专利名称：：用于检测与淀粉状蛋白前体蛋白或β淀粉状蛋白片段结合的物质的方法和结合化合物的制作方法
技术领域：
：本发明一般涉及与阿尔茨海默病("AD，，)相关的神经和生理机能障碍领域。更具体地说，本发明涉及用于鉴定和评价物质与淀粉状蛋白前体蛋白(APP)或与APP的P-淀粉状蛋白(AP)片段的结合特性的方法。本发明还涉及一类苯并呋喃衍生物，它们特别与APP或Ap发生相互作用并且阻断APP或AP与分泌酶或APP或与AP结合抗体的相互作用。
背景技术：
：阿尔茨海默病为一种影响中年人的常见神经变性疾病。该病的关键特征包括进行性记忆缺陷、语言和视觉空间技能丧失和行为缺失。这些认知功能的改变是大脑皮层、海马、基底前脑和脑的其它区域中的神经元变性的结果。认为称作淀粉状蛋白(3肽(A(3)的39-43个氨基酸的肽的蓄积是阿尔茨海默病的原因。A(3通过(3淀粉状蛋白前体蛋白裂解酶("(3分泌酶"或"BACE")和Y-分泌酶对(3-淀粉状蛋白前体蛋白(APP)的加工而在脑中产生。在解释AD的发病机理大多数最新进展集中在A(3的表观作用方面，作为这种复杂病症在遗传上的不同形式的统一病理特征。AD的些受侵害的脑中蓄积。这些淀粉状蛋白斑沉积^的存在是支;淀粉状蛋白推断的主要观察结果。有证据提示Ap沉积在淀粉状蛋白斑的发生和AD的病因方面起重要作用。例如，存在编码APP(A卩蛋白由其衍生)的基因突变的个体常常发生阿尔茨海默病(Goate等1991，Nature353:844-846;Mullan等1992，NatureGenet,l:345画347;Murrell等1991，Science254:97-99;VanBroeckhoven，1995，Eur.J.Neural.35:8-19)。同样，尸并且淀粉状蛋白斑沉积的程度与痴呆的程度相关(Cummings&Cotman，1995，Lancet326:1524-1587)。尽管有大量证据提示A(3的胞外蓄积和沉积是AD病因的关键结果，但是最新的研究还提出含有C-末端片段(CTF(3)的AP或淀粉状蛋白的胞内蓄积增加可能在AD的病理生理学上起作用。例如，隐藏导致家族性AD的突变的APP超表达导致CTFp在神经元培养物和HEK293细胞中的A(3142中的胞内蓄积增加。Api42为A(3的42个氨基酸长度形式，认为它比AP的较短形式更为有效地形成淀粉状蛋白斑。此外，有证据提示胞内和胞外A(3在海马神经元中的不同细胞群中形成，并且A(3142的胞内蓄积增加是与两种类型的APP中的家族性AD突变相关的常见特征("Swedish"和"London")。因此，基于这些研究和涉及AD病理学中胞外A(3蓄积的早期报导，显然改变的APP分解代谢涉及疾病发展。APP为进行各种蛋白酶解加工情况的遍在跨膜(l型)糖蛋白(Selkoe，1998，TrendsCellBiol.8:447-453)。APP实际上为一族由从单一基因可变剪接产生的肽类。APP的主要形式称作APP695、APP751和APP77。，其中下标指的是每个剪接变体中的氨基酸数量(Ponte等1988，Nature331:525-527;Tanzi等1988，Nature331:528-530;Kitaguchi等1988，Nature331:530-532)。APP在大部分细胞中表达并和组成型分解代谢。APP具有带有大胞外域、跨膜区和短胞质尾区的受体类结构。A(3结构域包括APP的胞外和跨膜结构域。A(3从APP中释放的含义是存在两种不同的蛋白水解结果以便产生A(3的NH广和COOH-末端。至少存在两种从膜中释放APP并且产生可溶性COOH-截短形式的分泌机制("分泌的APP"或"sAPP")。从膜中释放APP及其片段的蛋白酶称作"分泌酶"。显性分解代谢途经看起来由ot-分泌酶裂解AP序列中的APP内片段(约9kD)，称作组成型羧基-末端片段(cCTFot)。cCTFa为一种合适的用于通过Y-分泌酶裂解以产生p3片段的底物。这种途经看起来在种类中是广泛保守的并且存在于许多细胞类型(Weidemann等1989，Cell57:115-126;Oltersdorf等1990，J.Biol.Chem.265:4492-4497;和Esch等1990，Science248:1122-1124)。在这种途经中，APP的加工包括在Ap的残基Lys16与Leu17之间的位点上的蛋白酶剪切，而APP仍然在跨-高尔基分泌室中(Kang等1987，Nature325:773-776)。由于这种裂解发生在APP的Ap白巩内，所以排除了形成A|3。sAPPa具有神经营养和神经保护活性(Kuentzel等1993，Biochem.J.295:367-378)。与涉及a-分泌酶的非-促淀粉状变途经相反，(3-分泌酶对APP的蛋白酶解加工暴露了AP的N-末端，从而产生了含有完整A(3结构域的COOH末端片段(C-末端片段或CTFs)。在可变C-末端上的，分泌酶裂解后，A(3得到释放。C-末端实际上为切割位点而非单一位点的异源异种采集，这是因为y-分泌酶活性出现在APP氨基酸的一段短序列而非单一肽键上。在促淀粉状变途经中，APP被P-分泌酶裂解而释放sAPP(3和CTF(3，CTFp然后被Y-分泌酶裂解而释放有害的A(3肽。在这种产生A(3的途经中具有关键重要性的是，分泌酶裂解的位置。如果Y-分泌酶切割位于残基711-712上，那么产生短的A(3(A(340);如果在残基713后切割，那么产生长的A(3(A|342)。因此，^分泌酶法是产生长度为40或42个氨基酸的A(3肽(分别为A|340和A^42)的关键所在。就讨论APP及其加工的综述而言，参见Selkoe，l"8，TrendsCell.Biol.8:447-453;Selkoe，1994，Ann.Rev.CellBiol.10:373-做另外参见Esch等1994，Science248:1122。可以按照许多便利的方式检测APP的裂解，包括通过检测因蛋白水解产生的多肽或肽片段。可以通过任意便利的方式，诸如通过抗体结合检测这类片段。另一种用于检测蛋白酶剪切的便利方法通过使用产色的P-分泌酶底物来进行，由此裂解该动物而释放色原，例如染色的或焚光产物。大量关注集中在抑制淀粉状蛋白斑出现的可能性方面，作为预防或改善阿尔茨海默病症状的方式。为了该目的，富有前途的策略在于抑制|3-和，分泌酶中至少一种的活性，这两种酶共同导致产生Ap。这种策略具有吸引力，因为如果作为AP沉积结果的淀粉状蛋白斑形成是阿尔茨海默病的原因，那么抑制这两种分泌酶中的一种或它们两种的活性就可以在诸如炎症或编程性细胞死亡这类晚期情况发生前的早期阶段干预该病过程。预计这类早期干预特别有益(例如，参见Citron,2000，MolecularMedicineToday6:392-397)。由于这些原因，需要提供用于筛选能够抑制或防止AP从APP中产生或抑制AP在脑中蓄积的测试化合物的方法和系统。特别地，理想的是这类方法和系统以涉及这类转化的代谢途经为基础，其中测试化合物能够打断或干扰产生转化的这种代谢途经。特别地，初期的方法应使用体外系统而非动物模型，使得这些方法特别适合于成为合适的候选药物的测试化合物的初步筛选。发明概述本发明部分涉及用于鉴定和评价物质与淀粉状蛋白前体蛋白(APP)或与APP的(3-淀粉状蛋白(A(3)片段的结合特性的测定法。在一个实施方案中，本发明涉及用于测定物质与淀粉状蛋白前体蛋白(APP)或淀粉状蛋白(3肽(A(3)的相互作用的方法，其中该方法包括(a)在有利于形成sAPP(3-抗体复合物的条件下形成笫一种测试溶液，它包括(i)具有sAPPp区和A卩区的APP或APP变体；(ii)物质；和(iii)第一种抗体，其中第一种抗体对APP或APP变体的sAPP(3区具有特异性；从而得到sAPPp-抗体复合物的第一种测试信号传导解读；(b)在有利于形成Ap-抗体复合物的条件下形成第二种测试溶液，它包括(i)具有sAPP(3区和Ap区的APP或APP变体；(ii)所述的物质；和(iii)第二种抗体，其中第二种抗体对APP或APP变体的A(3区具有特异性；从而得到A(3-抗体复合物的第二种测试信号传导解读；(c)在有利于形成sAPPp-抗体复合物和A(3-抗体复合物的条件下形成对照溶液，它包括(i)具有sAPP(3区和A(3区的APP或APP变体；和(ii)第一种抗体和笫二种抗体，从而得到sAPP(3-抗体复合物的笫一种对照信号传导解读和A(3-抗体复合物的第二种对照信号传导解读；(d)比较第一种测试信号传导解读与第一种对照信号传导解读，并且比较第二种测试信号传导解读与第二种对照信号传导解读，其中(i)如果第一种测试信号传导解读等于第一种对照信号传导解读并且第二种信号传导解读等于第二种对照信号传导解读，那么所述的物质不与APP发生相互作用；(ii)如果第一种测试信号传导解读低于笫一种对照信号传导解读并且第二种信号传导解读等于第二种对照信号传导解读，那么所述的物质与APP的sAPP(3区特异性结合；(iii)如果第一种测试信号传导解读等于第一种对照信号传导解读并且第二种信号读低于第二种对照信号传导解读，那么所述的物质与APP的A(3区特异性结合。在某些实施方案中，对A(3具有特异性的抗体对A(3的氨基酸1-17或28-40具有特异性。在其它实施方案中，对A(3具有特异性的抗体对A(3区的C-末端具有特异性。在其它实施方案中，对A(3区具有特异性的抗体对A[3区的N-末端具有特异性。