聚乙烯亚胺-胆固醇〇· 4860g。
[0081] (c)将0. 1705g活化的聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯加入到10mL三氯甲烷中， 制备活化的聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯三氯甲烷溶液；将0. 4425g聚乙烯亚胺-胆固 醇加入到20mL三氯甲烷中，制备聚乙烯亚胺-胆固醇的三氯甲烷溶液；将上述两种溶液混 合，室温下，避光搅拌反应12小时，得到聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆 固醇嵌段聚合物的粗产物溶液。将粗产物溶液用300mL乙醚在4°C下沉淀，得到纯化聚乙二 醇1000维生素E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合物，25°C真空干燥箱中干燥32 小时，得到干燥固体产物聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合 物 0· 5092g。
[0082] 经检测，所得到的聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚 合物的重均分子量为56400Da。
[0083] 实施例4将实施例1的嵌段聚合物制备成嵌段聚合物纳米粒子
[0084] 取1Omg聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合物 溶于lmL的二氯甲烷中，加入200μL蒸馏水，在超声细胞粉碎机中用5 %的功率，超声 2分钟，得到油包水的初乳，再向初乳中加入4mL聚乙烯醇（1%，Wt% )和嵌段式聚醚 F-68(l%，Wt% )混合溶液，在超声细胞粉碎机中用25%的功率，超声5分钟，得到水包油 包水复乳。将所得乳液用旋转蒸发仪去除二氯甲烷，得到带蓝光的聚乙二醇1000维生素E 琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合物纳米粒子。
[0085] 图1为本实施例中聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段 聚合物纳米粒子的透射电镜图。从该图1可以看出，聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯-聚 乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合物纳米粒子具有规整的圆球形结构，粒径在200nm左右；同时可 以看出典型的核壳结构，内核是疏水的聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯，外壳为亲水的聚 乙烯亚胺-胆固醇。
[0086] 图2为本实施例中聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚 合物纳米粒子动态光散射示意图中的粒径分布图，其中平均粒径210nm，分散系数0. 110。 与图1相比，粒径较电镜图中的粒径大，这是由于投射电子显微镜样品制备过程中胶束壳 层的塌陷收缩，在真空环境下使得胶束缩小，而动态光散射测定的是具有核壳结构的胶束 在溶液中完全舒展时的水合力学直径，在水中存在亲水性外壳溶胀。
[0087] 图3为本实施例中聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段 聚合物纳米粒子动态光散射示意图中的电位分布图，从图3可以看出，聚乙二醇1000维生 素E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合物纳米粒子表面带一定的正电荷，平均Zeta 电位为24.OmV。纳米粒子表面带一定的电荷有利于粒子的稳定性，防止粒子之间相互团聚， 同时，有利于基因的装载。
[0088] 实施例5以实施例2的嵌段聚合物制备嵌段聚合物纳米粒子
[0089] 取10mg聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合物 溶于lmL的二氯甲烷中，加入200μL蒸馏水，在超声细胞粉碎机中用5 %的功率，超声 2分钟，得到油包水的初乳，再向初乳中加入4mL聚乙烯醇（1%，Wt% )和嵌段式聚醚 F-68(l%，Wt% )混合溶液，在超声细胞粉碎机中用25%的功率，超声5分钟，得到水包油 包水复乳。将所得乳液用旋转蒸发仪去除二氯甲烷，得到带蓝光的聚乙二醇1000维生素E 琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合物纳米粒子。
[0090] 经检测，聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合物纳米 粒子具有规整的圆球性结构；粒子大小在220±8nm，分散系数为0. 173±0. 023,平均Zeta 电位为 21. 9±2·lmV。
[0091] 实施例6以实施例3的嵌段聚合物制备嵌段聚合物纳米粒子
