发明以降低细胞内ROS水平为目标，提出了一种取代苯基二氢吲哚咔唑衍生物 以及其药学上可接受的盐或溶剂化物，其结构如式I所示，并发现这类化合物是一类具有 抗白血病活性的小分子化合物。
[0036] 式中：Ar选自对羟基苯基，3-羧基-4-羟基苯基，3, 5-二甲氧基-4-羟基苯基， 对氯苯基，对硝基苯基，对甲氧基苯基或3-甲氧基-4-羟基苯基。
[0037] 制备本发明取代苯基二氢吲哚咔唑衍生物的方法如式II所示：
[0039] 双吲哚甲烷与芳香醛在浓硫酸的作用下，双吲哚环之间成环，形成吲哚咔唑衍生 物。芳香醛可以是对羟基苯甲醛、丁香醛、水杨醛、对氯苯甲醛、对硝基苯甲醛、茴香醛、香草 醛等。
[0040] 以下结合具体实施例，更具体地说明本发明的内容，并对本发明作进一步阐述，但 这些实施例绝非对本发明进行限制。
[0041] 实施例1 :制备二氢吲哚咔唑酚（Ar为对羟基苯基，编号为ZW2-1)
[0042] 向50mL圆底烧瓶中加入492mg(2mmol)双吲噪甲烧，146mg(I. 2mmol)对羟基苯甲 醛，加入30mL无水乙醇搅拌溶解。冰浴下滴加浓硫酸0. 2mL，充分搅拌5分钟。室温反应24 小时后TLC检测双吲哚甲烷原料点消失，停止反应，反应液减压浓缩至干。残余物以30mL乙 酸乙酯溶解，转移至IOOmL分液漏斗中，依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗（10mLX3)、饱和氯 化钠水溶液洗（IOmLX3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥2小时、过滤、滤液减压浓缩至干， 得到褐色油状粗品。
[0043] 该粗品用干法拌样，石油醚湿法装柱，进行纯化（石油醚：丙酮=10:1)， 得 130mg (产率：37 % )化合物 ZW2-1。Rf = 0· 3 (石油醚：丙酮=2:1)。ESI-MS (m/ e) 349 [M+H] VH-NMR (DMS0-d6, 400MHz) δ = 10. 65 (s，2H)，8. 74 (s，1H)，7. 15 (d，J = 8. OHz， 2H)，8.15(d，J = 8.0Hz，2H)，7.56(d，J = 8.0Hz，2H)，7.43(d，J = 8.0Hz，2H)，7.28(t，J =8. 0Hz，J = 8. 0Hz，2H), 7. 13(t，J = 8. 0Hz，J = 8. 0Hz，2H), 7. 07(d，J = 8. 0Hz，4H)。 13C匪R(DMS0-d6,100MHz) δ /ppm = 156. 92,140. 75,137. 77, 130. 81，125. 49, 124. 33， 123. 39,119. 22,118. 28,117. 62,116. 62,110. 9,109. 89,105. 87。纯度 98.9 %，流动 相：CH3CN:H2O = 85:15,保留时间：12. 51min。
[0044] 实施例2 :制备二氢吲哚咔唑酚（Ar为3-羧基-4-羟基苯基，编号为ZW2-2)
[0045] 向50mL圆底烧瓶中加入492mg(2mmol)双吲噪甲烧，218mg(l. 2mmol) 丁香醛，加入 30mL无水乙醇搅拌溶解。冰浴下滴加浓硫酸0. 2mL，充分搅拌5分钟。室温反应24小时后 TLC检测双吲哚甲烷原料点消失，停止反应，反应液减压浓缩至干。残余物以30mL乙酸乙酯 溶解，转移至IOOmL分液漏斗中，依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗（IOmLX3)、饱和氯化钠水 溶液洗（IOmLX3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥2小时、过滤、滤液减压浓缩至干，得到褐 色油状粗品。
