加了2-3滴吐温-20的0.lm/v %升汞消毒10-15min，无菌水冲洗3_5次，在超净工作台上用无菌解剖刀切取芽点，剥去掉芽点外层，最后用消毒滤纸去除表面水份，得到外植体。其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
[0029](2)块茎萌发获得无菌试管苗:将步骤(I)中获得的外植体接种到MS培养基中，在温度为22-26度，光照强度15001uX，光照时间8-10h/d的条件下培养25d，获得无菌试管苗。其中，MS培养基中添加NAA 0.1-0.5mg/L、6-BA0.5-2.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8ο
[0030](3)试管苗丛生芽快速地繁殖培养:将步骤(2)中得到的试管苗置于MS繁殖培养基中，在温度为22-26°(:，光照强度150011?，光照时间8-1011/(1的条件下培养30(1，获得无菌试管苗丛生芽。其中，MS繁殖培养基中添加ΖΤ0.1-1.0mg/L、IBA0.1-1.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂51^/1，？田直5.8。
[0031](4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在温度22-26°(:，光照强度150011?，光照时间8-1011/(1的条件下培养30(1，得到健壮植株。其中，MS壮苗培养基中添加6-BA 0.5-1.5mg/L、NAA 0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8ο
[0032](5)健壮植株生根培养，将步骤(4)中得到的健壮植株置于I/2MS生根培养基中，在温度为22-26度，光照强度15001uX，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，得到带根完整植株。其中，1/2MS生根培养基中添加NAA0.1-1.0mg/L、IBA0.1-0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼月旨5mg/L，pH值5.8。
[0033](6)炼苗与移栽:向组培瓶中加入少量自来水，炼苗7天，待表面角质形成后，取出幼苗，洗净根部培养基，立即移栽到沙床中，生长I个月后移栽到大田。
[0034]实施例3
[0035]本发明所述的姜黄组织培养快速繁殖方法的再一个实例，包括如下步骤:
[0036](I)外植体的选择与消毒:取姜黄地下块茎作外植体，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡20min，用毛刷仔细刷掉块茎上的泥土，线状自来水冲洗15-20min，添加了2-3滴吐温-20的0.1111八％升汞消毒10-15min，无菌水冲洗3-5次，在超净工作台上用无菌解剖刀切取芽点，剥去芽点外层，最后用消毒滤纸去除表面水份，得到外植体。其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水。
[0037](2)块茎萌发获得无菌试管苗:将步骤(I)中获得的外植体接种到MS培养基中，在温度为22-26°C，光照强度15001uX，光照时间8-10h/d的条件下培养25d，获得无菌试管苗。其中，MS培养基中添加NAA 0.1-0.5mg/L、6-BA0.5-2.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值
5.8ο
[0038](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的试管苗置于MS繁殖培养基中，在温度为22-26度，光照强度15001uX，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，获得无菌试管苗丛生芽。其中，MS繁殖培养基中添加ZT0.1-1.0mg/L NAA0.1_1.0mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂51^/1，？田直5.8。
[0039](4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在温度为22-26°C，光照强度15001ux，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，得到健壮植株。其中，MS壮苗培养基中添加6-BA 0.5-1.5mg/L、NAA 0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.80
[0040](5)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于I/2MS生根培养基中，在温度为22-26°C，光照强度15001ux，光照时间8-10h/d的条件下培养30d，得到带根完整植株。其中，I /2MS生根培养基中添加0.1-1.0mg/L、NAA0.1-0.5mg/L、I BA 15mg/L、蔗糖 15mg/L、琼脂511^/1，？!1值5.8。
[0041 ] (6)炼苗与移栽:向组培瓶中加入少量自来水，炼苗7天，待表面角质形成后，取出幼苗，洗净根部培养基，立即移栽到沙床中，生长I个月后移栽到大田。
【主权项】
1.一种姜黄组织培养快速繁殖方法，其特征在于，该方法包括以下步骤: (1)外植体的选择与消毒:取姜黄地下块茎作外为植体，先用2v/v%的洗洁精水溶液浸泡20min，线状自来水冲洗15-20min，再用添加了2-3滴吐温-20的0.1m/v%的升汞消毒10-15min，无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸吸去除外植体表面水分，其中，无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水； (2)块茎发芽培养和获得无菌试管苗:将步骤(I)中获得的外植体接种到MS发芽培养基中培养得到无菌试管苗，其中MS发芽培养基中添加IAA 0.1-0.5mg/L、6-BA 0.5_2.0mg/L、鹿糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8 ； (3)试管苗快速繁殖和获得丛生芽:将步骤(2)中得到的试管苗接种至MS丛芽培养基中培养25-30d，获得丛生芽，其中，MS丛芽培养基中添加ZT 0.1-1.0mg/L、IBA 0.1-1.0mg/L、鹿糖30mg/L、琼脂5mg/L，pH值5.8 ； (4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的丛生芽转接至MS壮苗培养基中培养25-35d，得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中添加6-BA 0.5-1.5mg/L、NAA 0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、琼脂 5mg/L，pH值5.8; (5)生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株转接至1/2MS生根培养基中培养25-35d，得到带根完整植株，其中1/2MS培养基中添加NAA 0.1-1.0mg/L、IBA 0.1-0.5mg/L、蔗糖15mg/L、琼脂 5mg/L，pH值5.8; (6)炼苗与移栽:室温下打开组培瓶盖，加入少量自来水，炼苗7天;待培养基表面形成角质后，取出幼苗，洗净根部培养基，移栽到沙床中；在沙床中生长27-33d，移栽到大田。
【专利摘要】一种姜黄组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：取姜黄地下块茎作为外植体，清洗、消毒、再清洗，并吸去块茎表面水，将外植体置于MS发芽培养基中诱导发芽，得到无菌试管苗；将所述试管苗置于MS丛芽培养基中繁殖培养，获得丛生芽；将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中培养，获得健壮植株；将所述健壮植株移到1/2MS生根培养基中生根培养，得到完整带根苗；将完整带根苗炼苗6-10d后，先移植于沙床生长27-33d，再移栽到大田。采用本发明所述的培养方法得到丛生芽的增殖系数为10～15倍，获得组培苗生根率100％，移栽苗床成活率95％以上，有效解决了姜黄工厂化育苗的问题。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105557513
【申请号】CN201510918231
【发明人】王晓峰, 李刚, 韦坤华, 梁莹, 肖冬, 王一诺, 李林轩, 李翠, 缪剑华
【申请人】广西壮族自治区药用植物园
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2015年12月11日