专利名称：：一种小麦组织培养的方法
技术领域：
：本发明涉及一种小麦组织培养的方法。
背景技术：
：组织培养高频率再生是细胞工程育种、基因工程育种和功能基因组学研究的基础，烟草、拟南芥等双子叶植物和水稻、短柄草等单子叶植物再生非常容易，因而成为了基因工程研究的模式植物。相比之下，小麦组织培养还不稳定，在很大程度上受外植体类型、生理状态、基因型和培养基等因素的限制，影响了基因工程育种和功能基因组学研究的进程。目前为止，小麦组织培养成功的外植体包括幼胚、幼穗、花药、成熟胚等，幼胚培养最为容易，花药培养和幼穗培养次之，成熟胚培养最难。因此，幼胚一直被用作小麦组织培养和转基因研究的理想材料，愈伤组织诱导率和植株再生率相对较高。小麦成熟胚培养取得了一定进展，并已成功用于农杆菌转化和基因枪转化。无论是小麦哪种外植体的组织培养，常规方法是先将外植体接种在含有2.0mg/12，4-D或Dicamba等生长素的培养基上黑暗条件下培养4周左右诱导愈伤组织，然后转移到去掉2.0mg/12，4-D或Dicamba等生长素的培养基上，光照条件下分化植株。利用这样的技术体系，不同小麦基因型在相同条件下和同一小麦基因型在不同生理状态，培养效果差异显著，很多基因型不能成功再生或再生率很低，不能满足基因工程研究的需要。
发明内容本发明的一个目的是提供一种小麦的组织培养方法。本发明所提供的小麦组织培养方法，包括如下步骤先将小麦胚诱导培养成胚性愈伤组织；再将所述胚性愈伤组织分化培养成小麦再生植株；所述诱导培养的方法包括如下步骤将所述小麦胚依次用含有生长素的培养基进行诱导培养1、用不含有生长素的培养基进行诱导培养n、再用含有生长素的培养基进行诱导培养III，得到胚性愈伤组织。上述过程中，所述小麦胚可为小麦幼胚。当所述小麦胚为小麦幼胚时，所述含有生长素的培养基具体组成如下由终浓度为1650mg/L的NH4N0p终浓度为1900mg/L的KN0p终浓度为440mg/L的CaCl2*21120、终浓度为370mg/L的MgS04*71120、终浓度为1700mg/L的1(1^04、终浓度为0.83mg/L的KI、终浓度为6.2mg/L的！13803、终浓度为22.3mg/L的MnS0441120、终浓度为8.6mg/L的ZnS0471120、终浓度为0.25mg/L的Na2Mo04*21120、终浓度为0.025mg/L的CuS04*51120、终浓度为0.025mg/L的CoCl261120、终浓度为27.8mg/L的FeS0471120、终浓度为37.3mg/L的Na厂EDTA2H20、终浓度为30g/L的蔗糖、终浓度为10mg/L的维生素B1、终浓度为150mg/L的谷氨酰胺、终浓度为2.Omg/L的2，4-D、终浓度为2.4g/L的Phytagel(植物凝胶)组成；所述终浓度为各物质在所述含有生长素的培养基中的浓度。该含有生长素的培养基的PH值具体可为6.0。当所述小麦胚为小麦幼胚时，所述不含有生长素的培养基的组成为除了不含有2，4-D夕卜，其余组成与上述含有生长素的培养基的组成相同。当所述小麦胚为小麦幼胚时，所述分化培养中用到的培养基的组成具体如下由终浓度为1650mg/L的NH4N0p终浓度为1900mg/L的KNOy终浓度为440mg/L的CaCl2*2H20、终浓度为370mg/L的MgS047H20、终浓度为1700mg/L的KH2P04、终浓度为0.83mg/L的KI、终浓度为6.2mg/L的！