一种对氧及甘油具有耐受性的甘油脱水酶基因及其应用
【专利摘要】本发明提供了一种对氧及甘油具有耐受性的甘油脱水酶基因及其应用，本发明的甘油脱水酶基因dhaB1B2来自百脉根根瘤菌，仅包括两个亚基，大的α亚基和小的β亚基，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1?2所示。本发明的甘油脱水酶基因dhaB1B2具有很高的催化活性，且甘油及氧对其酶活的抑制作用远远低于目前已知的其他B12?依赖型甘油脱水酶。另外，本发明的甘油脱水酶基因可以显著提高1,3?丙二醇和3?羟基丙酸的产量，具有广阔的应用前景。
【专利说明】
一种对氧及甘油具有耐受性的甘油脱水酶基因及其应用
技术领域
[0001 ]本发明属于基因工程和生物发酵领域，具体地说，涉及一种对氧及甘油具有耐受 性的甘油脱水酶基因及其应用。
【背景技术】
[0002] 甘油脱水酶是一类特异性催化甘油或者1，2-丙二醇脱水生成3-羟基丙醛或者丙 醛的脱水酶，也是催化甘油合成1，3_丙二醇及3-羟基丙酸的第一个关键酶。甘油在甘油脱 水酶的催化下首先生成3-羟基丙醛，后者在醇脱氢酶的作用下还原生成1，3-丙二醇，或者 在醛脱氢酶的作用下氧化生成3-羟基丙酸。1，3_丙二醇是一种重要的二元醇，主要用作单 体与对苯二甲酸聚合生产新型的聚酯材料聚对苯二甲酸丙二醇脂(PTT)』-羟基丙酸就是 一种重要的平台化合物，可用于生产丙烯酸、丙二酸、1，3_丙二醇、丙烯酰胺等。
[0003] 目前已知的甘油脱水酶主要包括两类，一类是辅酶Β12-依赖型的甘油脱水酶，另 一类是非辅酶Β12-依赖型的甘油脱水酶。非辅酶Β12-依赖型的甘油脱水酶由于对氧具有极 度的敏感性，少量的氧即可使其失活，因此限制了其广泛的应用。辅酶Β12-依赖型的甘油脱 水酶存在于克雷伯氏肺炎杆菌、弗氏柠檬酸杆菌、鼠伤寒沙门氏菌等。目前已知的辅酶Β12-依赖型的甘油脱水酶都有三个亚基组成，包括较大的α亚基，中等的β亚基，和较小的γ亚 基，它们之间形成α2β2 γ 2的复合物结构。这一类辅酶Β12-依赖型的甘油脱水酶会受到甘油 以及氧的抑制。甘油对甘油脱水酶形成自杀性抑制，使其迅速失活。氧的存在也会显著降低 甘油脱水酶的酶活。在微氧及好氧发酵过程当中，甘油及氧对甘油脱水酶酶活的抑制是限 制1，3_丙二醇或3-羟基丙酸高产的关键因素之一。如何改善甘油脱水酶对甘油及氧的耐受 性，提高1，3_丙二醇或3-羟基丙酸的产量是本领域亟待解决的问题。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种对氧及甘油具有耐受性的甘油脱水酶基因及其在提高 1，3-丙二醇或3-羟基丙酸产量中的应用。
[0005] 本发明提供的Β12-依赖型甘油脱水酶基因 dhaBlB2来源于百脉根根瘤菌 (Rhizobium loti)，该基因仅包括两个亚基，大的α亚基和小的β亚基。
[0006] 所述α亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列或SEQ ID No. 1所 示核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸；
[0007] α亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如SEQ ID N0.10所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 10所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个氨基酸；
[0008] 所述β亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID N0.2所示的核苷酸序列或SEQ ID No. 2所 示核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸；
[0009] β亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如SEQ ID N0.11所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 11所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个氨基酸。
[0010] 具体地，本发明B12-依赖型甘油脱水酶基因 dhaBlB2的核苷酸序列如SEQ ID NO. 12所示。该基因仅包括两个亚基，大的α亚基和小的β亚基。
[0011] 本发明提供了上述甘油脱水酶基因 dhaBlB2及其编码的蛋白在催化甘油脱水中的 应用。
[0012] 本发明提供了含有上述甘油脱水酶基因 dhaBlB2的生物材料在催化甘油脱水中的 应用，所述的生物材料为载体、重组菌、细胞系或表达盒。
[0013] 本发明提供了上述甘油脱水酶基因 dhaBlB2及其编码的蛋白在提高1，3_丙二醇产 量中的应用。
[0014] 本发明提供了含有上述甘油脱水酶基因 dhaBlB2的生物材料在提高1，3_丙二醇产 量中的应用，所述的生物材料为载体、重组菌、细胞系或表达盒。
[0015] 具体地，在提高1，3-丙二醇产量中的应用中，是在重组菌中过表达甘油脱水酶基 因 dhaBlB2,所述的重组菌为克雷伯氏肺炎杆菌、弗氏柠檬酸杆菌、鼠伤寒沙门氏菌或大肠 杆菌。
[0016] 本发明提供了上述甘油脱水酶基因 dhaBlB2及其编码的蛋白在制备1，3_丙二醇中 的应用。
[0017] 本发明提供了上述甘油脱水酶基因 dhaBlB2及其编码的蛋白在提高3-羟基丙酸产 量中的应用。
[0018] 本发明提供了含有上述甘油脱水酶基因 dhaBlB2的生物材料在提高3-羟基丙酸产 量中的应用，所述的生物材料为载体、重组菌、细胞系或表达盒。
[0019] 具体地，在提高3-羟基丙酸产量中的应用中，是在重组菌中过表达甘油脱水酶基 因 dhaBlB2,所述的重组菌为克雷伯氏肺炎杆菌、弗氏柠檬酸杆菌、鼠伤寒沙门氏菌或大肠 杆菌。
[0020] 本发明提供了上述甘油脱水酶基因 dhaBlB2及其编码的蛋白在制备3-羟基丙酸中 的应用。
[0021] 本发明提供了上述甘油脱水酶基因 dhaBlB2及其编码的蛋白在生物发酵中耐受甘 油的用途。
[0022] 本发明提供了上述甘油脱水酶基因在生物发酵中耐受氧的用途。
