tRNA启动子，RNA酶MPR启动子以及 这些启动子每一个的功能部分。通常，如本领域技术人员所知，根据所用启动子选自用于本 发明的功能性终止子序列。
[0154] 在一个有用的实施方式中，使用2007年5月17日公开的美国专利公开号 2007/0113299中完全公开的1.8kb卵类粘蛋白启动子，将其公开内容整体纳入本文作参 考。如实施例3所示，该1. 8kb 0M启动子可用于在膨大部组织细胞中表达GalT编码序列。 涵盖在1. 8kb卵类粘蛋白启动子控制下在输卵管中产生的其它糖基化酶。
[0155] 所涵盖的在本发明转基因增强糖基化鸟类中产生的蛋白质具体包括含有一个 或多个N-连接寡糖结构的治疗性蛋白质，包括但不限于人蛋白质。此类蛋白质包括但 不限于：下列蛋白质，包括其可应用的人蛋白质的等价物：融合蛋白，生长激素，细胞因 子，结构蛋白和酶，包括人生长激素，干扰素，溶菌酶和酪蛋白，清蛋白，a-1抗胰蛋 白酶，抗凝血酶III，胶原，因子VIII，因子IX，因子X(等），纤维蛋白原，胰岛素，乳铁蛋 白，蛋白质C，红细胞生成素（EP0)，粒细胞集落刺激因子（G-CSF)，粒细胞巨噬细胞集落 刺激因子（GM-CSF)，组织型纤溶酶原激活物（tPA)，生长激素和糜蛋白酶，葡糖脑苷脂酶， 溶酶体酸脂肪酶，半乳糖苷酶和神经氨酸酶；半乳糖基神经酰胺酶（GALC);阿加糖酶 a(Replagal)，阿加糖酶MFabrazyme)或a半乳糖苷酶A;a-葡糖苷酶；酸性鞘磷脂 酶（rhASM);半乳糖基神经酰胺酶（GALC);修饰的免疫球蛋白和抗体，包括可结合人肿瘤 细胞的表面抗原的免疫毒素、b-结构域缺失的因子VIII、因子Vila、抗凝素；水蛭素，阿替 普酶，tpa，瑞替普酶，tpa，tpa - 5个结构域中3个缺失，胰岛素，赖脯胰岛素、速效胰岛素、 甘精胰岛素、长效胰岛素类似物，hgh，胰高血糖素，tsh，促卵泡素，fsh，gm-csf，pdgh， ifn a 2? ifn a 2a? ifn a 2b? inf- a ? inf-&lb? ifn-&la? ifn- y lb? il~2? il~ll? hbsag? ospa，抗t-淋巴细胞抗原的单抗，抗tag-72的单抗，肿瘤相关性糖蛋白，衍生自抗血小板表 面受体gpll (b)/III (a)的嵌合单抗的fab片段，抗肿瘤相关抗原cal25的单抗或单抗片 段，抗人癌胚抗原cea的单抗或单抗片段，抗人心肌球蛋白的单抗或单抗片段，抗肿瘤表面 抗原psma的单抗或单抗片段，抗hmw-maa的单抗片段（fab/fab2混合物），抗癌症相关抗 原的单抗或单抗片段（fab)，抗nca 90 (-种表面粒细胞非特异性交叉反应性抗原）的单 抗片段（fab)，抗b淋巴细胞表面上的cd20抗原的嵌合单抗，抗il2受体a链的人源化单 抗，抗il2受体a链的的嵌合单抗，抗tnf-a的嵌合单抗，抗呼吸道合胞病毒表面上的表 位的人源化单抗，抗her2(人表皮生长因子受体2)的人源化单抗，抗细胞角蛋白肿瘤相关 抗原抗_ctla4的人单抗，抗b淋巴细胞的cd 20表面抗原的嵌合单抗、阿法链道酶-DNA酶， 0葡糖脑苷脂酶，tnf-a，il-2-白喉毒素融合蛋白，tnfr-lgg片段融合蛋白、拉罗尼酶， DNA酶，单抗，阿来法塞，托西莫单抗，阿来组单抗，拉布立酶，阿加糖酶0，特立帕肽，甲状 旁腺激素衍生物，阿达木单抗（lggl)，阿那白滞素、生物改性剂，奈西立肽（nesiritide)， 人b-型利钠肽（hbnp)，集落刺激因子，培维索孟，人生长激素受体拮抗剂，重组活化的蛋 