13803、终浓度为22.3mg/L的MnS0441120、终浓度为8.6mg/L的ZnS0471120、终浓度为0.25mg/L的Na2Mo0421120、终浓度为0.025mg/L的CuS045叫、终浓度为0.025mg/L的CoCl261120、终浓度为27.8mg/L的FeS0471120、终浓度为37.3mg/L的Na2-EDTA*21120、终浓度为lmg/L的V『终浓度为0.5mg/L的Vp终浓度为0.5mg/L的烟酸、终浓度为2mg/L的甘氨酸、终浓度为100mg/L的肌醇、终浓度为20g/L的蔗糖、终浓度为2.4g/L的Phytagel组成；所述终浓度为各物质在所述分化培养中用到的培养基中的浓度；该分化培养中用到的培养基的PH值为6.0。上述过程中，所述小麦幼胚可为心形期小麦幼胚。上述过程中，当所述小麦胚为小麦幼胚时，所述小麦具体可为小麦品系中8601、小麦品系HW642或小麦品种济麦22。上述过程中，所述小麦胚还可为小麦成熟胚。上述过程中，当所述小麦胚为小麦成熟胚时，所述含有生长素的培养基的组成具体如下由终浓度为1650mg/L的朋4冊3、终浓度为1900mg/L的KNOy终浓度为440mg/L的CaCl221120、终浓度为370mg/L的MgS0471120、终浓度为1700mg/L的,04、终浓度为0.83mg/L的KI、终浓度为6.2mg/L的！13803、终浓度为22.3mg/L的MnS0441120、终浓度为8.6mg/L的ZnS0471120、终浓度为0.25mg/L的Na2Mo0421120、终浓度为0.025mg/L的CuS0451120、终浓度为0.025mg/L的CoCl261120、终浓度为27.8mg/L的FeS0471120、终浓度为37.3mg/L的Na2-EDTA*21120、终浓度为0.75g/L的MgCl"终浓度为15g/L的甘露醇、终浓度为15g/L的山梨醇、终浓度为2.4g/L的植物凝胶、终浓度为5mg/L的谷氨酰氨、终浓度为500mg/L的水解酪蛋白、终浓度为12g/L的葡萄糖、终浓度为10mg/L的维生素B1、终浓度为lmg/L的维生素B6、终浓度为lmg/L的烟酸、终浓度为2mg/L的甘氨酸、终浓度为39mg/L的乙酰丁香酮、终浓度为2mg/L的Dicamba、终浓度为4mg/L的AgNO终浓度为40mg/L的半胱氨酸、终浓度为100mg/L的Vc组成；所述终浓度为各物质在所述含有生长素的培养基中的浓度；该含有生长素的培养基的PH值具体可为6.0。上述过程中，当所述小麦胚为小麦成熟胚时，所述不含有生长素的培养基的组成为除了不含有Dicamba夕卜，其余组成与所述含有生长素的培养基的组成相同。上述过程中，当所述小麦胚为小麦成熟胚时，所述分化培养中用到的培养基的组成具体可如下由终浓度为1650mg/L的朋4冊3、终浓度为1900mg/L的KNO终浓度为440mg/L的CaCl2*21120、终浓度为370mg/L的MgS0471120、终浓度为1700mg/L的KH2P04Jf浓度为0.83mg/L的KI、终浓度为6.2mg/L的！13803、终浓度为22.3mg/L的MnS0441120、终浓度为8.6mg/L的ZnS0471120、终浓度为0.25mg/L的Na2Mo0421120、终浓度为0.025mg/L的CuS0451120、终浓度为0.025mg/L的CoCl261120、终浓度为27.8mg/L的FeS0471120、终浓度为37.3mg/L的Na2-EDTA21120、终浓度为30g/L的蔗糖、终浓度为10mg/L的V『终浓度为lmg/L的V『终浓度为lmg/L的烟酸、终浓度为2mg/L的甘氨酸、终浓度为5mg/L的谷氨酰胺、终浓度为0.2mg/L的IAA、终浓度为2.4g/L的Phytagel组成；该分化培养中用到的培养基的pH值为6.0。上述过程中，当所述小麦胚为小麦成熟胚时，所述小麦具体可为小麦品系CB037。