专利名称：磺胺嘧啶分子印迹整体柱的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种磺胺嘧啶检测整体柱的制备方法，特别是一种磺胺嘧啶分子印迹整体柱的制备方法。
背景技术：
磺胺类药物是应用最早的一类人工合成的抗菌药物，是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物总称。磺胺类药物在水产养殖过程中应用较广，但由于磺胺类药物在体内的作用时间和代谢时间较长，过量的药物残留会对人体健康构成潜在的危害。但是食品样品基质复杂，而且抗生素含量常常较低，因此如何有效地对食品样品中的痕量磺胺类抗生素进行预处理是比较关键的问题。传统的抗生素残留预处理方法有索氏提取、液液萃取、柱层析等。近年来，随着各种技术的发展与应用，一些新的提取、净化方法开始得到较广泛的应用，如固相萃取(SPE)、固相微萃取(SPME)、集体分散固相萃取(MSPD)、免疫亲和色谱(IAC)、凝胶渗透色谱(GPC)、加速溶剂提取(ASE)、超临界流体萃取(SFE)、微波辅助萃取(MAE)和分子印迹(MIP)等技术方法。其中分子印迹是一种制备预定选择性的填料的技术，此预处理方法更简便、直接。分子印迹技术就是仿照抗体的形成机理，在模板分子周围共聚制备得到一个高交联的刚性高分子，除去模板分子后便得到分子印迹聚合物介质，此时的介质可以将模板分子的空间结构保持“印迹”或留下“记忆”，在聚合物的结构中留下能够发生结合反应的基团，因此对模板分子表现出高度的选择识别性能。根据分子印迹技术优越的识别性和实用性以及可以根据不同目的而制备不同的分子印迹聚合物以满足各种不同的需要，因此在化学、生物、医学等许多领域会有较好的应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种简单、便捷、好操作、易控制的磺胺嘧啶分子印迹整体柱的制备方法，利用该整体柱可简便、直接的对磺胺嘧啶溶液进行检测。本发明的磺胺嘧啶分子印迹整体柱的制备方法，以磺胺嘧啶(SDZ)为模板，甲基丙烯酸(MAA)为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂，偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂，乙腈作为致孔剂；
上述各物质的用量如下
磺胺嘧啶(SDZ)与甲基丙烯酸(MAA)的摩尔比例为I : 3 3. 5 ;
磺胺嘧啶(SDZ)与乙二醇二甲基丙烯酸酯的摩尔比例为I : 18 23 ;
每摩尔的磺胺喃唳(SDZ)配115mg 125mg偶氮二异丁腈；
每摩尔的磺胺嘧啶(SDZ)配33mL 37mL乙腈；
按上述用量称取磺胺嘧啶并按上述用量分别加入甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯、偶氮二异丁腈、乙腈，超声混匀后除气泡；
将上述形成的溶液加入到不锈钢柱管中，两端密封，在55°C 65°C下恒温反应20 28h，形成柱状，然后将其接到高压泵上，用甲醇和冰醋酸的混合液作为流动相冲去模板分
3子和未反应的残余试剂，其中甲醇与冰醋酸的体积比为甲醇冰醋酸=9:0. 8 I. 2;再用乙腈溶液完全除去甲醇和冰醋酸；最后用纯水作为流动相，冲洗柱子直至中性，所得到的聚合物即为磺胺嘧啶分子印迹整体柱。本发明的磺胺嘧啶分子印迹整体柱的制备方法简便易行，好操作，易控制；利用本 发明的整体柱可简便、直接的对磺胺嘧啶溶液进行检测。
图I是磺胺嘧啶分子印迹整体柱内部印迹聚合物的5000倍扫描电镜图2是磺胺嘧啶分子印迹整体柱的富集对比实验的高效液相色谱图3是磺胺嘧啶分子印迹整体柱的吸附等温线示意图。
具体实施例方式以磺胺嘧啶(SDZ)为模板，甲基丙烯酸(MAA)为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂，偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂，乙腈作为致孔剂；
上述各物质的用量如下
磺胺嘧啶(SDZ)与甲基丙烯酸(MAA)的摩尔比例为I : 3 3. 5;
磺胺嘧啶(SDZ)与乙二醇二甲基丙烯酸酯的摩尔比例为I : 18 23;
每摩尔的磺胺喃唳(SDZ)配115mg 125mg偶氮二异丁腈；
每摩尔的磺胺嘧啶(SDZ)配33mL 37mL乙腈；
按上述用量称取磺胺嘧啶并按上述用量分别加入甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯、偶氮二异丁腈、乙腈，超声混匀后除气泡；
将上述形成的溶液加入到不锈钢柱管中，两端密封，在55°C 65°C下恒温反应20 28h，形成柱状，然后将其接到高压泵上，用甲醇和冰醋酸的混合液作为流动相冲去模板分子和未反应的残余试剂，其中甲醇与冰醋酸的体积比为甲醇冰醋酸=9:0. 8 1.2 ;再用乙腈溶液完全除去甲醇和冰醋酸；最后用纯水作为流动相，冲洗柱子直至中性，所得到的聚合物即为磺胺嘧啶分子印迹整体柱。实施例称取O. Immol的磺胺卩密唳(模板),加入O. 3mmol (O. 026mL)甲基丙烯酸或
