的敏感性也会有所不同。为此，首先用Μ?Τ法确定实验用的药物浓度范围。结果如 表UVS对照组#P<0.01)显示，不同浓度的化合物（I)对内皮细胞的作用效应不同，低剂 量的药物浓度巧~20μg/mL)细胞活性与对照组比较，没有统计学差异。40μg/mL作用 48小时后细胞活力下降了约50%，80μg/mL作用48小时后细胞活力下降了 70%，与对照 组比较有统计学差异（P<〇. 01)，产生了一定的毒副作用。因此本实验所用的化合物（I) 浓度为5、10、20μg/mL，W排除药物自身对细胞的毒性作用。
[0067] 2、不同浓度OX-LDL对厮静脉内皮细胞活力的影响
[0068]由于氧化低密度脂蛋白氧化程度的差异，氧化低密度脂蛋白的细胞毒性范围 会有所不同。因此我们先采用MTT确定OX-LDL细胞毒的范围。结果如表2(VS对照组 *P<0. 05#P<0. 01)所示，不同浓度OX-LDL对HUVEC细胞活性影响不同。与对照组相比，10μg/ 血组有促进HUVEC细胞活性增加的趋势，但与对照组比较没有统计学差异（P〉0. 05) ;20~ 100μg/血各组内皮细胞活性随浓度增加而减少，与对照组比较有统计学差异（P<0. 05或 P<0. 01)。
[0069] 3、化合物（I)对OX-LDL诱导厮静脉内皮细胞损伤的干预作用
[0070]结果如表 3 (VS.OX-LDLg;roup#P<0. 01)所示，ox-LDL(50μg/mL)组的细胞 活性下降，与对照组比较有统计学差异（P<〇. 01)，说明OX-LDL组细胞活性显著降低， ox-LDL(50μg/mL)对正常HUVEC具有损伤作用。化合物（I)不同剂量组的细胞活性均 高于OX-LDL组，与OX-LDL组比较差异有统计学意义（P<0. 01)，说明此Ξ个剂量组的细胞 活性显著高于OX-LDL组，提示化合物（I)可抑制OX-LDL诱导的HUVEC损伤。化合物 (I)l〇yg/血和化合物（I)2〇yg/血组的细胞活性高于化合物（I)5yg/血组，与化 合物（I) 5μg/血比较有统计学差异（P= 0. 01或P<0. 01)。化合物（I) 20μg/血细胞 活性较化合物（I) 10μg/mL组有升高趋势，但没有统计学差异（P= 0. 185)。提示化合物 (I)的内皮保护作用在一定范围内具有量效关系。
[0071] 4、化合物（I)对OX-LDL诱导损伤的厮静脉内皮细胞调亡的影响
[0072]各组流式细胞结果显示：各组细胞的调亡率差异有统计学意义（P<0. 01)，OX-LDL 组的增殖指数明显升高，与对照组比较有统计学差异（P<0.01)说明〇x-LDL(50yg/mL)对 正常HUVEC具有损伤作用。化合物（I)不同剂量组的调亡率均低于OX-LDL组，与OX-LDL 组比较差异有统计学意义（P<〇. 01)，说明此Ξ个剂量组的调亡率显著低于OX-LDL组，提 示化合物（I)可抑制OX-LDL诱导的HUVEC调亡。化合物（I)不同剂量组的调亡率 随着剂量升高逐渐降低，各组之间差异有统计学意义任<〇.〇1)。结果见表4(VSOX-LDL g;roup#P<0. 01)。提示化合物（I)的内皮保护效应在一定范围内具有量效关系。
[0073] 结论，本研究采用Μ?Τ法检测发现化合物（I)能明显提高OX-LDL损伤的人厮静 脉内皮细胞的细胞活力，说明其具有抑制OX-LDL诱导的HUVEC损伤的作用。进一步采用 AnnexinV-門TC、PI双染色流式细胞术检测细胞调亡，研究发现各浓度组化合物（I)均能 显著减少OX-LDL诱导的HUVEC调亡，并且效果呈剂量依赖性。提示化合物（I)能通过抑 制OX-LDL诱导的HUVEC调亡来实现内皮保护作用。
[0074] 表1不同浓度化合物（I)对HUVEC细胞活力的影响（品：&，η=6)
[00巧]
[0076] 表2OX-LDL对HUVEC细胞活力的影响（X二、，η= 6)
[0077]
[007引表3不同剂化合物（I)对OX-LDL诱导HUVEC损伤的干预作用（完±私η=6)[0079]
[0080] 表4不同剂量化合物（I)对OX-LDL诱导HUVEC调亡的作用（品S，η= 3)
[0081]
[00的]实施例3
[0083] 片剂的制备：按实施例1方法先制得化合物（I)，W及利用有机酸如酒石酸、或 巧樣酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或憐酸制成的盐，按其与赋形剂重量比为 1:9的比例加入赋形剂，制粒压片。
[0084] 实施例4
[0085] 口服液制备：按实施例1方法先制得化合物（I)，W及利用有机酸如酒石酸、或 巧樣酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或憐酸制成的盐，按常规口服液制法制成 口服液。