上述过程中，所述用含有生长素的培养基进行诱导培养I的时间可为7-9天，优选为8天；所述用含有生长素的培养基进行诱导培养III的时间可为7-9天，优选为8天；所述用不含有生长素的培养基进行诱导培养II的时间可为6-14天，进一步可为6-12天、具体可为10-14天，优选为12天。上述过程中，所述用含有生长素的培养基进行诱导培养1、所述用不含有生长素的培养基进行诱导培养II和所述用含有生长素的培养基进行诱导培养III中，培养的条件为黑暗、温度为24°C_26°C。—般的小麦组培中，在诱导形成愈伤组织阶段均是持续用生长素处理，本发明的小麦组织培养方法，在诱导形成愈伤组织阶段采用"生长素_中断生长素_生长素"培养模式，使小麦绿苗的获得率大大提高。实验证明，小麦中8601幼胚培养绿苗获得率为208.2%，常规培养方法没有获得再生植株(图1，图3，表1);小麦济麦22幼胚培养绿苗获得率为25.3%，常规培养方法再生率仅为0.9%(图4);小麦HW642幼胚培养绿苗获得率为211.3%，常规培养方法再生率仅为26.2%(图5);小麦CB037成熟胚培养绿苗获得率为67.1%，常规培养方法再生率为32.4%(图6);本发明方法使绿苗获得率提高了10-20倍。在生长素中断处理0-12天的范围内，绿苗获得率随生长素中断时间的延长显著增加(图l，表l)，过氧化氢酶等再生相关基因表达量随生长素中断时间的延长明显增强，生长素中断9天表达量最高，表明过氧化氢酶基因与再生性状具有正相关性(图2)。结果表明，小麦幼胚、成熟胚经生长素处理7-9天足以诱导小麦细胞脱分化；相反，较长时间生长素处理抑制了小麦再生相关基因表达和细胞再分化，不利于胚性愈伤组织形成，降低了绿苗获得率。本发明方法通过改进培养程序等技术环节，进一步提高了小麦幼胚和成熟胚再生频率，克服基因型、生理状态等条件对再生的障碍，减弱小麦组织培养对基因型、生理状态等因素的强烈依赖性，为小麦细胞工程育种、基因工程育种和功能基因组学研究提供技术支撑，大大提高了工作效率，对于小麦生物技术育种和功能基因组学研究具有重要意义。图1.生长素间歇处理不同时间对小麦幼胚再生效果的影响图2.生长素间歇处理不同时间小麦幼胚愈伤组织中再生相关基因表达情况(过氧化氢酶编码基因)图3.利用本发明技术和常用技术培养小麦中8601幼胚再生效果比较图4.利用本发明技术和常用技术培养小麦济麦22幼胚再生效果比较图5.利用本发明技术培养小麦HW642幼胚再生效果比较图6.利用本发明技术和常用技术培养小麦CB037成熟胚再生效果比较具体实施例方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。小麦幼胚的定义小麦子房授粉后发育13-14天的小麦幼嫩籽粒上剥取的小麦胚；小麦成熟胚的定义成熟期从小麦植株上收获后储藏2-3个月的小麦籽粒上剥取的小麦胚。"品种"为国家或省市品种审定委员会审定的遗传材料，可在适宜地区推广种植；"品系"为育种单位选育的具有优良农艺性状的高代遗传材料，通过审定后成为品种或作为品种资源进行育种和研究利用；多数情况下也把品系写作品种。小麦品种济麦22(世界农业，2009，9:78)(中国农业科学院作物科学研究所)；小麦品系中8601(徐惠君等，遗传学报，1996，5:377-381)(中国农业科学院作物科学研究所)；小麦品系CB037(陶丽莉，中国农业科学院硕士学位论文，2009年6月)(中国农业科学院作物科学研究所)；小麦品系HW642(张增艳等，作物学报，2002，28(4):486-491)(中国农业科学院作物科学研究所)；遗传资源名称小麦品种济麦22。遗传资源的获取途径I、遗传资源取自植物，n、获取方式赠送。直接来源获取时间2007年8月；非采集方式，提供者姓名或名称山东省农业科学院作物研究所，提供者所处国家或地区中国山东省，提供者联系方式(山东省济南市桑园路28号山东省农业科学院作物研究所)。