基于胶乳免疫比浊法的补体C3试剂盒及其制备方法与流程

文档序号:11824499阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于胶乳免疫比浊法的补体C3试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括:

试剂A,所述试剂A为pH=8.0~9.4的甘氨酸缓冲体系,含有0.1~0.5g/L的高分子促聚剂、1~10g/L的表面活性剂和0.5~10g/L的电解质;

以及试剂B,所述试剂B为pH=6.5~7.3的MES缓冲体系,含有2.5~3g/L的羊抗人补体C3多克隆抗体、2.5~5mL/L的羊抗人补体C3多克隆抗体包被的胶乳、1~10g/L的表面活性剂和0.5~10g/L的电解质。

2.如权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述胶乳为pH=6.5~7.3的MES缓冲体系,是粒径为30~80nm优选40~50nm的羧基微球经NHS和EDC活化后再由羊抗人补体C3多克隆抗体包被得到的胶乳;所述胶乳中,羧基微球的浓度为1~2g/L优选1g/L,NHS与羧基微球的质量比为0.05~0.1:1,EDC与羧基微球的质量比为0.05~0.1:1,包被用的羊抗人补体C3多克隆抗体与羧基微球的质量比为0.05~0.1:1。

3.如权利要求1或2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂A和所述试剂B分别还含有0.5~1g/L的防腐剂,所述防腐剂为proclin300和/或叠氮钠。

4.如权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂A中的高分子促聚剂为聚乙醇6000,聚乙醇6000在所述试剂A中的浓度为0.2~0.5g/L;所述试剂A和所述试剂B中的表面活性剂均为曲拉通X100;所述试剂A和所述试剂B中的电解质均为氯化钠。

5.如权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂A为pH=8.6的100mmol/L甘氨酸缓冲体系,含有0.5g/L的聚乙醇6000、1g/L的曲拉通X100、5g/L的氯化钠和1g/L的叠氮钠。

6.如权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂B为pH=6.8的50mmol/L MES缓冲体系,含有2.8g/L的羊抗人补体C3多克隆抗体、3mL/L的羊抗人补体C3多克隆抗体包被的胶乳、1g/L的曲拉通X100、5g/L的氯化钠和1g/L的叠氮钠。

7.一种制备试剂B的方法,其特征在于,所述试剂B为pH=6.5~7.3的MES缓冲体系,含有2.5~3g/L的羊抗人补体C3多克隆抗体、2.5~5mL/L的羊抗人补体C3多克隆抗体包被的胶乳、1~10g/L的表面活性剂和0.5~10g/L的电解质;

该方法包括如下步骤:

1)用pH=6.5~7.3的MES缓冲液将羧基微球稀释至1~2g/L,再加入NHS和EDC,15~25℃下反应20~30分钟得到活化胶乳;

2)向活化胶乳中加入包被用的羊抗人补体C3多克隆抗体,在25~37℃下振摇孵育2~4小时,制得羊抗人补体C3多克隆抗体包被的胶乳;

3)根据所述试剂B的各组分浓度,向pH=6.5~7.3的MES缓冲液中加入表面活性剂、电解质和羊抗人补体C3多克隆抗体,然后加入步骤2)制得的羊抗人补体C3多克隆抗体包被的胶乳;

4)用0.2μL尼龙膜过滤除菌和大颗粒,得试剂B。

8.如权利要求7所述的方法,其特征在于,步骤1)中的羧基微球粒径为30~80nm优选40~50nm;NHS与羧基微球的质量比为0.05~0.1:1,EDC与羧基微球的质量比为0.05~0.1:1;步骤2)中,包被用的羊抗人补体C3多克隆抗体与羧基微球的质量比为0.05~0.1:1。

9.如权利要求7所述的方法,其特征在于,步骤2)和步骤3)中加入的羊抗人补体C3多克隆抗体预先用pH=6.5~7.3的MES缓冲液稀释至20~30g/L。

10.如权利要求6所述的方法,其特征在于,步骤3)中,还添加有防腐剂proclin300和/或叠氮钠,所述防腐剂添加浓度为0.5~1g/L。

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