一种新的异香豆素类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体设及从马齿宽的干燥地上部分中分离得到的一种 异香豆素类化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 马齿宽（PortulacaoleraceaL.)又名妈昨菜、长命菜、马舌菜等，为马齿宽科植 物全草，多W其干燥地上部分入药，生于山区潮湿肥沃的地方，盛产于四川，遍布全国。性味 酸寒，具有清热解毒、凉血止血之功效。主治热频脈血、热淋、带下、痛肿恶毒、丹毒。药理研 究表明，马齿宽具有降血脂、降血糖、抗动脉粥样硬化等功效。马齿宽可入药，又可食用，是 我国卫生部划定的78种药食同源的野生植物之一，曾被列入2008北京奥运会菜谱。
[0003] 国内外研究人员对马齿宽的化学成分做了大量研究，结果表明，马齿宽中 富含有机酸、黄酬、祗类、酱体类、香豆素类、花色巧类W及挥发油等多种类型的化 学成分。目前，分离得到并且结构经过鉴定的香豆素类主要有6, 7-二径基香豆素 (6, 7-dihy化oxycoumarin)、东赏窘亭（scopoletin)、佛手相内醋化ergapten)、异茵香内 酯（isopimpinellin)、lonchocarpicacid、lonchocarpenin和大叶按亭（robustin)。
[0004]现代药理研究表明，马齿宽药理作用广泛，包括：抗菌、抗病毒作用；兴奋平滑肌 的作用；肌肉松弛作用；剂量依赖性地增加屯、肌收缩力度、速度，且可被屯、得安完全阻断； 降血脂、抗动脉粥样硬化作用；降血糖作用；抗肿瘤作用；抗衰老作用；增强免疫作用；抗过 敏反应等。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种从马齿宽的干燥地上部分中分离得到的一种异香豆素 类化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
[0006]本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物（I):
[0008]
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：(a)将马齿宽的干燥地上部 分粉碎，用80~90 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化） 步骤（a)中正下醇取物用大孔树脂除杂，先用5%乙醇洗脱6个柱体积，再用75%乙醇洗脱 8个柱体积，收集75 %洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱浓缩物；（C)步骤化）中75 %乙醇 洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1、30:1、15:1和8:1的二氯甲烧-甲醇梯 度洗脱得到4个组分；（d)步骤（C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为15:1、 8:1和5:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2用十八烷基娃 烧键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱 体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。
[0010] 进一步地，步骤（a)中，用85%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] 药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载体。
[0013] 所述的化合物（I)在制备神经保护的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备神经保护的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可W直接使用，或者W药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 W及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物W单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[001引图1为化合物（I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)计算ECD和实验ECD图；
[0020] 图3为MTT代谢率检测Aβ25 35对PC12细胞的毒性作用；
[0021] 图4为Aβ25 35对PC12细胞LDH释放率的影响；
[002引图5为Aβ化35和/或化合物（I)对PC12细胞LDH释放率的影口向。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0024] 主要材料、试剂来源及仪器类型：
[00巧]乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲烧为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限 公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[002引实施例1 :化合物（I)分离制备及结构确证