原始来源不清楚。遗传资源名称小麦品系中8601。遗传资源的获取途径I、遗传资源取自植物，11、获取方式国家种质库。直接来源获取时间2006年3月；非采集方式，提供者姓名或名称中国农业科学院作物科学研究所作物种质资源保存中心，提供者所处国家或地区中国北京市，提供者联系方式北京市中关村南大街12号中国农业科学院作物科学研究所。原始来源不清楚。遗传资源名称小麦品系CB037。遗传资源的获取途径I、遗传资源取自植物，I工、获取方式其他(发明人课题组选育并保存)。直接来源2006年；非采集方式，提供者姓名或名称中国农业科学院作物科学研究所，提供者所处国家或地区中国北京市，提供者联系方式北京市中关村南大街12号中国农业科学院作物科学研究所。原始来源不清楚。遗传资源名称小麦品系HW642。遗传资源的获取途径I、遗传资源取自植物，11、获取方式其他(发明人课题组选育并保存)。直接来源获取时间2005年；非采集方式，提供者姓名或名称中国农业科学院作物科学研究所，提供者所处国家或地区中国北京市，提供者联系方式北京市中关村南大街12号中国农业科学院作物科学研究所；原始来源不清楚。实施例1、用小麦幼胚进行组织培养本实施例中，分别以如下小麦品种为实验对象小麦中8601、小麦HW642和小麦济麦22。每个小麦材料的组培方法步骤如下—、小麦幼胚的获得将小麦中8601、小麦HW642和小麦济麦22种植在河北沽源夏繁基地(4_7月份小麦生长期间温度10-25°C)，开花授粉后13-14天，收集小麦中8601、小麦HW642和小麦济麦22的幼胚(心形期，大小为1.0-1.2mm)。二、组织培养1、诱导培养得到胚性愈伤组织将上述小麦幼胚接种在下述SD2培养基上培养8天(黑暗，25°C)，得到愈伤组织6I;将愈伤组织转移到下述SD0培养基培养3、6、9或12天(黑暗，25tO(中8601做了培养3、6、9或12天的实验，HW642和济麦22只培养了12天)，得到愈伤组织II;再将愈伤组织II转移到下述SD2培养基培养8天(黑暗，25t:)，得到胚性愈伤组织III。2、分化培养得到小麦再生植株将胚性愈伤组织III转移到下述FHCK培养基上培养20-25天(光照强度为3500Lx，温度为25°C)，分化得到小麦苗。记录接种幼胚数目，统计得到的胚性愈伤组织数目、愈伤组织分化数目、分化得到的小麦苗数目、胚性愈伤组织诱导率、愈伤组织分化率、绿苗获得率。胚性愈伤组织诱导率(％)=(胚性愈伤组织数+接种幼胚数)X100愈伤组织分化率(％)=(分化愈伤组织数+接种幼胚数)X100绿苗获得率(％)=(分化绿苗数+接种幼胚数)X100各培养基均采用12rC高压湿热灭菌20分钟。SD2培养基组成由终浓度为1650mg/L的NH4N03、终浓度为1900mg/L的KN03、终浓度为440mg/L的CaCl221120、终浓度为370mg/L的MgS0471120、终浓度为1700mg/L的KH2P04、终浓度为0.83mg/L的KI、终浓度为6.2mg/L的H萬、终浓度为22.3mg/L的MnS0441120、终浓度为8.6mg/L的ZnS0471120、终浓度为0.25mg/L的Na2Mo0421120、终浓度为0.025mg/L的CuS04*51120、终浓度为0.025mg/L的CoCl261120、终浓度为27.8mg/L的FeS04*71120、终浓度为37.3mg/L的Na2_EDTA*21120、终浓度为30g/L的蔗糖、终浓度为10mg/L的维生素Bl、终浓度为150mg/L的谷氨酰胺、终浓度为2.Omg/L的2，4-D、终浓度为2.4g/L的Phytagel(植物凝胶)组成；所述终浓度为各物质在所述SD2培养基中的浓度；SD2培养基的pH值为6.0。