器在油浴中升温至80°C，搅拌反应36小时。反应完 毕后，加入水20ml，二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥、过滤。浓缩有机相除去有 机溶剂，得到粗产品I. lg。用60-120目硅胶纯化（1 %甲醇/二氯甲烷为流动相），得到纯 品 13(440mg) (54% )。
[0090]对两亲性化合物MPZ进行质谱图谱、核磁图谱分析，由图3、4可知，所得MPZ化合 物纯度大于95%，其分子量与理论值相近，为分子量683g/mol。
[0091] 脂质化合物 DLin-MC2-MPZ13 :
[0092] MS (ES+) : C45H82N2O2, calculated683. 6376, found683. 6439 ;
[0093] 1HMlR(400MHz，CDCl3)S5. 36-5. 39 (8H)，4. 9 (IH)，2. 74-2. 79 (4H)，2. 5 (2H); 2.33(3H) ;2.05-2.07(8H) ;1.5(8H) ;1.28-1.37(42H) ;0.89-0.92(6H)。
[0094] 实施例2、3-(l_叔丁氣羰酰哌嗪-4-vl)丙酸两亲件衍牛物Ml
[0095] 图5为3-(1-叔丁氧羰酰哌嗪-4-yl)丙酸两亲性衍生物Ml的结构图；其制备具 体为：选用N-甲基哌嗪、棕榈酸等作为原料，按照实施例1合成方法合成，所不同之处在于： 步骤1中，反应物1为棕榈酸，其他合成步骤、合成原理及原料完全相同。得到Ml脂质；均 经过HPLC纯化和质谱鉴定，纯度大于95%，分子量与理论值相符。
[0096] 实施例3、3_(1_叔丁氣羰酰哌嗪-4-vl)丙酸两亲件衍牛物M2
[0097] 图6为3-(1-叔丁氧羰酰哌嗪-4-yl)丙酸两亲性衍生物M2结构图；其制备具