在另一个实施方案中，本发明涉及用于测定物质与淀粉状蛋白(3肽(Ap)的相互作用的方法，其中该方法包括(a)在有利于形成A(3-抗体复合物的条件下形成第一种测试溶液，它包括(i)具有sAPPI3区和Ap区的APP或APP变体，所述的A卩区具有第一亚区和第二亚区；和(ii)所述的物质；和(iii)第一种抗体，其中第一种抗体对APP或APP变体的A(3区的第一亚区具有特异性；从而得到A(3-抗体复合物的笫一种测试信号传导解读；(b)在有利于形成A(3-抗体复合物的条件下形成第二种测试溶液，它包括(i)具有sAPPp区和A(3区的APP或APP变体，所述的A(3区具有第一亚区和第二亚区；(ii)所述的物质；和(iii)第二种抗体，其中第二种抗体对APP或APP变体的A(3区的第一亚区具有特异性；从而得到A(3-抗体复合物的第二种测试信号传导解读；(c)在有利于形成A(3-抗体复合物的条件下形成对照溶液，它包括(i)具有sAPP(3区和AP区的APP或APP变体，所述的A卩区具有第一亚区和第二亚区；和(ii)第一种抗体和第二种抗体，从而得到A(3-抗体复合物的笫一种对照信号传导解读和Ap-抗体复合物的第二种对照信号传导解读；(d)比较第一种测试信号传导解读与第一种对照信号传导解读，并且比较第二种测试信号传导解读与第二种对照信号传导解读，其中(i)如果第一种测试信号传导解读等于第一种对照信号传导解读并且笫二种信号传导解读等于第二种对照信号传导解读，那么所述的物质不与A(3发生相互作用；(ii)如果第一种测试信号传导解读低于第一种对照信号传导解读并且第二种信号传导解读等于第二种对照信号传导解读，那么所述的物质与A(3的第一亚区特异性结合；(iii)如果第一种测试信号传导解读等于第一种对照信号传导解读并且第二种信号读低于第二种对照信号传导解读，那么所述的物质与A(3的第二亚区特异性结合。在本发明优选的实施方案中，A(3的第一亚区为C-末端并且A(3的第二亚区为N-末端。在本发明的测定法中，测试溶液和对照溶液可以进一步包括稀释剂、pH控制剂或其它常用于测定法的添加剂和无活性载体。可以将测试和对照溶液^呆温约达24小时。在某些实施方案中，所述的物质具有低于约2kD，优选约100Da-l，OOODa的分子量。在某些实施方案中，用于测定法的APP可检测地被标记，例如可检测地被配体标记。在某些实施方案中，测试和对照溶液包括受体珠。在另一个实施方案中，本发明涉及与APP或AI3发生相互作用的物质，它们通过本发明的测定法来鉴定。在某些实施方案中，所述的物质为小分子，具有低于约2kD的分子量。在一个实施方案中，所述的物质为选自通式I的化合物或其药物上可接受的盐的苯并呋喃衍生物其中R4任选地存在并且选自(a)卤素；(b)C^烷基；和(c)Cw烷氧基；R2选自(a)氢；(b)(CH2)mC(=0)-OR5，其中R5选自氢和Cw烷基；且m为1、2或3;Rj选自(a)氢；和(b)其中R5和116选自(i)氢；(ii)卤素；(iii)C^烷基；(iv)d—6烷氧基；和(v)四峻基，且n为3、4或5。通式(I)的化合物能够与APP和A(3发生相互作用并且能够阻断APP或A(3与分泌酶或APP或A(3结合抗体的相互作用。通式I的化合物由此能够用于治疗阿尔茨海默病。本发明还涉及对需要的患者治疗阿尔茨海默病的方法，包括对所述的患者给予治疗有效量的通式(I)的化合物。本发明还涉及对需要的患者改善或控制阿尔茨海默病的方法，包括对所述的患者给予治疗有效量的通式(I)的化合物。附图简述附图1描绘了受实施例1和4的化合物影响的BACE2的A(3裂解的质谱分析；附图2(A)和2(B)描绘了实施例2的化合物抑制APP的BACE1裂解的蛋白质印迹分析；附图3描绘了抑制素-Val和实施例4的化合物抑制全长APP或APP片段的BACE1裂解；附图4描绘了H4-C99细胞中A(340和42水平的降低；且附图5描绘了实施例1的化合物结合APP的示意图。发明详述定义本文所用的术语"beta-分泌酶"或"(3-分泌酶"指的是有时在文献中称作"BACE"、"BACE1"(例如，参见Vassar等1999，Science286:735-741)或BACE2(例如，参见Farzan等2000，PNAS97:9712-9717)的酶。BACE1是501个氨基酸的膜结合的天冬氨酸蛋白酶。BACE1具有(3-分泌酶所有已知的功能特性和特征。BACE2，也称作Asp-l或memapsin-l，为膜结合的天冬氨酸蛋白酶的BACE族中的成员。参见Roggo，CurrentTopicsinMedicinalChemistry,2002，2:359-370，其中进一步讨论了BACEl与BACE2之间的差异。本文所用的术语"Y分泌酶"或"gamma分泌酶"指的是为从膜结合的APP加工中间体中释放Ap的关键酶的y分泌酶。认为y分泌酶为多-蛋白复合物，包括两种早老素片段以及辅因子呆蛋白、Pen-2和Aph-1。参见Schroeter等2003，Proc.Nat'lAcad.Sci.，100:13075-13080;Beher等2003，Biochem42:8133-8142。此外，本文所用的术语"P-分泌酶"和"Y分泌酶"包括具有分别在APP中(3-和Y位点上裂解的能力的天然存在的酶的所有哺乳动物形式。本文所用的术语"(3-分泌酶"和"Y分泌酶"还包括这类酶的所有重组形式、突变体和其它变体，只要它们将催化(3-分泌酶或y分泌酶底物裂解的功能能力维持在相同底物上天然存在的P-分泌酶或y分泌酶的有效性的至少约5%的水平上。本文所用的术语"变体"在本发明的上下文中表示无论是核酸还是氨基酸的保留基本上与原始序列相似的生物活性(功能或结构)的序列。这种变体或等同物可以来自相同或不同的种类并且可以为天然的变体或通过合成方式制备。这类变体包括具有一个或多个氨基酸取代、缺失或添加的氨基酸序列，只要蛋白质的生物活性得到保护。同样的术语应用于可以具有一个或多个核苷酸取代、缺失或添加的核酸序列，只要该序列的生物活性一般得到维持。本文所用的术语"APP变体"或"变体(3分泌酶底物"可以互换使用。典型APP变体(或变体P-分泌酶底物)是含有作为WO02/094985公布的国际专利申请PCT/US02/15590和通常拥有的美国专利申请公开号US2003/0200555Al中披露的任意新(3-分泌酶P2-P1-P1'-P2'切割位点的多肽分子(将这两篇文献引入本文作为参考)，无论是还是不是这类分子均由有利于分析的额外表位组成。例如，由与(3-分泌酶P2-P1-P1'-P2'切割位点的一侧或两侧连接的2、3、4、5或6个氨基酸组成的多肽类为修饰的(3-分泌酶底物。修饰的(3-分泌酶底物包括非天然存在的肽类，它们各自包括至少8个氨基酸的连续序列片段，这类片段包括合成的(3-分泌酶切割位点，其中至少8个氨基酸具有选自WO02/094985和US2003/0200555Al中披露的序列的组的序列。正如其中类似地注意到的，这类非天然存在的肽类的片段和同源物包括在本发明中。全长APP分子，无论是695、751还是770个氨基酸长度的分子和带有添加到一端或两端的额外氨基酸的这类分子均为修饰的(3-分泌酶底物，只要它们如上所述带有(3-分泌酶P2-P1-P1'-P2'切割位点。此外，小于695、751或770个氨基酸长度的全长APP分子，而大于长度达16个多肽的上述多聚体的中间体大小的多肽类基本上由APP序列组成并且可被P-分泌酶裂解，它们为修饰的p-分泌酶底物，只要它们如上所述带有P-分泌酶P2-P1-P1'-P2'切割位点。这类中间体大小的多肽类也称作APP的"生物活性片段"或"生物活性氨基酸片段"、"APP生物活性片段"或"APP生物活性氨基酸片段"。涉及的这类中间体大小的多肽并不限于这些术语，从而避免了与下文涉及可通过单独的(3-分泌酶或(3-分泌酶与其它酶，诸如y-分泌酶的酶裂解产生的肽类和多肽类时与术语"片段"的应用混淆。术语"衍生物"在包括通常不为这些分子的组成部分的额外的化学部分时用以包括任意上述变体。这些化学部分可以具有不同目的，包括改善分子的溶解度、吸收、生物半衰期、降低毒性和消除或减少不良副作用。此外，这些部分可以用于标记、结合的目的或它们可以包括的融合产物中。能够介导上述作用的不同部分可以在Remington的TheScienceandPracticeofPharmacy(1995)中找到。这类部分与分子的偶联的方法为本领域众所周知。"保守氨基酸取代"指的是一个氨基酸残基被另一个化学上相似的氨基酸残基取代。这类保守取代的实例为一种疏水性残基(异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸或曱硫氨酸)取代另一种残基；一种极性残基取代相同电荷的另一种极性残基(例如精氨酸取代赖氨酸；谷氨酸取代天冬氨酸)；芳族氨基酸(色氨酸、酪氨酸或苯丙氨酸)取代另一种氨基酸。如上述定义的"保守氨基酸取代"为，并且是一种类型的广义术语"其保守修饰的变体"包括的氨基酸序列表的变化形式。例如，采用后者是具有归于M.P.E.P.2422.03，第8版，2001中的术语的含义，可以包括，但不限于该实例，删除了诸如"在C-末端上被1、2、3、4或5个残基"。认为例如，但不限于氨基酸序列或核苷酸序列与参比序列"相同"，条件是这两种序列在比较窗上进行最大序列对比时为相同的。可最佳序列对比Smith&Waterman,1981，Adv.Appl.Math.2:482的局部同源性算法；Needleman&Wunsch，1970，J.Mol.Biol.48:443的同源性序列对比算法；Pearson&Lipman，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.，U.S.A.85:2444-2448的相似性方法检索；这些算法的计算机执行(WisconsinGeneticsSoftwarePackageRelease7.0中的GAP、BESFIT、FASTA和TFASTA，GeneticsComputerGroup,575ScienceDr.，Madison,Wis.);或检查。可以将这类同一性的测定视为表示特定氨基酸序列或核苷酸序列的"保守修饰的变体"，只要该变体持续作为p-分泌酶底物起作用。在备选方案中，用于本发明目的的变体的相差无几的相似性被定义为该变体与蛋白质或多肽序列的"相对序列同一性"，只要所述相差无几的相似性属于特定的范围并且所述的变体持续为|3-分泌酶的底物。