氨基被 保护所以不能发生缩合反应。当我们需要合成4拷贝Tuftsin(TKPR)化合物时，合成方式 是通过在赖氨酸上的2个活化氨基上同时进行氨基酸的缩合反应（本文中用">K"表示）， 并在以后的氨基酸加成缩合反应中同时得到延伸得以实现的。
[0023] 多肽合成目前成为常规技术并有商业化服务公司可根据客户的需求提供合成服 务。关于多肽合成及纯化的具体细节和原理我们在此不再赘述，合成原理和操作参见由盛 树力主编，科学技术文献出版社（1998年）出版的"多肽激素的当代理论和应用"一书的第 三章"多肽的化学合成和纯化"。本发明合成制备多肽化合物的方式可以参照以上固相合成 方式，但并不局限于此合成方式。
[0024] 多肽化合物是一类具有生物活性的分子，它们的氨基酸序列和结构决定了它们的 生物学作用。单一氨基酸在蛋白质或肽序列中的改变或蛋白质，肽分子结构的任何改变都 有可能产生不可预测的生物学活性的改变，下面通过具体实施例来对本发明提供的多肽化 合物的生物活性及其功效进行详细阐述。
[0025] 实施例
[0026] 本发明实施例提供了两种4拷贝Tuftsin分子及单拷贝Bursin分子共价联接而 得的多肽化合物，其结构式分别为：（TKPR) 4>K2>KHG和（TKPR) 4>K2>KHG-NH2，这两种化合物 分别通过上述合成路线合成，具体操作如下：
[0027] 本发明实施例提供的两种多肽化合物均采用有机化学Fmoc保护的氨基酸固相合 成法。
[0028]合成肽酸类分子，包括TKPR、（TKPR) 4>K2>KG、（TKPR) 4>K2>KHG采用"WANG树脂"在 多肽自动合成仪（ABI433A型）上自多肽的羧基端（C)向氨基端（N)逐个氨基酸缩合延伸， 合成完成后采用TFA法将目的多肽从树脂上裂解下来。
[0029] 合成肽酰胺类分子，包括KHG_NH2、（TKPR) 4>K2>KHG-NH2采用"RINK树脂"在多肽自 动合成仪（ABI433A型）上自多肽的羧基端（C)向氨基端（N)逐个氨基酸缩合延伸，合成 完成后采用TFA法将目的多肽从树脂上裂解下来。
[0030] 采用色谱柱型号DaisoC18(IOiIm，100A。50x250mm)，色谱操作流动相A为（含 0. 05 %三氟乙酸，2%乙腈的水溶液），流动相B为90%乙腈/ 7jC，流速为每分钟25毫升，紫 外检测波长220纳米。收集流出峰溶液，经过冷冻干燥得到白色絮状固体多肽产物。
[0031]其中：
[0032]Tuftsin分子，TKPR分子式为C21H4qN8O6，理论分子量为500. 60,合成质谱分子量为 501. 79 ；
[0033]Bursin分子，KHG-NH2分子式为C14H25N7O3,理论分子量为339. 4合成质谱分子量为 339.57；
[0034] (TKPR) 4>K2>KG分子式为CmH193N39O25，，理论分子量为2389. 94,合成质谱分子量为 2389.88；
[0035] (TKPR) 4>K2>KHG分子式为C1iqH2qqN 42O26，理论分子量为2527. 09,合成质谱分子量为 2528.97 ；
[0036] (TKPR) 4>K2>KHG-NH2分子式为C1iqH2qiN43O25，理论分子量为2526. 10,合成质谱分子 量为 2527. 39。
[0037] 本发明实施例提供的（TKPR) 4>K2>KHG及（TKPR) 4>K2>KHG-NH2肽化合物分子经高效 液相色谱（HPLC)C18柱以流动相TFA/乙晴系统分离纯化可得到纯度>99. 0%的合成产物， 经过冷冻干燥得到白色絮状固体多肽产物，经密封包装后放入冰箱保存待用。
[0038] 对比例1
[0039] 通过实施例中提供的人工固相合成方法得到TKPR分子，TKPR分子式为C21H4qN8O6, 理论分子量为500. 60,合成质谱分子量为501. 79,该分子经高效液相色谱（HPLC)C18柱以 流动相TFA/乙晴系统分离纯化可得到纯度>99. 0%的合成产物，经过冷冻干燥得到白色絮 状固体产物，经密封包装后放入冰箱保存待用。
[0040] 对比例2
[0041] 通过实施例中提供的人工固相合成方法得到的结构式为KHG-NH2的肽分子， KHG-NH2分子式为C14H25N7O3,理论分子量为339. 4合成质谱分子量为339. 57,该分子经高效 液相色谱（HPLC)C18柱以流动相TFA/乙晴系统分离纯化可得到纯度>99. 0%的合成产物， 经过冷冻干燥得到白色絮状固体产物，经密封包装后放入冰箱保存待用。
[0042] 对比例3
