一种利用根诱导原球茎快速繁殖国兰的方法及其培养基的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种利用根诱导原球茎快速繁殖国兰的方法及其培养基，采用改良后含有植物生长调节剂（6-BA+PIC）和水解酪蛋白的MS培养基进行原球茎的诱导，针对国兰根外植体，采用特定培养方法，使国兰根诱导原球茎，诱导率达75%以上，培养45天后根外植体原球茎数为15个以上，原球茎成活率为80%以上，植株生长健壮，直接生根。
【专利说明】一种利用根诱导原球茎快速繁殖国兰的方法及其培养基
【技术领域】
[0001]本发明属植物细胞工程【技术领域】，涉及一种利用根诱导原球茎快速繁殖国兰的方法及其培养基。
【背景技术】
[0002]国兰通常指兰属(Cymbidium)植物中的一部分地生种，如春兰(Cymbidiumgoeringii)、蕙兰(Cymbidium / aberi)、建兰(Cymbidium ensijol)、墨兰(Cymbidiumsinensis)、寒兰(Cymbidiumkanran)及它们的变种春剑(Cymbidiumlongibracteatym)、莲瓣兰(Cymbidiumlianpan)等，是我国十大传统名花之一，距今已有2500多年的栽培历史。其昧幽香，花色淡雅，素有“花中君子”美称，具有很高的观赏价值和经济价值。
[0003]大部分国兰杂交种授粉获得的种子在播种后，性状会发生分离，难以保持母株的优良性状。而传统的分株繁殖系数低、速度慢、周期长，难以满足规模化生产的需要，一些杂交种还可能由于高度不育而得不到种子。因此组织培养技术的应用无疑是最有效的繁殖方式。国兰组织培养是在洋兰组织培养的技术基础上进一步发展而成，到20世纪末，春兰、蕙兰、建兰、墨兰、寒兰、春剑、莲瓣兰和部分原产我国的气生兰品种，均用组织培养方法繁殖获得成功。
[0004]目前国兰组织培养成功的外植体主要是种子、茎尖和侧芽，叶片和花芽成功的很少。理论上，凡是 生长健壮、具有强烈活性的细胞、组织、器官(如种子、侧芽、茎尖、根、叶片、花粉、子房、花瓣等)都可以作为外植体，但不同兰花种类所用的外植体部位也不尽相同。尤其是国兰的组织培养受技术、母体数量等因素制约，应用的外植体种类相对较少。
[0005]根尖也是分生组织存在的部位，但在组织培养过程中，植物学家们认为从根分生组织转化成芽分生组织的可能性微乎其微。国兰根尖组织培养虽然也有人尝试，但尚未见有成功的报道。李子红也指出国兰的根尖组织培养比较困难，需要对许多培养条件进行研究探讨。
[0006]国兰组织培养的一般程序为:外植体——诱导形成中间繁殖体(根状茎、原球茎、胚状体)——中间繁殖体扩繁——芽分化——根诱导——壮苗培养——试管苗移栽。
[0007]迄今为止，国兰组织培养的过程比较繁琐，成本高，要想提高效率，降低成本并进行快速繁殖，今后的研究重点应该是简化繁殖过程，尽量避免诱导、继代、育苗和生根4个阶段用不同的培养基，探讨能减少变异又能提高增殖系数，且再生植株生长健壮的中国兰组织培养方法。
【发明内容】
[0008]本发明的目的在于提供一种利用国兰根诱导原球茎的培养方法及其培养基，使国兰根诱导原球茎的诱导率达100%，培养45天每个根外植体原球茎数达15个以上，原球茎成活率达80%以上，植株生长健壮，直接生根。[0009]本发明的利用根诱导原球茎快速繁殖国兰的方法，包括以下步骤:
[0010]I)选取国兰无菌苗的根，接种于培养基中，进行暗培养，获得原球茎，培养室温度为25±2°C ;所述的培养基组分为:MS基本培养基+蔗糖+琼脂粉+水解酪蛋白，以及由6-苄氨基嘌呤+毒莠定组成的植物生长调节剂；
[0011]2)将暗培养获得的原球茎转到光下进行培养，每天10-16小时光照，温度为25 ±2 °C，原球茎逐渐变绿；
