本发明涉及一种色谱分析方法，尤其是一种分析分离顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的高效液相色谱法。
技术背景
前列腺素是一类重要的内源性生理活性物质，在激素浓度水平上调节人体多种生理作用，对血压、平滑肌收缩、胃液分泌及血小板凝聚有调节作用。前列腺素是广泛存在于人和动物各组织中的微量成分，含量极低，天然来源的前列腺素不能满足临床用药需求。为此，前列腺素类衍生物的全合成研究至关重要。
顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮是一种合成前列腺素类药物的重要中间体，其分子式为C7H8O，英文名为：(+/-)-cis-Bicyclo[3.2.0]hept-2-en-6-one。结构式为:
该分子有2个手性中心，根据立体结构及反应机理推断，存在2个对映异构体，其中1个作为异构体杂质在后续步骤中参与反应，进而形成多种对应杂质，严重影响前列腺素类药物的质量，这也是该类药物临床用药引起不良反应的重要因素之一。因此，如何分析分离该对对映异构体，进而控制前列腺素类药物质量，是目前需要解决的技术问题。
近年来，随着手性色谱填料多样化，手性色谱柱液相色谱法应用日益广泛，但是，使用手性色谱柱高效液相方法分析分离顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体却少有报道。
因此，有必要建立一种分析分离顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的HPLC方法，能够有效分析分离该对对映异构体，有效控制杂质含量，提高该目标产物纯度，进而提高前列腺素类药物质量，保证该类药物临床用药安全。
技术实现要素：
本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种采用手性色谱柱以正向混合溶剂为流动相的HPLC方法，该方法能够简单、准确、高效分析分离顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体，从而实现对顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的质量控制,同时也可以用来制备高纯度的顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体。
本发明的目的是通过以下方案实现的：
一种HPLC法分析分离顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的方法，采用手性色谱柱并使用正相色谱法分析分离。
本发明所述的手性色谱柱为多糖衍生物正相涂覆型手性色谱柱，硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)或直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯]。
本发明的正相色谱法所用的流动相为正己烷-异丙醇混合溶剂。
进一步地，本发明所使用的正己烷-异丙醇的体积比例为87:13～99:1，最优为90:10～95:5。
本发明的正相色谱法所用的流动相为正己烷-无水乙醇混合溶剂。
进一步地，本发明所选用的正己烷-无水乙醇体积比例为85:15～98:2，最优为90:10～96:4。
本发明所述的分析分离方法，可按照以下方法实现：
(1)顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体供试品用流动相溶解，配制成1mL含顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体1～10μL的供试品溶液；进样量是1～20μL，较优选的是5～10μL。
(2)设置流动相流速为0.4～1.5mL/min，优选为0.5～1mL/min；检测波长为205～220nm，较优选为210nm；柱温14～50℃，较优选的是18～40℃。
(3)取步骤(1)所制供试品溶液5～10μL注入液相色谱仪，完成顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的分析与分离。
实验结果表明，与正相硅胶色谱柱、反相硅胶色谱柱、氰基柱等非手性色谱柱相比，本发明所采用的手性色谱柱具有更优的分离效果。
与OD-H纤维素手性色谱柱相比，本发明直链淀粉类手性色谱柱因其手性填料的特异性，能够将顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体简单、快速的分离，从而可以准确控制目标物纯度及其对映异构体杂质含量。
本发明采用手性色谱柱为直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性色谱柱具体为Chiralpak AD-H(250×4.6mm,5.0μm)，对顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体有较好的分析分离效果。
本发明流动相较优选的是正己烷/异丙醇混合溶剂，混合溶剂的体积比例为87:13～99:1，较优选为90:10～95:5；
同时，经实验发现，硅胶表面涂覆有直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯]手性色谱柱，具体为ETN chiral AS(250×4.6mm,5.0μm)，对顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体有较好的分离效果，分离度高且峰形较好。
本发明的正相流动相选用正己烷-无水乙醇混合溶剂；本发明的方法选用的正己烷-无水乙醇体积比例为85:15～98:2，较优选为90:10～96:4。
本发明采用直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)或直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯]两种直链淀粉类手性色谱柱；选择较优选的流动相；选择流动相溶解样品，选用较优的进样量；选用较优的柱温；选用较优的波长；从而确保了溶液的稳定性，提高了色谱峰的对称性和分离效果，其中(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体先后出峰，分离度≥1.5，有效的分析分离顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体。
本发明解决了顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的分析分离问题，能够有效控制目标产物及其异构体杂质含量，免除异构体杂质对后续合成反应的干扰，提高前列腺素类药物质量，确保用药安全。
本发明分析分离方法简单、快速、准确和高效，能够确保顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的质量可控性；本发明分析分离方法，也可以用来制备高纯度的顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体。因此，本发明克服了现有技术的不足。
由此可见，本发明开发一种分析分离顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的HPLC方法是十分必要的。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明一种HPLC法分析分离顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的方法做进一步说明，但本发明的保护范围并不限于实施例。
实施例1
仪器与条件
色谱柱：Chiralpak AD-H(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-异丙醇(87:13)；
柱温：50℃；
流速：0.4mL/min；
进样体积：1μL；
检测波长：205nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体100μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(87:13)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液1μL进入液相色谱，柱温50℃，流速0.4mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为3.9，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离，。
实施例2
仪器与条件
色谱柱：Chiralpak AD-H(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-异丙醇(99:1)；
柱温：14℃；
流速：0.5mL/min；
进样体积：20μL；
检测波长：220nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体10μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(99:1)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液20μL进入液相色谱，柱温14℃，流速0.5mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为4.8，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例3