例如，特定的APP骨架(或其多肽区)可以具有如下的任意或所有情况取代、缺失、插入和添加。用于制备具有取代、缺失、插入和/因此，在某些实施方案中、，具体主张的序列数与证实变体为(3-分泌酶的底物的序列数至少95%相同(基于氨基酸序列同源性，即"相对序列同一性")的蛋白质或多肽变体属于本发明的范围。在其它实施方案中，具体主张的序列数与证实变体为P-分泌酶的底物的序列数至少85%相同(基于氨基酸序列同源性，即"相对序列同一性")的蛋白质或多肽变体属于本发明的范围。在其它实施方案中，具体主张的序列数与证实变体为(3-分泌酶的底物的序列数至少65%相同(基于氨基酸序列同源性，即"相对序列同一性")的蛋白质或多肽变体属于本发明的范围。就所有这类变体而言，注意到诸如在本文所述的测试系统或还可以在本领域目前公知的其它方法中，或任选地在包括本领域随后公知的方法中用作(3-分泌酶的"合适的底物"的功能能力对实施本发明中和任意相关权利要求范围内包括的任意这类变体而言是必不可少的。作为上述定义的术语，"AP变体肽类"为淀粉状蛋白肽类，它们是淀粉状蛋白P肽(A(3)的变体。"主要组成"就(3-分泌酶底物而言表示参比序列可以通过N-末端和/或C-末端添加或缺失修饰，所述的N-末端和/或C-末端添加或缺失与参比序列相比不会导致所裂解的P-分泌酶的能力显著降低。缺失的实例为除去N-末端曱硫氨酸。术语"抗体"指的是基本上由特异性结合并且识别分析物(抗原)的免疫球蛋白基因或多个免疫球蛋白基因或其片段编码的多肽。公认的免疫球蛋白基因包括k、X、Y、5、s和ia恒定区基因以及无数免疫球蛋白可变区基因。抗体作为完整的免疫球蛋白或作为通过用各种肽酶消化产生的大量充分表征的片段存在。它们包括例如Fab'和F(ab)'2片段。术语"抗体"还包括通过修饰完整抗体产生的抗体片段或那些术语重组DNA方法重新合成的抗体，并且进一步包括通过常规技术制备的"人源化"抗体。术语"免疫测定法"为使用特异性结合分析物的抗体的测定法。免疫测定法的特征在于使用特定抗体的特异性结合特性分离、靶向和/或定量分析物。当抗体在有蛋白质、多肽或肽存在下或有蛋白质和其它生物制品的异源群体存在下起决定作用的结合反应中起作用时，抗体与蛋白质、多肽或肽"特异性结合"或"与之发生特异性免疫反应"。因此，在设计的免疫测定条件下，具体的抗体优选结合特定的蛋白质、多肽或肽并且不以大量与存在于样品中的其它蛋白质、多肽类或肽类结合。在这类条件下特异性结合蛋白质、多肽或肽需要为对特定蛋白质、多肽或肽具有特异性而选择的抗体。本文所用的术语"识别"在认为抗体与特定蛋白质、多肽或肽或其中的区或表位结合时指的是所述的抗体与该蛋白质、多肽或肽或其中的区或表位"特异性结合"或"与之发生特异性免疫反应"。适用于本发明的抗体包括对APP或Ap具有特异性或更具体的说是对APP或AP的各种特定区具有特异性的任意抗体。合适的抗体描述在文献中并且为本领域技术人员所公知。对APP或A(3的特定区具有特异性的抗体可以由本领域技术人员使用常规技术研发。适合于本发明测定法的一种类型的抗体为对APP的sAPP(3区具有特异性的抗体。典型的sAPP(3特异性抗体包括LN27(对APP的N-末端的200个氨基酸具有特异性)，购自SouthSanFrancisco,California的ZymedLaboratories;P2-l，购自Golden,Colorado的AffinityBioReagentsofj22C11,购自Indianapolis,Indiana的BoehringerMannheimj和S-12，购自SanAntonio,Texas的AlphaDiagnosticInternational,Inc.。另一种适用于本发明测定法的体为对APP的Ap区具有特异性的抗体。对该区具有特异性的典型抗体包括WO-2，购自TorayCompany,Tokyo,Japan;和6E-10,购自SignetLaboratoriesofDedham，Massachusettes。另一种适用于本发明测定法的体为对Af3的C-末端具有特异性的抗体。典型的C画末端抗体包括购自TorayCompany,Tokyo,Japan的G2-10。另一种适用于本发明测定法的体为对Ap的N-末端具有特异性的抗体o、特异性合并抗体的蛋白质、多肽或肽和特异性合并免疫细胞的细胞表面受体的已加工肽类称作"抗原"。将"免疫原性肽"定义为在以合适范围的浓度注入合适的宿主动物和氨基k组成"肽序列。包'括修饰的p:分泌酶切割位点、(诸如，例如WO02/094985和US2003/0200555Al中披露的修饰的[3-分泌酶切割位点)的全部或部分的免疫原性肽使得抗体在宿主动物中产生，所述的抗体最终将修饰的P-分泌酶切割位点的肽序列识别为游离肽，并且在已加工的APP和APP变体的(3-分泌酶的末端时也是如此。上述免疫原性肽类还具有抗原特性，即这类免疫原性肽为抗原的方面在于每种这类免疫原性肽均特异性合并了对这类特异性肽增加的特定抗体。各种免疫测定方式可以用于筛选与特定蛋白质、多肽或肽发生特异性免疫反应的抗体。例如，固相ELISA免疫测定法常用于筛选与蛋白质、多肽或肽发生特异性免疫反应的单克隆抗体。参见Harlow&Lane，1988，Antibodies,ALaboratoryManual,ColdSpringHarborPublications,N.Y.，该文献中描述了可以用于测定特异性免疫反应性的免疫测定方式和条件。本文所用的术语"物质"指的是怀疑与APP或Ap发生相互作用并且能够阻断APP或A(3与分泌酶或APP或A(3结合抗体的相互作用的任意分子、化合物、分子或化合物的混合物或任意其它组合物。在本发明中筛选的"物质"可以为在制药工业中的药物研发过程中一般筛选的任意物质。这些物质可以为大分子，诸如生物聚合物，包括蛋白质、多糖类、核酸等。更通常的是，物质可以为具有低于约2kD，更通常的是低于1.5kD，通常低于1kD并且通常在100Da-1,000Da且甚至更通常地在200Da-750Da范围的分子量的化合物或小分子。可以基于不同标准预筛选一种或多种物质。例如，可以选择作为具有已知蛋白水解抑制活性的合适的物质。或者，可以通过本发明的筛选方法随机选择并且测试所述的物质。将能够在体外阻断APP或A(3与分泌酶或APP或A[3结合抗体的相互作用的物质视为用于进一步筛选其减少Ap在细胞和/或动物中产生的能力的候选物。可以在本发明的方法中作为大量采集的物质，例如低分子量有机化合物、肽类或天然产物的文库测试物质。尽管本文所述的测定法和筛选方法明显地涉及测试"一种"物质，但是对本领域技术人员显而易见的是，这类方法可以适用于测试多种物质，例如组合文库以便测定这类采集的任意成员是否结合APP。因此，采集的物质或这类采集的物质中的各成员的应用属于本发明的范围。本文所用的术语"测定条件"为有助于形成所述测定法中所需的结合相关性的条件。例如，测定条件可以为有助于或有利于在抗体与抗原之间形成复合物的条件(例如有利于形成sAPPp-抗体复合物的条件)。测定条件可以包括使用pH控制剂，例如乙酸钠；稀释剂，例如DMSO;緩冲剂，例如包括PIPES的緩冲溶液；洗涤剂，例如CHAPS;和/或阻滞剂，例如BSA。测定条件还可以包括使用商购的测定混合物，例如商购的蛋白酶抑制剂混合物。本文所用的术语"受体珠"指的是常用于测定法中的惰性珠。典型的受体珠包括来自购自PerkinElmerLifeSciences的AlphaScreenGeneralIgG检测试剂盒。术语"片段"指的是上文所述鉴定的氨基酸序列和/或任意变体或衍生物的任意片段。"sAPP(3片段"或"sAPP(3"指的是在p-分泌酶裂解APP时产生的约12kD的氨基末端片段。"C-末端片段"或"CTFp"指的是在(3-分泌酶裂解APP时产生的约99个氨基酸(也称作CTF99)的COOH-末端片段。或者，"C-末端片段"或"CTF(3"可以指含有APP的99个C-末端氨基酸和N-末端甲硫氨酸的100个氨基酸改造的蛋白质(也称作CTF100或C100)。CTF(3含有完整的AP结构域。使用"夹心式"测定法便利地进行本文所述的l3-分泌酶测定，其中通过裂解产生的氨基-末端或羧基-末端片段被俘获在固相上。然后可以使用对通过(3-分泌酶裂解暴露的片段末端具有特异性的抗体检测俘获的片段。典型的抗体包括对作为(3-分泌酶活性的结果产生的任意裂解产物增加的抗体。使用与抗体直接(共价)或通过中间体连接物质，诸如生物素和抗生物素蛋白间接结合的常用标记系统，诸如辣根过氧化物酶或其它可检测的酶标记来检测抗体与裂解的裂解产物的结合。这类"夹心式"测定法可以按照各种方式进行，包括基于IGEN的技术、HTRF、a筛选技术和本领域技术人员公知的其它技术。本文所用的术语"可测定的信号"包括任意类型的产生的信号，例如放射性、显色、光度、分光光度、闪烁，在放射性配体结合剂靶物结合时形成。本文所用的术语"C-末端"或"羧基-末端"为含有末端a-羧基的蛋白质或肽区。这些术语在本文中使用时指的是含有淀粉状蛋白P肽的a-羧基的区。本文所用的术语"N-末端"或"氨基末端"为含有末端a-氨基的蛋白质或肽区。这些术语在本文中使用时指的是含有淀粉状蛋白(3肽的a-氨基的区。本文所用的术语"分泌酶"指的是裂解APP而形成促淀粉状变肽类的蛋白酶，包括BACE1、BACE2和Y分泌酶。本文所用的术语"媒介物"指的是用作实验中的对照品的载体或活性物质所用的无活性培养基。例如，作为如本文所述的本发明测定法中所用的，将所关注的物质通常与稀释剂、pH控制剂和其它本领域技术人员为实施测定法所常用的无活性载体一起保温。在所述测定法中用作对照品的"媒介物"中，存在相同的稀释剂、pH控制剂和其它无活性载体。本文所用的术语"相互作用"指的是所关注的物质、配体或抗体与生物受体之间的结合和化学吸引的特性。本文所用的"相互作用"指的是物质配体或抗体与受体之间的任意类型的化学键，包括共价键、氢键或离子键。