[0023] 本发明的优点在于：（1)本发明的甘油脱水酶基因 dhaBlB2,甘油及氧对该甘油脱 水酶酶活的抑制作用远远低于目前已知的其他B12-依赖型甘油脱水酶（包含三个亚基）； (2)本发明的甘油脱水酶具有很高的催化活性，在重组菌中过表达本发明所提供的甘油脱 水酶基因可以极大的提高1，3_丙二醇或者3-羟基丙酸的产量。
【具体实施方式】
[0024]以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神 和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。 [0025]若未特别指明，实施例中所用的化学试剂均为常规市售试剂，实施例中所用的技 术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0026]实施例1表达来源于百脉根根瘤菌的甘油脱水酶基因 dhaBlB2及其催化性能验证 [0027] 以百脉根根瘤菌（Rhizobium loti)的基因组为模板，以引物dhaB-F (AAGCTTGTCGACGGAGCTCGAATTCTCAGAAGCGGAATGTGAAAAGGCC)和dhaB-R (CTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATGatgACGCCGAAACTGAACCG)为引物进行 PCR，获得 dhaBlB2基因约 2.7kb并进行PCR产物纯化。dhaBlB2基因仅含有2个亚基，α亚基和β亚基，dhaBl基因为α亚 基，其核苷酸序列如SEQIDN0.1所示，dhaB2基因为β亚基，其核苷酸序列如SEQIDN0.2所 不。
[0028] 以克雷伯氏肺炎杆菌HR526(Klebsiella pneumoniae)的基因组为模板，以引物 gld-F(AAGCTTGTCGACGGAGCTCGAATTCTTAGCTTCCTTTACGCAGCTTATGC)和gld-R (CTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATGatgAAAAGATCAAAACGATTTGCAGTACTGG)为引物进行 PCR，获得 gldABC基因约2.7kb并进行PCR产物纯化。
[0029] 将表达质粒pET_28a利用Ndel和EcoRI双酶切，再利用Gibson Assembly试剂盒 (NEB)分别将dhaBlB2片段和gldABC片段连接到pET-28a上，获得的重组质粒分别命名为 pET-dhaBlB2和pET-gldABC。将这两个质粒利用化学转化法转入到大肠杆菌BL21 (DE3)中， 在含50mg/L的卡那霉素 LB平板上筛选获得重组菌，分别命名为BL21/pET-dhaBlB2和BL21/ pET-gldABC〇
[0030] 将BL21/pET-dhaBlB2和BL21/pET-gldABC在含50mg/L卡那霉素的LB液体培养基中 培养至0D600达到0.6(37°(：，150印111)，添加0.511^的1?了6并继续培养1211以诱导蛋白的表达。 将菌体离心分离，并用l〇〇ml 100mM的Tris-HCl(pH8.0)洗涤两次，最后将菌体重悬于5ml的 100mM的HEPES-K0H缓冲液(pH8.2，包含2mM的DTT)。将所述重悬液利用超声进行破碎，并离 心获得上清液（12000rpm，30分钟）。利用蛋白纯化试剂盒HisTrap(GE)分离纯化甘油脱水 酶。
[0031] 利用上述纯化的甘油脱水酶进行酶动力学分析。甘油脱水酶的检测方法是利用 MBTH-比色醛法测定，反应体系（lmL)包括：100mM的HEPES-K0H(pH8.2)，20μΜ的辅酶B12， 10mM的甘油，0.05Μ的KC1，以及适量的酶。反应在37°C反应一定时间后，加入lmL 0.1Μ的柠 檬酸钾(PH3)终止反应，再加入0.5mL的0.1 %的MBTH，37°C保温15min后，测定其在305nm下 的吸光值。为了检测甘油对甘油脱水酶的抑制作用，分别检测起始反应酶活(前3分钟），以 及40分钟的平均酶活。为了检测氧气对甘油脱水酶的抑制作用，将纯化的甘油脱水酶在空 气中放置两小时再检测其酶活。实验结果如表1。
[0032] 表1不同来源的甘油脱水酶的酶活对比（单位U/mg)
[0034]由表1可以看出，来源于百脉根根瘤菌(Rhizobium loti)的甘油脱水酶(dhaBlB2) 具有很高的比酶活，达到35.2U/mg(初始酶活），大于来源于克雷伯氏肺炎杆菌的甘油脱水 酶(gldABC)的比酶活(28.4U/mg)。甘油对克雷伯氏肺炎杆菌的甘油脱水酶(gldABC)具有明 显的抑制作用，其40分钟的平均酶活比3分钟的平均酶活低82%，而百脉根根瘤菌的甘油脱 水酶其40分钟的平均酶活比3分钟的平均酶活仅低42%，说明其对甘油具有更高的耐受性。 有氧的条件下，克雷伯氏肺炎杆菌的甘油脱水酶酶活降低76%，而来源于百脉根根瘤菌的 甘油脱水酶酶活仅降低12%，说明来源于百脉根根瘤菌的甘油脱水酶酶具有更高的氧耐受 性。
[0035]实施例2利用来源于百脉根根瘤菌的甘油脱水酶基因提高1，3-丙二醇的产量 [0036] 将实施例1的pET-dhaBlB2和pET-gldABC分别用Ndel和EcoRI进行双酶切后连接到 质粒pEC-K18(从Addgene购买）上，所获得的质粒命名为pEC-dhaBlB2和pEC-gldABC。将pEC-dhaBlB2和pEC-gldABC分别电转化到克雷伯氏肺炎杆菌HR526中（电转条件为电压1.8KV， 1mm电转杯），含50mg/L的卡那霉素 LB平板上筛选获得重组菌，分别命名为Kp/pEC-dhaBlB2 和Kp/pEC-gldABC。
[0037] 将野生型的克雷伯氏肺炎杆菌HR526以及两株重组菌株分别在发酵培养基中培养 48小时（37°C，150rpm)，检测1，3_丙二醇的产量。发酵培养基的成分为(g/L):甘油30,（NH4) 2S〇4 4·0，Κ2ΗΡ〇4 0.85，MgS〇4 0.2，FeS〇4 0.005,酵母粉 1.5,卡那霉素0.05,微量元素 lml。 其中微量元素的组成为(mg/L):MnS〇4,4H20 100，C〇C12,6H20 200，
[0038] ZnCl2 70，NaMo〇4 · 2H20 35，H2B〇3 60，CuS〇4 · 5H20 29，NiCl2 · 6H2O25,浓盐酸： 0.9mL。发酵结果，野生克雷伯氏肺炎杆菌HR526的1，3-丙二醇的产量为12.4g/L，重组菌Kp/ pEC-gldABC的1，3-丙二醇的产量为12 · lg/L，重组菌Kp/pEC-dhaBlB2的1，3-丙二醇的产量 为14.8g/L。说明过表达来源于百脉根根瘤菌的甘油脱水酶可以显著提高1，3-丙二醇的产 量，该来源于百脉根根瘤菌的甘油脱水酶其仅含2个亚基，大的α亚基和小的β亚基，α亚基的 核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示，β亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID Ν0.2所示。