仪器与条件
色谱柱：Chiralpak AD-H(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-异丙醇(90:10)；
柱温：18℃；
流速：0.5mL/min；
进样体积：5μL；
检测波长：215nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体50μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(90:10)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，柱温18℃，流速0.5mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为4.1顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例4
仪器与条件
色谱柱：Chiralpak AD-H(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-异丙醇(95:5)；
柱温：40℃；
流速：1mL/min；
进样体积：10μL；
检测波长：205nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体100μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(95:5)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液10μL进入液相色谱，柱温40℃，流速1mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为3.0，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例5
仪器与条件
色谱柱：Chiralpak AD-H(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-异丙醇(93:7)；
柱温：35℃；
流速：0.8mL/min；
进样体积：5μL；
检测波长：210nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体50μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(93:7)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，柱温35℃，流速0.8mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为3.7，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例6
仪器与条件
色谱柱：Chiralpak AD-H(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-异丙醇(88:12)；
柱温：35℃；
流速：0.5mL/min；
进样体积：5μL；
检测波长：210nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体10μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(88:12)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，柱温35℃，流速0.5mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为4.0，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例7
仪器与条件
色谱柱：Chiralpak AD-H(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-异丙醇(97:3)；
柱温：25℃；
流速：1mL/min；
进样体积：5μL；
检测波长：205nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体100μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-异丙醇(97:3)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，柱温25℃，流速1mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为3.7，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例8
仪器与条件
色谱柱：Chiralpak AD-H(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-异丙醇(98:2)；
柱温：25℃；
流速：1mL/min；
进样体积：5μL；
检测波长：210nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体50μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(98:2)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，柱温25℃，流速1mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为4.5，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例9
仪器与条件
色谱柱：Chiralpak AD-H(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-异丙醇(99:1)；
柱温：25℃；
流速：1mL/min；
进样体积：5μL；
检测波长：210nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体50μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(99:1)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，柱温25℃，流速1mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度5.1，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离开来。
实施例10
仪器与条件
色谱柱：Chiralpak AD-H(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-无水乙醇(95:5)；
柱温：25℃；
流速：0.8mL/min；
进样体积：5μL；
检测波长：210nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体50μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(95:5)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，柱温25℃，流速0.8mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为2.0，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例11
仪器与条件
色谱柱：ETN chiral AS(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-无水乙醇(85:15)；
柱温：15℃；
流速：0.5mL/min；
进样体积：2μL；
检测波长：210nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体100μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(85:15)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液2μL进入液相色谱，柱温15℃，流速0.5mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为3.2，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例12
仪器与条件
色谱柱：ETN chiral AS(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-无水乙醇(85:15)；
柱温：50℃；
流速：0.4mL/min；
进样体积：1μL；