以上成分采用12rC高压湿热灭菌20分钟。SDO培养基除了不含有2，4_D夕卜，其它成份与用量与SD2培养基完全相同。FHCK培养基组成由终浓度为1650mg/L的NH4N03、终浓度为1900mg/L的KN03、终浓度为440mg/L的CaCl221120、终浓度为370mg/L的MgS0471120、终浓度为1700mg/L的KH2P04、终浓度为0.83mg/L的KI、终浓度为6.2mg/L的H萬、终浓度为22.3mg/L的MnS0441120、终浓度为8.6mg/L的ZnS0471120、终浓度为0.25mg/L的Na2Mo0421120、终浓度为0.025mg/L的CuS04*51120、终浓度为0.025mg/L的CoCl261120、终浓度为27.8mg/L的FeS04*71120、终浓度为37.3mg/L的Na2_EDTA*21120、终浓度为lmg/L的V『终浓度为0.5mg/L的V朋、终浓度为0.5mg/L的烟酸、终浓度为2mg/L的甘氨酸、终浓度为100mg/L的肌醇、终浓度为20g/L的蔗糖、终浓度为2.4g/L的Phytagel组成；所述终浓度为各物质在所述FHCK培养基中的浓度；FHCK培养基的pH值为6.0。以上成分采用12rC高压湿热灭菌20分钟。三、对照组2，4-D持续处理对照方法将相同的小麦幼胚接种在SD2培养基上黑暗条件下培养4周左右，诱导得到愈伤组织，然后转移到FHCK培养基上，光照条件下(光照强度为3500Lx，温度25°C)分化得到小麦再生植株。实验设3次重复。结果取平均数。中8601小麦幼胚的组织培养情况如表1所示。小麦中8601绿苗获得率为208.2%(图1，图3，表1)，对照组没有获得再生植株；小麦济麦22绿苗获得率为25.3%，对照组绿苗获得率仅为0.9%(图4);小麦HW642绿苗获得率为211.3%，对照组绿苗获得率仅为26.2%(图5)。图1中，A:对照(生长素持续处理)；B:生长素间歇3天；C:生长素间歇6天；D:生长素间歇9天；E:生长素间歇12天。图3中，图4中，图5中，A为对照组，B为本发明方法组。表1.中8601小麦幼胚生长素不同间歇时间的再生情况<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>四、中8601愈伤组织中过氧化氢酶基因表达分析对于不同生长素间歇处理的中8601(即中断生长素3、6、9、12天的处理)，在分化培养基上取愈伤组织，迅速置于液氮速冻，-7(TC保存供RNA提取之用。采用TRIzol试剂盒(Tiangen，Beijing)进行材料总RNA提取，方法参考试剂盒说明。反转录按照PrimeScript1ststrandcDNASynthesis(TaKaRa，大连)试剂盒进行。以小麦Tubulin作为内标，采用半定量RT-PCR法进行模板均一化，均一好的模板立即进行过氧化氢酶基因的表达分析。模板均一的PCR扩增条件94t:变性4min，28个循环包括94。C变性30s，6rC退火30s，72。C延伸20s，最后72。C延伸10min;过氧化氢酶基因RT-PCR扩增条件94t:变性4min，25个循环包括94。C变性30s，55-62t:退火30s，72t:延伸20s，最后72。C延伸10min;1%琼脂糖凝胶电泳分离目的片段，采用Quantity-Onediscoveryseries(BioRad，USA)进行定量分析。Tubulin内标引物5'-TCCTCCTATGCCCCAGTGATC—3'，5'-ACTCATCGCCCTCATCACCG-3'。过氧化氢酶基因引物5'-CAAGGGCTTCTTCGAGGTCAC-3'，5'-TGTAGAAGGTCCACTCCGGGTAG-3，。