本发明在一个实施方案中涉及用于测定和评价物质与APP的在该实施方案中，将全;APP蛋白(或一APP变体蛋白)在第二种测试溶液中与所关注的物质与对APP的sAPP(3区具有特异性的第一种抗体一起保温。形成包括对APP的Ap区具有特异性的第二种抗体以及所关注的物质和APP或APP变体的第二种测试溶液。例如，第二种抗体可以对A(3的氨基酸1-17或28-40具有特异性。或者，第二种抗体可以对A(3的C-末端或N-末端具有特异性。在测定条件下形成包括媒介物、第一种抗体和APP或变体以及媒介物、笫二种抗体和APP或变体的两种对照溶液。还可以形成分别包括第一种和所关注的物质以及第二种抗体和所关注的物质的笫三种和第四种对照溶液。测定第一种和笫二种测试溶液以及第一种和第二种对照溶液购自中笫一种和第二种抗体各自的结合特性。结合测定值表示所关注的物质与APP的sAPPp区和与AP发生相互作用或与之结合的程度。为了测定所关注的物质的结合特性，可以使用配体结合对中的一种配体可检测地标记APP或变体。合适的标记APP或变体为生物素化APP或变体。在某些实施方案中，APP为APP变体，该变体为含有WO02/094985和US2003/0200555Al中披露的任意新(3國分泌酶P2-P1-P1'-P2'切割位点的修饰(3-分泌酶底物。可以将物质和APP(或变体)在约371C下保温约达24小时，优选约1小时。然后将保温混合物的溶液置于多孔平板的一个孔中。还可以将稳定剂，例如pH8.0的1MTris-Cl加入到该混合物中以^t中和结合反应。在一个实施方案中，制备用于所述测定法的珠。例如，笫一种珠混合物由如下珠形成(1)包括链霉抗生物素的珠；(2)含有定向于A(3的氨基酸28-40的多克隆的受体珠(例如来自AlphaScreenGeneralIgGDetectionKitPerkinElmerLifeSciences的蛋白质A受体珠)；(3)BSA;和(4)磷酸緩冲盐水，并且形成由如下珠形成的第二种珠混合物(1)包括链霉抗生物素的供体珠(2)含有定向于APP的N-末端200个氨基酸的单克隆小鼠抗体的受体珠(例如来自AlphaScreenGeneralIgGDetectionKitPerkinElmerLifeSciences的蛋白质A受体珠)；(3)BSA;和(4)磷酸緩冲盐水。此后，将运动战珠混合物与所关注的物质和APP(或变体)的保温混合物合并并且将该混合物保温过夜。将第二种珠混合物与所关注物质和APP(或变体)的保温混合物合并。分别形成包括媒介物、APP或APP变体和来自上述第一种和第二种混合物的受体珠的第三种和第四种混合物。然后读取孔-平板。链霉抗生物素包被的供体珠与存在于APP(或变体)上的生物素白矾发生相互作用并且受体珠通过APP的N-末端或A(3结构域的抗体发生相互作用而与APP(或变体)结合。不与笫一种或第二种具体结合位点上的APP发生相互作用的物质产生基本上与媒介物相同的信号。与APP发生非特异性相互作用的物质从溶液中沉降，这是因为APP无法接近任何抗体，并且在使用抗-A(3或APPN-末端抗体混合物时，与媒介物相比，信号减弱。与物质接近第一种或第二种抗体结合位点的APP发生特异性相互作用的物质产生特别对邻近该物质结合位点的抗体而言减弱的信号，而对更远端的抗体信号不会减弱。本发明在第二个实施方案中涉及用于检测和评价物质与A(3或AP变体肽类的N-末端和C-末端发生相互作用的测定法。该物质结合特性的测定值可以确定所述物质与A(3或Ap变体肽类发生相互作用或与之结合的程度。在该实施方案中，在测定条件下将AP(或变体)与在磷酸緩冲盐水中的緩沖液，例如BSA混合。还形成了结合緩沖液的对照混合。然后将结合混合物的溶液置于多-孔平板中。然后将结合反应体系在约37r下保温约1小时。将各反应溶液转入第二个测定平板，其中评价A(3(或AP变体肽)与抗体的相互作用。第一种珠混合物由如下珠形成(1)包括链霉抗生物素的供体珠；和(2)对A(3的C-末端具有特异性的标记抗体。第二种珠混合物由如下珠形成(1)受体珠(例如来自AlphaScreenGeneralIgGDetectionKitPerkinElmerLifeSciences的蛋白质A受体珠)；和(2)对A(3的氨基末端具有特异性的抗体。将该混合物在室温下保温约1小时，此后添加到淀粉状蛋白结合反应体系中。在多-孔平板的各孔中，加入第一种珠混合物、第二种珠混合物和緩沖液(例如在PBS中的BSA)。然后将平板保温过夜，并且检测与Af3的N-末端结合的抗体(例如通过ALPHAQUEST)。如果反应在有与A(3发生相互作用的物质存在下进行，那么信号减弱。如上戶斤述的测定法可以j吏用由BioSignalPackard，Inc.，Meriden，Connecticut研发的AlphaScreenT^支术。本领域中存在可以使用本发明的原理的其它结合测定技术，即使APP和物质的混合物接触第一种抗体，其中第一种抗体对APP的sAPP区具有特异性，并且接触第二种抗体，其中第二种抗体对APP的AP区具有特异性，并且测定该物质的结合特性。这些其它结合测定法包括配体-结合测定法，例如显色分光光度测定法，例如测定产生的颜色或荧光、磷光(例如elisa、固相吸附测定法)和其它放射性免疫测定法，其中产生短或长波光射线(包括紫外和y射线)。本发明在第三个实施方案中涉及根据本发明测定法鉴定的通式(i)的化合物。通式(i)的化合物与app或AP发生特异性相互作用并且阻断app与分泌酶或与a(3结合抗体的相互作用。通式(i)的化合物通过bace1和bace2抑制app加工，通过bace2抑制a(3加工并且通过y分泌酶抑制ctf(3(包括ctf99和ctf100)加工。认为通式(i)的化合物通过结合app的AP结构域中的app抑制bace和y分泌酶。本发明的化合物还可以作为y分泌酶作用的调节剂起作用，以便选择性弱化Ap1-42的产生，导致优先分泌A(3的较短链同种型(例如a(340)。认为较短链的同种型具有减弱的自聚集和空斑形成特性，且由此更易于从脑中被清除并且神经毒性较低。可以通过下列方案形成通式i的化合物。按照文献中对类似化合物所述的方法制备。在进行反应和纯化所得反应产物过程中所需的技能为本领域中公知的。纯化操作步骤包括结蒸馏、正相或反相色谘法。本发明进一步涉及制备用于治疗人和动物阿尔茨海默病的药物或晶组合物的方法，包括将本发明通式(I)的化合物与药物上可接受的载体或稀释剂合并。本发明还涉及制备药物的方法，该药物包括与APP或A(3发生特异性相互作用并且阻断APP或AP与分泌酶或与A(3结合抗体相互作用的化合物。本发明的另一个实施方案为通式(I)的化合物，它们选自如下实施例1-4的标题化合物及其药物上可接受的盐。本发明通式(I)的化合物具有治疗、控制或降低阿尔茨海默病风险度的应用。例如，这些化合物可以用于预防阿尔茨海默型痴呆以及用于治疗阿尔茨海默型的早期阶段、中期阶段或晚期阶段的痴呆。这些化合物还可以用于治疗、改善、控制或降低因APP异常裂解介导的疾病风险度和可以通过抑制APP的BACE裂解和抑制A(3聚集治疗或预防的其它疾病。这类疾病包括轻度认知缺损、21三体(唐氏综合征)、大脑淀粉样血管病、变性性痴呆、Dutch-型遗传性脑出血伴淀粉样变(HCHWA-D)、克-雅病、阮病毒病症、肌萎缩性侧索硬化、进行性核上性麻痹、头部创伤、中风、唐氏综合征、胰腺炎、包涵体肌炎、其它外周淀粉样变、糖尿病和动脉粥样硬化。本发明通式(I)的化合物还可以用作AD检测或诊断的正电子发射计算机断层成像(PET)配体。可以用正电子发射放射性核素标记本发明的化合物，对我们来说，在PET成像中作为PET配体。为了成像，合适的PET放射性核素包括3H、"C、18F、125I、82Br、123I、131I、7SBr、150、13N、21'At和77Br。最常用的PET放射性核素为"C、18F、"O和13N。掺入本发明应用。本发明还涉及包括本发明化合物和至少一种药物上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。本发明还涉及用于标记哺乳动物的APP或A(3的方法，包括对有这类标记需要的哺乳动物给予有效量的本发明放射性标记的化合物。本发明还涉及用于哺乳动物的APP或Ap诊断成像的方法，包括对有这类诊断成像需要的哺乳动物给予有效量的本发明放射性标记的化合物。本发明还涉及用于哺乳动物的大脑诊断成像的方法，包括对有这类诊断成像需要的哺乳动物给予有效量的本发明放射性标记的化合物。在本发明方法优选的实施方案中，所述的哺乳动物为人。术语"药物上可接受的盐"指的是由药物上可接受的无毒性碱或酸，包括无机碱或有机碱和无机酸或有机酸制备的盐。来源于无机碱的盐包括铝、铵、钓、铜、三价铁、亚铁、锂、镁、锰盐、亚锰、钾、锌等。特别优选铵、钙、镁、钾和钠盐。固体形式的盐可以以一种以上晶体结构存在，并且还可以以水合物的形式存在。来源于药物上可接受的有机无毒性碱的盐包括如下胺类的盐伯、仲和叔胺类；取代的胺类，包括天然存在的取代胺类；环胺类；和碱性离子交换树脂，诸如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N'-二节乙烯-二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二曱氨乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基-吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、海巴明、异丙胺、赖氨酸、曱葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤类、可可碱、可可碱、三曱胺、三丙胺、氨基丁三醇等。当本发明通式(I)的化合物为碱性时，可以由药物上可接受的无毒性酸，保留无机酸和有机酸制备盐。