检测波长：205nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体100μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(85:15)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液10μL进入液相色谱，柱温50℃，流速0.4mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为3.3，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例13
仪器与条件
色谱柱：ETN chiral AS(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-无水乙醇(98:2)；
柱温：14℃；
流速：1.5mL/min；
进样体积：20μL；
检测波长：220nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体50μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(98:2)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液20μL进入液相色谱，柱温14℃，流速1.5mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为5.4，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例14
仪器与条件
色谱柱：ETN chiral AS(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-无水乙醇(90:10)；
柱温：18℃；
流速：0.5mL/min；
进样体积：5μL；
检测波长：215nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体10μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(90:10)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，柱温18℃，流速0.5mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为3.8，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例15
仪器与条件
色谱柱：ETN chiral AS(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-无水乙醇(96:4)；
柱温：40℃；
流速：1mL/min；
进样体积：10μL；
检测波长：210nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体100μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(96:4)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液10μL进入液相色谱，柱温40℃，流速1mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为3.5，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例16
仪器与条件
色谱柱：ETN chiral AS(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-无水乙醇(93:7)；
柱温：35℃；
流速：0.8mL/min；
进样体积：20μL；
检测波长：210nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体10μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(95:5)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液20μL进入液相色谱，柱温35℃，流速0.8mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为3.1，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例17
仪器与条件
色谱柱：ETN chiral AS(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-无水乙醇(90:10)；
柱温：25℃；
流速：0.8mL/min；
进样体积：10μL；
检测波长：205nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体50μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(90:10)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液10μL进入液相色谱，柱温35℃，流速0.8mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为2.8，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例18
仪器与条件
色谱柱：ETN chiral AS(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-无水乙醇(98:2)；
柱温：25℃；
流速：0.5mL/min；
进样体积：20μL；
检测波长：210nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体100μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(98:2)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液20μL进入液相色谱，柱温25℃，流速0.5mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为6.1，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例19
仪器与条件
色谱柱：ETN chiral AS(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-无水乙醇(85:15)；
柱温：35℃；
流速：0.8mL/min；
进样体积：10μL；
检测波长：215nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体100μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-正己烷(85:15)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液10μL进入液相色谱，柱温35℃，流速0.8mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为2.6，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例20
仪器与条件
色谱柱：ETN chiral AS(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-无水乙醇(95:5)；
柱温：25℃；
流速：0.8mL/min；
进样体积：10μL；
检测波长：210nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体10μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-无水乙醇(95:5)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液10μL进入液相色谱，柱温25℃，流速0.8mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为3.7，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。
实施例21
仪器与条件
色谱柱：ETN chiral AS(250×4.6mm,5.0μm)；
流动相：正己烷-异丙醇(93:7)；
柱温：35℃；
流速：0.8mL/min；
进样体积：5μL；
检测波长：210nm；
实验步骤
精密量取顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体100μL，置于10mL容量瓶中，正己烷-正己烷(93:7)溶解并稀释到刻度，摇匀，作为供试品溶液。吸取供试品溶液5μL进入液相色谱，柱温35℃，流速0.8mL/min，记录色谱图。
实验结果：(1R,5S)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮与(1S,5R)-双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮两个对映异构体的分离度为3.3，顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体能够完全分离。