结果如图2所示(0d:表示生长素持续处理(对照)；3d、6d、9d、12d:分别表示生长素间歇3天、6天、9天和12天)。表明过氧化氢酶再生相关基因表达量随生长素中断时间的延长明显增强，生长素中断9天表达量最高，表明过氧化氢酶再生相关基因与再生性状具有正相关性。实施例2、用小麦成熟胚进行组织培养本实施例中，分别以品种CB037为实验对象。组培方法步骤如下1、小麦种子的消毒处理将小麦CB037成熟种依次用70%酒精灭菌10分钟、25%次氯酸钠灭菌25分钟、无菌水冲洗5次后在无菌水中浸泡15-18小时，次日用15%次氯酸钠灭菌15分钟、无菌水冲洗5次。2、成熟胚诱导成胚性愈伤组织用接种刀在消毒处理过的种子上将成熟胚刮碎，接种在下述Adi培养基上培养8天(黑暗，25°C)，诱导愈伤组织，然后将愈伤组织转移到去掉Dicamba的下述Ad0培养基上培养12天(黑暗，25°C)，再将愈伤组织转移到含有Dicamba的Adi培养基上培养8天，得到胚性愈伤组织。3、分化培养得到小麦再生植株将胚性愈伤组织转移到下述XCFH培养基上培养20-25天(光照强度为3500Lx，温度为25°C)，分化得到小麦再生植株。记录接种成熟胚数目，统计分化得到的小麦再生苗数目和植株再生率。Adi培养基组成由终浓度为1650mg/L的NH4N03、终浓度为1900mg/L的KN03、终浓度为440mg/L的CaCl221120、终浓度为370mg/L的MgS0471120、终浓度为1700mg/L的KH2P04、终浓度为0.83mg/L的KI、终浓度为6.2mg/L的H萬、终浓度为22.3mg/L的MnS0441120、终浓度为8.6mg/L的ZnS0471120、终浓度为0.25mg/L的Na2Mo0421120、终浓度为0.025mg/L的CuS04*51120、终浓度为0.025mg/L的CoCl261120、终浓度为27.8mg/L的FeS0471120、终浓度为37.3mg/L的Na2_EDTA21120、终浓度为0.75g/L的MgCl"终浓度为15g/L的甘露醇、终浓度为15g/L的山梨醇、终浓度为2.4g/L的Phytagel(植物凝胶)、终浓度为5mg/L的谷氨酰氨、终浓度为500mg/L的水解酪蛋白、终浓度为12g/L的葡萄糖、终浓度为10mg/L的维生素Bl、终浓度为lmg/L的维生素B6、终浓度为lmg/L的烟酸、终浓度为2mg/L的甘氨酸、终浓度为39mg/L的乙酰丁香酮、终浓度为2mg/L的Dicamba、终浓度为4mg/L的AgNOy终浓度为40mg/L的半胱氨酸、终浓度为100mg/L的Vc组成；所述终浓度为各物质在所述Adi培养基中的浓度；Adi培养基的pH值为6.0。以上成分采用12rC高压湿热灭菌20分钟。AdO培养基除了不含有Dicamba外，其它成份和配制方式及灭菌方式与Adi培养基完全相同。XCFH培养基组成由终浓度为1650mg/L的NH4N03、终浓度为1900mg/L的KN03、终浓度为440mg/L的CaCl221120、终浓度为370mg/L的MgS0471120、终浓度为1700mg/L的KH2P04、终浓度为0.83mg/L的KI、终浓度为6.2mg/L的H萬、终浓度为22.3mg/L的MnS0441120、终浓度为8.6mg/L的ZnS0471120、终浓度为0.25mg/L的Na2Mo0421120、终浓度为0.025mg/L的CuS04*51120、终浓度为0.025mg/L的CoCl261120、终浓度为27.8mg/L的FeS04*71120、终浓度为37.3mg/L的Na2_EDTA*21120、终浓度为30g/L的蔗糖、终浓度为10mg/L的V『终浓度为lmg/L的U冬浓度为lmg/L的烟酸、终浓度为2mg/L的甘氨酸、终浓度为5mg/L的谷氨酰胺、终浓度为0.2mg/L的IAA、终浓度为2.4g/L的Phytagel组成；XCFH培养基的pH值为6.0。