白质c，奥马珠单抗，免疫球蛋白e(lge)阻断物，替伊莫单抗，ACTH，胰高血糖素，促生长素 抑制素，促生长素，胸腺素，甲状旁腺激素，色素激素，生长调节素，红细胞生成素，黄体生成 素，绒毛膜促性腺素，下丘脑释放因子，依那西普，抗利尿激素，促乳素，促甲状腺激素，多聚 蛋白质，包括免疫球蛋白，如抗体和其抗原结合片段，包含可变区或其变体的免疫球蛋白重 链多肽，其可包含D区、J区、C区或其组合；包含可变区或其变体的免疫球蛋白轻链多肽， 其可包含J区和C区；由至少一种包含免疫球蛋白重链可变区、免疫球蛋白轻链可变区和 接头肽编码的表达载体编码的免疫球蛋白多肽，从而形成能够选择性结合抗原的单链抗 体；贺赛汀?(曲妥珠单抗）（基因泰克公司（Genentech)，CA)，它是用于治疗转移性乳腺 癌患者的人源化抗-HER2单克隆抗体；REOPRO? (阿昔单抗）（森托克公司（Centocor))，它 是用于防止血凝块形成的血小板上糖蛋白Ilb/IIIa受体的抗体；ZENAPAX?(达珠单抗） (瑞士罗氏制药公司（Roche Pharmaceuticals，Switzerland))，它是免疫抑制剂型人源化 抗-⑶25单克隆抗体，用于预防急性肾移植排斥；PAN0REX?，它是抗-17-IA细胞表面抗原 IgG2a抗体（葛兰素史克公司（Glaxo Wellcome)/森托克公司）；BEC2,它是鼠抗-独特型 (⑶3表位）IgG抗体（因克隆系统公司（ImClone System)) ;nC-C225,它是嵌合抗-EGFR IgG抗体（因克隆系统公司）；维他辛（VITAXIN)?，它是人源化抗-a Vf3 3整联蛋白抗体 (应用分子演化公司（Applied Molecular Evolution)/米迪缪尼公司（Medlmmune));坎 帕斯（Campath);坎帕斯1H/LDP-03,它是人源化抗CD52IgGl抗体（LS公司（Leukosite)); 斯马特（Smart)M195,它是人源化抗-CD33IgG抗体（蛋白质设计实验室（Protein Design Lab)/康宝公司（Kanebo));利妥昔?，它是嵌合抗-⑶20 IgGl抗体（IDEC制药/基因泰克 公司，罗氏公司/泽塔公司（Zettyaku)) ;LYMPH0CIDE?，它是人源化抗-CD22IgG抗体（頂 公司（Immunomedics)) ;ICM3,它是人源化抗-ICAM3抗体（IC0S制药）；IDEC-114,它是灵 长动物抗-⑶80抗体（IDEC制药/三菱公司（Mitsubishi)) ;ZEVALIN?，它是放射性标记 的鼠抗-CD20抗体（IDEC/先灵公司（Schering AG)) ;IDEC-131，它是人源化抗CD40L抗 体（IDEC/卫才公司（Eisai)) ;IDEC-151，它是灵长化的抗-CD4 抗体（IDEC) ;IDEC-152， 它是灵长化的抗-CD23抗体（IDEC/生化公司（Seikagaku)) ;SMART抗-CD3,它是人源 化抗-⑶3IgG(蛋白质设计实验室）；5G1. 1，它是人源化抗-补体因子5(CS)抗体（阿来 申制药公司（Alexion Pharm)) ;D2E7,它是人源化抗-TNF-a 抗体（CATIBASF) ;CDP870， 它是人源化抗-TNF-aFab片段（塞尔泰克公司（Celltech)) ;IDEC_151，它是灵长化的 抗 _CD4IgGl 抗体（IDEC 制药 / 史可必成公司（SmithKline Beecham)) ;MDX_CD4,它是人 抗-CD4IgG抗体（麦得莱克斯公司/卫才公司/基麦公司（Medarex/Eisai/Genmab)); ⑶P571，它是人源化抗-TNF- a IgG4抗体（塞尔泰克公司）；LDP_02,它是人源化抗-a 4 0 7 抗体（LS公司/基因泰克公司）；奥索克隆（0rth〇Cl〇ne)0KT4A，它是人源化抗-CD4IgG抗 体（奥索生物技术公司（Ortho Biotech)) ;ANTOVA?