[0039] 实施例3利用来源于百脉根根瘤菌的甘油脱水酶基因提高3-羟基丙酸的产量
[0040] 以大肠杆菌K 1 2的基因组为模板，以引物a 1 d Η - F (tgcatgcctgcaggtcgactCTGACGTTCACAAACTGCATATATCTGATAGACWPaldH-R (TATATCTCCTTtcaGGCCTCCAGGCTTATCCA)为引物进行PCR，获得3-羟基丙酸脱氢酶基因 aldH 片段并进行纯化(序列如seq 3所示）。
[0041 ] 利用Gibson As semb 1 y试剂盒(NEB)将a 1 dH基因分别连接到实施例1制得的pET-dhaBlB2 和 pET-gldABC，获得的重组质粒命名为 pET-dhaBlB2-aldH 和 pET-gldABC-aldH。进 一步将这两个质粒利用化学转化法转入到大肠杆菌BL21(DE3)中，在含50mg/L的卡那霉素 LB平板上筛选获得重组菌，分别命名为BL21/pET-dhaBlB2-aldH和BL21/pET-gldABC-aldH。
[0042] 从新鲜平板上挑取单菌落接种到含有30ml种子培养基的250ml带档板摇瓶中，32 °C，200rpm培养12小时。种子培养基的配方包括(g/L):甘油25，（NH4) 2S〇4 5.0，K2HP〇4 1.5， MgS〇4 1.0，MnS〇4 0.005，FeS〇4 0.005,酵母粉3,卡那霉素0.005。
[0043] 以10%的接种量将种子液接种到100mL发酵培养基当中，控制温度为32°C，转速为 200rpm，当pH达到0.6时添加 O.lmM的IPTG诱导蛋白的表达，并继续培养直到甘油完全耗完。 [0044]发酵培养基配方包括（g/L):甘油50，（NH4)2S〇4 10.0，K2HP〇4 2.5，MgS〇4 1.0， MnS〇4 0.010，FeS〇4 0.010,酵母粉3.5,维生素 B12 0.005,卡那霉素 0.005。
[0045] 发酵48小时，检测3-羟基丙酸的产量。其中BL21/pET-gldABC-aldH的3-羟基丙酸 的产量为18g/L，BL21/pET-dhaBlB2-aldH的3-羟基丙酸的产量为24g/L，说明过表达来源于 百脉根根瘤菌的甘油脱水酶可以显著提高3-羟基丙酸的产量，该来源于百脉根根瘤菌的甘 油脱水酶其仅含2个亚基，大的α亚基和小的β亚基，α亚基的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所 示，β亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO.2所示。
[0046] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在 本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1. 甘油脱水酶基因 dhaBlB2在催化甘油脱水中的应用，所述的甘油脱水酶基因 dhaBlB2 来源于百脉根根瘤菌(Rhizobium loti)，该基因包括两个亚基，α亚基和β亚基， 所述α亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列或SEQ ID No. 1所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;α亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 10所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 10所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸； 所述β亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或SEQ ID No.2所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;β亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 11所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 11所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸。2. 含有甘油脱水酶基因 dhaBlB2的生物材料在催化甘油脱水中的应用，所述的甘油脱 水酶基因 dhaBlB2来源于百脉根根瘤菌(Rhizobium loti)，该基因包括两个亚基，α亚基和β 亚基， 所述α亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列或SEQ ID No. 1所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;α亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 10所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 10所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸； 所述β亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或SEQ ID No.2所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;β亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 11所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 11所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸； 所述的生物材料为载体、重组菌、细胞系或表达盒。