以上成分采用12rC高压湿热灭菌20分钟。二、对照组Dicamba持续处理对照将成熟胚破碎组织接种在Adi培养基上黑暗条件下培养4周左右，诱导得到愈伤组织，然后转移到去掉Dicamba生长素的XCFH培养基上，光照条件下(光照强度为3500Lx，温度为25°C)分化得到小麦再生植株。实验设3次重复。结果取平均数。用本发明方法组中，小麦CB037绿苗获得率为67.1%(图6_B);对照组中，小麦CB037绿苗获得率为32.4%(图6-A)。权利要求一种小麦的组织培养方法，包括如下步骤先将小麦胚诱导培养成胚性愈伤组织；再将所述胚性愈伤组织分化培养成小麦再生植株；所述诱导培养的方法包括如下步骤将所述小麦胚依次用含有生长素的培养基进行诱导培养I、用不含有生长素的培养基进行诱导培养II、再用含有生长素的培养基进行诱导培养III，得到胚性愈伤组织。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述小麦胚为小麦幼胚。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述小麦幼胚为心形期小麦幼胚。4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于所述小麦为小麦品系中8601、小麦品系HW642或小麦品种济麦22。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述小麦胚为小麦成熟胚。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述小麦为小麦品系CB037。7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于所述用含有生长素的培养基进行诱导培养I的时间为7天_9天；所述用含有生长素的培养基进行诱导培养III的时间为7天-9天；所述用不含有生长素的培养基进行诱导培养II的时间为6天-14天。8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述用含有生长素的培养基进行诱导培养I的时间为8天；所述用含有生长素的培养基进行诱导培养III的时间为8天；所述用不含有生长素的培养基进行诱导培养II的时间为12天。9.根据权利要求1-8中任一所述的方法，其特征在于所述用含有生长素的培养基进行诱导培养1、所述用不含有生长素的培养基进行诱导培养II和所述用含有生长素的培养基进行诱导培养III中，培养的条件为黑暗、温度为24°C-26°C。全文摘要本发明公开了一种小麦组织培养的方法。该方法包括如下步骤先将小麦胚诱导培养成胚性愈伤组织；再将所述胚性愈伤组织分化培养成小麦再生植株；所述诱导培养的方法包括如下步骤将所述小麦胚依次用含有生长素的培养基进行诱导培养、用不含有生长素的培养基进行诱导培养、再用含有生长素的培养基进行诱导培养，得到胚性愈伤组织。本发明方法进一步提高了小麦幼胚和成熟胚再生频率，减弱了基因型、生理状态等条件对再生的障碍，为小麦细胞工程育种、基因工程育种和功能基因组学研究提供技术支撑，对于小麦生物技术育种和功能基因组学研究具有重要意义。文档编号A01H4/00GK101703004SQ20091023736公开日2010年5月12日申请日期2009年11月16日优先权日2009年11月16日发明者佘茂云,别晓敏,叶兴国,孙伟珊,徐惠君,李欣,杜丽璞,殷桂香,陈朵朵申请人:中国农业科学院作物科学研究所