体 为：选用N-甲基哌嗪、油酸等作为原料，按照实施例1合成方法合成，所不同之处在于：步 骤1中，反应物1为油酸，其他合成步骤、合成原理及原料完全相同。得到M2脂质。均经过 HPLC纯化和质谱鉴定，纯度大于95%，分子量与理论值相符。
[0098] 实施例4、Ml脂质体
[0099] 本实施例利用两亲性衍生化合物Ml与辅助脂质，按照不同比例制备了脂质体。
[0100] 其制备方法包括如下步骤：
[0101] 1.制备样品溶液
[0102] Ml乙醇溶液、二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC)乙醇溶液、胆固醇（Cholesterol，CH0L) 乙醇溶液配制：以电子天平称取一定量Ml、DPPC或CH0L，加入无水乙醇使之成为10mg/ml， 并以之作为贮备液；
[0103] 4-羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES)缓冲液（HEPES buffer)的配制：以电子天平称取 HEPES，加入去离子水，用盐酸溶液调pH，使之成为5mMpH4.0,焦碳酸二乙酯（DEPC)处理， 灭菌后，以之作为贮备液；
[0104] 2.脂质体的制备：
[0105] 1)取出Ml化合物，胆固醇（CHOL)，二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC)贮备液，室温下 平衡半小时；
[0106] 2)分别按表1所示的摩尔比，量取Ml乙醇溶液、DPPC乙醇溶液、CHOL乙醇溶液至 5ml离心管混合；
[0107] 3)取 5Mm pH4. OHEPES Buffer 于 5ml 离心管中，30°C预热，5-lOmin ;将 vortex 润 旋仪调至shake II档，在涡旋搅拌下，将脂质乙醇混合液缓慢加入5mM pH4. OHEPES buffer 中，润旋揽泮1~2min，制备含30%乙醇的脂质体混悬液；
[0108] 4)将步骤3)得到的脂质体混悬液放在透析袋内，置于5mM pH4. OHEPES buffer中 4°C下透析12h出去乙醇。
[0109] 5)激光散射粒度分析仪（PCS)测定纳米粒子粒径分布、电动电势（zeta电位），使 用的仪器是英国马尔文公司的ZetaSizerfOOOH激光粒度仪，使用He-Ne离子激光（X 〇 = 633nm)为入射光，动力学光散射试验在25°C进行，反射角为1.33,角度为90°。连续检测 三次的平均值作为得到的数据。
[0110] 效果验证：
[0111] 通过对不同脂质组分组成、不同脂质组分比例制备的Ml脂质体的表征如表1所 示；
[0112] 表 1
[0113]
[0114] 实施例5、M2脂质体
[0115] 本实施例利用两亲性衍生化合物M2与辅助脂质，按照不同比例制备了脂质体。
[0116] 其制备及表征方法如实施例3脂质体制备方法。
[0117] 效果验证：
[0118] 不同原料、不同比例制备的M2脂质体的表征如下表2所示：
[0119] 表 2
[0120]
[0121] 实施例6、MPZ脂质体
[0122] 本实施例利用两亲性衍生化合物MPZ与辅助脂质，按照不同比例制备了脂质体。
[0123] 其制备及表征方法如实施例3脂质体制备方法。
[0124] 效果验证：
[0125] 不同原料、不同比例制备的MPZ脂质体的表征如下表3所示：
[0126] 表 3
[0127]
[0128] 实施例7、MPZ脂质体/某因复合物
[0129] 本实施例利用MPZ脂质制备的脂质体，按照不同比例N/P与SiRNA制备了脂质/ 基因复合物，并对其进行表征。
[0130] 其方法如下：
[0131] 1.空白脂质体制备：制备方法及处方比例如实施例4脂质体制备方法；
[0132] 2.脂质/基因复合物制备：
[0133]1)配制小干扰RNA (siRNA)溶液：将siRNA用DEPC水溶解，使之成为lmg/ml，并以 之作为贮备液；
[0134] 2)按不同siRNA/脂质总量（N/P)比，取适量siRNA溶液，将未透析的脂质体混悬 液放置在vortex涡旋仪上，缓慢加入siRNA溶液，37°C孵育l_2h ;
[0135] 3)将制备好的复合物置于5mM pH4. OHEPES buffer中，4°C下透析4h，除去体系中 的乙醇。然后取出，继续在0.0说？117.4?85溶液中，41：下透析1211，将体系？11调为7.4，接 近体液PH，即得脂质/基因复合物。透析结束收集于1.5ml离心管中，4°C保存备用；
[0136] 3.脂质/基因复合物在不同pH环境下的带电情况及粒子均一度以及对siRNA的 包封情况表征：
