转化纳米砸中的应用。本发明所述苏云金芽抱杆菌BacillusthuringiensisYLX-4具有 嗜砸微生物特征，在培养液中的可溶态无机砸（Se4\Se6+)含量在200mg/kg~2000mg/kg的 条件下，可W将无机砸高效转化为纳米砸，该纳米砸的尺寸为100~200nm，进一步可W利 用运些具有生物活性的纳米砸作为砸缺乏人群的补砸来源。
[0018] 本发明还公开了苏云金芽抱杆菌BacillusthuringiensisYLX-4在活化含砸矿 石中的应用。本发明所述苏云金芽抱杆菌BacillusthuringiensisYLX-4具有嗜砸微生 物特征，可W对含砸矿石进行微生物活化，产生游离态砸/生物纳米砸，进而使含砸矿石中 的不可生物利用砸活化为生物可利用砸，可将天然含砸矿石中生物可利用砸含量提高5~ 6倍，进一步可W将活化之后的含砸矿石加工为±壤砸改良剂，施用于缺砸±壤中种植富砸 农作物。
[0019] 本发明还公开了苏云金芽抱杆菌BacillusthuringiensisYLX-4在制备富砸微 生物肥料中的应用。本发明所述苏云金芽抱杆菌BacillusthuringiensisYLX-4具有嗜砸 微生物特征，可W直接制作为微生物冻干粉，施用到±壤中后复水复活，活化±壤中的砸， 提高±壤砸的生物可利用性，从而提高作物对砸的累积效率；也可W与有机肥复合发酵，制 成微生物有机肥，施用于±壤中种植富砸农作物。
[0020] 本发明还公开了苏云金芽抱杆菌BacillusthuringiensisYLX-4在砸污染环境 修复中的应用。本发明所述苏云金芽抱杆菌BacillusthuringiensisYLX-4具有嗜砸微 生物特征，当污染水体中砸含量不超过500yg/L时，可W对砸污染环境中的砸进行微生物 转化、累积，进一步可W收集运些微生物，一方面大大降低环境中的砸含量，达到修复环境 的目的，另一方面可w利用转化、累积的微生物砸，作为微生物有机砸或微生物纳米砸的来 源，用于缺砸人群的砸补充来源，其对砸污染水体中砸的清除效率可达50~60%。
[0021] 借由上述方案，本发明至少具有W下优点：本发明所述苏云金芽抱杆菌Bacillus thuringiensis YLX-4具有嗜砸微生物特性，可在微生物有机砸转化、微生物纳米砸合成、 含砸矿石微生物活化、富砸微生物肥料W及砸污染环境修复中具有潜在的应用价值。
[0022] 上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段， 并可依照说明书的内容予W实施，W下W本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。
【附图说明】
[0023] 图1为本发明所述菌株的形态特征；
[0024] 图2为本发明所述菌株在显微镜下的形态特征；
[00巧]图3为本发明所述菌株的伴抱晶体的形态特征；
[0026] 图4为本发明所述菌株的16SrRNA基因序列的系统发育树示意图。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合附图和实施例，对本发明的【具体实施方式】作进一步详细描述，W下实施 例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0028] 按照下述步骤进行菌种的筛选分离：
[0029] (1)初筛：无菌采集中国湖北恩施渔塘巧砸矿区渗滤水系统中的菌席沉积物样品 约20g于灭菌处理的25mL的封口瓶中，平行采集3份，带回实验室4°C低溫保存。然后在实 验室无菌操作台内将3份平行样品进行混合均匀，取5g置于50mL灭菌蒸馈水的锥形瓶中， 常溫条件下15化/min震荡15min，静置30秒后取ImL菌液梯队稀释到10 3、10 4、10 5、10 6， 然后接种0. 〇5mL均匀涂布于分离培养基上（分离培养基组成：含砸200yg/kg的TSA，砸 源为亚砸酸钢），每一处理设置4组重复。常溫下培养2-3天，挑取形态典型的单一菌落进 行点接纯化2-3次得到纯培养物。