这类酸包括乙酸、苯磺酸、苯曱酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、马来酸、苹果酸、曱磺酸、粘酸、硝酸、朴酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、疏酸、酒石酸、对-甲苯磺酸等。特别优选柠檬酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸、富马酸和酒石酸。本文所用的术语"烷基"作为自身或作为另一取代基的组成部分指的是带有指定碳原子数的饱和直链或直链烃基(例如Cw。烷基指的是带有1-10个碳原子的烷基)。用于本发明的优选的烷基为带有1-6个碳原子的C,—6烷基。典型的烷基包括甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等。本文所用的术语"烷氧基"作为自身或作为另一取代基的组成部分指的是基团-O-R，其中R为如上述所定义的烷基。用于本发明的优选的烷氧基为带有1-6个碳原子的Cw烷氧基。典型的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、异丙氧基等。术语"卤素(halo)"或"卤素(halogen)"包括氟、氯、溴和碘。本发明通式(I)的化合物所给予的受试者或患者一般为男性或女性人体，在他们中，需要与APP或Af3的特异性相互作用，但也可以包括其它哺乳动物，诸如狗、小鼠、大鼠、牛、马、绵羊、家兔、猴、黑猩猩或其它猿或灵长类，对它们而言需要与APP或A卩或与APP或AP的特异性相互作用。本发明通式(I)的化合物可以与治疗本发明通式(I)的化合物具有应用的疾病或疾患的一种或多种其它药物联用，其中所述药物彼此的组合比单独的药物更为安全或更为有效。另外，本发明通式(I)的化合物可以与治疗、预防、控制、改善或降低本发明通式(I)的化合物的副作用或毒性的风险度的一种或多种其它药物联用。可以通过常用途经和用量以与本发明通式(I)的化合物同时或依次的方式给予这类其它药物。因此，本发明的药物组合物包括那些含有一种或多种其它活性组分与本发明通式(I)的化合物的那些组合物。可以将该组合作为单位剂型联用产品或作为试剂盒或治疗方案的组成部分给药，其中将一种或多种额外的药物作为治疗方案的组成部分在单独的剂型中给药。在单位剂型或试剂盒形式中的本发明通式(I)的化合物与其它药物的组合的实例包括与一种或多种如下活性剂的组合抗阿尔茨海默病药，例如其它(3-分泌酶抑制剂或Y-分泌酶抑制剂；HMG-CoA还原酶抑制剂；NSAID's，包括布洛芬；维生素E;抗-淀粉状蛋白抗体，包括人源化单克隆抗体；组织蛋白酶B抑制剂；CB-1受体拮抗剂或CB-1受体反激动剂；抗生素，诸如多西环素和利福平；N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂，诸如美金刚；胆碱酯酶抑制剂，诸如加兰他敏、利凡斯的明、多奈哌齐和他克林；生长激素促分泌素，诸如伊布莫仑、甲磺酸伊布莫和卡普瑞林；组胺H3拮抗剂；AMPA激动剂；PDEIV抑制剂；GABAA反激动剂；神经元烟碱性激动剂；或影响本发明通式(I)的化合物的功效、安全性、便利性或减少不需要的副作用或毒性的受体或酶的其它药物。上述组合的实例仅为解释性的并且并以任何方式起限定作用。本文所用的术语"组合物"用以包括以预定量或比例的具体组分的产品以及直接或间接由具体量的具体组分的组合形成的任意产品。涉及药物组合物的该术语用以包括含有一种或多种活性组分和含有惰性组分的可选载体的产品以及直接或间接由任意两种或多种组分组合、复合、或聚集或由一种或多种组分混合或由一种或多种组分的其它类型的反应或相互作用形成的任意产品。一般来说，通过下列步骤制备药物组合物将活性组分均匀和紧密混入液体载体或固体载体细粉或它们两者，且然后如果需要，将使产物形成所需的制剂。在药物组合物中，包括在疾病过程或情况中足以产生所需作用的用量的活性成分主体化合物。因此，本发明的药物组合物包括通过将本发明化合物与药物上可接受的载体混合制成的任意组合物。可以按照用于制备药物组合物领域中公知的任意方法制备口服应用的药物组合物，并且这类组合物可以含有一种或多种选自增甜剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的试剂，以便提供美观和适口的药物制剂。片剂可以含有活性组分与适合于制备片剂的无毒性的药物上可接受的赋形剂的混合物。这些赋形剂可以为例如惰性稀释剂，诸如碳酸钾、碳酸钠、乳糖、磷酸钓或磷酸钠；成粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸镁或滑石粉。可以不对片剂包衣或可以通过公知技术给它们包衣以便延緩在胃肠道中的崩解和吸收，且由此在较长期限内提供持续的作用。还可以将口月良应用的组合物制成活性组分与例如碳酸钩、裤酸该或高呤土这类惰性固体稀释剂混合的硬胶嚢，或制成活性组分与水或例如花生油、液体石蜡或橄榄油这类油介质混合的软胶嚢。其它药物组合物包括含水混悬液，其含有活性物质与适合于制备含水混悬液的赋形剂的混合物。此外，可以通过将活性组分悬浮于植物油，例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油或诸如液体石蜡这类矿物油中配制油混悬液。油混悬液还可以含有不同的赋形剂。本发明的药物组合物还可以为水包油型乳剂，其还可以含有诸如增甜剂和矫味剂这类赋形剂。所述的药物组合物可以为可以按照公知领域配制的无菌可注射水或油混悬液的形式，或可以将它们以用于直肠给药的栓剂形式给药。还可以通过吸入，借助于本领域技术人员公知的吸入装置或通过透皮贴剂给予本发明通式(I)的化合物。所谓"药物上可接受的"是指所述的载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂中的其它组分相容并且对其接受者而言无害。应将术语化合物的"给药"或"给予"理解为指的是对需要治疗的个体提供一定形式的本发明通式(I)的化合物，可以将其形式以治疗上有用的剂型和治疗上有用的量导入个体体内，包括，但不限于口服剂型，诸如片剂、胶嚢、糖浆剂、混悬液等；可注射剂型，诸如IV、IM或IP等；透皮剂型，包括霜剂、凝胶剂、粉末或贴剂；口含剂型；吸入粉末、喷雾剂、混悬液等；和直肠用栓剂。术语"有效量"或"治疗有效量"指的是引起研究人员、兽医、医生或其它临床医师寻求的组织、系统、动物或人的生物或医学反应的主题化合物的量。本文所用的术语"治疗"指的是治疗上述疾病，特别是表现出所述疾病或病症的症状的患者。本文所用的术语"治疗(treatment)"或"治疗(treating)"指的是本发明化合物的任何给药并且包括(1)抑制经历或展现出疾病的病理或症状的动物中的疾病(即阻止病理和/或症状进一步发展)；或(2)症i逆转^:术语"控制"包括^防、、治疗、根除、改善，否则就是^轻所控制疾病的严重程度。可以便利地将含有本发明通式(I)化合物的组合物制成单位剂型并且可以通过制药领域中众所周知的任意方法制备。采用术语"单位剂型"指的是在合适的系统中合并所有活性和非活性组分的单剂量，使得患者或对患者给药的人可以打开其中包含完整剂量的单一容器或包装，并且不必将来自两个或多个容器或包装的任何充分进行混合。单位剂型的典型实例为口服给药用片剂或胶嚢、注射用单剂量小瓶或直肠给药用栓剂。这一单位剂型的目录并不以任何方式起限定作用，而仅用于代表单位剂型的典型实例。可以将含有本发明通式(I)化合物的组合物便利地制成试剂盒，其中配有可以为活性或非活性组分的两种或多种成分、载体、稀释剂等与患者或对患者给药的人制备实际剂型的说明书。这类试剂盒中可以配有其中包含的所有必需的物质和组分，或它们可以含有使用或制备必须由患者或对患者给药的人独立获得的物质或成分的说明书。如果治疗、改善、控制或降低本发明通式(I)化合物所针对的阿尔茨海默病或其它疾病的风险度时，那么一般在以约0.1mg-约100mg/kg动物体重的每日剂量给药时，获得了令人满意的效果，优选作为单次每日剂量或每天2-6次的分次剂量或以緩释剂型的形式给予。总每日剂量约为1.0mg-约2000mg，优选约0.1mg-约20mg/kg体重。就70kg成年人而言，总每日剂量一般在约7mg-约1，400mg。可以调整该剂量方案以便提供最佳治疗反应。可以基于每天1-4次，优选每天1次或2次的方案给予本发明通式(I)的化合物。用于给药的本发明通式(I)的化合物或其药物上可接受的盐的具体剂量包括lmg、5mg、10mg、30mg、80mg、100mg、150mg、300mg和500mg。可以将本发明的药物组合物制成制剂，它包括约0.5mg-1000mg活性组分；更优选包括约0.5mg-500mg活性组分；或0.5mg-250mg活性组分；或1mg-100mg活性组分。用于治疗的具体药物组合物可以包括约1mg、5mg、10mg、30mg、80mg、100mg、150mg、300mg和500mg活性纟且分。然而，可以理解任何特定患者的具体剂量水平和剂量频率均可以改变并且取决于各种因素，包括所用具体化合物的活性、化合物的代谢稳定性和作用期限、年龄、体重、一般健康情况、性别、膳食、给药方式和时间、排泄率、药物组合、特定疾病的严重程度和宿主进行的疗法。提供下列实施例的目的仅在于进一步解释，而不对披露的本发明起限定作用。实施例1{[6-(3-苯氧基丙基)-2-(2-苯基乙基)-2，3-二氢-1-苯并呋喃-5-基氧基}乙酸步骤A向在-78iC下的5-甲氧基苯并呋喃(148gm;1mole)在THF(2L)中的溶液中滴加在己烷(420mL;1.05moles)中2.5摩尔的正-丁基锂。将该混合物在-78X:下搅拌1.5小时且任何在15分钟内加入苯基乙醛(144g，1.2mole)。除去冷却浴并且允许该混合物逐步升至0"C。加入水(600mL)。分离醚层，用MgS(^干燥，过滤并且在真空中浓缩。