，它是人源化抗⑶40L IgG抗体（拜基 公司（Biogen)) ;ANTEGREN?，它是人源化抗-VLA-4IgG 抗体（伊兰公司（Elan)) ;CAT-152， 它是人抗-TGF-0 2抗体（剑桥抗体技术公司（Cambridge Ab Tech));西妥昔单抗（BMS)， 它是单克隆抗-EGF受体（EGFr)抗体；贝伐单抗（基因泰克公司），它是抗-VEGF人单克隆 抗体；英夫利昔单抗（森托克公司（Centocore)，JJ)，它是用于自身免疫病的嵌合（小鼠和 人）单克隆抗体；吉姆单抗奥佐米星（惠氏公司（Wyeth))，它是用于化疗的单克隆抗体；雷 珠单抗（基因泰克公司），它是用于治疗黄斑变性的嵌合（小鼠和人）单克隆抗体，GM-CSF， 干扰素0，融合蛋白，CTLA4-FC融合蛋白，生长激素，细胞因子，结构蛋白，干扰素，溶菌酶， 酪蛋白，清蛋白，a-1抗胰蛋白酶，抗凝血酶III，胶原，因子VIII，因子IX，因子X(等）， 纤维蛋白原，乳铁蛋白，蛋白质C，组织型纤溶酶原激活物（tPA)，促生长素和胰凝乳蛋白 酶，免疫球蛋白，抗体，免疫毒素，因子VIII，b_结构域缺失的因子VIII，因子Vila，因子IX， 抗凝素；水蛭素，阿替普酶，tpa，瑞替普酶，tpa，tpa - 5个结构域中缺失3个，胰岛素、赖脯 胰岛素、速效胰岛素、甘精胰岛素、长效胰岛素类似物，胰高血糖素，tsh，促卵泡素-0，fsh， pdgh，inf - 0，ifn_ 01，ifn_ 0 2, ifn_ a，ifn_ a 1，ifn_ a 2, ifn_ y，il_2, il_ll，hbsag， ospa，阿法链道酶-DNA酶，0葡糖脑苷脂酶，tnf-a，il-2-白喉毒素融合蛋白，tnfr-lgg 片段融合蛋白，拉罗尼酶，DNA酶，阿来法塞，托西莫单抗，鼠单抗，阿来组单抗，拉布立酶，阿 加糖酶0，特立帕肽，甲状旁腺激素衍生物，阿达木单抗（lggl)，阿那白滞素、生物改性剂， 奈西立肽，人b-型利钠肽（hbnp)，集落刺激因子，培维索孟，人生长激素受体拮抗剂，重组 活化的蛋白质c，奥马珠单抗，免疫球蛋白e(lge)阻断物，替伊莫单抗，ACTH，胰高血糖素， 促生长素抑制素，促生长素，胸腺素，甲状旁腺激素，色素激素，生长调节素，黄体生成素，绒 毛膜促性腺素，下丘脑释放因子，依那西普，抗利尿激素，促乳素和促甲状腺激素，免疫球蛋 白多肽，免疫球蛋白多肽D区，免疫球蛋白多肽J区，免疫球蛋白多肽C区，免疫球蛋白轻 链，免疫球蛋白重链，免疫球蛋白重链可变区，免疫球蛋白轻链可变区和接头肽。
[0156] 如本领域技术人员所知，可对如本文公开的那些通常没有N-糖基化的蛋白质进 行工程改造，使其包含在禽类系统中可糖基化的糖基化位点（即N-连接的糖基化位点）。 此外，可对如本文公开的蛋白质进行工程改造，使其包含一个或多个另外的N-连接的糖基 化位点。在一个实施方式中，将附加糖基化的蛋白质与一个或多个具有如本文公开的方法 产生的修饰末端的N-连接寡糖结构连接。
[0157] 尤其涵盖如本文所述产生的可使用本领域一般技术人员所知方法分离或纯化的 蛋白质。