[0043] 通过实施例中提供的人工固相合成方法得到的结构式为（TKPR) 4>K2>KG的肽 分子，（TKPR)4>K2>KG分子式为CmH193N39O25，理论分子量为2389. 94,合成质谱分子量为 2389. 88 ;该分子经高效液相色谱（HPLC)C18柱以流动相TFA/乙晴系统分离纯化可得到纯 度>99. 0%的合成产物，经过冷冻干燥得到白色絮状固体产物，经密封包装后放入冰箱保存 待用。
[0044] 实施例、对比例1、对比例2及对比例3提供的肽化合物进行抑制肿瘤试验，具体试 验方法及结果如下：
[0045] 一、实体荷瘤小鼠残瘤模型验证：
[0046] 肿瘤发生的早期无明显症状，被确诊的肿瘤患者绝大多数已处于中晚期。肿瘤患 者面临的治疗首选方案是手术切除以减少肿瘤负荷。但是肿瘤中晚期患者手术往往很难将 肿瘤完全剔除干净，弥撒、转移在其它部位的微小瘤灶肉眼难以发现。临床观察表明，术后 残瘤的生长速度比原发瘤灶生长更快，造成肿瘤复发来势汹汹难以控制的境况。肿瘤患者 术后接受的放化疗措施产生的毒副作用给患者造成更加严重的伤害，许多中晚期肿瘤患者 术后的生存期可能更短。对于恶性实体瘤患者的治疗重点在于消除残存瘤灶避免肿瘤的复 发。本文所述的小鼠术后残瘤模型已公开发表（贾娜等.小鼠术后残瘤模型的建立及T肽 抑制术后残瘤生长的初步研究，解放军药学学报，2010 ;26 (5) : 377-80)。
[0047] 肿瘤免疫逃逸理论认为，肿瘤组织会在其周围形成免疫抑制包围圈，肿瘤微环境 造成免疫细胞进入其中不能发挥正常的免疫识别和清除功能，由此造成肿瘤组织逃逸免疫 监视，瘤组织继续生长扩张。"小鼠术后残瘤模型"模仿中晚期患者手术切不净的状态，检测 抗瘤药物抑制残瘤生长的效果。
[0048] 该模型的实施步骤如下：
[0049] 扩增小鼠肿瘤细胞达到一定数量后，制成小鼠肿瘤细胞悬液，通常按照每只小鼠 接种200-400万个细胞，于小鼠腋部皮下。待肿瘤体积达到约400-500mm3范围内时，将小鼠 麻醉后，在无菌条件下，手术切除大部瘤块，存留残瘤体积约50-60mm3,术后缝合手术切口。 24小时后，将术后小鼠按照残瘤体积进行分组给药。
[0050] 每2-3天，测量各组肿瘤体积的变化和体重。根据对照组肿瘤生长状况，确定试验 结束时间。试验结束时，采取颈部脱臼处死荷瘤小鼠，仔细剥离小鼠肿瘤，称重。根据小鼠 肿瘤重量、体积，血液中与机体免疫功能相关的各细胞组分和细胞因子的变化等，确定受试 药物的抗癌效果。根据小鼠体重、死亡状况、日常活动，以及主要脏器组织切片的检查、血液 生化指标等，确定受试药物的毒性评价。
[0051] 另外，在上述基础上，还可以观察小鼠的生存期为指标，确定受试药物各给药组的 生存延长期，作为抗癌效应的评价指标。
[0052] 采用以上建立的荷瘤小鼠残瘤模型评价抑瘤药物的抑瘤作用。
[0053]I、肽类化合物对小鼠S180肉瘤移植瘤术后残瘤生长的抑制作用：
[0054] 1、试验目的
[0055] 评价实施例及对比例提供的肽化合物对S180肉瘤昆明小鼠移植瘤手术后残瘤生 长的影响。
[0056] 2、实验动物和肿瘤细胞株
[0057] 昆明小鼠，SPF级，4-6周龄，16-19g，雌性。小鼠肉瘤S180细胞株，由中国人民解 放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所肿瘤药理室传代、培养、保存。
[0058] 3、实验环境条件、仪器设备等
[0059] 实验动物饲养于无菌、独立送风IVC笼具中，每笼10只小鼠，饲以专门为小鼠配制 的饲料，自由饮水。动物实验室内温度保持在25°C左右，相对湿度保持在40-70%，每日光 照12小时。
[0060] 4、实验方法及药物处理
[0061] 无菌条件下，取3只荷S180肉瘤小鼠的腹水，大约8mL，用无菌生理盐水以1 :3的 比例稀释，肿瘤细胞浓度约为8. 2XIO6个/ml，给予小鼠右侧腋部皮下接种0. 2mL。接种肿 瘤细胞数为1. 64XIO6个/只。小鼠接种肿瘤细胞一周，肿瘤体积大约有500mm3时，腹腔注 射0. 5 %的无菌戊巴比妥钠溶液（0. 15mL/20g体重）麻醉动物，无菌条件下切开荷瘤处小鼠 的皮肤，手术去除大部瘤块，剩余肿瘤体积大约为50-60mm3,缝合皮肤，然后进行后续试验。
[0062] 分组方式：
[0063] 以《抗肿瘤药效学指导原则（讨论稿）》及《细胞毒类抗肿瘤药物非临床研 究技术指导原则》为指导，设各试验组以10只小鼠为一组，分别为=(TKPR)4>K2>KHG肽 给药组、（TKPR) 4>K2>KHG-NH2肽低剂量给药组、（TKPR) 4>