[008引实施例5
[0087] 胶囊剂或颗粒剂的制备：按实施例1方法先制得化合物（I)，W及利用有机酸如 酒石酸、或巧樣酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或憐酸制成的盐，按其与赋形剂 重量比为1:9的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂。
[008引实施例6
[0089] 注射液的制备：按实施例1方法先制得化合物（I)，W及利用有机酸如酒石酸、 或巧樣酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或憐酸制成的盐，按常规加注射用水，精 滤，灌封灭菌制成注射液。
[0090] 实施例7
[0091] 无菌粉针的制备：按实施例1方法先制得化合物（I)，W及利用有机酸如酒石 酸、或巧樣酸或甲酸或乙二酸等、无机酸如盐酸或硫酸或憐酸制成的盐，将其溶于无菌注射 用水中，揽拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安飯中，低溫冷冻干燥后无菌 烙封得粉针剂。
[0092] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明的保护 范围。本领域的普通技术人员应当理解，可W对本发明的技术方案进行修改或者等同替换， 而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。
【主权项】
1. 具有下述结构式的化合物（I)，2. 权利要求1所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于包含以下操作步骤：（a)将 散沫花的干燥叶粉碎，用80~90%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油 醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物；（b)步骤（a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用 80%乙醇洗脱8个柱体积，收集80%乙醇洗脱液，减压浓缩得80%乙醇洗脱物浸膏；（c)步 骤（b)中80%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、50:1、35:1、15:1和1:1 的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4用正相硅胶进一步分离， 依次用体积比为25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d) 中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度 洗脱，收集8~10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。3. 根据权利要求2所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于：所述大孔树脂为AB-8 型大孔吸附树脂。4. 根据权利要求2所述的化合物（I)的制备方法，其特征在于：所述用乙醇热回流提 取采用的乙醇浓度为85%。5. -种药物组合物，其特征在于：其中含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物 (I)和药学上可接受的载体。6. 权利要求1所述的化合物（I)在制备内皮细胞保护的药物中的应用。7. 权利要求5所述的药物组合物在制备内皮细胞保护的药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种新的杂帖类化合物及其制备方法和医药用途。该化合物为首次报道，是一种结构新颖的杂帖类化合物，可以从散沫花的干燥叶中提取、分离纯化得到。本研究证实该化合物能明显提高ox-LDL损伤的人脐静脉内皮细胞的细胞活力，具有抑制ox-LDL诱导的HUVEC损伤的作用，并且效果呈剂量依赖性。提示化合物(Ⅰ)能通过抑制ox-LDL诱导的HUVEC凋亡来实现内皮保护作用，可以用来开发成内皮细胞保护的药物。
【IPC分类】C07C45/78, A61K31/122, A61P9/14, C07C49/755
【公开号】CN105254482
【申请号】CN201510771470
【发明人】庄立
【申请人】庄立
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月12日