专利名称：酶法水解褐藻制备岩藻聚糖硫酸酯的方法
技术领域：
本发明涉及一种岩藻聚糖硫酸酯的制备方法，尤其是一种提取率高的酶法水解褐藻制备岩藻聚糖硫酸酯的方法。
背景技术：
岩藻聚糖硫酸酯(fucoidan)是一种存在于褐藻中的特殊硫酸多糖，国内外研究表明其具有抗凝血、降血脂、抗肿瘤、抗病毒，增强机体免疫机能等多种生物学活性。由于海带在我国养殖区域广泛，产量巨大，占世界产量的89％左右，因此海带已成为岩藻聚糖硫酸酯的主要生产原料之一，而目前的生产方法之有酸解和蒸煮两种。酸解法破环性大，环境污染较严重且目的性差、提取率低；蒸煮法虽然克服了酸解法所具有的破环性大、污染严重等缺点，但是其提取率更低。
发明内容
本发明是为了解决现有技术所存在的提取率低的缺点，提供一种无污染、破坏性小、提取率高的酶法水解褐藻制备岩藻聚糖硫酸酯的方法。
本发明的技术解决方案是一种酶法水解褐藻制备岩藻聚糖硫酸酯的方法，其特征在于有如下步骤a.将纤维素酶和果胶酶，按重量比例为2～6∶1配制成复合纤维素酶；b.以褐藻为原料，向原料中加入原料重量10～20倍的水，并加入原料重量0.23～0.34％的复合纤维素酶，在pH为6.0～8.0的条件下酶解50～80分钟，然后以90～100℃水浴加热3～4小时，降至室温，离心得上清液；c.在上清液中加入乙醇产生沉淀，离心得上清液；d.在c步骤所得上清液中加入乙醇产生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷冻干燥沉淀得白色粉末。
所述的褐藻为海带或裙带菜。
所述的乙醇浓度为95％。
本发明是将纤维素酶和果胶酶按比例配制成复合纤维素酶，对褐藻进行酶解并蒸煮以提取岩藻聚糖硫酸酯，克服了现有酸解法破坏性大、污染严重的缺点，对提取后所剩原料的综合利用价值无任何影响；同时其目的性强，提取率高，其提取率在现有技术的基础上提高0.37～2.40％；所配制的复合纤维素酶价格低廉，降低了提取岩藻聚糖硫酸酯的成本，所提取的岩藻聚糖硫酸酯可制备具有抗凝血、降血脂、抗肿瘤、抗病毒，增强机体免疫机能的保健产品或作为药品的先导物。本发明操作简单、可操作性强，适合工业化生产。
具体实施例方式实施例1a.取0.46g纤维素酶和0.22g果胶酶，混合配制成0.68g复合纤维素酶；b.称200g干海带为原料，向干海带中加入原料重量18倍(3600g)的水，并加入所配制的复合纤维素酶(占原料重量的0.34％)，在pH为8.0的条件下酶解50分钟，然后以94℃水浴加热4小时，降至室温，离心得上清液；c.在上清液中加入乙醇使其产生沉淀，离心得上清液；d.在c步骤所得上清液中加入乙醇直至产生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷冻干燥沉淀得白色粉末。
所提取的白色粉末中为岩藻聚糖硫酸酯，分子量10～25道尔顿，重量为原料重量的1.2％。
实施例2a.取0.44g纤维素酶和0.08g果胶酶，混合配制成0.52复合纤维素酶；b.称200g干海带为原料，向干海带中加入原料重量13倍(2600g)的水，并加入所配制的复合纤维素酶(占原料重量的0.26％)，在pH为6.0的条件下酶解80分钟，然后以100℃水浴加热3.5小时，降至室温，离心得上清液；c.在上清液中加入95％乙醇使其产生沉淀，离心得上清液；d.在c步骤所得上清液中加入95％乙醇直至产生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷冻干燥沉淀得白色粉末。
所提取的白色粉末中为岩藻聚糖硫酸酯，分子量10～25道尔顿，重量为原料重量的1.2％。
实施例3a.取0.48g纤维素酶和0.16g果胶酶，混合配制成0.64g复合纤维素酶；b.称200g干海带为原料，向干海带中加入原料重量20倍(4000g)的水，并加入所配制的复合纤维素酶(占原料重量的0.32％)，在pH为7.0的条件下酶解60分钟，然后以96℃水浴加热3.5小时，降至室温，离心得上清液；