3. 甘油脱水酶基因 dhaBlB2在提高1,3-丙二醇产量中的应用，所述的甘油脱水酶基因 dhaBlB2来源于百脉根根瘤菌(Rhizobium loti)，该基因包括两个亚基，α亚基和β亚基， 所述α亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列或SEQ ID No. 1所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;α亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 10所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 10所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸； 所述β亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或SEQ ID No.2所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;β亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 11所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 11所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸。4. 含有甘油脱水酶基因 dhaBlB2的生物材料在提高1，3_丙二醇产量中的应用，所述的 甘油脱水酶基因 dhaBlB2来源于百脉根根瘤菌(Rhizobium loti)，该基因包括两个亚基，α 亚基和β亚基， 所述α亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列或SEQ ID No. 1所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;α亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 10所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 10所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸； 所述β亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或SEQ ID No.2所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;β亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 11所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 11所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸； 所述的生物材料为载体、重组菌、细胞系或表达盒。5. 甘油脱水酶基因 dhaBlB2在制备1，3-丙二醇中的应用，所述的甘油脱水酶基因 dhaBlB2来源于百脉根根瘤菌(Rhizobium loti)，该基因包括两个亚基，α亚基和β亚基， 所述α亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列或SEQ ID No. 1所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;α亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 10所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 10所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸； 所述β亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或SEQ ID No.2所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;β亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 11所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 11所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸。6. 甘油脱水酶基因 dhaBlB2在提高3-羟基丙酸产量中的应用，所述的甘油脱水酶基因 dhaBlB2来源于百脉根根瘤菌(Rhizobium loti)，该基因包括两个亚基，α亚基和β亚基， 所述α亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列或SEQ ID No. 1所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;α亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 10所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 10所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸； 所述β亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或SEQ ID No.2所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;β亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 11所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 11所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸。7. 