使用增加极性的5%、10%、20%和30%在己烷中的乙酸乙酯的溶剂混合物对粗品进行硅胶(2kg)色谙而得到2-(l-羟基-2-苯基乙基)-5-甲氧基苯并呋喃，m.p.69-70"C。步骤B向在51C下和氮气环境中的氯化铝(204gm;1.5moles)在甲苯(2.5L)中的混合物按照50gm的部分加入正丁基胺硼烷(200gm;2.3moles)。在搅拌30分钟后，滴加在化合物l-A(238g，880mmol)在曱苯(600mL)中的溶液。将该混合物在5。C下搅拌2小时且任何分部分加入到搅拌的10%盐酸的水冷混合物(3L)中。持续搅拌至发泡停止。分离有机层并且用MgS(^干燥，过滤且在真空中浓缩。使用15%乙酸乙酯作为洗脱剂对残余物进行硅胶(2kg)色谱而得到2-(2-苯基乙基)-5-曱氧基苯并呋喃。步骤C在5TC下和15分钟内将三氟乙酸(232mL;30moles)加入到2-(2-苯基乙基)-5-甲氧基苯并呋喃from步骤1-B(128gm;500mmol)在三乙基硅烷(465mL;2.8moles)中的混悬液中。将该混合物在此温度下搅拌1小时并且在室温下搅拌18小时。浓缩该混合物并且溶于乙醚，用1N氢氧化钠洗涤，用MgS04干燥，过滤并且浓缩。对残余物进行色谱(5%EtOAc/己烷)而得到2-(2-苯基乙基)-5-曱氧基-2，3-曱氧基苯并呋喃。步骤D在氮气糊精中将乙硫醇(62gm;1mole)滴加到在DMF(700mL)中的氢化锂(8g;1.0mol)中。然后一次加入在DMF(200mL)中的2-(2-苯基乙基)-5-甲氧基-2，3-二氢苯并呋喃(126g，500mmol)并且使该混合物达到回流状态下3小时。将该混合物倾入1N盐酸并且用乙醚提取。分离醚层并且用水洗涤两次，用MgS04干燥，过滤并且在真空中浓缩而得到123g(98。/。)的5-羟基-2-(2-苯基-乙基)-2，3-二氢苯并呋喃，m.p.56-581C。步骤E将5-羟基-2-(2-苯基乙基)-2，3-二氢苯并呋喃(5.0g，20.8mmol)、碳酸钾(5.5g;40.0mmol)、烯丙基溴(4.8g，40.0mmol)和丙酮(50mL)的混合物回流18小时。冷却该混合物，用己烷(25mL)稀释并且通过C盐过滤。在真空中浓缩滤液并且使用10"/oEtOAc/己烷对残余物进行硅胶色镨而得到5-烯丙氧基-2-(2-苯基乙基)-2，3-二氢苯并吹喃。步骤F将5-烯丙氧基國2画(2國苯基乙基)-2(4.7g,16.7mmol)1，2醫二氯苯(IOmL)中的混合物回流过夜。浓缩该混合物并且使用10%EtOAc/己烷对残余物进行硅胶色谱而得到4.1g(87"/。)纯的异构体混合物，通过色谱法进一步分离(50"/。己烷/DCM)而得到6-烯丙基-5-羟基-2-(2-苯基乙基)-2，3-二氢苯并呋喃，m.p.79-801C。步骤G将6-烯丙基-5-羟基-2-(2-苯基乙基)-2，3-二氢苯并呋喃(2.8g，lO.Ommol)、碳酸钾1.38g，10.0mmol)、爷基溴(1.7g,10.0mmol)和丙酮(50mL)的混合物回流18小时。冷却该混合物，用乙醚(25mL)稀释并且通过C盐过滤。蒸发溶解得到所需的千醚I-G。步骤H向在0"C下来自步骤1-G的烯烃(2.0g，4.6mmol)在THF中的溶液中加入1M在THF中的硼烷(14mL，14mmol)并且将该反应混合物搅拌2小时。用三甲胺-N-氧化物(2.15gm，19.4mmol)处理该反应混合物并且将整个体系回流8小时。在真空中浓缩该反应体系并且使用30%EtOAc/己烷作为洗脱剂对残余物进行硅胶色谱而得到所需化合物。步骤I向醇1-H(900mg，2.1mmol)在20mLDCM中的溶液中加入三苯膦(l.lgm，4.2mmol)和四溴化碳(1.4gm，4.2mmol)。将所得混合物在室温下搅拌15分钟，任何使用己烷，随后是5%EtOAc/己烷作为洗脱剂进行色镨而得到标题化合物。步骤J将苯酚(1.4g，15.2mmol)加入到在DMF(20mL)中的95%氬化钠(365mg;14.5mmol)中。在搅拌30分钟后，加入溴化物1-1(870mg;1.69mmol)在DMF(3mL)中的溶液并且将该混合物在室温下搅拌3小时。将该混合物倾入过量的INHC1并且用乙醚提取。用1N氢氧化钠将醚侧目光洗涤两次，干燥(MgS04)，过滤并且在真空中浓缩。使用5%在己烷中的乙酸乙酯对残余物进行硅胶色谱而得到630mg(82n/o)的5-节氧基-2-(2-苯基乙基)-6-(3-苯氧基丙基)-2，3-二氢苯并吹喃，为油状物。H醒R51.86-2.25(m，4H)，1.15-2.95(m，5H)，3.24(dd，1H，J=16Hz，J=8.5Hz)，3.96(t，3H，J=6.5Hz)，4.6-4.83(m，1H)，4.99(s，2H)，6.65(s，1H)，6.77(s，1H)，6.80-7.0(m，2H)，7.1画7.5(m，13H)。步骤K在-78X:下将三溴化硼溶液(lMDCM:1.9mL;1.88mmol)滴加到来自步骤1-J的节醚在二氯甲烷(30mL)中的溶液中。将该混合物搅拌10分钟且任何滴加曱醇(0.5mL)。使该混合物达到室温并且加入饱和碳酸氢钠溶液。分离有机层，干燥(MgS04)，过滤并且在真空中浓缩。使用20%EtOAc/己烷对残余物进行硅胶色谱而得到5-羟基-2-(2-苯基乙基)-6-(3-苯氧基丙基)-2,3-二氢苯并呋喃，65-70"C;1HNMRS1.86画2.24(m，4H)，2.68-2.95(m，5H)，3.2(dd，1H，J=15Hz，J=7.4)，4.0(t，2H，J=5.5)4.67-4.83(m，1H)，5.21(s,1H)，6.58(s，1H)，6.67(s，m)，6.88-7.04(m，3H)，7.13-7.39(m，7H)。步骤L向来自步骤1-K的苯酚(151mg，0.37mmol)在DMF(12mL)和碳酸铯(120mg，0.37mmol)中的溶液中加入溴乙酸叔丁酯(0.05mL，0.37mmol)并且将该混合物在室温下搅拌18小时。使该反应混合物分配在乙醚与饱和碳酸氢钠之间并且分离。用水将有机相洗涤7次并且干燥和浓缩。将所得固体不经进一步纯化直接用于下一步反应。步骤M向来自步骤l-L的化合物(195mg，0.37mmol)在DCM(2mL)中的溶液中加入2mLTFA并且将该混合物在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂并且进行反相色谱而得到所需化合物。1HNMRS(CDC13，250MHz)1.89画2.23(m，4H)，2.71-3.30(m，6H)，4.02(t，2H，J=7Hz)4.58(s，2H)，4.76(m，1H)，6.64(s，1H)，6.66(s，1H)，6.91-6.98(m，3H)，7.18画7.33(m，8H)。实施例6-[3-(2氯苯氧基)丙基)-2-(2-苯基乙基)-2，3-二氢-l-苯并呋喃-5-基]氧基}乙酸按照与化合物1类似的方式制备该化合物，但用2-氯苯酚取代步骤1-J中的苯酚。1HNMRS(CDC13，400MHz)1.89國2.23(m，4H)，2.71-3.30(m，6H)，4.02(t，2H，J=7Hz)4.58(s，2H)，4.76(m，1H)，6.64(s，1H)，6.88-6.98(m，3H)，7.2-7.4(m，7H)。实施例32-(2-苯基乙基)-2，3-二氢-1-苯并呋喃-5-基氧基}乙酸步骤A向含有120mg(0.5mmol)5-羟基-2-(2-苯基乙基)-2，3二氢苯并呋喃(实施例l-D)和0.088mL(0.6mmol)溴乙酸叔丁酯在3mLTHF中的溶液中加入15mg(0.6mmol)NaH粉末。将该反应体系搅拌5小时，此后用水使该体系猝灭并且用乙醚提取。将柱色镨法(30%EtOAc/己烷)而得到所需酯，为油状物。LCMS(M+Na=377.11)。步骤B将来自步骤3-B的酯的溶液(71mg，0.2mmol)溶于2mLDCM并且用2mLTFA处理。将该反应混合物搅拌3小时，此后将其浓缩并且通过反相色谱法纯化。1HNMR5(CDC13，400MHz)1.85画1.91(m，1H)，2.05-2.2(m，1H)，2.71-2.91(m，3H)，3.25(dd，1H)，4.58(s，2H)，4.77(m，1H)，6.65(s，2H)，6.80(s，1H)，7.2画7画4(m，6H)。实施例46-{3-[2-氯-4-(111-四唑-5-基)苯氧基丙基}-2-(2-苯基乙基)-2，3-二氢-1-苯并呋喃-5-醇按照Lau等在J.Med.Chem.，(1992)，35(7)，1299-318中所述的方法合成该4t合物。发现实施例1-4抑制全长APP的BACE裂解。然而，这些化合物在使用短肽底物的测定法中不与BACE发生相互作用。推定所述的化合物可以与APP底物而非BACE酶发生相互作用，或所述的化合物可以与全长APP非特异性结合，从而赋予APP蛋白不溶性并且不易于接近BACE。为了测定实施例1-4的抑制方式，研发了下列测定法。实施例5在测定条件下将生物素化APP变体(400nM)与实施例1-3合并(50mM乙酸钠，pH4.5;Ix蛋白酶抑制剂混合物(Rochecat#1836153);100g/mL牛血清清蛋白0.2%CHAPS)。与媒介物，包括DMSO(化合物稀释剂)一起保温，并且进行缺乏APP变体的保温作为每次实验的对照组。将各混合物在37t:下保温1小时。此后，70pL保温混合物各自置于96-孔平板的其自身的孔中。将5卩iLpH8.0的1MTris-Cl加入到各孔中以便中和任何结合反应。在实施例5A中，由如下珠制备ALPHA珠混合物(1)20pig/mL链霉抗生物素供体珠；(2)含有150ng/mL定向于A(3的C-末端区的家兔多克隆抗体的20pg/mL蛋白质A受体珠(来自AlphaScreenGeneralIgG(蛋白质A)DetectionKitPerkinElmerLifeSciences;10,000pts(PartNumber6760617M));和(3)0.1%牛血清清蛋白。