[0027](a)将马齿宽的干燥地上部分（8kg)粉碎，用85%乙醇热回流提取（3化X3次）， 合并提取液，浓缩至无醇味化L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋化LX3次）和水饱 和的正下醇化LX3次）萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（375g)和正下醇 萃取物；化）步骤（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8大孔树脂除杂，先用5%乙醇洗脱6个柱 体积，再用75 %乙醇洗脱8个柱体积，收集75 %洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱浓缩物 (129g) ;(c)步骤化）中75%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为65:1(8个 柱体积）、30:1 (8个柱体积）、15:1 (8个柱体积）和8:1 (10个柱体积）的二氯甲烧-甲醇 梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤（C)中组分4(27g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积 比为12:1 (8个柱体积）、8:1 (10个柱体积）和5:1 (8个柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗 脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (15g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体 积百分浓度为75%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩 得到纯的化合物（I) (40mg)。
[0028] 结构确证：HR-ESIMS显示[M+Na]+为m/z425. 1608,结合核磁特征可得分子式 为C2化6〇7,不饱和度为10。核磁共振氨谱数据5H(Ppm，DMS0-d6,500MHz) :H-1(5.01， d，J= 4. 9)，H-2 (4. 54,d，J= 4. 9)，H-3 (4.68,br，s)，H-5 (2.88,s)，H-7 (5. 78,s)， H-9(2. 91，m)，32,m)，57,m)，H-14(2. 63,d，J= 16. 0)，H-14(2. 21，d，J =16. 0)，H-15 巧.78,dd，J= 17. 8,11.2)，H-16 巧.10,d，J= 11.2)，H-16(4. 94,d，J= 17. 8)，H-17(1.02,s)，H-19(1.39,s)，H-20(1.08,s)，l-0Ac(2. 21，s);核磁共振碳谱数 据δc(卵m，DMSO-de，125MHz) :71. 9 (CH，1-C)，74. 4 (CH，2-C)，64. 2 (CH，3-C)，46. 2 (C，4-C)， 58. 1 (CH，5-C)，193.6(C，6-C)，126. 2 (CH，7-C)，155. 3 (C，8-C)，40. 1 (CH，9-C)，34.8(C， 10-C)，37. 5 (邸2,11-C)，210. 1 (C，12-C)，55. 7 (C，13-C)，42. 2 (邸2,14-C)，141. 1 (CH，15-C)， 115. 8(細2,16-C)，17. 8(邸3,17-C)，174. 9(C，18-C)，12. 2(邸3,19-C)，17. 3(邸3,20-〇， 170. 1 (C，1-OAc)，20.8(邸3,1-OAc);碳原子标记参见图1。该化合物在227nm处有紫外吸 收带，说明含有α,β-不饱和酬幾基基团。电和"C-NMR谱显示了Ξ个甲基[δ化.02(s， H-17)，1. 39 (S，H-19)和 1. 08 (S，H-20) ;δC17. 8(C-17)，12.2 (C-19)和 17. 3(C-20)]，一 个2, 18-内醋结构[δΗ4. 54(d，J=4. 9Hz，H-2);δ C74. 4(C-2)和174. 9(C-18)]，一个α，e-不饱和酬幾基[δ册.78 (s，H-7) ; δ C193. 6 (C-6)，126. 2 (C-7)和155. 3 (C-8)]，一 个酬幾基[δ C210. 1(C-12)]，乙締基[δ册.78(dd，J=17. 8，11. 2Hz，H-15)，4. 94(d，J= 17.細z，H-16)和5. 10(d，J = 11. 2Hz，H-16) ; δ C141. 1(C-15)和115. 8(C-16)]，一个乙酷 氧基[δ肥.21 (s，1-OAc);δ C170. 1 (1-OAc)和20. 8 (1-OAc)]。含氧碳信号δ C64. 2W及氨 质子信号δ H4. 68表明C-3位连有一个径基。HMBC谱中，质子信号δ册.01与相应醋幾基 碳δ C170. 1的相关性表明C-1(δ C71. 9)位连有一个乙酷氧基。通过核磁数据可知，C-13 同时连有乙締基和叔甲基；HMBC谱中C-13与&-16, &-14和Me-17, C-15与H-16b，&-14 和Me-17, W及C-16与Me-17的相关性验证了上述推论。综合氨谱、碳谱、HMBC谱和N犯SY 谱，W及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立体构型进一步通 过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致（图2)。
[002引实施例2 :化合物（I)药理作用试验 [0030] 一、材料和仪器
[00引]Αβ2535购于美国sigma公司。化合物（I)自制，制备方法见实施例LHPLC归一 化纯度大于98%。MTT(四挫氮蓝）购于美国Amresco公司。LDH测定试剂盒购于南京建成 生物有限公司。叮晚澄（A0)购于美国sigma公司。漠化乙晚巧B)购于美国sigma公司。 RNase酶购于美国sigma公司。蛋白酶K购于美国sigmaAnnexin公司。V-FITC细胞调亡 检测试剂盒购于南京凯基生物科技发展有限公司。D-MEM/F12培养基干粉购于美国GibwL 公司。马血清购于美国hycLon公司。胎牛血清购于杭州四季青生物工程有限公司。多聚 赖氨酸（PLL)购于美国sigma公司。
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