[0092] 取10mg聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合物 溶于lmL的二氯甲烷中，加入200μL蒸馏水，在超声细胞粉碎机中用5 %的功率，超声 2分钟，得到油包水的初乳，再向初乳中加入4mL聚乙烯醇（1%，Wt% )和嵌段式聚醚 F-68(l%，Wt% )混合溶液，在超声细胞粉碎机中用25%的功率，超声5分钟，得到水包油 包水复乳。将所得乳液用旋转蒸发仪去除二氯甲烷，得到带蓝光的聚乙二醇1000维生素E 琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合物纳米粒子。
[0093] 经检测，聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合物纳米 粒子具有规整的圆球性结构；粒子大小在190±4nm，分散系数为0. 125±0. 053,平均Zeta 电位为 25. 3±4· 2mV。
[0094] 虽然，上文中已经用一般性说明、【具体实施方式】及试验，对本发明作了详尽的描 述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见 的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的 范围。
【主权项】
1. 聚乙二醇1000维生素 E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇三嵌段聚合物，其特征在 于，其具有式（1)所述的结构式：其中，η为116-348的整数，X为20-25, Y为3。2. 根据权利要求1所述的聚合物，其特征在于：所述聚乙二醇1000维生素 E琥珀酸 酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合物的重均分子量为56400-78000Da。3. -种制备聚乙二醇1000维生素 E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合物的方 法，其特征在于，包括如下步骤： (a) 聚乙二醇1000维生素 E琥珀酸酯与酰化试剂反应，得到活化聚乙二醇1000维生素 E琥珀酸酯； (b) 聚乙烯亚胺与胆固醇氯甲酸酯反应，得到聚乙烯亚胺-胆固醇； (c) 所述活化的聚乙二醇1000维生素 E琥珀酸酯与所述聚乙烯亚胺-胆固醇反应，得 到聚乙二醇1000维生素 E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合物。4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述酰化试剂为对硝基苯基氯甲酸酯、丁 二酸酐中的一种，优选为对硝基苯基氯甲酸酯；步骤（a)的操作优选为：按照聚乙二醇1000 维生素 E琥珀酸酯与酰化剂的摩尔比为1 : (1-2)使二者反应，反应12-24小时，得到粗产品 溶液；向所述粗产品溶液中加入有机溶剂沉淀得到化合物粗品，洗涤并干燥所述粗品，即得 活化聚乙二醇1000维生素 E琥珀酸酯。5. 根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于：步骤（b)的具体操作为：按照聚乙烯 亚胺与胆固醇氯甲酸酯的摩尔比为I :(5-20)使二者反应，反应12-24小时，透析反应液，冷 冻并干燥即得聚乙烯亚胺-胆固醇。6. 根据权利要求3-5任一所述的方法，其特征在于：所述聚乙烯亚胺-胆固醇的重均 分子量为 35000-50000Da。7. 根据权利要求3-6任一所述的方法，其特征在于：步骤（c)的具体操作为：按照活 化聚乙二醇1000维生素 E琥珀酸酯与聚乙烯亚胺-胆固醇I :(2-4)的质量比，使二者 在20-30°C，避光条件下反应，得到粗产品溶液，向所述粗产品溶液中加入有机溶剂沉淀得 到式化合物粗品，洗涤并干燥所述粗品即得聚乙二醇1000维生素 E琥珀酸酯-聚乙烯亚 胺-胆固醇嵌段聚合物。8. 根据权利要求1-2任一所述的聚乙二醇1000维生素 E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆 固醇嵌段聚合物，或权利要求3-7任一所述的方法制备得到的聚乙二醇1000维生素 E琥珀 酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合物在非病毒转基因载体中的应用。9. 一种非病毒转基因载体，其特征在于：所述非病毒转基因载体是将权利要求1或2 所述的嵌段聚合物或权利要求3-7任一所述方法制备得到的嵌段聚合物制备成纳米粒子 得到的，优选所述纳米粒子的粒径为190-260nm。
【专利摘要】本发明属于高分子聚合物领域，特别涉及一种聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯-聚乙烯亚胺-胆固醇嵌段聚合物，所述嵌段聚合物的重均分子量为56400-78000Da，该化合物是由活化的聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯与聚乙烯亚胺-胆固醇反应得到的，该化合物的生物相容性效果好，生物降解性好，毒性低，作为非病毒基因载体材料具有转基因效率高的特点，同时还具有稳定性好，体内循环时间长，细胞摄取强等优点。
【IPC分类】C12N15/87, C08G65/337, C08G73/04, C08G81/00, A61K48/00
【公开号】CN105418931
【申请号】CN201510903306
【发明人】吴雁, 邵磊厚, 赵彩艳, 卢剑清, 邓雄威
【申请人】国家纳米科学中心
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月9日