将所述的珠在磷酸緩冲盐水中合并。在实施例5B中，由如下珠制备ALPHA珠混合物(1)20pg/mL链霉抗生物素供体珠；(2)含有160ng/mL定向于APP的N-末端区的家兔单克隆抗体LN27的20|iig/mL蛋白质A受体珠(来自AlphaScreenGeneralIgG(蛋白质A)DetectionKitPerkinElmerLifeSciences;10,000pts(PartNumber6760617M));和(3)0.1%牛血清清蛋白。将它们在磷酸緩沖盐水中合并。在5A和5B中，将46|LiLALPHA珠混合物与4|LiL各保温混合物合并。将所述的珠在室温下和黑暗中保温过夜。第2天，使用ALPHAQUEST读取平板以便测定抗体的结合程度。不与5A和5B的抗体结合位点上的APP或APP变体发生相互作用的化合物会产生基本上与媒介物相同的可测定信号。与APP或APP变体非特异性结合的化合物使得APP或APP变体从溶液中沉淀。作为结果，蛋白质不应易于接近任何抗体并且可测定的信号与媒介物相比应减弱。与接近所述抗体之一结合位点的APP或APP变体发生相互作用的化合物会对与化合物结合位点邻近的抗体显示出减弱的信号。然而，该信号对在非邻近位点上的抗体不应减弱。实施例5A和5B的结果表明实施例1和2的化合物与C-末端结合位点邻近的其AP结构域内的APP变体发生相互作用。实施例3的化合物与接近任一抗体结合位点的APP变体几乎不或不发生相互作用。实施例6还评价了结合接近AP结构域的C-末端区的APP变体的化合物以便确定化合物是否抑制APP的Y-分泌酶裂解。因此，如Li，2000,Proc.NatlAcadSd.97:6138-6143中所述，测试实施例l-4抑制全长CTF(3底物的，分泌酶裂解的能力。如下进行测定CTF(3裂解的抑制裂解反应25)liL2|LlL5juL7|uL511|LlLIOX蛋白酶抑制剂混合物(Roche,cat#1836153)4X緩冲液(50mMPIPESpH7.0'150mMKCl，5mMMgCl2，5mMCaCl2)10%CHAPSO用于，分泌酶活性表征的海拉细胞膜提取物25)liM细菌表达的CTF(3水在DMSO的化合物将反应体系在371C下保温150分钟并且用255XRIPA緩冲液(750mMNaCl，5%NP-40,2.5%DOC，0.5%SDS，250mMTrisH8.0)猝灭。检测通过下列步骤评价CTF(3底物的，分泌酶裂解将与对A(3的N-末端区具有特异性的25^il4ing/mL生物素化抗体6E-10的50^L反应体系和对AP40的C-末端区具有特异性的25/|iiL1.5jag/mL生物素化(ruthinylated)抗体G2-10—起保温。C-区仅在Ap的，分泌酶裂解后存在。使抗体在室温下结合过夜。第2天将"pLS0^ig/mL链霉抗生物素包被的Dynabeads(M-280)加入到各反应体系中，使其结合30分钟，并且使用275pLIGEN测定緩冲液猝灭。使用Origen分析仪对，分泌酶裂解产物进行定量。结果检测实施例l-4对CTFP的，分泌酶裂解的抑制。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>如上所示，实施例l-3各自抑制Y-分泌酶裂解CTFp。实施例7还可以预计与结合APP(或APP变体)的A(3结构域的分泌酶或抗体发生相互作用的化合物与A(3或相关促淀粉状变肽类发生相互作用。将如WO02/094985和US2003/0200555Al中所述的与A卩l-40相似，但含有取代N-末端两个氨基酸的Glu和Val的Ap变体肽(下文称作"EV-淀粉状蛋白")用于评价苯并呋喃类与淀粉状蛋白肽之间的相互作用。如果使用实施例5中的全长APP变体，那么将抗体结合位点的掩蔽用于测定潜在的相互作用。如下进4于测定1.如下制备EV-淀粉状蛋白肽在结合緩沖液中的主混合物10650ILiL0.1%在磷酸緩冲盐水中的牛血清清蛋白，UOO|LiL10X蛋白酶抑制剂混合物(Roche，cat#1836153)，30)uLEV淀粉状蛋白肽(在DMSO中4iliM)。2.通过将0.1%在磷酸緩沖盐水中的牛需求清蛋白、IOX蛋白酶抑制剂混合物和DMSO按照相同比例合并制备结合緩冲液的阴性对照混合物。3.将99|LiL所述的主混合物和阴性对照混合物分布在96-孔平板的各孔中。4.将1在DMSO中的实施例1-4或单独的DMSO(媒介物)加入到各孔中。5.然后将结合反应体系在37r下保温1小时。6.将20pL各反应体系转入第二个测定平板。通过经使用ALPHA检测的抗体夹心式测定法对EV淀粉状蛋白肽定量来评价EV淀粉状蛋白与抗体之间的相互作用。7.为了进行EV-淀粉状蛋白检测，制备下列两种溶液溶液1:24|uL链霉抗生物素供体珠(5mg/mL，来自AlphaScreenGeneralIgG(蛋白质A)DetectionKitPerkinElmerLifeSciences;IO，OOOpts(PartNumber6760617M)),2.3jliL生物素化抗体G2-10(对A(3的C-末端区具有特异性)，1173.750mMHepespH7.5。溶液2:24|uL蛋白质A受体珠(5mg/mL，来自AlphaScreenGeneralIgG(蛋白质A)DetectionKitPerkinElmerLifeSciences);10,000pts(PartNumber6760617M)),10.4|uL与EV淀粉状蛋白的氨基末端上的NH2-EVEFR发生特异性相互作用的抗体，1165.650mMHepespH7.5。将所述的溶液在室温下保温1小时，此后加入到EV-淀粉状蛋白结合反应体系中。8.向含有EV淀粉状蛋白结合反应体系的96-孔平板中的各孔中加入10iliL溶液1、10iliL溶液2和10nL0.1%在PBS中的BSA。9.将平板在室温下和黑暗中保温过夜并且通过ALPHAQuest检测与EV-淀粉状蛋白结合的抗体。使用结合A(3的抗体观察到了对抗体结合EV-淀粉状蛋白的抑制。实施例1和2两者均抑制app的bace加工和ctf(3的y-分泌酶加工，并且两者均阻断抗体与APP结合，这两者均抑制抗体与EV淀粉状蛋白结合的约40°/。。既不阻断APP的加工，又不阻断抗体与APP的相互作用的实施例3对抗体与EV-淀粉状蛋白的相互作用没有影响。实施例8BACE2酶裂解A(3结构域内几个不同位置上的APP。APP的A(3结构域内不同切割位点上的BACE2裂解的分化抑制有助于证实抑制是因化合物与底物而非与裂解酶的相互作用所致。APP的BACE2裂解的抑制如下检测实施例l-4对(3-分泌酶切割位点上的APP裂解的作用裂解反应25|uL0.2M乙酸钠，pH4.510juL10X蛋白酶抑制剂混合物(Roche,cat#1836153)10牛血清清蛋白(lmg/mL溶液)4)iiL50/0CHAPS1EDTA(150mM，pH4.5)2juLDF4MBP(麦芽糖结合蛋白)-含有NFEVBACE切割位点的生物素化AP融合蛋白(细菌表达的，lOpM溶液)1DMSO或溶于DMSO的化合物2|uLBACE2(CHO细胞表达的蛋白，250nM)41蒸馏水将反应体系在37X:下保温:30分钟且然后使用4|liL1MTrisHCl,pH8.0捽灭。使用ALPHA检测MBP生物素APP(NF)裂解产物如下制备ALPHA测定混合物20pL链霉抗生物素供体珠(来自AlphaScreenGeneralIgG(蛋白质A)DetectionKitPerkinElmerLifeSciences;10,000pts(PartNumber6760617M)20|liL蛋白质A受体珠(来自AlphaScreenGeneralIgG(蛋白质A)DetectionKitPerkinElmerLifeSciences);10,000pts(PartNumber6760617M)3.7亲和纯化的抗-NF抗体(203g/mL)(WO02/094985中所述)4.50.1%在PBS中的BSA将4|liL猝灭的反应混合物与46测定混合物合并。将反应体系在室温下保温过夜并且使用ALPHAQuest平板读出器读取。结果:<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>实施例3对BACE1无活性，而对BACE2具有弱活性。实施例1、2和4能够抑制(3-分泌酶位置上APP的BACE2裂解，具有的有效性与其对相同位点上BACE1裂解的抑制相似。实施例9使用Shi等在2003，J.Biol.Chem.，278:21286-21294中所述的方案检测抑制EV淀粉状蛋白的BACE2裂解的作用。实施例1-4在100|uM下的检测结果如下所示:<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>-无作用。NS-无信号所有测试的4种化合物均破坏了34位上的BACE2裂解。使用实施例1、2和3可能无法测定对19和20位上裂解的作用，这是因信号极弱所致。然而，实施例2基本上促进了19和20上的裂解，从而证实了对APP的BACE2裂解的位置依赖性作用。附图1表示在有和没有100实施例4和实施例1化合物存在下A(3的BACE2裂解的质i普分析。实施例4促进了19和20位上A卩的裂解，但阻断了34位上的裂解，而实施例4抑制了所有A(3位点上的裂解。该数据证实本发明的化合物可以作为分泌酶裂解的调节剂起作用。实施例10将含有增强的BACE裂解序列的细菌表达的APP变体与实施例2和BACE1蛋白在37。C下保温1小时以便进行蛋白质印迹分析。使反应在凝胶上进行并且印迹。使用特异性识别BACE裂解后出现的N-末端产物的抗体检测BACE-特异性裂解产物。