[0158] 在一个实施方式中，根据本发明产生的禽类在输卵管中生产的卵包含具有糖 基化模式改变的外源或异源蛋白质（如治疗性蛋白质），每个硬壳卵中包含的量大于约 〇. 01 yg。例如，所述卵包含异源性蛋白质的量范围为每个硬壳卵中含约0.01 yg-2g。在 一个实施方式中，所述卵包含的量为每个硬壳卵中含约〇. 1 yg-ig。例如，所述卵包含的量 为每个硬壳卵中含约1 y g-lg。在一个实施方式中，所述卵包含的量为每个硬壳卵中含约 10 yg-lg。例如，所述卵包含的量为每个硬壳卵中含约100 yg-lg(如，所述卵包含的量为 每个硬壳卵中含约100 y g_l〇〇mg)。
[0159] 通常，本文所公开的糖基化模式改变的异源性蛋白质（如治疗性蛋白质）出现于 卵清中。在一个实施方式中，卵清中异源性蛋白质的量大于每毫升卵约0.01yg。在另一实 施方式中，卵清中异源蛋白质的量的范围是约每毫升卵清〇.〇1 yg-〇.2g。例如，卵清中异源 蛋白质的量的范围是每毫升卵清约〇. 1 yg-〇. 5g。在一个实施方式中，卵清中异源蛋白质的 量的范围是每毫升卵清约1 y g-〇. 2g。例如，卵清中异源性蛋白质量的范围是每毫升卵清约 10 y g-o. lg(如卵清中异源性蛋白质量的范围是每毫升卵清约10 y g-5mg)。
[0160] 本发明也考虑，将按照本文所述产生的蛋白质PEG化可能是有利的，如2006年10 月23日提交的美国专利申请11/584, 832(通过参考将其全部内容纳入本文）所述。
[0161] 虽然本发明产生的治疗性蛋白质可以原型给药，但优选作为药物制剂的一部分给 予该治疗性蛋白质。
[0162] 因此，本发明还提供了含有按照本发明产生的治疗性蛋白质或其药学上可接受的 衍生物及一种或多种药学上可接受的载体和任选的其它治疗性和/或预防性成分的药物 制剂，以及给予这种药物制剂的方法。所述载体必须是"可接受的"，这意味着它与该制剂的 其它成分相容，并且对接受者无害。可利用具有本领域技术的医生知道的标准方法确定用 本发明药物组合物治疗患者的方法（如药物蛋白质的给药量、给药频率和治疗持续时间），
[0163] 药物制剂包括适合口服、直肠、经鼻、局部（包括粘膜和舌下）、阴道给予的制剂。 药物制剂包括适合注射给药，包括肌肉内、皮下和静脉内给药的制剂。药物制剂也包括通过 吸入或吹入给药的制剂。适当时，该制剂可方便地制备成独立的剂量单位，可通过药学领域 熟知的任何方法来制备。生产药物制剂的方法一般包括以下步骤：将治疗性蛋白质与液体 载体或细碎的固体载体或二者放在一起，然后（如果必要）使该产品成型制成所需制剂。
[0164] 适用于口服给药的药物制剂可方便地制成各自含有预定量的活性成分的粉末剂 或颗粒剂、溶液剂、混悬剂或乳剂形式的独立单位，如胶囊剂、扁囊剂或片剂。该活性成分也 可制成大丸剂、药糖剂或贴剂。口服给药的片剂和胶囊可含有常规赋形剂，如粘合剂、填充 剂、润滑剂、崩解剂或湿润剂。可按照本领域熟知方法对片剂进行包衣。口服液体制剂可以 是（例如）水性或油性混悬剂、溶液剂、乳剂、糖浆剂或酏剂的形式，或者可制成临用前用水 或其它合适的载体进行重建的干燥产品。这类液体制剂可含有常规的添加剂，如助悬剂、乳 化剂、非水性载体（可含食用油）或防腐剂。
[0165] 配制成胃肠道外给药（例如注射，如推注或连续输注）形式的本发明治疗性蛋白 质可制成单位剂型装在安瓿、预填充注射器、小体积输液瓶或加入防腐剂的多剂量容器中。 可通过（例如）皮下注射、肌肉内注射和静脉内输液或注射来注射该治疗性蛋白质。