[0012]3)将变绿的原球茎转接到置于培养瓶的培养基中，逐渐发育成正常植株，同时生根；所述培养基为步骤I)中不含6-苄氨基嘌呤+毒莠定+水解酪蛋白的培养基；
[0013]4)室温，打开瓶盖炼苗，I周后种植于温室穴盘中。
[0014]优选地，步骤I)中所述的的培养基组分用量为:MS基本培养基+蔗糖20000-30000mg/L+琼脂粉5000_7000mg/L+水解酪蛋白500mg/L，以及由6-苄氨基嘌呤
0.5-2mg/L+毒莠定0.5-2mg/L组成的植物生长调节剂。
[0015]优选地，步骤I)所述的培养基组分含量为:MS基本培养基+蔗糖30000mg/L+琼脂粉5000mg/L+水解酪蛋白500mg/L,以及由6-节氨基嘌呤0.5mg/L+毒莠定0.5mg/L组成的植物生长调节剂。
[0016]本发明的一种用于根诱导原球茎快速繁殖国兰的培养基，其组分为:MS基本培养基+蔗糖+琼脂粉+水解酪蛋白，以及由6-苄氨基嘌呤+毒莠定组成的植物生长调节剂。
[0017]优选地，所述的培养基组分含量为:MS基本培养基+蔗糖20000-30000mg/L+琼脂粉5000-7000mg /L+水解酪蛋白500mg/L，以及由6-苄氨基嘌呤0.5_2mg/L+毒莠定
0.5-2mg/L组成的植物生长调节剂。
[0018]其中，所述的MS基本培养基配方如下表1所示，mg/L表示每升MS培养基中含各成分的晕克数。
[0019]表1
【权利要求】
1.一种利用根诱导原球茎快速繁殖国兰的方法，包括如下步骤， 1)选取国兰无菌苗的根，接种于培养基中，进行暗培养，获得原球茎，培养室温度为25±2°C;所述的培养基组分为:MS基本培养基+蔗糖+琼脂粉+水解酪蛋白，以及由6-苄氨基嘌呤+毒莠定组成的植物生长调节剂； 2)将暗培养获得的原球茎转到光下进行培养，每天10-16小时光照，温度为25±2°C，原球茎逐渐变绿； 3)将变绿原球茎转接到置于培养瓶的培养基中，逐渐发育成正常植株，同时生根；所述培养基为步骤I)中不含6-苄氨基嘌呤+毒莠定+水解酪蛋白的培养基； 4)室温，打开瓶盖炼苗，一周后种植于温室穴盘中。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤I)所述的培养基组分含量为:MS基本培养基+蔗糖20000-30000mg/L+琼脂粉5000_7000mg/L+水解酪蛋白500mg/L，以及由6-节氨基嘌呤0.5-2mg/L+毒莠定0.5_2mg/L组成的植物生长调节剂。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤I)所述的培养基组分含量为:MS基本培养基+蔗糖30000mg/L+琼脂粉5000mg/L+水解酪蛋白500mg/L，以及由6-苄氨基嘌呤0.5mg/L+毒莠定0.5mg/L组成的植物生长调节剂。
4.一种用于根诱导原球茎快速繁殖国兰的培养基，其组分为:MS基本培养基+蔗糖+琼脂粉+水解酪蛋白，以及由6-苄氨基嘌呤+毒莠定组成的植物生长调节剂。
5.根据权利要求4所述的培养基，其特征在于，所述的培养基组分含量为:MS基本培养基+蔗糖20000-30000mg/L+琼脂粉5000_7000mg/L+水解酪蛋白500mg/L，以及由6-苄氨基嘌呤0.5-2mg/L+毒莠定0.5-2mg/L`组成的植物生长调节剂。
【文档编号】C05G3/00GK103843567SQ201410085648
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2014年3月10日 优先权日:2014年3月10日
【发明者】周音, 张建军, 陈敏敏, 谢纪红 申请人:上海市农业科学院