附图2(A)描绘了蛋白质印迹。附图2(B)为蛋白质印迹的光密度定量，表明使用抑制APP的BACE裂解具有11|LiM的IC50。实施例11附图3表示抑制素-Val和实施例4对全长APP和P-位点P5/P5'肽，即APP片段的BACE1裂解的抑制。附图3(A)描绘了被为APP和APP片段，包括(3-位点P5/P5'肽片段的BACE裂解的已知抑制剂的抑制素-Val的抑制。附图2(B)描绘了被实施例4的抑制。这些示意图描绘了全长APP底物(O)或P-位点P5/P5'片段(口)的抑制。显示可与DMSO-处理的BACE裂解相比的酶活性。抑制素-Val和实施例4对APP和基于肽的底物裂解显示出抑制，而实施例4仅抑制APP的裂解。实施例12将实施例1的化合物滴定入表达CTF99的H4神经胶质瘤细胞。用实施例1的化合物将细胞处理20小时并且收集条件培养基。通过ECL检测分泌的淀粉状蛋白x-42和x-40的水平(Li等，2000，Proc.Nat'lAcad.Sci.97:6138-6143，并且测定A(342和A04O的产生砌绘图，如附图4中所示。结果证实本发明的化合物调节Ap肽类的产生以便与A卩40的产生相比减少A(342的产生。实施例13认为通式(I)的化合物通过结合APP抑制APP的裂解功能。通过BiacoreS51检测实施例1的化合物与APP的结合。使生物素^f匕APP和生物素化sAPPb与SA-包被的传感器芯片固定。注射实施例1的滴定液并且对两种蛋白质获得每种实施例1浓度的结合反应。附图5为结合APP的化合物2(〇)或BACE1抑制剂抑制素-Val(口)的响应单位的示意图，数据表明实施例1的化合物结合APP，但不结合sAPPp，并且BACE抑制剂，即抑制素-Val既不结合APP，也不结合sAPPp。实施例1的化合物结合APP的能力与其通过几种不同的酶抑制APP加工的合并表明APP加工的抑制可能是因化合物与APP之间而非该化合物与酶之间的相互作用所致。在本文的上下文中的使用如下缩写Me:曱基Et:乙基Bu:丁基tBu:叔丁基Ar:芳基Bn:卡基THf:四氢吹喃TFA:三氟乙酸TPP:磷酸三苯酯DMF:N，N'-二甲基甲酰胺DCM:二氯曱烷BSA:牛血清清蛋白CHAPSO:3-(胆酰氨基丙基)二甲铵l-2-羟基-l-丙磺酸酯CHAPS:3-[(胆酰氨基丙基)二曱铵卜l-丙磺酸酯DMSO:二甲亚砜RIPA:放射性免疫沉淀测定法PIPES:哌"秦-N，N'-双(乙磺酸)PBS:砩酸緩冲盐水EDTA:乙二胺四乙酸尽管描述并且参照本发明的某些具体实施方案解释了本发明，但是本领域技术人员可以理解可以在不脱离本发明实质和范围的情况下对操作步骤和方案进行各种变型、改变、修改、取代、缺失或添加。法的变型结果，以便由上述本发明的;法制:所述的化合物。li];羊，、并且这类预计的结果中的变型;i别为本发明的目'的和实施所丄注。因此，本发明由如下的权利要求的范围所定义并且这类权利要求被解释为以尽可能合理的宽范围。进一步可以理解的是所有的值均为近似值并且提供它们是为了描述。本申请的全文中引述了专利、专利申请、公开文献、产品描述和方案，为所有目的而将这些文献披露的全部内容引入本文作为参考。权利要求1.用于测定物质与淀粉状蛋白前体蛋白(APP)或淀粉状蛋白β肽(Aβ)的相互作用的方法，该方法包括(a)在有利于形成sAPPβ-抗体复合物的条件下形成第一种测试溶液，它包括(i)具有sAPPβ区和Aβ区的APP或APP变体；(ii)物质；和(iii)第一种抗体，其中第一种抗体对APP或APP变体的sAPPβ区具有特异性；从而得到sAPPβ-抗体复合物的第一种测试信号传导解读；(b)在有利于形成Aβ-抗体复合物的条件下形成第二种测试溶液，它包括(i)具有sAPPβ区和Aβ区的APP或APP变体；(ii)所述的物质；和(iii)第二种抗体，其中第二种抗体对APP或APP变体的Aβ区具有特异性；从而得到Aβ-抗体复合物的第二种测试信号传导解读；(c)在有利于形成sAPPβ-抗体复合物和Aβ-抗体复合物的条件下形成对照溶液，它包括(i)具有sAPPβ区和Aβ区的APP或APP变体；和(ii)第一种抗体和第二种抗体，从而得到sAPPβ-抗体复合物的第一种对照信号传导解读和Aβ-抗体复合物的第二种对照信号传导解读；(d)比较第一种测试信号传导解读与第一种对照信号传导解读，并且比较第二种测试信号传导解读与第二种对照信号传导解读，其中(i)如果第一种测试信号传导解读等于第一种对照信号传导解读并且第二种信号传导解读等于第二种对照信号传导解读，那么所述的物质不与APP发生相互作用；(ii)如果第一种测试信号传导解读低于第一种对照信号传导解读并且第二种信号传导解读等于第二种对照信号传导解读，那么所述的物质与APP的sAPPβ区特异性结合；(iii)如果第一种测试信号传导解读等于第一种对照信号传导解读并且第二种信号读低于第二种对照信号传导解读，那么所述的物质与APP的Aβ区特异性结合。2.权利要求1所述的方法，其中所述的测试溶液和对照溶液各自进一步包括稀释剂。3.权利要求1所述的方法，其中所述的测试溶液和对照溶液进一步包括pH控制剂。4.权利要求l所述的方法，其中所述的物质具有低于约2kD的分子量。5.权利要求l所述的方法，其中使用配体可检测地标记APP。6.权利要求1所述的方法，其中所述的测试溶液和对照溶液包括受体珠。7.权利要求l所述的方法，其中第二种抗体对A(3的氨基酸1-17或28-40具有特异性。8.权利要求1所述的方法，其中第二种抗体对Ap区的C-末端具有特异性。9.权利要求1所述的方法，其中第二种抗体对AP区的N-末端具有特异性。10.权利要求1所述的方法，其中APP或APP变体为APP变体。11.用于测定物质与淀粉状蛋白P肽(A[3)的相互作用的方法，该方法包括(a)在有利于形成A(3-抗体复合物的条件下形成第一种测试溶液，它包括(i)具有sAPP(3区和A(3区的APP或APP变体，所述的A(3区具有第一亚区和第二亚区；和(ii)所述的物质；和(iii)第一种抗体，其中第一种抗体对APP或APP变体的A(3区的第一亚区具有特异性；从而得到A(3-抗体复合物的第一种测试信号传导解读；(b)在有利于形成A(3-抗体复合物的条件下形成第二种测试溶液，它包括(i)具有sAPP(3区和Ap区的APP或APP变体，所述的A(3区具有第一亚区和第二亚区；(ii)所述的物质；和(iii)笫二种抗体，其中第二种抗体对APP或APP变体的A(3区的第二亚区具有特异性；从而得到Ap-抗体复合物的第二种测试信号传导解读；(c)在有利于形成A(3-抗体复合物的条件下形成对照溶液，它包括(i)具有sAPP(3区和A(3区的APP或APP变体，所述的A(3区具有第一亚区和第二亚区；和(ii)第一种抗体和第二种抗体，从而得到A(3-抗体复合物的第一种对照信号传导解读和Ap-抗体复合物的第二种对照信号传导解读；(d)比较第一种测试信号传导解读与第一种对照信号传导解读，并且比较第二种测试信号传导解读与第二种对照信号传导解读，其中(i)如果笫一种测试信号传导解读等于第一种对照信号传导解读并且第二种信号传导解读等于第二种对照信号传导解读，那么所述的物质不与AP发生相互作用；(ii)如果第一种测试信号传导解读低于第一种对照信号传导解读并且第二种信号传导解读等于第二种对照信号传导解读，那么所述的物质与A(3的第一亚区特异性结合；(iii)如果第一种测试信号传导解读等于第一种对照信号传导解读并且第二种信号读低于第二种对照信号传导解读，那么所述的物质与A(3的第二亚区特异性结合。12.权利要求11所述的方法，Ap的第二亚区为N-末端。13.权利要求11所述的方法，自进一步包括稀释剂。14.权利要求11所述的方法，自进一步包括pH控制剂。15.权利要求11所述的方法，体。16.权利要求11所述的方法的分子量。17.权利要求11所述的方法APP变体。18.权利要求11所述的方法，括受体珠。19.与APP或A(3发生相互作用的物质，其结构通过权利要求1所述的测定法鉴定。20.与APP或Ap发生相互作用的物质，其结构通过权利要求11所述的测定法鉴定。21.通式(I)的化合物或其药物上可接受的盐其中A(3的第一亚区为C-末端并且其中所述的测试溶液和对照溶液各其中所述的测试溶液和对照溶液各其中APP或APP变体为APP变，其中所述的物质具有低于约2kD，其中用配体可检测地标记APP或其中所述的测试溶液和对照溶液包<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中:RM壬选地存在并且选自(a)卤素；(b)C^烷基；和(c)C^烷氧基；R2选自(a)氢；(b)(CH2)mC(=0)-OR5，其中R5选自氢和C^烷基;m为1、2或3;R3选自(a)氢；和(b)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中115和R6选自(i)氢；(ii)卤素；(iii)C^烷基;(iv)Cw烷氧基；和(v)四哇基，n为3、4或5。22.权利要求21的化合物，其中W为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>23.对需要的哺乳动物治疗阿尔茨海默病的方法，该方法包括对所述的哺乳动物给予治疗有效量的权利要求21的化合物或其药物上可接受的盐。全文摘要披露了用于鉴定和评价物质与淀粉状蛋白前体蛋白(APP)或与APP的β-淀粉状蛋白(Aβ)片段的结合特性的方法。还披露了通式(I)的一类苯并呋喃衍生物，它们特别与APP或Aβ发生相互作用并且阻断APP或Aβ与分泌酶(secreatase)或APP或Aβ结合抗体的相互作用。文档编号G01N33/68GK101421624SQ200580011982公开日2009年4月29日申请日期2005年3月29日优先权日2004年4月2日发明者A·S·埃斯佩塞思,C·A·科布恩,D·J·哈祖达申请人:默克公司