c.在上清液中加入95％乙醇使其产生沉淀，离心得上清液；d.在c步骤所得上清液中加入95％乙醇直至产生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷冻干燥沉淀得白色粉末。
所提取的白色粉末中为岩藻聚糖硫酸酯，分子量10～25道尔顿，重量为原料重量的1.3％。
实施例4a.取2g纤维素酶和1g果胶酶，混合配制成3g复合纤维素酶；b.称1000g干裙带菜为原料，向干裙带菜中加入原料重量15倍(15000g)的水，并加入所配制的复合纤维素酶(占原料重量的0.3％)，在pH为6.0的条件下酶解70分钟，然后以98℃水浴加热3.5小时，降至室温，离心得上清液；c.在上清液中加入95％乙醇使其产生沉淀，离心得上清液；d.在c步骤所得上清液中加入95％乙醇直至产生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷冻干燥沉淀得白色粉末。
所提取的白色粉末中为岩藻聚糖硫酸酯，分子量10～25道尔顿，重量为原料重量的6％。
实施例5a.取0.36g纤维素酶和0.1g果胶酶，混合配制成0.46g复合纤维素酶；b.称200g干海带为原料，向干海带中加入原料重量10倍(2000g)的水，并加入所配制的复合纤维素酶(占原料重量的0.23％)，在pH为7.0的条件下酶解80分钟，然后以100℃水浴加热3小时，降至室温，离心得上清液；c.在上清液中加入95％乙醇使其产生沉淀，离心得上清液；d.在c步骤所得上清液中加入95％乙醇直至产生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷冻干燥沉淀得白色粉末。
所提取的白色粉末中为岩藻聚糖硫酸酯，分子量10～25道尔顿，重量为原料重量的1.2％。
权利要求
1.一种酶法水解褐藻制备岩藻聚糖硫酸酯的方法，其特征是有如下步骤a.将纤维素酶和果胶酶，按重量比例为2～6∶1配制成复合纤维素酶；b.以褐藻为原料，向原料中加入原料重量10～20倍的水，并加入原料重量0.23～0.34％的复合纤维素酶，在pH为6.0～8.0的条件下酶解50～80分钟，然后以90～100℃水浴加热3～4小时，降至室温，离心得上清液；c.在上清液中加入乙醇产生沉淀，离心得上清液；d.在c步骤所得上清液中加入乙醇产生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷冻干燥沉淀得白色粉末。
2.根据权利要求1所述的酶法水解褐藻制备岩藻聚糖硫酸酯的方法，其特征在于所述的褐藻为海带或裙带菜。
3.根据权利要求1或2所述的酶法水解褐藻制备岩藻聚糖硫酸酯的方法，其特征在于所述乙醇的浓度为95％。
全文摘要
本发明公开一种酶法水解褐藻制备岩藻聚糖硫酸酯的方法，是将纤维素酶和果胶酶，按重量比例为2～6∶1配制成复合纤维素酶；以褐藻为原料，向原料中加入原料重量10～20倍的水，并加入原料重量0.23～0.34％的复合纤维素酶，在pH为6.0～8.0的条件下酶解50～80分钟，然后以90～100℃水浴加热3～4小时，降至室温，离心得上清液；在上清液中加入乙醇产生沉淀，离心得上清液；在c步骤所得上清液中加入乙醇产生沉淀，收集沉淀；乙醚清洗沉淀，真空冷冻干燥沉淀得白色粉末。克服了现有酸解法破坏性大、污染严重的缺点，对提取后所剩原料的综合利用价值无任何影响；同时其目的性强，提取率高，其提取率在现有技术的基础上提高0.37～2.40％；所配制的复合纤维素酶价格低廉，降低了提取岩藻聚糖硫酸酯的成本。
文档编号C12N9/42GK1763212SQ20051004758
公开日2006年4月26日 申请日期2005年10月28日 优先权日2005年10月28日
发明者汪秋宽, 何云海, 陈勇, 张泽宇, 康平, 谢智芬 申请人:大连水产学院