[0030] 似复筛：将（1)中得到的纯培养物依次接入含砸（W亚砸酸钢配置）0、10、20、 50、100、200、500、1000、2000、5000mg/kg的TSB培养液中，在砸浓度《2000mg/kg条件下，该 菌株均能正常生长，表明该纯培养物具有耐砸能力，是需要的嗜砸微生物，将该纯培养物命 名为YLX-4,保藏于保藏培养基中。
[0031] 对上述经复筛得到的苏云金芽抱杆菌进行形态特征观察、分子生物学鉴定和生理 生化反应特征测试。
[0032] 形态特征观察：该苏云金芽抱杆菌在28摄氏度的TSA培养基中培养24小时观察 到的菌落为红色平滑的圆形，并具有全缘凸面（附图1);透射电子显微镜下观察到的菌株 为杆状，大小为3~5X10~15ym(附图。；并具有伴抱晶体，大小为1X1ym的菱形（附 图3);对该菌株进行革兰氏染色，显示为革兰氏阳性菌。
[0033] 分子生物学鉴定：从本发明所述菌株的纯培养物中提取基因组DNA，利用通用引 物27f和149化进行PCR扩增和测序，进一步通过化USTALX软件和Mega4. 0软件W Nei曲bour-joining方法构建系统进化树（附图4)，进行系统发育分析。结果显示菌株属 于苏云金芽抱杆菌度acillusthuringiensis),命名为苏云金芽抱杆菌YLX-4度acillus thuringiensisYLX-4)，保藏单位为中国典型培养物保藏中屯、（CCTCC)，保藏地址为：中国 武汉武汉大学，保藏日期为2013年12月18日，保藏编号为CCTCCN0:M2013674。
[0034] 生理生化反应特征测试：该菌株的运动性特征检测显示其运动性良好，菌落颜色 呈白色，菌落直径达2~5mm，适宜生长溫度为10°C，在溫度为4°C或42°C均不能生长，且具 有伴抱晶体产生（表1)。 阳0对 实施例1
[0036] 本发明所述微生物在合成有机砸中的应用。
[0037] 将本发明所述微生物YLX-4菌株接种到含砸（亚砸酸钢配置）lOmg/L的TSB培 养液中，常溫下2(K)r/min培养48小时，离屯、收集菌体和上清液。然后利用液相色谱-原 子巧光光谱联用仪化C-GA-AF巧分别检测上清液和菌体中的砸含量与形态，结果显示上 清液中几乎均为Se4%而菌体中绝大部分为砸甲基砸代半脫氨酸（SeMe切S)和砸代脫氨酸 (Se切S2)(表2)。运表明YLX-4菌株能在lOmgSe/L条件下，将培养液中的无机砸（Se4+)转 化为有机砸（SeMe切S和Se切S2)，并累积到菌体内。进一步收集菌体可作为动物饲料等的 有机砸添加，也可W做进一步的砸代氨基酸纯化原料，作为缺砸人群的有机砸补砸来源。
[0038] 表2反应体系中上清液和菌体的砸形态特征 「00391
W40] 注表示没有检出；表示没有样品。 柳41] 实施例2
[0042] 本发明所述微生物在合成有机砸中的应用。
[0043] 将本发明所述微生物YLX-4菌株接种到含砸（亚砸酸钢配置）20mg/L的TSB培养 液中，常溫下20化/min培养72小时，离屯、收集菌体和上清液。然后利用液相色谱-原子巧 光光谱联用仪化C-GA-AF巧分别检测上清液和菌体中的砸含量与形态，结果显示上清液中 几乎均为Se4%而菌体中绝大部分为甲基砸代半脫氨酸（SeMe切S)和砸代脫氨酸（Se切S2)， 在菌株的生长平稳期有少部分Se4+(表3)。运表明YLX-4菌株能在20mgSe/L条件下，将 培养液中的无机砸（Se4+)转化为有机砸（Se切S2、SeMe切S)，并累积到菌体内。进一步收集 菌体可作为动物饲料等的有机砸添加，也可W做进一步的砸代氨基酸纯化原料，作为缺砸 人群的有机砸补砸来源。
[0044] 表3反应体系中上清液和菌体的砸形态特征
[0045]
[0046] 注表示没有检出；表示没有样品。
[0047] 实施例3
[0048] 本发明所述微生物在合成纳米砸中的应用。
[0049] 将本发明所述微生物YLX-4菌株接种到含砸（亚砸酸钢配置）200mg/L的TSB培养 液中，常溫下200r/min培养24小时，溶液出现明显的红色、浑浊。培养48小