本发明涉及海洋污染物检测方法领域，尤其涉及海水及海洋沉积物中氨基脲残留量测定的快速检测方法。
背景技术：
氨基脲是制取硝基呋喃类等药物的工业原料，也可作为测定酮、醛的试剂、色谱分析及分离激素精油的溶剂。从毒理学角度考虑，氨基脲具有潜在的弱毒性及致癌性。目前，国内对海洋环境中氨基脲污染状况的研究发现，通过各种途径产生的氨基脲最终汇入大海，成为一种新型的环境污染物。因此建立海洋环境中氨基脲定性、定量检测方法，是评价氨基脲是否会影响海洋环境所必需的。
现有氨基脲检测方法多为液相色谱串联质法，对实验人员和实验条件要求较高，检测时间较长，成本较高，检测所用仪器价格昂贵，不利于海水和海洋沉积物中氨基脲残留量的简单、快速的测定。免疫胶体金快速检测方法是将胶体金免疫技术和层析技术相结合的分析方法，具有快速、简便、低成本和安全等优点。目前，使用免疫胶体金快速检测方法对氨基脲进行测定的检测对象均为水产品，尚无利用免疫胶体金快检技术开展海水和海洋沉积物中氨基脲残留量测定方法的研究。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种海水及海洋沉积物中氨基脲残留量测定的快速检测方法，首次建立海水和海洋沉积物中氨基脲残留量测定的免疫胶体金快速检测方法，为海水和海洋沉积物中氨基脲污染状况监测提供技术支持。
为解决上述问题，本发明公开了一种海水及海洋沉积物中氨基脲残留量测定的快速检测方法，其特征在于使用免疫胶体金法进行测定。
本发明还公开了海水及海洋沉积物中氨基脲残留量测定的快速检测方法，包括如下步骤：
（1）海水样品用0.45μm纤维滤膜过滤，去除海水中悬浮物，分析时准确量取经过滤的海水20ml于50ml离心管中；海洋沉积物样品沥去海水，不需干燥，分析时准确称取2.0g沉积物样品于50ml离心管中；
（2）向样品中加入5ml盐酸溶液和200μl衍生化试剂溶液，振荡2min，置于60℃水浴锅中，孵育30min；
（3）加入5ml磷酸氢二钾溶液和800μl氢氧化钠溶液，振荡1min，再加入10ml乙酸乙酯，振荡2min，然后置于离心机中4000r/min，离心5min；
（4）准确移取上层液体5ml于15ml离心管中，60℃下吹干；
（5）向吹干的离心管中加入2ml正己烷，振荡1min，再准确加入500μl复溶试剂，振荡1min，然后置于离心机中4000r/min，离心1min，取下层溶液待测；
（6）用移液枪移取100μl待测液于免疫胶体金快速检测卡加样孔中，室温反应5min，根据结果判读示意图判读结果。
进一步的，其中所述盐酸溶液浓度为0.20mol/l：量取密度为ρ=1.19g/ml浓盐酸0.60ml，用水稀释至100ml。
进一步的，其中所述磷酸氢二钾溶液浓度为0.1mol/l：准确称取1.74g磷酸氢二钾，溶于100ml水中制成。
进一步的，其中所述氢氧化钠溶液浓度为1.0mol/l：准确称取4.00g氢氧化钠，溶于100ml水中制成。
进一步的，其中所述氨基脲免疫胶体金快速检测盒，其中含有检测卡、衍生化试剂和复溶试剂。
进一步的，其中所述电子天平的精度为0.01g。
进一步的，其中所述室温为20~25℃。
本发明的有益效果在于：通过海水和海洋环境中的氨基脲在酸性条件下，与衍生化试剂发生衍生化反应，衍生物经乙酸乙酯液-液萃取，正己烷净化后，用免疫胶体金快速检测卡进行测定。
建立海水和海洋沉积物中氨基脲残留量测定的免疫胶体金快速检测方法，与现有海水和海洋沉积物中氨基脲检测方法相比。免疫胶体金快速检测方法对实验人员和实验条件要求较低，不需要液相色谱串联质谱仪等昂贵仪器，将衍生化时间由16h缩短为30min，极大缩短检测时间，可以对海水和海洋沉积物进行现场检测。通过此方法，海水中定性检测限为0.1μg/l，海洋沉积物中定性检测限为1.0μg/kg。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1是本发明的结果判读依据图；
图2是本发明的实验结果例图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
准备如下试剂及仪器
盐酸溶液浓度为0.20mol/l：量取密度为ρ=1.19g/ml浓盐酸0.60ml，用水稀释至100ml。
磷酸氢二钾溶液浓度为0.1mol/l：准确称取1.74g磷酸氢二钾，溶于100ml水中制成。
氢氧化钠溶液浓度为1.0mol/l：准确称取4.00g氢氧化钠，溶于100ml水中制成。
氨基脲免疫胶体金快速检测盒，其中含有检测卡、衍生化试剂和复溶试剂。
以及正己烷、乙酸乙酯、醋酸纤维滤膜0.45μm、电子天平精度为0.01g，水浴锅、离心机、氮吹仪或样品浓缩仪、移液枪。
具体的测试步骤包括如下：
（1）海水样品用0.45μm纤维滤膜过滤，去除海水中悬浮物，分析时准确量取经过滤的海水20ml于50ml离心管中；海洋沉积物样品沥去海水，不需干燥，分析时准确称取2.0g沉积物样品于50ml离心管中；
（2）向样品中加入5ml盐酸溶液和200μl衍生化试剂溶液，振荡2min，置于60℃水浴锅中，孵育30min；
（3）加入5ml磷酸氢二钾溶液和800μl氢氧化钠溶液，振荡1min，再加入10ml乙酸乙酯，振荡2min，然后置于离心机中4000r/min，离心5min；
（4）准确移取上层液体5ml于15ml离心管中，60℃下吹干；
（5）向吹干的离心管中加入2ml正己烷，振荡1min，再准确加入500μl复溶试剂，振荡1min，然后置于离心机中4000r/min，离心1min，取下层溶液待测；
（6）用移液枪移取100μl待测液于免疫胶体金快速检测卡加样孔中，室温反应5min，根据结果判读示意图判读结果。
如图1所示的结果判读依据图例所示，测试能够出现三种结果：
1、阴性：质控线c显色，检测线t比质控线c显色深或一样深，表示样品中不含有待检物或其浓度低于检测限；
2、阳性：质控线c显色，检测线t比质控线c显色浅或t线不显色，则表示样品中待检物浓度高于检测限；
3、无效：质控线c未显色，表明操作步骤不正确或检测卡失效。
实施例一：
使用阴性海水样品按照上述步骤进行测试。
实施例二：
使用阴性海洋沉积物样品按照上述步骤进行测试。
实施例三：
使用空白海洋沉积物样品按照上述步骤进行测试。
实施例四：
使用阳性海水样品按照上述步骤进行测试。
实施例五：
使用阳性海洋沉积物样品按照上述步骤进行测试。
实施例六：
使用空白海洋沉积物加标样品按照上述步骤进行测试。
由附图2可见，该方法能够准确的对海水及海洋沉积物中氨基脲残留量进行快速测定，为海水和海洋沉积物氨基脲污染状况监测提供技术支持。