O.32 mmol的甲基丙烯酸或O. 35 mmol的甲基丙烯酸(功能单体),2. Ommol (0.377mL)乙二醇二甲基丙烯酸酯或I. 8 mmol乙二醇二甲基丙烯酸酯或2. 3乙二醇二甲基丙烯酸酯(交联齐LI)和IL 5 mg偶氮二异丁腈或12. 5 mg偶氮二异丁腈或12. Omg偶氮二异丁腈(引发剂)，
3.5mL乙腈或3. 3mL乙腈或3. 7mL乙腈作为致孔剂，超声混匀后除气泡。然后将此溶液加入到一个不锈钢柱管中(管长50. 0_，管内径4. 6_)，两端用螺纹连接的丝堵及密封卷进行密封。在60°C下恒温反应24h。反应终止后将其连接到高压泵上，以甲醇冰醋酸(9 I或9 O. 8或9 I. 2, v/v)作为流动相冲去模板分子和未反应的残余试剂,然后用乙腈完全除去甲醇和冰醋酸。最后换纯水作为流动相，冲洗柱子直至中性。最终得到的聚合物即为磺胺嘧啶分子印迹整体柱。采用上述磺胺嘧啶分子印迹整体柱对4 mL的浓度为I. 5mg/L的磺胺嘧啶溶液进行吸附，最后计算出磺胺嘧啶分子印迹整体柱的饱和吸附量为5. 9708mg/l。采用上述磺胺嘧啶分子印迹整体柱连接到HPLC泵上，并配制浓度为O. 2mg/L含有磺胺脒(sulfaguanidine, SG)、磺胺卩密唳(sulphadiazine, SDZ)、磺胺二甲卩密唳(sulfadimidine, SM2)、磺胺甲卩惡唑(sulfamethoxazole, SM0)的混合溶液作为流动相，量取4. OmL以O. 2mL/min的流速通过磺胺卩密唳分子印迹整体柱冲洗,然后用乙腈以O. 2mL/min的流速洗脱被SG、SDZ、SM2, SMO吸附的磺胺嘧啶分子印迹整体柱，收集洗脱液4mL，上HPLC分析，其色谱图如图2中谱图a所示。对照实验，将磺胺嘧啶分子印迹整体柱更换为非印迹整体柱(合成时未加入模板分子)，以同样方法收集4. OmL的洗脱液，测得色谱图如图2中b所示。如图2所示由谱图a与谱图b相比较可以看出，与非印迹整体柱相比，磺胺嘧啶分子印迹整体柱对磺胺嘧啶具有很强的富集作用，其他磺胺类药物吸附较小。说明磺胺嘧啶分子印迹整体柱内部形成了可以吸附磺胺嘧啶的空穴，而非印迹柱在柱内没有形成磺胺嘧啶空穴或结合位点。如图3所示将磺胺嘧啶分子印迹整体柱连接到HPLC上，并配制浓度分别为L5mg/L、1.2 mg/LU. O mg/L、0. 8 mg/L、0. 6 mg/L 的磺胺嘧啶溶液，分别在 28°C、30°C、32°C、34°C、36°C进行断续前沿色谱法(NCFC)分析。根据NCFC法中吸附量的计算公式q= (VD-Vo)C/Vp计算得到5个温度下的吸附量，吸附量范围为1. 2363-5. 9708mg/l。
权利要求
1.一种磺胺嘧啶分子印迹整体柱的制备方法，其特征在于 以磺胺嘧啶(SDZ)为模板，甲基丙烯酸(MAA)为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂，偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂，乙腈作为致孔剂； 上述各物质的用量如下 磺胺嘧啶(SDZ)与甲基丙烯酸(MAA)的摩尔比例为I : 3 3. 5 ; 磺胺嘧啶(SDZ)与乙二醇二甲基丙烯酸酯的摩尔比例为I : 18 23 ; 每摩尔的磺胺喃唳(SDZ)配115mg 125mg偶氮二异丁腈； 每摩尔的磺胺嘧啶(SDZ)配33mL 37mL乙腈； 按上述用量称取磺胺嘧啶并按上述用量分别加入甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯、偶氮二异丁腈、乙腈，超声混匀后除气泡； 将上述形成的溶液加入到不锈钢柱管中，两端密封，在55°C 65°C下恒温反应20 28h，形成柱状，然后将其接到高压泵上，用甲醇和冰醋酸的混合液作为流动相冲去模板分子和未反应的残余试剂，其中甲醇与冰醋酸的体积比为甲醇冰醋酸=9:0. 8 I. 2;再用乙腈溶液完全除去甲醇和冰醋酸；最后用纯水作为流动相，冲洗柱子直至中性，所得到的聚合物即为磺胺嘧啶分子印迹整体柱。
全文摘要
磺胺嘧啶分子印迹整体柱的制备方法，以磺胺嘧啶为模板，甲基丙烯酸为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，偶氮二异丁腈为引发剂，乙腈作为致孔剂；各物质用量磺胺嘧啶与甲基丙烯酸的摩尔比例为1∶3；磺胺嘧啶与乙二醇二甲基丙烯酸酯的摩尔比例为1∶20；每摩尔的磺胺嘧啶配120mg偶氮二异丁腈；每摩尔的磺胺嘧啶配35mL乙腈；按上述用量超声混匀后除气泡并加入到不锈钢柱管中，密封后在60℃下反应24h，将其接到高压泵上，用甲醇和冰醋酸的混合液作为流动相冲去模板分子和未反应的残余试剂，再用乙腈溶液完全除去甲醇和冰醋酸；最后用纯水作为流动相，冲洗柱子直至中性，所得到的聚合物即为磺胺嘧啶分子印迹整体柱。
文档编号B01J20/285GK102921392SQ201210441498
公开日2013年2月13日 申请日期2012年11月8日 优先权日2012年11月8日
发明者孔亮, 王睿, 褚仁杰, 游慧珍, 韩欢, 徐婧 申请人:大连海洋大学, 孔亮