含有甘油脱水酶基因 dhaBlB2的生物材料在提高3-羟基丙酸产量中的应用，所述的 甘油脱水酶基因 dhaBlB2来源于百脉根根瘤菌(Rhizobium loti)，该基因包括两个亚基，α 亚基和β亚基， 所述α亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列或SEQ ID No. 1所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;α亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 10所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 10所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸； 所述β亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或SEQ ID No.2所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;β亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 11所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 11所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸； 所述的生物材料为载体、重组菌、细胞系或表达盒。8. 甘油脱水酶基因 dhaBlB2在制备3-羟基丙酸中的应用，所述的甘油脱水酶基因 dhaBlB2来源于百脉根根瘤菌(Rhizobium loti)，该基因包括两个亚基，α亚基和β亚基， 所述α亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列或SEQ ID No. 1所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;α亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 10所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 10所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸； 所述β亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或SEQ ID No.2所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;β亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 11所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 11所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸。9. 甘油脱水酶基因 d h a BIB 2在生物发酵中耐受甘油的用途，所述的甘油脱水酶基因 dhaBlB2来源于百脉根根瘤菌(Rhizobium loti)，该基因包括两个亚基，α亚基和β亚基， 所述α亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列或SEQ ID No. 1所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;α亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 10所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 10所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸； 所述β亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或SEQ ID No.2所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;β亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 11所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 11所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸。10. 甘油脱水酶基因 dhaBlB2在生物发酵中耐受氧的用途，所述的甘油脱水酶基因 dhaBlB2来源于百脉根根瘤菌(Rhizobium loti)，该基因包括两个亚基，α亚基和β亚基， 所述α亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO. 1所示的核苷酸序列或SEQ ID No. 1所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;α亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 10所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 10所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸； 所述β亚基的核苷酸序列含有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或SEQ ID No.2所示核 苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸;β亚基编码蛋白的氨基酸序列含有如 SEQ ID NO. 11所示的氨基酸序列或SEQ ID No. 11所示氨基酸序列经取代、缺失和/或增加 一个或几个氨基酸。
【文档编号】C12N9/88GK105950642SQ201610576214
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年7月20日
【发明人】陈振, 刘德华
【申请人】清华大学, 东莞深圳清华大学研究院创新中心