[0137] 1)激光散射粒度分析仪（PCS)测定在0.OlMpH7. 4PBS中透析除去乙醇的脂质/ 基因复合物的粒径分布及粒子zeta电位，考察复合物在pH7. 4中性条件下的带电情况及粒 径分布；
[0138] 2)激光散射粒度分析仪（PCS)测定在5mM pH4. OHEPES buffer中透析除去乙醇的 脂质/基因复合物的粒径分布及粒子zeta电位，考察复合物在pH4. 0条件下的带电情况及 粒径分布；
[0139] 3)用凝胶电泳仪，利用利用"分子筛"和"电泳"的双重作用，分离未稳定包裹的 siRNA,从条带结果分析对siRNA包封情况。
[0140] 效果验证：
[0141] (1)不同原料比例、不同N/P比制备的MPZ脂质体/基因复合物的表征如表4所 示，由结果可以看出，MPZ两亲性化合物制备的脂质体包裹基因药物siRNA后，形成了粒径 较小且分布均匀的复合纳米粒子。同时，复合物在近血液环境PH7. 4的条件下为负电性，大 大减小了阳离子脂质过剩的正电性引起的毒性。而包裹了 siRNA的脂质/基因复合物在近 核内体PH4.0的条件下带正电，说明其进入细胞内的核内体后可以因电荷反应与负电性的 膜融合，逃逸出核内体，免受酶降解失活。同时，由图7的凝胶电泳阻滞结果来看，在100 : 1、50:1、20:1三个复合比下制备的复合物电泳条带几乎没有显示，而20:1组的复合物，月旨 质体被破膜后，观察有明显条带，因此说明MPZ脂质体对siRNA进行了完全包封，能保护其 不受外界环境的破坏。因此，从以上两点可以看出，MPZ两亲性化合物制备的脂质体具有帮 助基因药物穿过细胞外障碍和细胞内障碍的能力。
[0142] 表 4
[0143]
[0145] 实施例8、Ml脂质体/某因复合物
[0146] 本实施例利用Ml两亲性化合物制备的脂质体，按照不同比例N/P与SiRNA制备了 脂质/基因复合物，并对其进行表征。
[0147] 其方法如下：
[0148] 实验方法如实施例7复合物表征。
[0149] 效果验证：
[0150] (1)不同原料比例、不同N/P比制备的Ml脂质体/基因复合物的表征如表5所示， 由结果可以看出，Ml两亲性化合物制备的脂质体包裹基因药物SiRNA后，形成了粒径较小 且分布均匀的复合纳米粒子。同时，复合物在近血液环境PH7. 4的条件下为负电性，大大减 小了阳离子脂质过剩的正电性引起的毒性。而包裹了 siRNA的脂质/基因复合物在近核内 体PH4.0的条件下带正电，说明其进入细胞内的核内体后可以因电荷反应与负电性的膜融 合，逃逸出核内体，免受酶降解失活。因此，从以上可以看出，Ml脂质制备的脂质体具有帮 助基因药物穿过细胞外障碍和细胞内障碍的能力。同时，由图8的凝胶电泳阻滞结果来看， 在100 :1、50:1、20:1三个复合比下制备的复合物电泳条带几乎没有显示，而20:1组的复合 物，脂质体被破膜后，观察有明显条带，因此说明Ml脂质体对siRNA进行了完全包封，能保 护其不受外界环境的破坏。
[0151] 表 5
[0152]
[0153] 实施例9、M2脂质体/某因复合物
[0154] 本实施例利用M2两亲性化合物制备的脂质体，按照不同比例N/P与siRNA制备了 脂质/基因复合物，并对其进行表征。
[0155] 其方法如下：
[0156] 实验方法如实施例7复合物表征。
[0157] 效果验证：
[0158] (1)不同原料比例、不同N/P比制备的M2脂质体/基因复合物的表征如表6所示， 由结果可以看出，M2两亲性化合物制备的脂质体包裹基因药物SiRNA后，形成了粒径较小 且分布均匀的复合纳米粒子。同时，复合物在近血液环境PH7. 4的条件下为负电性，大大减 小了阳离子脂质过剩的正电性引起的毒性。而包裹了 siRNA的脂质/基因复合物在近核内 体PH4.0的条件下带正电，说明其进入细胞内的核内体后可以因电荷反应与负电性的膜融 合，逃逸出核内体，免受酶降解失活。因此，从以上可以看出，M2两亲性化合物制备的脂质体 具有帮助基因药物穿过细胞外障碍和细胞内障碍的能力。同时，由图9的凝胶电泳阻滞结 果来看，在100:1、50:1、20:1三个复合比下制备的复合物电泳条带几乎没有显示，而20:1 组的复合物，脂质体被破膜后，观察有明显条带，因此说明M2脂质体对siRNA进行了完全包 封，能保护其不受外界环境的破坏。
[0159] 表 6
[0160]
[0161] 实施例KKMPZ可电离阳离子脂质体/某因复合物人肺癌H1299-DGL3细朐转染效
[0162] 本实施例利用MPZ两亲性化合物制备的脂质体/luciferase-siRNA复合物对人非 小细胞肺癌H1299细胞进行细胞转染，由其基因沉默效果，来观察载体脂质对基因药物的 转运情况。
[0163] 1.脂质/基因复合物的制备：
[0164] MPZ/基因复合物制备方