[0046] 该粗品用干法拌样，石油醚湿法装柱，进行纯化（石油醚：丙酮=15:1)，得 150mg(产率：36· 8 % )化合物 ZW2-2。Rf = 0· 37(石油醚：丙酮=2:1)。ESI-MS(m/ e) 409 [M+H] VH-NMR (DMS0-d6, 400MHz) δ = 10. 78 (s，2H)，8. 78 (s，1H)，8. 16 (d，J = 8. OHz， 2Η),7. 46(d, J = 8. 0Hz, 2Η), 7. 29(t, J = 4. 0Hz, 2Η), 7. 15 (t, J = 4. 0Hz, J = 4. 0Hz, 2Η), 6· 95(s, 2Η), 3· 88(s, 6Η)。13CNMR(DMS0-d6, ΙΟΟΜΗζ) δ /ppm = 148. 48,140. 68,137. 65， 135. 02,124. 7,124. 32,123. 35,119. 23,118. 27,117. 55,116. 62,110. 88,109.99,106.74， 106.24,55.83。纯度98.8%，流动相：〇^仏!120 = 85:15，保留时间：17.9611^11。
[0047] 实施例3 :制备二氢吲哚咔唑酚（Ar为3, 5-二甲氧基-4-羟基苯基，编号为ZW2-3)
[0048] 向50mL圆底烧瓶中加入492mg(2mmol)双吲噪甲烧，180mg(l. Immol)水杨醛，加入 30mL无水乙醇搅拌溶解。冰浴下滴加浓硫酸0. 2mL，充分搅拌5分钟。室温反应24小时后 TLC检测双吲哚甲烷原料点消失，停止反应，反应液减压浓缩至干。残余物以30mL乙酸乙酯 溶解，转移至IOOmL分液漏斗中，依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗（IOmLX3)、饱和氯化钠水 溶液洗（IOmLX3)，乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥2小时、过滤、滤液减压浓缩至干，得到褐 色油状粗品。
[0049] 该粗品用干法拌样，石油醚湿法装柱，进行纯化（石油醚：丙酮=10:1)，得 40mg(产率：10· 2 % )化合物 ZW2-3。Rf = 0· 25(石油醚：丙酮=2:1)。ESI-MS(m/ e) 393[M+H] VH-匪R(DMS0-d6, 400MHz) δ = 11. 47 (s, 1H), 10. 78 (s, 1H), 8. 83 (s, 1H), 8 .18(d, J = 8. 0Hz, 2Η),8. ll(s, 1Η),7. 87(dd, J = 4. 0Hz, J = 10. 0Hz, 1Η), 7. 44 (d, J = 8. 0Hz, 2Η), 7. 29(m, 3Η), 7. 16(t, J = 8. 0Hz, J = 12. 0Hz, 2Η). 13CNMR (DMS〇-d6, ΙΟΟΜΗζ) δ /ppm = 206. 58,172. 11，140. 7,127. 92,137. 38,131. 76,125. 96,124.45,123.39,119.3， 118. 43,118. 24,117. 59,113. 77,110. 82,110. 57,106. 4。纯度99. 1%，流动相：CH3CN:H2O = 90:10(含0.1%了卩厶），保留时间：4.5811^11。
[0050] 在工业应用中，以上制备规模可等比例放大。
[0051 ] 利用以上制备得到的化合物进行活性实验。实验例中所涉及的细胞购自美国标准 菌种收藏所（ATCC)。PBS缓冲液（0. 1M)，RPMI-1640或DMEM/F12培养基溶液购自Hyclone 公司。胎牛血清购自Gibco公司，0. 25%胰酶溶液购自Hyclone公司。青霉素和链霉素购 自solarbio公司。MTS检测试剂盒购自PR0MEGA公司，避光保存。其余均为实验室常规试 剂。
[0052] 实验例1 :本发明化合物抑制肿瘤细胞增殖活性的测定
[0053] 用MTS法进行本发明化合物抑制肿瘤细胞增值活性的测定。具体为：将实施例1-3 得到的化合物ZW2-UZW2-2和ZW2-3分别用含0. 05% (体积百分比，v/v)DMS0的PBS缓冲 液将RPMI-1640培养基或DMEM/F12培养基配制成所需浓度。
[0054] 将生长状态良好，处于对数生长期的HL-60细胞（人粒细胞性白血病细胞）、HaCa T细胞（永生化人皮肤角质细胞）分别按4X IO4个/mL的密度接种于96孔板中，每孔 100 μ L。37°C下96孔板置于5% CO2培养箱中培养12小时。实验组按预设的浓度梯度分 别向96孔板中加入经灭菌处理的ZW2-1溶液、ZW2-2溶液和ZW2-3溶液（加入后终浓度分 别为0、2、4、8、10、12 μ M)，每孔25 μ L，平行6孔；阴性对照孔加入25 μ L含相