[0166] 该治疗性蛋白质可以是诸如油性或水性载体中的悬浮剂、溶液剂或乳剂的形式， 可含有配方试剂，如助悬剂、稳定剂和/或分散剂。也考虑该治疗性蛋白质可以是无菌固体 经无菌分离或溶液经冻干获得的临用前用合适的载体如无菌无热原水进行重建的粉末形 式。
[0167] 外用于表皮时，本发明产生的治疗性蛋白质可配制成软膏剂、乳膏剂或洗剂，或透 皮贴剂。可用水性或油性基料，加入合适的增稠剂和/或凝胶剂来配制软膏剂和乳膏剂。可 用水性或油性基料配制洗剂，通常还含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠 剂或着色剂。
[0168] 适合局部给予口腔的制剂包括含有活性成分和调味基料，例如蔗糖和阿拉伯胶或 黄芪胶的锭剂；含有活性成分和惰性基料如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶的软锭剂；以及 含有活性成分和合适液体载体的漱口水。
[0169] 载体是固体的适合直肠给药的药物制剂最优选为单位剂量栓剂。合适载体包括可 可油和本领域常用的其它材料，通过将活性化合物与软化或融化的载体混合，然后在模具 中冷却成型，可方便地形成栓剂。
[0170] 适合阴道给药的制剂可制成阴道栓剂、棉塞剂，乳膏剂、凝胶剂、贴剂、泡沫剂或喷 雾剂。
[0171] 就鼻内给药而言，本发明治疗性蛋白质可用作液体喷雾剂或可分散粉末剂，或者 是滴剂形式。
[0172] 可使用还含有一种或多种分散剂、增溶剂或助悬剂的水性或非水性基料来配制滴 剂。通过加压罐可方便地递送液体喷雾剂。
[0173] 吸入给药时，可由吹药器、喷雾器或加压罐或其它方便的递送气溶胶喷雾的方式 来方便地递送本发明治疗性蛋白质。加压罐可包含合适的推进剂，如二氯二氟甲烷、三氯氟 甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适气体。在加压气溶胶的情况下，可通过阀门递送 计量用量，以确定剂量单位。
[0174] 吸入或吹入给药时，本发明治疗性蛋白质可以是干燥粉末组合物的形式，例如该 化合物与合适的粉末基料如乳糖或淀粉的粉末混合物。可将粉末组合物制成单位剂型，装 在（例如）胶囊或药筒中，或者（如）明胶或泡罩包装中，可通过吸入器或吹药器的辅助来 给予该粉末。
[0175] 需要时，上述制剂被配置成能实现活性成分的缓释。
[0176] 本发明药物组合物也可含有其它活性成分，如抗微生物剂或防腐剂。此外，还考虑 到本发明治疗性蛋白质可与其它治疗剂联合使用。
[0177] 本发明组合物或化合物可用于治疗各种疾病。例如，本领域技术人员已知用于治 疗许多疾病的治疗方案，这些方案利用获自细胞培养物（如CH0细胞）的治疗性蛋白质。本 发明涵盖根据本发明产生的可用于治疗这类病症的治疗性蛋白质。就是说，本发明考虑利 用本发明产生的治疗性蛋白质来治疗已知可方便地用常规治疗性蛋白质进行治疗的疾病。 例如，根据本发明产生的红细胞生成素可用于治疗人的病症，如贫血和肾脏疾病，如慢性肾 衰竭（或其它可通过给予本发明EP0进行治疗的病症）。
[0178] 通常，给药剂量取决于已知因素，如接受者的年龄、健康状况和体重、并行治疗的 类型、治疗频率等。通常，活性成分的剂量可约为0.0001-10毫克/千克体重。可由熟知各 治疗性蛋白质的给药知识的医生确定准确的剂量、给药频率和治疗时间间隔。
[0179] 例如本文中图9-11公开了图6中至少部分所示载体的核苷酸序列。还显示了编码 糖基转移酶的糖基转移